Methodenartikel

Fabricage van een uitbreidbare hersenmatrix die aanpasbaar is over ontwikkelingsstadia

DOI:

10.3791/68638

⸱

20 februari 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Spinal Cord and Brain Injury Research Center, Department of Physiology, College of Medicine, University of Kentucky, 2Department of Biomedical Engineering, College of Engineering, University of Kentucky, 3Department of Neurosurgery, University of Kentucky

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een innovatieve methode om uitbreidbare hersenmatrices te bouwen om zowel coronale als sagittale sneden te snijden, wordt beschreven voor toepassing op neonatale biggen. Deze budgetvriendelijke aanpak maakt gebruik van acrylplaten die zijn gesneden met sjablonen uit agarosegel-hersenvormen, wordt toegepast op meerdere soorten en maakt uitbreiding mogelijk om hersengroei mogelijk te maken.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De toenemende interesse in het gebruik van pasgeboren biggetjes als studiemodel voor neonatale ontwikkeling en pathologie heeft de behoefte aan een hersenmatrix vergroot om histologische doorsneden nauwkeurig te kunnen verkrijgen. De snelle groei van de pasgeborene hersenen beperkt echter het nut van commercieel verkrijgbare matrices tot een smal ontwikkelingsvenster. Daarom werd een verstelbare methode voor het bouwen van hersenmatrix ontwikkeld. Eerst werd een glazen container op nat ijs geplaatst en werd een laag 4% agarosegel op de bodem gelegd. Vervolgens werd een formaline-gefixeerde hersenlaag op deze laag geplaatst en voorzien van 4% agarosegel. Nadat de gel was gestold, werd de gel boven de hersenen voorzichtig verwijderd en de hersenen verwijderd. De holte werd gevuld met 4% agarosegel en 2% Indian Ink. Na het stollen werd het gelblok verwijderd en in de gewenste dikte (2 mm of 5 mm) en oriëntatie (coronal of sagittal) gesneden om de hersensjablonen op schaalpapier te printen. De sjablonen werden gekopieerd op een reeks transparante acrylplaten (2 mm of 5 mm dik) en dienovereenkomstig uitgezaagd op een lintzaag. Ten slotte werden de platen in elkaar gezet en vastgezet met drie sets bouten en moeren via voorgeboorde uitlijngaten om een aangepaste hersenmatrix te bouwen. De constructie van zowel coronale als sagittale matrices wordt geïllustreerd voor een neonatale dag 5 bigge-hersenen met stappen van 2 mm en een coronale matrix voor postnatale dag 32-38 hersenen met stappen van 5 mm. Door correcte acrylplaten toe te voegen of te verwijderen, werd de matrix aangepast aan de verschillende maten van biggetelbreinen. Zo wordt een eenvoudige, kosteneffectieve methode geïntroduceerd om hersenmatrices aan te passen voor verschillende groottes grote dieren in de neurologische onderzoeksgemeenschap.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De hersenontwikkeling van biggetjes lijkt sterk op die van mensen 1,2,3,4. Daarom is er toenemende interesse in het gebruik van biggen voor preklinische studies van neuro-ontwikkelingsstoornissen, neonatale en kinderziekten en letsel (Figuur 1A,B)5,6,7,8,9,10. Zoals te zien is in Figuur 1 heeft het neonatale biggetje, als groot diermodel, een schedel- en hersengrootte die dichter bij die van een premature menselijke foetus ligt (Figuur 1A,B), terwijl de volwassen muis- en rattenschedel minstens twee magnitudes kleiner zijn.

Er zijn echter uitdagingen bij het gebruik van grotere zoogdieren in biomedisch onderzoek in vergelijking met de meer gebruikte muismodellen. Neonatale biggetjes groeien snel in de eerste 3 maanden na de geboorte. In de eerste 5 weken van het leven verdubbelt het biggetjesbrein bijna in gewicht en verdrievoudigt het volume (Figuur 1C)4,11,12,13. In de periode van p5 tot p38 waren hersengroei en ontwikkeling van gyri en sulci opmerkelijk (Figuur 1C). Het gewicht en volume van de p5-bigge-hersenen waren 29,5 g en 18,9 mL, terwijl de twee p32-hersenen respectievelijk 51,4 en 52,6 g en 49,6 en 53,5 mL waren. Na 38 dagen groeide de hersenen tot 53,7 g en 52,5 mL, wat een gewichtstoename van 80% en 170% toename in volume vertegenwoordigt ten opzichte van p5. Deze snelle groei van het neonatale varkensbrein vormt een uitdaging voor nauwkeurige histologische secties van hersenen van biggetjes van verschillende leeftijden, stammen of geslachten, met behulp van één matrix.

