Methodenartikel

Onderzoek naar de farmacologische werking en het moleculaire mechanisme van salidroside bij het remmen van MCF-7-celproliferatie en -migratie

DOI:

10.3791/65634

⸱

9 juni 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Pathology Department, Suining Central Hospital, 2General Surgery Day Ward, Department of General Surgery, the Third People's Hospital of Chengdu & the Affiliated Hospital of Southwest Jiaotong University

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het huidige protocol beschrijft een alomvattende strategie voor het evalueren van de farmacologische werking en het mechanisme van salidroside bij het remmen van de proliferatie en migratie van MCF-7-cellen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Salidroside (Sal) bevat anticarcinogene, antihypoxische en ontstekingsremmende farmacologische activiteiten. De onderliggende anti-borstkankermechanismen zijn echter slechts onvolledig opgehelderd. Vandaar dat dit protocol bedoeld was om het potentieel van Sal te decoderen bij het reguleren van de PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1-route in de kwaadaardige proliferatie van MCF-7-cellen van menselijke borstkanker. Ten eerste werd de farmacologische activiteit van Sal tegen MCF-7 geëvalueerd door middel van CCK-8- en celkrastesten. Bovendien werd de resistentie van MCF-7-cellen gemeten door middel van migratie- en Matrigel-invasietests. Voor celapoptose en cyclusassays werden MCF-7-cellen in stappen verwerkt met respectievelijk annexine V-FITC/PI en detectiekits voor celcycluskleuring voor flowcytometrieanalyses. De niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) en Ca2+ werden onderzocht door middel van DCFH-DA en Fluo-4 AM immunofluorescentiekleuring. De activiteiten van Na+-K+-ATPase en Ca2+-ATPase werden bepaald met behulp van de bijbehorende commerciële kits. De eiwit- en genexpressieniveaus in apoptose en de PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1-route werden verder bepaald met behulp van respectievelijk western blot- en qRT-PCR-analyses. We ontdekten dat Sal-behandeling de proliferatie, migratie en invasie van MCF-7-cellen aanzienlijk beperkte, met dosisafhankelijke effecten. Ondertussen dwong de toediening van Sal MCF-7-cellen ook dramatisch om apoptose en celcyclusstilstand te ondergaan. De immunofluorescentietests toonden aan dat Sal de productie van ROS en Ca2+ in MCF-7-cellen waarneembaar stimuleerde. Verdere gegevens bevestigden dat Sal de expressieniveaus van pro-apoptotische eiwitten, Bax, Bim, gespleten caspase-9/7/3 en hun overeenkomstige genen bevorderde. Consequent verminderde Sal-interventie prominent de expressie van de Bcl-2-, p-PI3K/PI3K-, p-AKT/AKT-, mTOR-, HIF-1α- en FoxO1-eiwitten en hun overeenkomstige genen. Concluderend kan Sal worden gebruikt als een potentiële van kruiden afgeleide verbinding voor de behandeling van borstkanker, omdat het de kwaadaardige proliferatie, migratie en invasie van MCF-7-cellen kan verminderen door de PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1-route te remmen.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Als een van de meest gediagnosticeerde vormen van kanker en de meest voorkomende maligniteiten, geven de laatste statistieken aan dat er in 2020 wereldwijd 2,3 miljoen gevallen van borstkanker zijn ontstaan, goed voor 11,7% van alle gevallen vankanker1. Veel voorkomende symptomen van borstkanker zijn gevoelige en tintelingen in de borsten, knobbels en pijn in de borst, tepelafscheiding, erosie of ingevallen huid en vergrote oksellymfeklieren 1,2. Nog alarmerender is dat het aantal nieuwe gevallen en de totale incidentie van borstkanker elk jaar in een overweldigend tempo blijft toenemen, goed voor 6,9% van de kankergerelateerde sterfgevallen. Op dit moment bestaat de interventie bij borstkanker nog steeds voornamelijk uit chemotherapie, chirurgie, radiotherapie en uitgebreide behandeling. Hoewel behandeling het recidiefpercentage en het sterftecijfer van patiënten effectief kan verminderen, veroorzaakt langdurige behandeling vaak resistentie tegen meerdere geneesmiddelen, haaruitval op grote oppervlakken, misselijkheid en braken, en ernstige mentale en psychologische belasting 2,3. Met name het potentiële risico op meerdere orgaanmetastasen van borstkanker dwingt mensen ook om nieuwe kruidenbronnen van medicamenteuze therapie te zoeken 4,5.

