Methodenartikel

Tandem-massaspectrometrie met hoge resolutie voor het bestuderen van chemische bestanddelen van Gynura bicolor DC

1.4K weergaven

⸱

DOI:

10.3791/66612

⸱

2 februari 2024

 ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Clinical Research Center for Dermatology, Chongqing Key Laboratory of Integrative Dermatology Research, Key Laboratory of External Therapies of Traditional Chinese Medicine in Eczema, Department of Dermatology, Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine, 2General Surgery, Chongqing Hospital of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

We beschrijven een algemeen protocol dat massaspectrometrie-analyse met hoge resolutie en moleculaire docking integreert in onderzoek naar traditionele Chinese geneeskunde.

Samenvatting

Het scheiden en analyseren van de gewenste chemische componenten zijn belangrijke onderwerpen voor het fundamenteel onderzoek van de traditionele Chinese geneeskunde (TCM). Ultra-high-performance vloeistofchromatografie quadrupole time-of-flight tandem massaspectrometrie (UPLC-Q-TOF-MS/MS) is geleidelijk uitgegroeid tot een toonaangevende technologie voor de identificatie van TCM-ingrediënten. Gynura tweekleurig gelijkstroom. (BFH), een overblijvend stengelloos kruid dat in China wordt gebruikt voor medicijnen en voedsel, heeft geneeskrachtige effecten zoals het opruimen van warmte, het bevochtigen van de longen, het verlichten van hoest, het verspreiden van stasis en het verlichten van zwelling. Polyfenolen en flavonoïden bevatten talrijke isomeren, die de identificatie van de complexe verbindingen in BFH belemmeren. Dit artikel presenteert een systematisch protocol voor het bestuderen van chemische bestanddelen van BFH op basis van oplosmiddelextractie en geïntegreerde gegevens via UPLC-Q-TOF-MS.

De hier beschreven methode omvat systematische protocollen voor de voorbehandeling van monsters, MS-kalibratie, MS-acquisitie, gegevensverwerking en analyse van resultaten. De voorbehandeling van het monster omvat het verzamelen, reinigen, drogen, vermalen en extraheren. MS-kalibratie bestaat uit meerpunts- en enkelpuntscorrectie. Gegevensverwerking omvat het importeren van gegevens, het vaststellen van methoden, analyseverwerking en presentatie van resultaten. Representatieve resultaten van het typische fragmentatiepatroon van fenolzuren, esters en glycosiden in Gynura bicolor DC. (BFH) worden in dit artikel gepresenteerd. Daarnaast worden de selectie van organische oplosmiddelen, extractie, data-integratie, selectie van botsingsenergie en methodeverbetering in detail besproken. Dit universele protocol kan op grote schaal worden gebruikt om complexe verbindingen in TCM te identificeren.

Inleiding

Traditionele Chinese geneeskunde (TCM) wordt al duizenden jaren klinisch beoefend in China en speelt een cruciale rol bij het behoud van de gezondheid vanChinezen. De samenstelling van TCM is divers en complex, en TCM is op grote schaal gerapporteerd in veel kwalitatieve onderzoeken die zich richten op de chemische samenstelling2. De chemische componenten in TCM kunnen grofweg worden onderverdeeld in de volgende categorieën, zoals alkaloïden, organische zuren, fenylpropanoïden, coumarines, lignanen, chinonen, flavonoïden, terpenoïden, triterpenoïde saponinen, steroïde saponinen, hartglycosiden en tannines3. Gezien de grote aantallen onbekende componenten en niet van elkaar te onderscheiden isomeren in TCM, zijn de scheiding en analyse van de gewenste chemische componenten belangrijke onderwerpen voor het fundamentele onderzoek van TCM4.

Ultra-high-performance vloeistofchromatografie quadrupole time-of-flight massaspectrometrie (UPLC-Q-TOF-MS) is toegepast om stoffen in de traditionele Chinese geneeskunde (TCM) te analyseren, die kunnen worden gescheiden door ultra-high-performance vloeistofchromatografie 5,6. De hoge resolutie van MS kan uitgebreide ioneninformatie opleveren, die wordt gebruikt voor database-analyse met een fout van minder dan 5 ppm7. Na het inschakelen van de botsingsenergie kan de secundaire MS-modus secundaire fragmentionen verkrijgen, waarvan de intensiteit en het aantal worden beïnvloed door de grootte van energie8.

