Evaluatie van de rechterventrikelfunctie in experimentele modellen van pulmonale arteriële hypertensie

Summary

De presentatie van gedetailleerde methoden voor de evaluatie van de rechterventrikelfunctie zal de kwaliteit en betrouwbaarheid van onderzoek naar pulmonale hypertensie verbeteren, een robuust kader bieden voor toekomstige studies en de reproduceerbaarheid in verschillende laboratoria verbeteren.

Abstract

Pulmonale hypertensie (PH) is een chronische aandoening die gepaard gaat met verminderde overleving, waardoor het een cruciaal onderzoeksgebied is. Experimentele modellen van PH hebben ons begrip van de pathofysiologie ervan aanzienlijk verbeterd en het ontwerp van kleine observationele en klinische onderzoeken vergemakkelijkt. Het is echter van cruciaal belang om gestandaardiseerde methodologieën vast te stellen om de vergelijkbaarheid tussen verschillende experimentele studies en onderzoeksgroepen te garanderen. Standaardisatie verbetert niet alleen de reproduceerbaarheid, maar bevordert ook de samenwerking tussen onderzoeksteams.

In deze video schetsen we de methodologische stappen die nodig zijn om de functionele parameters van PH nauwkeurig te analyseren. Deze omvatten echocardiografische beoordeling, invasieve rechterventrikel (RV) punctie en berekening van de Fulton-index. Wat echocardiografie betreft, worden de meting van de pulmonale arteriële versnellingstijd en de pulmonale ejectietijdverhouding, evenals de berekening van de RV-output, in detail gepresenteerd. Met betrekking tot invasieve metingen worden essentiële procedures beschreven, waaronder anesthesieprotocollen, optimale positionering van de dieren, mechanische ventilatie-opstelling, nauwkeurige opening van de borstwand, visualisatie van de RV en RV-punctietechnieken.

De methodologie voor ventriculaire dissectie (Fulton-index) wordt in detail uitgelegd, evenals de berekening van de RV/linkerventrikel plus septum-ratio, gecorrigeerd voor het lichaamsgewicht van het dier. Wij zijn van mening dat het verstrekken van een gedetailleerde presentatie van deze methoden de kwaliteit en betrouwbaarheid van PH-onderzoek zal verbeteren, een robuust kader zal bieden voor toekomstige studies en de reproduceerbaarheid in verschillende laboratoria zal verbeteren.

Introduction

Adequate functionele meting van de functie van de rechterventrikel (RV) bij kleine dieren is essentieel geworden sinds de toename van studies met diermodellen in de ademhalings- en cardiovasculaire wetenschappen. Er zijn verschillende diermodellen van pulmonale hypertensie (PH), waarbij monocrotaline¹, hypoxie² of Sugen + hypoxie³ wordt gebruikt. Ze hebben goed gediend om nieuwe pathofysiologische routes te ontrafelen ^1,4 en nieuwe potentiële farmacologische⁵ en niet-farmacologische....

Protocol

Het onderzoeksprotocol werd goedgekeurd door de Ethische Commissie voor het Gebruik van Dieren (CEUA) van de Federale Universiteit van Rio de Janeiro onder procesnummer 043/22. Alle procedures voldeden aan de Principles of Laboratory Animal Care en de US National Academy of Sciences Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. De studie volgde de ARRIVE-richtlijnen¹¹.

1. Preparaat van dieren en experimenteel protocol

1. Bereken het aantal dieren zoals eerder gerapporteerd¹².
   OPMERKING: Rekening houdend met het feit dat de vers....

Results

Voor de statistische analyses werd elke variabele getest op normaliteit en variantie met behulp van de Shapiro-Wilk-test. De gegevens worden gepresenteerd als gemiddelden ± standaarddeviatie. De ongepaarde t-test werd gebruikt om deeltjesconcentraties in de controlegroep (CTRL) en pulmonale arteriële hypertensie (PAH) (p<0,05) te vergelijken.

Echocardiografische veranderingen in het diermodel van PAH
Figuur 4<.......

Discussion

PAH is een progressieve ziekte die wordt gekenmerkt door overmatige vasculaire remodellering, die een toename van de pulmonale vasculaire weerstand bevordert, wat resulteert in verhoogde RV-afterload¹⁴. Dienovereenkomstig vertegenwoordigt de RVSP een functionele variabele die direct correleert met de ernst van PAH¹⁵. Na verloop van tijd is de adaptieve respons van de RV compenserende concentrische hypertrofie (gemeten aan de hand van de Ful.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Reagents
Alcohol 70%	Montenegro	ALC70-001
Conductive gel	Mercor	CG-002
Saline solution (NaCl 0,9%)	BioPharma	SAL-009
Instruments
19 G scalp vein set	Descarpack	SVS-19G
Curved kelly forceps	ABC instrumentos cirurgicos	CKF-003
Kelly forceps	ABC instrumentos cirurgicos	KF-004
Needles (18, 22 and 26 G)	Descarpack	NDL-MIX
Petri dish	GlassLab	PD-150
Razor blade	ABC instrumentos cirurgicos	RB-005
Scalpel	ABC instrumentos cirurgicos	SC-006
Scissors	ABC instrumentos cirurgicos	SCIS-007
Suture line	ABC instrumentos cirurgicos	SUT-008
Syringes (1, 3, and 5 mL)	Descarpack	SYR-135
Tracheostomy cannula	MedTech	TC-010
Tweezer	ABC instrumentos cirurgicos	TWZ-011
Drugs
Dextroketamine hydrochloride 5%	Cristália	DXT-005	87.5 mg/kg intraperitoneal
Isoflurane 1 mL/mL 240 mL	Cristália	ISO-240	2.5% inhalation solution
Lidocaine hydrochloride 1%	Cristália	LID-001	400 µL subcutaneous locally
Monocrotaline	Sigma-Aldrich	C2401	60 mg/kg intraperitoneal
Pancuronium bromide 2 mg/mL	Cristália	PAN-002	2 mg/kg intravenous
Sodium heparin 5000 IU/mL	Cristália	HEP-5000	diluted 1:4 in 1 mL
Xylazine hydrochloride 2%	Syntec	XYL-002	12.5 mg/kg intraperitoneal
Equipment
GraphPad Prism 9	GraphPad Software, Inc	GP9
Networked Multiparameter Veterinary Monitor LifeWindow 9x	Digicare Animal Health	LW9x
LabView software	National Instruments, Corp.	LV-2019
MATLAB R2019a (Version) software	The MathWorks, Inc.	MATLAB-2019
Monitor and signal transducer	MedTech	MST-015
Precision scale	Sartorius	PS-020
R540 Mice&Rat Animal Anesthesia Machine	RWD Life Schience Co.,LTD	R540-ANA
Scale	Ohaus	SCL-025
Servo-i mechanical ventilator	Getinge AB	SERVO-I	FiO2 = 21%; tidal volume = 8 ml/kg, respiratory rate = 70 bpm, and PEEP = 3 cmH2O
SonoView software	SONOTEC Ultraschallsensorik Halle GmbH	SV-2020
UGEO HM70A system	Samsung Eletrônica da Amazônia LTDA	HM70A
G*Power 3.1.9.7	University of Düsseldorf, Germany	gpower