Fosfoinositide 3-kinase (PI3K)-gemedieerde signalering is betrokken bij de groei, proliferatie en overleving van borstkanker door middel van splicing die de expressie van meerdere genen beïnvloedt6. Als een stroomafwaarts signaalgevoelig eiwit van PI3K, suggereert talrijk bewijs dat eiwitkinase B (AKT) zou kunnen paren met het zoogdierdoelwit van rapamycine (mTOR) -eiwit om borstkanker verder te verhogen 7,8,9. Bovendien wordt beweerd dat de deactivering van PI3K/AKT/mTOR-signalering ook een sleutelcomponent is in geneesmiddelen die kwaadaardige proliferatie remmen en apoptose stimuleren bij borstkanker10,11,12. Het is bekend dat extreme hypoxie in de micro-omgeving van de tumor een enorme toename van hypoxie-induceerbare factor 1-alfa (HIF-1α) veroorzaakt, wat de progressie van borstkanker verder verergert13,14,15. Tegelijkertijd leidt AKT-stimulatie ook tot overmatige accumulatie van HIF-1α, waardoor apoptose in borstkankermonsters wordt beperkt16,17. Interessant is dat is bevestigd dat de activering van PI3K-AKT-HIF-1α-signalering betrokken is bij pathologische progressie en metastase bij verschillende vormen van kanker, waaronder longkanker18, colorectale kanker19, eierstokkanker20 en prostaatkanker21. Naast het feit dat het wordt georkestreerd door HIF-1α, wordt overexpressie van gevorkte hoofdtranscriptiefactor 1 (FoxO1) ook veroorzaakt door AKT-signaleringsstimulatie, die cyclusstilstand en remming van apoptose in borstkankercellen bevordert22,23. Samen suggereert het bovenstaande solide bewijs dat de remming van de cascade van PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1-signalering een potentieel nieuw doelwit kan zijn voor medicamenteuze behandeling bij borstkanker.

Van salidroside (Sal) is algemeen aangetoond dat het anti-kanker 24,25, anti-hypoxie26,27,28,29 en immuunversterkende farmacologische activiteiten uitoefent 30. Het is een lichtbruin of bruin poeder dat gemakkelijk oplosbaar is in water, een soort fenylehanoïde glycoside is en een chemische structuurformule heeft van C14H 20 O7 en een molecuulgewicht van300,331,32. Modern farmacologisch onderzoek heeft aangetoond dat Sal de apoptose van maagkankercellen kan bevorderen door PI3K-AKT-mTOR-signalering te beperken24. Verder bewijs suggereert ook dat de onderdrukking van PI3K-AKT-HIF-1α-signalering door Sal-behandeling kan bijdragen aan de apoptose van kankercellen door hun gevoeligheid voor chemotherapeutische middelen te vergroten25. Er zijn ook aanwijzingen dat Sal celmigratie en -invasie beperkt en cyclusstilstand veroorzaakt door apoptose te bevorderen in de MCF-7-cellen van borstkanker bij de mens33,34. Het valt echter nog te bezien of Sal de PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1-signalering kan reguleren en de kwaadaardige proliferatie van MCF-7-cellen kan remmen. Daarom was dit protocol gericht op het onderzoeken van de effecten van Sal op MCF-7-celmigratie, invasie, celcyclus en apoptose via de PI3K-AKT-HIF-1α-FoxO1-route. De geïntegreerde onderzoeksstrategieën die conventionele, goedkope en onafhankelijke experimenten omvatten, zoals celmigratie- en invasiebeoordelingen, apoptose en celcyclusdetectie door flowcytometrie, reactieve zuurstofspecies (ROS) en Ca2+ fluorescentiebepaling, enz., kunnen een referentie vormen voor het algemene ontwerp van experimenten voor antikankeronderzoek met traditionele kruidengeneeskunde. Het experimentele proces van deze studie is weergegeven in figuur 1.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De MCF-7-cellen die voor dit onderzoek zijn gebruikt, zijn afkomstig van een commerciële bron (zie de materiaaltabel).