Gynura tweekleurig gelijkstroom. (BFH), een overblijvend stengelloos kruid dat veel wordt gebruikt voor medicijnen en voedsel (Figuur 1A), is een zeldzame en bedreigde plant die uniek is voor China9. BFH heeft een overvloed aan anthocyanen, polyfenolen, flavonoïden en een sterke antioxidantcapaciteit10. BFH heeft medicinale effecten, waaronder het opruimen van warmte, het koelen van bloed, het bevochtigen van de longen, het verlichten van hoest, het verspreiden van stasis, het verlichten van zwelling, het verlichten van zomerhitte en het elimineren van hitte. Er zijn maar weinig studies die zich hebben gericht op de chemische samenstelling van BFH11. Polyfenolen en flavonoïden bevatten talrijke isomeren, die de identificatie van de complexe verbindingen in BFH bemoeilijken. Er moet een universele methode worden ontwikkeld voor de identificatie van chemische componenten, die kan worden toegepast op alle soorten TCM. Deze studie had tot doel een systematisch protocol te rapporteren voor het bestuderen van chemische bestanddelen van BFH op basis van oplosmiddelextractie en geïntegreerde gegevens via UPLC-Q-TOF-MS.

Protocol

1. Voorbehandeling van de steekproef

  1. Was het hele kruid BFH in zuiver water totdat er geen zichtbare afzettingen en onzuiverheden meer zijn. Doe de schone BFH in een schaal en plaats deze vervolgens in de oven (Figuur 1B). Zet de oven 24 uur op 50 °C.
    OPMERKING: De volledige plant van BFH werd verzameld in de provincie Sichuan, China.
  2. Plet gedroogde BFH in een multifunctionele breker met hoge snelheid. Breng het grove poeder over in een zeef met mazen van 50 mazen (Figuur 1C). Verzamel het fijne poeder in een luchtdichte zak en bewaar het in een droogtoren.
  3. Weeg nauwkeurig zes BFH-monsters van elk 0,25 g af en plaats ze in zes kegelvormige kolven. Voeg 30 ml organisch oplosmiddel (50% ethanolwater, 70% ethanolwater, chloroform, petroleumether, ethylacetaat en n-butylalcohol) toe aan elke conische fles (Figuur 1D).
  4. Breng het mengsel over naar een ultrasone badsonicator voor 30 minuten extractie bij 25 °C. Centrifugeer het monster bij 14.000 x g gedurende 5 minuten. Bereid een injectiespuit en een organisch microporeus membraanfilter van 0,22 μm voor. Filtreer alle supernatanten in monsterflesjes van 2 ml.

2. MS-kalibratie

  1. Breng met een pipet van 1.000 μl 500 μl natriumhydroxideoplossing van 0,1 M over in een maatkolf van 100 ml en breng vervolgens 450 μl gedeïoniseerd of ultrapuur water over in de maatkolf van 100 ml (figuur 2).
  2. Voeg met een pipet van 200 μl 50 μl mierenzuur toe aan de maatkolf van 100 ml. Maak een totaal volume van 100 ml met 90:10 2-propanol:water en sonificeer de oplossing gedurende 5 minuten. Etiketteer de kolf als 0,5 mM natriumformiaatoplossing in 90:10 2-propanol:water en bewaar deze in de koelkast.
    OPMERKING: De natriumformiaatoplossing vervalt binnen 1 week bij kamertemperatuur.
  3. Start de besturingssoftware UPLC-Q-TOF-MS en open vervolgens het MS tune-venster . Stel in het Sample Flow Control-paneel 25 μL/min in bij de optie Infusion Flow Rate en selecteer C bij de optie Reservoir . Wacht ongeveer 1 minuut totdat de automatische ontluchting tot het einde is.
  4. Klik op de Flow-knop om te beginnen met het toedienen van natriumformiaatoplossing. Klik op de positieve knop om over te schakelen naar de positieve ionenmodus en klik op de gevoeligheidsknop om over te schakelen naar de gevoeligheidsmodus.
    OPMERKING: Ga verder met de volgende stap totdat de karakteristieke pieken van natriumformiaat verschijnen in het real-time spectrumvenster.
  5. Open in de besturingssoftware UPLC-Q-TOF-MS het venster MS Console . Selecteer in de linkerpositie achtereenvolgens de opties SYNAPT XS en Intellistart .
  6. Vink de Kalibratie maken aan en klik op de Start knop. Klik op de knop Volgende en selecteer Kalibratieprofiel in het vervolgkeuzemenu. Klik op de knop Volgende en selecteer de gevoeligheidsmodus in positieve polariteit. Klik achtereenvolgens op de knoppen Volgende, Pagina Afstemmen, Volgende en Start .
  7. Schakel over naar het MS tune-venster en klik op de negatieve knop om over te schakelen naar de negatieve ionenmodus. Ga terug naar het MS Console-venster .
  8. Vink de Kalibratie maken aan en klik op de Start knop. Klik op de knop Volgende en selecteer Kalibratieprofiel in het vervolgkeuzemenu. Klik op de knop Volgende en selecteer de gevoeligheidsmodus in negatieve polariteit. Klik achtereenvolgens op de knoppen Volgende, Pagina Afstemmen, Volgende en Start .
  9. Stel in het LockSpray Flow Control-paneel een debiet van 50 μL/min in en klik op de Flow-knop om de LE-oplossing in de massaspectrometer te laten komen. Schakel over naar het MS-tune-venster , vink de LockSpray Source Setup aan en klik op de Start-knop om de kalibratie te starten.