Commerciële hersenmatrices voor biggetjes kosten ongeveer $1.000 tot $3.600 per stuk en zijn slechts verkrijgbaar in één maat, ontworpen voor biggetjes van 2 weken of jonger. Hoewel er enkele publicaties zijn die de 3D-scantechniek en 3D-printtechniek hebben gebruikt om verschillende hersenmatrices voor zebravissen, muizen en vogelste maken, zijn die matrices op relatief kleine schaal. Er is geen vastgestelde MRI-beeldvorming of gedetailleerde groeigrafiek voor de hersenen van neonatale biggetjes, vooral niet voor jongeren van 2 weken. Daarom hebben we verschillende hersensnedensjablonen gemaakt met hersenen verzameld tussen dag 5 en dag 38, waarop een aanpasbaar hersenmatrixsysteem is opgezet.

Dit protocol beschrijft een innovatieve methode voor het opzetten van neonatale bigge-hersensjablonen en het ontwikkelen van acrylplaat-gebaseerde, aanpasbare hersenmatrixconstructie die kan worden gebruikt voor coronale of sagittale doorsnijding van hersenen over een spectrum van groottes.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

In dit artikel zijn de vier biggetjeshersenen verkregen en voorbereid voor histologische kleuring na humane euthanasie volgens een protocol dat is goedgekeurd door het Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) van de University of Kentucky voor een apart onderzoek. Alle procedures bij dierlijke proefpersonen werden goedgekeurd en er werd passende zorg voor dieren toegepast om stress of pijn die samenhangt met behandelingen of euthanasie te minimaliseren.

1. Dieren

  1. Aanschaft vier naïeve mannelijke neonatale biggetjes (postnatale dag 4, p4) (lichaamsgewicht 1,5-1,8 kg) met een genetische achtergrond van 62,5% Landrace, 25% Large White en 12,5% Yorkshire.
  2. Huisvest de dieren samen in één speciale kamer in een varkensstal, met steun van een warmtelamp en een met handdoeken bedekte vloer. Geef ze de eerste week ad libitum met melkvervanger en stap geleidelijk over op pelletvoer na 2-3 weken.
  3. Monitor de fysiologische activiteit en het lichaamsgewicht en voer wekelijks MRI-scans uit onder isofluoraan-anesthesie.
  4. Euthanaseren met een overdosis pentobarbital en transcardiaal perfuseren met heparinized zoutoplossing, gevolgd door 10% neutrale gebufferde formaline.
  5. Ontleed de hersenen uit de schedel17, doe het 's nachts met formaline, en plaats dan 30% sucrose in PBS voor 3 dagen voor cryopreservatie.

2. Agarosegel-gieten

  1. Dompel een glazen container onder in een bak nat ijs tot op de helft van de hoogte (Figuur 2A).
  2. Gebruik een zware plastic strip als voering voor de container en zorg ervoor dat de onderkant en zijwanden volledig bedekt zijn, terwijl beide uiteinden minstens 5 cm boven de bovenrand staan.
  3. Verwarm 150 mL PBS in een glazen beker tot 90 °C op een roerplaat met een magneetroeraar en voeg geleidelijk 6 g agarose toe om 4% agarosegel in PBS te maken.
  4. Giet een laag van 0,5-1 cm dik in de glazen container (Figuur 2B) en wacht tot deze is gestold.
  5. Breng een dunne laag minerale olie topisch aan op de hersenen (Figuur 2C) en plaats de hersenen op de gellaag (Figuur 2D).
  6. Laat de agarose-oplossing afkoelen tot 50 °C. Inbed de hersenen met gekoelde agarosegel (Figuur 2E) en laat het stollen (Figuur 2F), wat meestal ~10 minuten duurt op nat ijs.
  7. Verwijder voorzichtig de bovenste laag agarosegel boven de hersenen (Figuur 2G) met een chirurgische sonde en haal de hersenen uit de gestolde mal (Figuur 2H,I).
  8. Verwarm 98 ml PBS in een andere glazen beker tot 90 °C op een roerplaat met een magnetische roermachine, voeg 4 g agarose en 2 ml India Ink toe, en laat goed roeren en mengen. Giet 4% agarose met 2% India Inkt in de holte die door de geëxtraheerde hersenen is achtergelaten (Figuur 2J) tot deze vol is en laat deze 15 minuten op nat ijs stollen (Figuur 2K).
  9. Gebruik de overhangende delen van de plastic strip om de plastic strip op te tillen om het hele agaroseblok uit de container te verwijderen (Figuur 2L).