1. Celkweek

  1. Kweek de MCF-7-cellen in een bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 bij 37 °C met DMEM dat 10% FBS en 1% penicilline (10.000 E/ml)/streptomycine (10.000 μg/ml) bevat (zie de materiaaltabel).
    OPMERKING: De cellen die 90% van de bodem van de schaal bedekten, werden voor het experiment gebruikt en ingedeeld in de volgende groepen: controlegroep, doxorubicinehydrochloridegroep (DXR, 5 μM) en Sal-groepen (20 μM, 40 μM en 80 μM), of controlegroep, LY294002 (10 μM, een remmer van PI3K) groep, Sal (80 μM) groep en LY294002 (10 μM) + Sal (80 μM) groep (zie de Tabel met materialen).

2. Levensvatbaarheidstest van de cel

OPMERKING: Voor meer informatie over deze procedure wordt verwezen naar een eerder rapport27.

  1. Zaad MCF-7-cellen met een dichtheid van 8 x 104 cellen/putje in platen met 96 putjes, en incubeer met Sal (10 μM, 20 μM, 40 μM, 80 μM, 160 μM en 320 μM) gedurende 24 uur of Sal (20, 40, 80 μM) gedurende 12 uur/24 uur/36 uur/48 uur 's nachts totdat de cellen hechten.
  2. Co-incubeer na de behandeling de MCF-7-cellen met 10 μL/putje CCK-8-oplossing (zie de materiaaltabel) gedurende 2 uur. Meet vervolgens de optische dichtheid bij 450 nm (OD450) met een automatische microplaatlezer.

3. Celmigratie en invasie

OPMERKING: Voor details over deze procedure wordt verwezen naar een eerder rapport35.

  1. Incubeer 2 ml van 5 x 10 cellen van 6 cellen/ml in platen met6 putjes om 90% van de bodem van de schaal te bedekken.
  2. Voer een lineaire kraswond uit langs het midden van de monolaag van de cel met een steriele pipetpunt. Maak beelden met een optische microscoop om 0 uur, 24 uur en 48 uur.
  3. Gebruik Image J-software om de breedte van de kraswonden te meten.
  4. Voor de transwell-test suspendeert u MCF-7-cellen zonder serummedium en zaad in de bovenste transwellkamer die vooraf is gecoat met of zonder Matrigel (zie de tabel met materialen).
  5. Gebruik op de bodem van de transwellkamer DMEM compleet medium als chemische inductor. Verwijder na 24 uur de cellen in de bovenste kamer en fixeer de resterende invasieve en migrerende cellen in methanol35.
  6. Kleur de MCF-7-cellen met een kristalviolette oplossing (zie de tabel met materialen). Leg de beelden vast met een optische microscoop.

4. Activiteitsevaluatie van Na+-K+-ATPase en Ca 2+-Mg2+-ATPase

  1. Gebruik een bicinchoninezuurkit (BCA) om de eiwitconcentratie in gelyseerde MCF-7-cellen te meten, volgens de instructies van de fabrikant (zie de materiaaltabel).
    1. Voeg monsters van de gelyseerde cellen in hun overeenkomstige groepen toe aan de platen met 96 putjes. Voeg daarna de werkoplossing toe om verder te incuberen bij 37 °C gedurende 5 minuten. Meet ten slotte de waarden van OD636 met een multifunctionele microplaatlezer.

5. Flowcytometrie-analyse van apoptose en de celcyclus

OPMERKING: Voor details over deze procedure wordt verwezen naar een eerder rapport31.

  1. Verbeter de cellen en oogst ze om te resuspenderen in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) gedurende een kleuring van 20 minuten met annexine V-FITC en propidiumjodide (PI) (zie de materiaaltabel) en bepaal vervolgens het aantal apoptotische cellen met behulp van een flowcytometer.
  2. Meng de geresuspendeerde monsteroplossing met PI-oplossing gedurende een incubatie van 30 minuten, gevolgd door detectie met een flowcytometer.

6. DCFH-DA en Fluo-4 AM fluorescentiekleuring

OPMERKING: Voor details over deze procedure wordt verwezen naar een eerder rapport29.

  1. Incubeer de MCF-7-cellen gedurende 20 minuten met een 10 μM DCFH-DA fluorescentiesonde (zie de materiaaltabel) bij 37 °C. Nadat u het overschot aan DCFH-DA grondig hebt verwijderd door drie keer te wassen met PBS, test u de fluorescentie-intensiteit bij excitatie- en emissiegolflengten van respectievelijk 488 nm en 525 nm met behulp van een fluorescentiemicroscoop.
  2. Incubeer de MCF-7-cellen met een 5 μM Fluo-4 AM fluorescerende sondeoplossing (zie de materiaaltabel) gedurende 45 minuten bij 37 °C. Bepaal na drie keer wassen met PBS de fluorescentie-intensiteitswaarden bij excitatie- en emissiegolflengten van respectievelijk 488 nm en 516 nm met behulp van een fluorescentiemicroscoop.