3. Overname van LS

  1. Schakel over naar de hoofdinterface en klik met de rechtermuisknop op de kolom Inlaatbestand om de vloeistofchromatografiemethode te openen.
  2. Klik op de knop Inlaat en stel vervolgens parameters in, waaronder Looptijd en Gradiënt. Klik op de knop Autosampler en stel vervolgens parameters in, waaronder Runtime, Column en Sample. Klik op de knop Opslaan .
  3. Klik met de rechtermuisknop op de kolom MS-methode om de massaspectrometriemethode te openen.
  4. Klik op de knop Informatie en stel vervolgens parameters in, waaronder Eindtijd, Polariteit, Analysatormodus, Lage massa, Hoge massa en Ramp Transfer Collision Energy. Klik op de knop OK en vervolgens op de knop Opslaan .
  5. Vul de sequentietabel in, inclusief bestandsnaam, flacon en volume. Klik op de knop Opslaan .
  6. Selecteer de rij in de volgordetabel voor het voorbeeld dat u wilt uitvoeren. Klik op de knop Uitvoeren en klik op de knop OK in het venster dat zojuist verschijnt.

4. Gegevensverwerking

  1. Start de software voor gegevensanalyse. Klik in de kolom Mijn werk op de knop MassLynx-gegevens importeren om een nieuw venster te openen.
  2. Klik op de plustekenknop en controleer alle vijf onbewerkte bestanden vanuit de positieve modus. Voer een groepsnaam in en klik op de knop UNIFI-voorbeeldset maken om het importeren van gegevens te starten (Afbeelding 3A).
  3. Dubbelklik op het bestand Analysemethode in de positieve modus. Klik op het verwerkingslabel en klik op de knop Target by Mass . Voer het aantal van 5 ppm in het invoervak in na Tolerantie voor doelovereenkomst en Tolerantie voor fragmentovereenkomst.
  4. Klik op de Home-knop en klik op de Adducts-knop . Selecteer de rijen van +H en +Na en klik op de pijlvormige knop naar rechts . Klik op de knop Opslaan (Figuur 3B).
  5. Dubbelklik op het bestand Analysemethode in de negatieve modus. Klik op het verwerkingslabel en klik op de knop Target by Mass . Voer het aantal van 5 ppm in het invoervak in na Tolerantie voor doelovereenkomst en Tolerantie voor fragmentovereenkomst.
  6. Klik op de Home-knop en klik vervolgens op de Adducts-knop . Selecteer de rijen van -H en +HCOO en klik op de pijlvormige knop naar rechts . Klik op de knop Opslaan .
  7. Klik in de kolom Mijn werk op de knop Analyse om een nieuw venster te openen. Kies de zojuist geïmporteerde gegevens en de zojuist gemaakte methode en klik vervolgens op de knop Volgende. Voer de bestandsnaam in. Selecteer de map waarin de analysegegevens zijn opgeslagen en klik vervolgens op de knop Voltooien
  8. Klik op de knop Verwerken en wacht een paar minuten totdat de resultaten verschijnen (Figuur 3C).
  9. Kopieer de resultatentabel naar een leeg formulier (Figuur 3D).