3. Agarose blok snijden en sjabloon kopiëren naar schaalpapier

  1. Om het papier tijdens het snijden tegen vocht te beschermen, plaats je één stuk schaalpapier tussen twee transparante acrylplaten van 0,76 mm (0,03") dik (Figuur 3A), en plaats je de gelamineerde papier-acrylplaat dicht bij de rand van de bank.
  2. Bevestig hoekvierkanten aan de bank met klemmen in een geschikte positie om twee acrylplaten van 5 mm dik overeind te houden en het gelblok stevig met de gewenste oriëntatie ertussen te houden (sagittaal in Figuur 3). Zorg ervoor dat de rand van elke verticale acrylplaat op dezelfde lijn op het schaalpapier is uitgelijnd om als referentie te gebruiken voor het snijden van het gelblok. Gebruik een gewicht om het gelblok aan het uiteinde tegenover te zetten van waar het snijden plaatsvindt (Figuur 3B).
  3. Gebruik het onderliggende schaalpapier als leidraad en beweeg het gelblok tussen de acrylplaten naar voren op de gewenste stap (2 mm of 5 mm), houd het microtomeblad met beide handen vast en snijd het gedeelte voorbij de voorrand van de acrylplaat (Figuur 3B).
  4. Verzamel elk plakje (Figuur 3C), leg het op een apart schaalpapier (Figuur 3D), druk het met India inkt geverfde deel van de gietsel voorzichtig op het schaalpapier om de omtrek over te brengen (Figuur 3E), trek de omtrek van het hele gelgedeelte over met een pen, verwijder het gelgedeelte en omlijnt de India-inktafdruk ook met een pen (Figuur 3F). Let erop dat de oriëntatie van elke schijf en het gekopieerde sjabloon consistent blijft.
  5. Herhaal stappen 2.3 en 2.4 totdat alle gelstukken op het schaalpapier zijn gekopieerd en opeenvolgend genummerd. Controleer de plakken en hun afdrukken opnieuw (representatieve afbeeldingen van coronale sneden en afdrukken in Figuur 3G,H).

4. Acrylplaatsnijden

  1. Snijd groeven op de grote acrylplaat met een plexiglas snijmes en breek de grote platen in stukken van 10 x 8,5 cm.
    OPMERKING: Het totale aantal stukken hangt af van de grootte van de hersenen, de gewenste snijdikte en de snijrichting. Over het algemeen bereiden we 25 stukken 2 mm acrylplaten voor een coronale of sagittale matrix voor neonatale bigge-hersenen en 15 stukken 5 mm platen voor grotere hersenen voor gemakkelijker hanteren.
  2. Herkenningspunt drie verankeringsgaten op de acrylplaat bij x, y-coördinaten, gemeten vanuit de linker onderste hoek (in mm): (11, 42); (45, 15); en (88, 42).
  3. Bevestig de acrylplaten met de ondersteuning van hoekblokken en klemmen op het platform van de boormachine. Boor drie verankeringsgaten op de genoemde coördinaten met een acrylplaatboor (Figuur 4A). Teken een kleurlijn aan de rechterkant van alle platen om de oriëntatie aan te geven.
  4. Verwijder de beschermende folie van de acrylplaat en plaats deze boven het sjabloon op het schaalpapier, waarbij de bovenrand van de acrylplaat uitgelijnd wordt met de bovenste lijnen van het sjabloon dat op het schaalpapier is gekopieerd. Teken de omtrek van de hersenen op de acrylplaat met een permanente stiftpen (Figuur 4B). Label de plaat achtereenvolgens zoals in de template.
  5. Zaag de acrylplaat van de bandzaag langs de sjabloonlijnen (Figuur 4C). Alternatief kun je een roterend gereedschap met een multifunctionele snijset en een houtsnijpunt gebruiken om de ongewenste plekken te verwijderen.
  6. Polijst de snijkant met het roterende gereedschap en een polijstende schuurtip om de randen glad te strijken die door het snijgereedschap zijn achtergelaten (Figuur 4D).
  7. Controleer de sneden op de acrylplaten opnieuw met het sjabloon op het schaalpapier (Figuur 4E). Trim en polijst indien nodig.
  8. Assembleer de matrix vooraf door de gesneden platen in volgorde te stapelen en controleer de uitlijning van de platen (Figuur 4F).