7. Westelijke vlek

  1. Voeg 2 ml van 5 x 10 6 cellen/ml celsuspensies met verschillende geneesmiddelen toe aan platen met6 putjes en kweek gedurende 24 uur in een incubator van 37 °C, 5% CO2 .
    OPMERKING: De groepen voor de western blot-analyse werden als volgt ingesteld: controlegroep, LY294002 (10 μM)-groep, Sal-groep (80 μM)-groep en LY294002-groep (10 μM) + Sal (80 μM) (zie de materiaaltabel).
  2. Verzamel de cellen en het supernatant en centrifugeer bij 560 × g bij 4 °C gedurende 3 min. Gooi het supernatant weg en was twee keer met voorgekoelde PBS. Centrifugeer de cellen na elke wasbeurt bij 560 × g bij 4 °C gedurende 3 min.
  3. Voeg 50 μL lysisbuffer toe aan het celmonster uit stap 7.2 voor een ijsbad van 15 minuten. Centrifugeer bij 8550 × g bij 4 °C gedurende 10 minuten om het bovenstaande eiwitmonster te verzamelen.
  4. Na het detecteren van de eiwitconcentratie met behulp van een BCA-methode, mengt u het eiwitmonster in stap 7.3 met de laadbuffer in een verhouding van 4:1, denatureert u gedurende 10 minuten bij 100 °C in een metaalbad en koelt u af tot kamertemperatuur.
  5. Voeg 20 μg van het eiwitmonster uit stap 7.4 toe, scheid de eiwitten met verschillende molecuulgewichten35met behulp van 10% SDS-PAGE (zie de tabel met materialen) en breng het vervolgens over naar PVDF-membranen van 0,22 μm. Na blokkade met 5% BSA de membranen met de bijbehorende primaire antilichamen 's nachts bij 4 °C incuberen.
    OPMERKING: De verdunde concentratie van de volgende primaire antilichamen is 1:1.000: gespleten caspase-9/7/3 (CC-9/7/3), Bim, Bax, Bcl-2, p-PI3K/PI3K, p-AKT/AKT, mTOR, HIF-1α, FoxO1 en β-actine (zie de materiaaltabel).
  6. De volgende dag de membranen incuberen met secundair IgG-antilichaam van geiten tegen konijnen gedurende 2 uur bij 37 °C. Ontwikkel de membranen met behulp van een ECL-chemiluminescente oplossing en leg beelden vast met behulp van een contactloos kwantitatief western blot-beeldvormingssysteem (zie de materiaaltabel).