5. Analyse van de resultaten

  1. Selecteer een verbinding in de resultatentabel. Het bijbehorende secundaire massaspectrum wordt weergegeven in de rechterbenedenhoek (Figuur 4A).
  2. Klik op de tabelvormige knop en selecteer de optie Hoge Energie Fragmenten om de tabel met secundaire fragmentionen weer te geven (Figuur 4B).
  3. Selecteer een secundair fragmention in de tabel. Beweeg de muis over de ionenpiek die overeenkomt met het secundaire massaspectrum en de bijbehorende structurele breuk wordt op het scherm weergegeven (Figuur 4C).
    OPMERKING: Beoordeel handmatig de redelijkheid van het kraken dat door de software wordt gegeven en onderscheid isomeren op basis van de secundaire fragmentionen.
  4. Teken het fragmentatiepatroon handmatig in de tekensoftware.
    OPMERKING: Voorbeelden van fragmentatiepatronen worden in detail beschreven in de sectie representatieve resultaten.

Resultaten

De identificatie van de chemische samenstelling van BFH werd gebruikt als model om de representatieve resultaten weer te geven. Basispiekchromatogrammen van met oplosmiddel geëxtraheerde Gynura bicolor DC. worden weergegeven in aanvullend bestand 1-aanvullende figuur S1-S6, en de waargenomen retentietijd (RT), componentnaam, formule, massa-tot-ladingsverhouding (m/z) en massafout worden vermeld in tabellen S1-S6. In de ZBTK werden alle 35 soorten verbindingen geïdentificeerd uit afzonderlijke pieken in UPLC-TOF-MS. Zoals weergegeven in aanvullend dossier 1-Aanvullende tabel S1, bevatten de belangrijkste chemicaliën zuur (kininezuur, DL-appelzuur, citroenzuur, o-coumarinezuur en 3-O-trans-coumaroylquininezuur), glycosiden (gentiopicrine, picroside II, suffruticoside J, copoline en borneol-2-O-β-D-apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucoside) en esters (bilobalide, trimethylcitraat en trans-O-glucosyl-methyl-trans-cinnamaat). In de ZBTK-CT werden 25 soorten extra verbindingen gedetecteerd (Supplemental File 1-Supplemental Table S2) en 45 soorten totale verbindingen werden waargenomen.

Toen chloroform als extractiemiddel werd gebruikt, werden alle 50 verbindingen gevonden. Onder hen omvatten de 28 soorten extra verbindingen coronarinezuur, sanlengzuur, agrimol A en methylartemisaat (aanvullend bestand 1-aanvullende tabel S3). Toen petroleumether als extractiemiddel werd gebruikt, werden 44 soorten totale verbindingen waargenomen. We vonden 17 soorten extra verbindingen, waaronder notopterol, onjisaponine en cnideol B (aanvullend bestand 1-aanvullende tabel S4). In totaal werden 65 verbindingen verkregen in oplosmiddel met behulp van ethylacetaat als extractiemiddel. Vergeleken met de vorige vier extractieven werden 37 extra verbindingen opgemerkt, zoals daphnetine, acetovanillon B en stigmasterol-3-O-β-D-glucoside (aanvullend bestand 1-aanvullende tabel S5). In de extractivische butylalcohol vonden we 67 soorten totale verbindingen, die 26 soorten extra verbindingen bevatten, waaronder rengyoside C, chromonen, aturameteline F en deacetylmatricarine-8-O-β-D-glucopyranoside (aanvullend bestand 1-aanvullende tabel S6). Samenvattend vonden we 168 verbindingen op basis van alle verbindingsresultaten van zes extracten.