5. Assemblage en uitbreiding van de hersenmatrix

  1. Plaats drie ringen tussen acrylplaten, elk gecentreerd op één verankeringsgat (Figuur 5A). Lijm ze rond de verankeringsgaten met secondelijm aan dezelfde kant van alle acrylplaten om de montagetijd te verkorten (Figuur 5A).
  2. Stapel de acrylplaten achter elkaar, steek roestvrijstalen bouten door elk ankergat om de matrix te assembleren, en draai de moeren vast om vast te zetten (Figuur 5A).
  3. Breng de laatste polijsting toe aan de gesneden randen die contact maken met de hersenen om over de platen te strijken.
  4. Kleurcodeer de bovenkant van de matrix om de stappen tijdens het snijden te identificeren. Kleur afwisselend de bovenranden van de plaat zwart, rood en daarna blanco om een patroon te vormen. Herhaal deze stap totdat alle platen kleurgecodeerd zijn met hetzelfde patroon (Figuur 5).
  5. Om de geometrie aan te passen of de holtegrootte aan te passen zodat deze beter bij bepaalde hersenen past, verwijder of voeg je geselecteerde acrylplaten toe (Figuur 5B) om je aan te passen aan verschillende hersenmaten, wat de flexibiliteit van deze matrices aanzienlijk verhoogt en materialen en moeite kan besparen.

6. Coronale of sagittale sneden van hersenen

  1. Wikkel één uiteinde van het hoogprofiel cryostatblad in met laboratoriumtape voor minstens 2 cm lengte om de hand van de gebruiker te beschermen. Plaats de hersenen veilig in de matrixholte. Door het omwikkelde uiteinde van het blad vast te houden, plaats je het mes voorzichtig tussen de acrylplaten van de matrix en snijd je de hersenen vervolgens in coronale of sagittale sneden, waarbij de hersenen worden ondersteund en vastgezet door de andere hand (Figuur 6A,B).
    OPMERKING: Voorzichtigheid: 1) Omdat elk hersendeel na formalinefixatie verschillende texturen heeft, moet voorzichtigheid worden betracht om gelijkmatige druk op het mes uit te oefenen. 2) Bovendien is het biggetjesbrein groot, dus het is beter om een snijbeweging te gebruiken om het brein te snijden dan een directe "duw" snijbeweging. 3) Het is cruciaal om de hersenen tijdens het snijden stevig in de matrix te houden met steun van de andere hand om kantelingen of verandering in de oriëntatie te voorkomen. Overmatige druk op de hersenen tegen de matrix moet altijd worden vermeden.
  2. Doe alle plakken in een met PBS gevulde 6-well plaat of een roestvrijstalen bak. Leg de plakken zorgvuldig uit in dezelfde oriëntatie (Figuur 6C, D) en bewaar of ga verder indien nodig.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Een biggetje werd op de leeftijd van p5 geëuthanaseerd met een overdosis pentobarbital. De andere drie dieren vertoonden normale fysiologische activiteiten en vergelijkbare lichaamsgewichtstoename (met een gewichtstoename van 7,44-8,4 kg). Twee biggetjes kregen wekelijks een MRI-scan onder isoflurane anesthesie totdat ze op p32 werden geëuthanaseerd. Het vierde biggetje bleef naïef tot euthanasie op p38.