8. qRT-PCR

  1. Voer centrifugatie uit om MCF-7-cellen te verzamelen bij 560 x g bij 4 °C gedurende 3 minuten en voeg 500 μL buffer RL1 toe aan 5 × 106 cellen. Blaas en meng herhaaldelijk met een pipet totdat er geen celmassa's meer zichtbaar zijn.
    OPMERKING: Buffer RL1 is een van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de materiaaltabel).
  2. Breng de in stap 8.1 bedoelde celhomogenaten over naar de DNA-reinigingskolom die in de verzamelbuis is ingebed en centrifugeer bij 8.550 × g bij 4 °C gedurende 2 min. Verwijder de DNA-reinigingskolom en bewaar het supernatans in de opvangbuis.
    OPMERKING: De DNA-reinigingskolom en de verzamelbuis zijn twee van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de materiaaltabel).
  3. Voeg 800 μL buffer RL2 toe aan 500 μL van het supernatans uit stap 8.2 en meng voorzichtig.
    OPMERKING: Buffer RL2 is een van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de materiaaltabel). Voeg voor gebruik 120 ml watervrije ethanol toe aan 60 ml buffer RL2.
  4. Breng 700 μl van het mengsel uit stap 8.3 over in de kolom met alleen RNA die in de verzamelbuis is ingebed en centrifugeer bij 8.550 × g bij 4 °C gedurende 1 minuut. Gooi de afvalvloeistof weg in de opvangbuis.
    OPMERKING: De kolom met alleen RNA is een van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de tabel met materialen).
  5. Herhaal stap 8.4 om het resterende mengsel van stap 8.3 te verwerken.
  6. Voeg 500 μL buffer RW1 toe aan de kolom met alleen RNA en centrifugeer gedurende 1 minuut bij 8.550 × g bij 4 °C. Gooi de afvalvloeistof weg in de opvangbuis.
    OPMERKING: Buffer RW1 is een van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de materiaaltabel).
  7. Voeg 700 μL buffer RW2 toe aan de kolom met alleen RNA en centrifugeer bij 8.550 × g bij 4 ◦C gedurende 1 minuut. Gooi de afvalvloeistof weg in de opvangbuis. Herhaal stap 8.7 eenmaal.
    OPMERKING: Buffer RW2 is een van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de materiaaltabel).
  8. Plaats de RNA-kolom terug in de verzamelbuis en centrifugeer gedurende 2 minuten bij 8550 × g bij 4 °C om de resterende buffer RW2 te verwijderen.
  9. Breng de RNA-kolom over naar een nieuwe verzamelbuis en druppel 100 μL RNase-vrije ddH2O voorverwarmd bij 65 °C in het midden van het membraan voor de RNA-only kolom. Breng gedurende 2 minuten bij 25 °C en vang de RNA-oplossing op door centrifugatie bij 8.550 × g bij 4 °C gedurende 1 min.
    OPMERKING: RNase-vrij ddH2O is een van de componenten in de totale RNA-isolatiekit (zie de materiaaltabel).
  10. Voeg 4 μL 5x reactiebuffer, 1 μL oligo (dT)18 primer, 1 μL willekeurige hexameerprimer, 1 μL genspecifieke primer (zie tabel 1), 1 μL enzymmix en 5 μg van de RNA-oplossing uit stap 8.9 toe aan een strip van 100 μL met 8 buizen. Vul het reactiesysteem aan met RNasevrij water tot 20 μL.
  11. Stel de reactiecondities van het systeem als volgt in: (1): 95 °C, 30 s, 1 cyclus; (2): 95 °C, 5 s, 50 cycli, 60 °C, 34 s; (3): 95 °C, 5 s, 1 cyclus, 65 °C, 60 s, 97 °C, 1 s; en (4): 42 °C, 30 s, 1 cyclus. Voer de qRT-PCR-procedure uit.
    OPMERKING: De relatieve expressieniveaus van de doelgenen werden kwantitatief geanalyseerd met behulp van de 2−ΔΔCT-methode 36,37. De primerinformatie van elk gen dat voor de qRT-PCR-analyse wordt gebruikt, staat vermeld in tabel 1.