Om de splitsingsroute van verbindingstypen in UPLC-TOF-MS diepgaand te begrijpen, hebben we drie verbindingen als voorbeelden geselecteerd. Voor zuren zou 3-O-trans-coumaroylquininezuur met m/z = 337,09222 een C7H10O5 of C9H8O2 groep kunnen verliezen via de hydrolysereactie om tussenproducten te vormen met respectievelijk m/z = 163,04116 of 199,05557 (Figuur 4D). Voor esters kan trans-O-glucosyl-methyl-trans-cinnamaat met m/z = 385,11308 worden omgezet in intermediair met m/z = 153,07485 of 135,04679 via C-C-splitsing op verschillende plaatsen (Figuur 4E). Voor glycosiden werd citrusine C met m/z = 385,11308 getransformeerd in intermediair met m/z = 272,09174 via C-C bindingssplitsing in de alifatische keten, terwijl het verlies van de C7H6O2-groep resulteerde in intermediair met m/z = 113,02534 (Figuur 4F). In een andere route leidde de breuk van de C-O-C-binding op de benzeenring tot de vorming van een tussenproduct met m/z = 163,11245, terwijl de hexose-eenheid verdween.

De representatieve resultaten van moleculaire docking onthulden respectievelijk 2D- en 3D-structuren in figuur 4G,H. Analyse van de verrijking van de genontologie toonde de resultaten van de genfunctie in termen van biologisch proces (BP), cellulaire component (CC) en moleculaire functie (MF; Figuur 4I). De Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes pathway annotation analysis toonde de pathway-resultaten van differentieel tot expressie gebrachte genen, die zouden kunnen worden gebruikt om de functie van genen verder te begrijpen (Figuur 4J). De gedetailleerde resultaten van moleculaire docking worden weergegeven in Supplemental File 1-Supplemental Table S7 en Supplemental File 1-Supplemental Figure S7-S9.

figure-results-1
Figuur 1: Voorbehandelingsmethode van de traditionele Chinese geneeskunde. (A) Gynura bicolor DC. (B) Reinigen en drogen. (c) Verpulvering. (D) Additie van organische oplosmiddelen. (E) Ultrasone extractie. (F) Centrifugeren van het mengsel. (G) Filtratie van supernatant. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-2
Figuur 2: Bedieningsprocedure van UPLC-Q-TOF-MS/MS. (A) Natriumformiaatpreparaat. (B) Kalibratie van de massaas. (C) MS-afstemming. (D) Plaatsing van de steekproef. (E) Massaal spectrum verwerven. (F) Weergave van het massaspectrum. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-3
Figuur 3: Gegevensverwerking en -integratie. (A) Gegevensconversie. (B) Wijziging van de methode. (C) Gegevensverwerking. (D) Statistische analyse van de resultaten. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figure-results-4
Figuur 4: Diepgaande analyse van de resultaten. (A) Secundair massaspectrum. (B) Weergave van secundaire fragmentionen. (C) Weergave van de fractuurplaats. (D) fragmentatiepatroon 1. (E) Fragmentatiepatroon 2. (F) Fragmentatiepatroon 3. (G) Demonstratie van het streefdoel voor de werkzame stof. (H) 3D-structuur van het actiedoel van de werkzame stof. (I) GO-verrijkingsanalyse. (J) Analyse van annotatie van de KEGG-route. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Aanvullend bestand 1: Identificatie van verbindingen, moleculaire dockingresultaten, basepiekchromatogrammen en netwerkanalyse. Klik hier om dit bestand te downloaden.

Discussie

Naast waterafkooksel12 is extractie met organische oplosmiddelen een andere veelgebruikte methode voor TCM-voorbehandeling13. Volgens het principe van gelijksoortige fase-oplossing zijn talrijke componenten geëxtraheerd door de combinatie van verschillende organische oplosmiddelen14. Ultrasoon geassisteerde extractie is een van de belangrijkste methoden die worden gebruikt om componenten in TCM15 te verkrijgen. Superkritische kooldioxide-extractie is goed voor het extraheren van bepaalde soorten stoffen, zoals lignanen16. Bovendien werd microgolf-geassisteerde extractie in ionische vloeistoffen (IL's) onderzocht als alternatief voor conventionele extracties met organische oplosmiddelen17. De precieze regeling van de microgolfenergie is echter moeilijk te bereiken, wat secundaire reacties kan veroorzaken, zoals etherificatie, uitdroging en verestering, uitdroging.

Optimale instellingen van botsingsenergie kunnen extra tweede-orde MS-fragmentinformatie opleveren. Informatie van tandem MS, d.w.z. MSE-modus , werd geleverd door twee parallelle afwisselende scans met behulp van ofwel lage energie om moleculaire ioneninformatie te verkrijgen of hoge energie om volledige scannauwkeurige massafragmentionen te verkrijgen18. Tijdens het instellen van hoogenergetische parameters wordt meestal het bereik van 10-35 V gebruikt bij de overdracht van botsingsenergie om de efficiëntie van de voorloperfragmentatie te verbeteren19.