9. Statistische analyse

  1. Druk de gegevens uit als het gemiddelde ± standaarddeviatie van drie onafhankelijke experimenten.
  2. Analyseer de vergelijkingen tussen meerdere groepen met behulp van grafiek- en analysesoftware (zie de tabel met materialen) met een eenrichtingsvariantieanalyse (ANOVA) gevolgd door een Tukey's test. In dit werk werd P < 0,05 gedefinieerd als statistisch significant.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Effecten van Sal op het remmen van overmatige proliferatie en het vertragen van wondgenezing in MCF-7-cellen
Om het potentieel van Sal tegen borstkanker te onderzoeken, hebben we eerst de kankerbestrijdende eigenschappen getest met behulp van celproliferatietoxiciteit en krastesten van de MCF-7-cellijn van borstkanker bij mensen. Deze cellen werden gedurende 24 uur gecoördineerd met een concentratiereeks van Sal (5-320 μM) en de celproliferatie werd geëvalueerd met behulp van een CCK-8-test. Er werd e...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Borstkanker treft mensen van alle leeftijden en veroorzaakt een onberekenbare fysieke en mentale belasting en grote economische druk1. Borstkanker, met zijn toenemende morbiditeit en mortaliteit elk jaar, heeft ook wereldwijd de aandacht getrokken in termen van het zoeken naar effectieve op kruiden gebaseerde samengestelde therapieën die verder gaan dan conventionele behandelingen 4,5. Veelbelovend is dat een grote hoeveelheid bewijs de an...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben niets te onthullen.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door de Gezondheidscommissie van de provincie Sichuan (120025).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1% penicillin/streptomycinHyCloneSV30010
AKT antilichaamImmunoWay Biotechnology CompanyYT0185
Annexin V-FITC/PI kitMultiSciences Biotech Co., Ltd.AP101
Automatische microplaatlezerMolecular DevicesSpectraMax iD5
Bax antilichaamCell Signaling Technology, Inc.#5023
BCA kitBiosharp Life SciencesBL521A
Bcl-2 antilichaamCell Signaling Technology, Inc.#15071
Bim antilichaamCell Signaling Technology, Inc.#2933
Ca2+–ATPase testkitNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA070-4-2
Celtelling kit-8Biosharp Life SciencesBS350B
Celcyclus kleuring kitMultiSciences Biotech Co., Ltd.CCS012
Geknipt caspase-3Cell Signaling Technology, Inc.#9661
Geknipt caspase-7Cell Signaling Technology, Inc.#8438
Geknipt caspase-9Cell Signaling Technology, Inc.#20750
Kristal violet oplossingBeyotime BiotechnologyC0121
DMEM hoge glucose kweekmediumServicebio Technology Co., Ltd.G4510
Doxorubicine hydrochlorideMedChemExpressHY-15142
ECL chemiluminescentie oplossingBiosharp Life SciencesBL520B
Fetaal runderserumProcell Life Science & Technology Co., Ltd.164210
Flow cytometerBDFACSCanto figure-materials-1
Fluo-4 AMBeyotime BiotechnologyS1060
FoxO1 antilichaamImmunoWay Biotechnology CompanyYT1758
Geit anti-konijn IgG secundair antilichaamMultiSciences Biotech Co., Ltd.70-GAR0072
GraphPad Prism softwareLa JollaVersie 6.0
HIF-1α antilichaamAffinity BiosciencesBF8002
Menselijke borstkanker cellijn MCF-7Procell Life Science & Technology Co., Ltd.CL-0149
Loading bufferBiosharp Life SciencesBL502B
LY294002MedChemExpressHY-10108
MatrigelThermo 356234
mTOR antilichaamServicebio Technology Co., Ltd.GB11405
Na+–K+–ATPase testkitNanjing Jiancheng Bioengineering InstituteA070-2-2
Optische microscoopOlympusIX71PH
p-AKT antilichaamImmunoWay Biotechnology CompanyYP0006
PI3K antilichaamServicebio Technology Co., Ltd.GB11525
p-PI3K antilichaamAffinity BiosciencesAF3241
Kwantitatief western blot beeldvormingssysteemTouch Image ProeBlot
Omgekeerde transcriptie eerste streng cDNA synthesekitServicebio Technology Co., Ltd.G3330-100
ROS testkitBeyotime BiotechnologyS0033SDCFH-DA fluorescentie probe is hierbij inbegrepen
SalidrosideChengdu Herbpurify Co., Ltd.H-040
SDS-PAGE kitServicebio Technology Co., Ltd.G2003-50T
Totale RNA isolatie kitForegeneRE-03014
TrypsineHyCloneSH30042.01
β-actinAffinity BiosciencesAF7018