De enorme hoeveelheid ruwe MS-gegevens werd gegenereerd uit MS-gegevens met een hoge resolutie. Ruwe MS-gegevens, waaronder moleculaire ionenpieken in het MS-spectrum en fragmentionenpieken in het MS/MS-spectrum, moeten grondig worden verwerkt en geïntegreerd. MS-software voor gegevensanalyse was gericht op het uitgebreid analyseren van alle metabolieten in een biologisch monster20. De screening van gesulfaatde metabolieten was gebaseerd op de gegevensafhankelijke verwerving van volledige MS-scans en multidimensionale metabolietgegevens21. Op basis van de evoluerende technologie zal het voorspellen van kunstmatige intelligentie een haalbare ontwikkelingsrichting zijn voor de analyse van MS-gegevens.

De meeste verbindingen kunnen met deze methode worden geïdentificeerd. De beperkte secundaire fragmenten kunnen echter niet alle isomeren volledig identificeren, inclusief flavonoïden en tannines. Om structuuridentificatie te bereiken, kunnen onderzoekers tandem-massaspectrometrie gebruiken om meer informatie te verstrekken over fragmentionen, die helpen bij de identificatie van samengestelde structuren8. Gezien de beperking van de chemische ionisatiebron elektrospray-ionisatie of atmosfeerdruk, is MS met hoge resolutie niet geschikt voor macromolecuulanalyse. Matrix-ondersteunde laserdesorptie-ionisatie kan de ionisatie van grote moleculaire verbindingen, zoals eiwitten, bevorderen22. Samenvattend is UPLC-Q-TOF-MS/MS een van de meest breed toepasbare technieken voor de identificatie van TCM-verbindingen. Het heeft het potentieel om te worden toegepast op andere gebieden, waaronder klinische geneeskunde en energiechemie.

Openbaarmakingen

De auteurs verklaren dat er geen concurrerende financiële belangen zijn.

Dankbetuigingen

Dit werk werd gefinancierd door de National Natural Science Foundation of China (82104881), Inheritance and Innovation Team of TCM Treatment of Immune Diseases, Chongqing Medical Scientific Research Project (gezamenlijk project van Chongqing Health Commission en Science and Technology Bureau) (2022DBXM007), Een speciaal project voor prestatieprikkeling en begeleiding van het Chongqing Scientific Research Institute (cstc2022jxjl120005), Een speciaal project voor Chongqing Postdoctoral Science Foundation (2022CQBSHTB3035), Senior Medical Talents Program van Chongqing voor Yong en mensen van middelbare leeftijd, het programma voor wetenschappelijke instellingen van Chongqing (onafhankelijk onderzoeksproject nr. 2022GDRC015).

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
chloroformSinopharm Chemical ReagentCo., LtdCAS 67-66-3
ethanolChuandongChemicalCAS 64-17-5
ethyl acetateChuandongChemicalCAS 141-78-6
liquid chromatographWatersACQUITY Class 1 plus
MassLynxWatersV4.2MS control software
n-butyl alcoholChuandongChemicalCAS 71-36-3
petroleum etherChuandongChemicalCAS 8032-32-4
Quadrupole time-of-flight mass spectrometryWatersSYNAPT XS
UNIFIWatersData analysis software