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sung, H., et al. Global cancer statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Franzoi, M. A., et al. Evidence-based approaches for the management of side-effects of adjuvant endocrine therapy in patients with breast cancer. Lancet Oncology. 22 (7), e303-313 (2021).
  3. Prionas, N. D., Stephens, S. J., Blitzblau, R. C. Early-stage breast cancer: Tailored external beam fractionation approaches for treatment of the whole or partial breast. Seminars in Radiation Oncology. 32 (3), 245-253 (2022).
  4. Wei, W. C., et al. Diterpenoid vinigrol specifically activates ATF4/DDIT3-mediated PERK arm of unfolded protein response to drive non-apoptotic death of breast cancer cells. Pharmacological Research. 182, 106285(2022).
  5. Zhu, Y., et al. Apoptosis induction, a sharp edge of berberine to exert anti-cancer effects, focus on breast, lung, and liver cancer. Frontiers in Pharmacology. 13, 803717(2022).
  6. Ladewig, E., et al. The oncogenic PI3K-induced transcriptomic landscape reveals key functions in splicing and gene expression regulation. Cancer Research. 82 (12), 2269-2280 (2022).
  7. Lu, Z. N., Song, J., Sun, T. H., Sun, G. UBE2C affects breast cancer proliferation through the AKT/mTOR signaling pathway. Chinese Medical Journal. 134 (20), 2465-2474 (2021).
  8. Weng, H. C., et al. The combination of a novel GLUT1 inhibitor and cisplatin synergistically inhibits breast cancer cell growth by enhancing the DNA damaging effect and modulating the Akt/mTOR and MAPK signaling pathways. Frontiers in Pharmacology. 13, 879748(2022).
  9. Silveira Rabelo, A. C., et al. Calotropis procera induced caspase dependent apoptosis and impaired Akt/mTOR signaling in 4T1 breast cancer cells. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry. 22 (18), 3136-3147 (2022).
  10. Tohkayomatee, R., Reabroi, S., Tungmunnithum, D., Parichatikanond, W., Pinthong, D. Andrographolide exhibits anticancer activity against breast cancer cells (MCF-7 and MDA-MB-231 cells) through suppressing cell proliferation and inducing cell apoptosis via inactivation of ER-α receptor and PI3K/AKT/mTOR signaling. Molecules. 27 (11), 3544(2022).
  11. Jin, X. Y., et al. TPI1 activates the PI3K/AKT/mTOR signaling pathway to induce breast cancer progression by stabilizing CDCA5. Journal of Translational Medicine. 20 (1), 191(2022).
  12. Li, Z. W., et al. Atractylodin induces oxidative stress-mediated apoptosis and autophagy in human breast cancer MCF-7 cells through inhibition of the P13K/Akt/mTOR pathway. Journal of Biochemical and Molecular Toxicology. 36 (8), 23081(2022).
  13. Chen, F., et al. Extracellular vesicle-packaged HIF-1α-stabilizing lncRNA from tumour-associated macrophages regulates aerobic glycolysis of breast cancer cells. Nature Cell Biology. 21 (4), 498-510 (2019).
  14. You, D., et al. Mitochondrial malic enzyme 2 promotes breast cancer metastasis via stabilizing HIF-1α under hypoxia. Chinese Journal of Cancer Research. 33 (3), 308-322 (2021).
  15. La Camera, G., et al. Adipocyte-derived extracellular vesicles promote breast cancer cell malignancy through HIF-1α activity. Cancer Letters. 521, 155-168 (2021).
  16. Jeong, Y. J., et al. Ascofuranone suppresses EGF-induced HIF-1α protein synthesis by inhibition of the Akt/mTOR/p70S6K pathway in MDA-MB-231 breast cancer cells. Toxicology and Applied Pharmacology. 273 (3), 542-550 (2013).
  17. Zhang, T., et al. Targeting the ROS/PI3K/AKT/HIF-1α/HK2 axis of breast cancer cells: Combined administration of polydatin and 2-deoxy-d-glucose. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (5), 3711-3723 (2019).
  18. Han, N. N., et al. HIF-1α induced NID1 expression promotes pulmonary metastases via the PI3K-AKT pathway in salivary gland adenoid cystic carcinoma. Oral Oncology. 131, 105940(2022).
  19. Sun, L. T., Zhang, L. Y., Shan, F. Y., Shen, M. H., Ruan, S. M. Jiedu Sangen decoction inhibits chemoresistance to 5-fluorouracil of colorectal cancer cells by suppressing glycolysis via PI3K/AKT/HIF-1α signaling pathway. Chinese Journal of Natural Medicines. 19 (2), 143-152 (2021).
  20. Gao, T., et al. SIK2 promotes reprogramming of glucose metabolism through PI3K/AKT/HIF-1α pathway and Drp1-mediated mitochondrial fission in ovarian cancer. Cancer Letters. 469, 89-101 (2020).
  21. Zhu, W. H., et al. Dihydroartemisinin suppresses glycolysis of LNCaP cells by inhibiting PI3K/AKT pathway and downregulating HIF-1α expression. Life Sciences. 233, 116730(2019).