Referenties

  1. Lin, P., et al. Qualitative and quantitative analysis of the chemical profile for gualou-xiebai-banxia decoction, a classical traditional chinese medicine formula for the treatment of coronary heart disease, by uplc-q/tof-ms combined with chemometric analysis. J Pharm Biomed Anal. 197, 113950(2021).
  2. Hui, D., et al. Uplc-q-tof/ms-based metabolomic studies on the toxicity mechanisms of traditional chinese medicine chuanwu and the detoxification mechanisms of gancao, baishao, and ganjiang. Chinese J Nat Med. 13 (9), 687-698 (2015).
  3. Newman, D. J. Modern traditional chinese medicine: Identifying, defining and usage of tcm components. Adv Pharmacol. 87, 113-158 (2020).
  4. Liu, S., Yi, L. Z., Liang, Y. Z. Traditional chinese medicine and separation science. J Sep Sci. 31 (11), 2113-2137 (2008).
  5. Yuan, L., et al. Rapid classification and identification of complex chemical compositions in traditional chinese medicine based on uplc-q-tof/ms coupled with data processing techniques using the kudiezi injection as an example. Anal Methods. 7 (12), 5210-5217 (2015).
  6. Wang, F., et al. Hplc coupled with chemical fingerprinting for multi-pattern recognition for identifying the authenticity of clematidis armandii caulis. JoVE. (189), e64690(2022).
  7. Gao, Y., et al. Ultra high-performance liquid chromatography-mass spectrometry and self-established database analysis of chinese herbal medicine components. JoVE. (201), e66091(2023).
  8. Fu, X., et al. Standardized identification of compound structure in tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis. JoVE. (193), e65054(2023).
  9. Wang, Y., et al. Comparison of morphological and physiological characteristics in two phenotypes of a rare and endangered plant, begonia fimbristipula hance. Photosynthetica. 54, 381-389 (2016).
  10. Zhang, P., et al. Response of population canopy color gradation skewed distribution parameters of the rgb model to micrometeorology environment in begonia fimbristipula hance. Atmosphere. 13 (6), 890(2022).
  11. Yu, L., Ning, L., Youzhen, D. Studies on microwave extraction of the pigment from begonia fimbristipula hance. Guangdong Trace Elements Science. 11 (10), 60-63 (2004).
  12. Xiao, Q., et al. Novel fusion protein consisting of metallothionein, cellulose binding module, and superfolder gfp for lead removal from the water decoction of traditional chinese medicine. ACS Omega. 5 (6), 2893-2898 (2020).
  13. Huang, H., et al. Using multiple light scattering to examine the stability of phyllanthus emblica l. Extracts obtained with different extraction methods. JoVE. (194), e65130(2023).
  14. Miao, W. G., Tang, C., Ye, Y., Quinn, R. J., Feng, Y. Traditional chinese medicine extraction method by ethanol delivers drug-like molecules. Chin J Nat Med. 17 (9), 713-720 (2019).
  15. Olejar, K. J., et al. Ultrasonic-assisted extraction of cannabidiolic acid from cannabis biomass. JoVE. (183), e63076(2022).
  16. Zhu, H. Y., et al. Sedative and hypnotic effects of supercritical carbon dioxide fluid extraction from schisandra chinensis in mice. J Food Drug Anal. 24 (4), 831-838 (2016).
  17. Lin, X., Wang, Y., Liu, X., Huang, S., Zeng, Q. Ils-based microwave-assisted extraction coupled with aqueous two-phase for the extraction of useful compounds from chinese medicine. Analyst. 137 (17), 4076-4085 (2012).
  18. Wu, T., Lv, H., Wang, F., Wang, Y. Characterization of polyphenols from lycium ruthenicum fruit by uplc-q-tof/mse and their antioxidant activity in caco-2 cells. J Agric Food Chem. 64 (11), 2280-2288 (2016).
  19. Distler, U., et al. Drift time-specific collision energies enable deep-coverage data-independent acquisition proteomics. Nat Methods. 11 (2), 167-170 (2014).
  20. Sawada, Y., et al. Widely targeted metabolomics based on large-scale ms/ms data for elucidating metabolite accumulation patterns in plants. Plant Cell Physiol. 50 (1), 37-47 (2009).
  21. Zhang, X. M., et al. Data-dependent acquisition based high-resolution mass spectrum for trace alternaria mycotoxin analysis and sulfated metabolites identification. Food Chem. 364, 130450(2021).
  22. Downard, K. M. Indirect study of non-covalent protein complexes by maldi mass spectrometry: Origins, advantages, and applications of the "intensity-fading" approach. Mass Spectrom Rev. 35 (5), 559-573 (2016).

Herprints en machtigingen

Tags

Ultra-high-performance vloeistofchromatografiequadrupool tijd-van-vlucht massaspectrometriemonsterpreparatiesolventextractiefenolzuurenflavonoïde-isomerentraditionele Chinese geneeskunde
Tandem-massaspectrometrie met hoge resolutie voor het bestuderen van chemische bestanddelen van Gynura bicolor DC
Neem contact met ons op
Aanbevelen aan de bibliotheek

Privacy

Gebruiksvoorwaarden

Beleidsoverzicht

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Alle rechten voorbehouden.