  22. Sajadimajd, S., Yazdanparast, R. Differential behaviors of trastuzumab-sensitive and -resistant SKBR3 cells treated with menadione reveal the involvement of Notch1/Akt/FOXO1 signaling elements. Molecular and Cellular Biochemistry. 408 (1-2), 89-102 (2015).
  23. Sajadimajd, S., Yazdanparast, R., Akram, S. Involvement of Numb-mediated HIF-1α inhibition in anti-proliferative effect of PNA-antimiR-182 in trastuzumab-sensitive and -resistant SKBR3 cells. Tumor Biology. 37 (4), 5413-5426 (2016).
  24. Rong, L., et al. Salidroside induces apoptosis and protective autophagy in human gastric cancer AGS cells through the PI3K/Akt/mTOR pathway. Biomedicine & Pharmacotherapy. 122, 109726(2020).
  25. Zeng, Q., et al. Salidroside promotes sensitization to doxorubicin in human cancer cells by affecting the PI3K/Akt/HIF signal pathway and inhibiting the expression of tumor-resistance-related proteins. Journal of Natural Products. 85 (1), 196-204 (2022).
  26. Wang, X. B., et al. Rhodiola crenulata attenuates apoptosis and mitochondrial energy metabolism disorder in rats with hypobaric hypoxia-induced brain injury by regulating the HIF-1α/microRNA210/ISCU1/2 (COX10) signaling pathway. Journal of Ethnopharmacology. 241, 111801(2019).
  27. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. European Journal of Pharmacology. 912, 174617(2021).
  28. Jiang, S. N., et al. Salidroside attenuates high altitude hypobaric hypoxia-induced brain injury in mice via inhibiting NF-κB/NLRP3 pathway. European Journal of Pharmacology. 925, 175015(2022).
  29. Wang, X. B., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115278(2022).
  30. Vasileva, L. V., et al. Antidepressant-like effect of salidroside and curcumin on the immunoreactivity of rats subjected to a chronic mild stress model. Food and Chemical Toxicology. 121, 604-611 (2018).
  31. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).
  32. Fan, F. F., et al. Salidroside as a potential neuroprotective agent for ischemic stroke: A review of sources, pharmacokinetics, mechanism and safety. Biomedicine & Pharmacotherapy. 129, 110458(2020).
  33. Hu, X. L., Zhang, X. Q., Qiu, S. F., Yu, D. H., Lin, S. X. Salidroside induces cell-cycle arrest and apoptosis in human breast cancer cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 398 (1), 62-67 (2010).
  34. Zhao, G., Shi, A. P., Fan, Z. M., Du, Y. Salidroside inhibits the growth of human breast cancer in vitro and in vivo. Oncology Reports. 33 (5), 2553-2560 (2015).
  35. Bai, J. R., et al. The enhanced mitochondrial dysfunction by cantleyoside confines inflammatory response and promotes apoptosis of human HFLS-RA cell line via AMPK/Sirt 1/NF-κB pathway activation. Biomedicine & Pharmacotherapy. 149, 112847(2022).
  36. Hou, Y., et al. Longzhibu disease and its therapeutic effects by traditional Tibetan medicine: Ershi-wei Chenxiang pills. Journal of Ethnopharmacology. 249, 112426(2020).
  37. Yang, L., et al. Dengzhan Xixin injection derived from a traditional Chinese herb Erigeron breviscapus ameliorates cerebral ischemia/reperfusion injury in rats via modulation of mitophagy and mitochondrial apoptosis. Journal of Ethnopharmacology. 288, 114988(2022).
  38. Cui, L. J., et al. Salidroside promotes apoptosis of human HCT116 colon cancer cells by regulating Wnt/β-catenin signaling pathway. Pharmacological Research - Modern Chinese Medicine. 3, 100088(2022).
  39. Wu, S. L., et al. Genome-wide 5-Hydroxymethylcytosine profiling analysis identifies MAP7D1 as a novel regulator of lymph node metastasis in breast cancer. Genomics Proteomics & Bioinformatics. 19 (1), 64-79 (2021).
  40. Du, J. W., et al. Targeted NIRF/MR dual-mode imaging of breast cancer brain metastasis using BRBP1-functionalized ultra-small iron oxide nanoparticles. Materials Science & Engineering C-Materials for Biological Applications. 116, 111188(2020).
  41. Wang, S. F., et al. Mitochondrial stress adaptation promotes resistance to aromatase inhibitor in human breast cancer cells via ROS/calcium up-regulated amphiregulin-estrogen receptor loop signaling. Cancer Letters. 523, 82-99 (2021).
  42. Zuo, Y., et al. Activation of mitochondrial-associated apoptosis signaling pathway and inhibition of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway by voacamine suppress breast cancer progression. Phytomedicine. 99, 154015(2022).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Werking van salidrosideMCF 7 cellenborstkankercelmigratiePI3K AKT routecelapoptoseWestern blotflowcytometrieqRT PCR

Gerelateerde artikelen