De gelijkenis in de hoofdgrootte tussen biggetje en mens...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit protocol presenteert de methodologie voor het creëren van betaalbare en eenvoudig te bouwen hersenmatrices die kunnen worden gebruikt om het sneden van het biggetjesbrein of andere soorten grote dieren op de gewenste oriëntatie en dikte te ondersteunen. Belangrijk is dat, in tegenstelling tot commerciële "vaste grootte" matrices die werken met slechts een beperkt bereik van hersengroottes, deze aanpak het mogelijk maakt de matrix gemakkelijk aan te passen of uit te breiden om een bre...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs hebben geen belangenconflicten om te melden.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door de National Institutes of Health (NIH) #R21-NS114771 (K.E.S.), #R56-NS117587, #R01-EB028792, #R01-HD101508, #R21-HD091118, #R41-NS122722, #R42-MH135825 (G.Y.), American Heart Association (AHA) #16GRNT30820006 (G.Y.) en #14SDG20480186 (L.C.), en het University of Kentucky Neuroscience Research Priority Area (L.C.). De naïeve mannelijke neonatale varkens werden via de Division of Laboratory Animal Resources (DLAR) gekocht van het Swine Center van het College of Agriculture, University of Kentucky.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

```html

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
1/4"-20 X 3-1/2" Stainless Phillips Truss Head Machine Screw, (25 pc), Coarse Thread, 18-8 (304) Stainless Steel, by Bolt DropperBolt Dropperhttps://www.amazon.com/
Stainless-Phillips-Machine
-Bolt-Dropper/dp/B07D1L8
7VB/ref=sr_1_2?crid=38M
PNERXG39Q3&keywords
=1%2F4%22+3.5+inch+
stainless+bolts&qid=16427
82626&s=industrial&sprefix
=1%2F4+3.5+inch+stainless
+bolts%2Cindustrial%2C62
&sr=1-2
10 Pack of 8 x 10” PET Sheet/Plexiglass Panels 0.03” Thick CALPALMYhttps://www.amazon.com/dp
/B084P4YSST/?coliid=I1S59
82XD9P6CB&colid=XJ78FAX
D85BF&psc=1&ref_=lv_ov_lig_dp_it
3 Pack 3/16" (4.5mm) Clear Acrylic Sheet 8" x 12" Cast Plexiglass (0.177”) Thick Nominal Size AZMAZM Displayshttps://www.amazon.com/4-5mm
-Acrylic-Plexiglass-Nominal-AZM
/dp/B082CGYSCK/ref=sr_1_12?
dchild=1&keywords=acrylic+sheet %2C+4.5mm&qid=1617572206&sr=8-12
3 Shoulder-Shortening Shim Flat Washer, 18-8 Stainless Steel, 1/2" Bolt Size, 0.501" ID,.750" OD, 0.016" Thick (Pack of 50)Small Partshttps://www.amazon.com/Shoulder-
Shortening-Washer-Stainless-Stee
l-0-251/dp/B004K1FFZA/ref=sr_1_
3?crid=1K8LO0VN4GLE&dchild=1
&keywords=Washers&pd_rd_r=
0ffe510e-abe5-4eae-b975-ed945
08ac71a&pd_rd_w=HuED5&pd_r
d_wg=fixK7&pf_rd_p=b4950e17-f
2f6-494c-bba5-69a9d0aa3887&pf
_rd_r=BRVGS2378CHD1WBC2E
4P&pid=3tntl8w&qid=1617573484
&refinements=p_n_feature_twenty
_browse-bin%3A17420898011%2C
p_n_feature_twenty-one_browse
-bin%3A19047154011&s=industria
l&sprefix=washer%2Bfor%2B%2C
aps%2C202&sr=1-3&th=1
6 well plateavantor76520-650
8-32 Hex Nut, Coarse Thread Hexagon Nut, 18-8 Stainless Steel Hex Nut, Silver Tone,?100 Pcs?Fullerkreghttps://www.amazon.com/Fullerkreg
-Machine-Stainless-Bright-Quantity/
dp/B078S3J765/ref=sr_1_4?crid=4
VSSI5B9MJ2D&keywords=1%2F4
%22-20+Inch+Stainless+Steel+
Hex+nut+coarse+thread&qid=1
642782823&s=industrial&sprefix
=1%2F4+-20+inch+stainless+ste
el+hex+nut+coarse+thread%2Cin
dustrial%2C61&sr=1-4
90 Degree Positioning Squares Aluminium AlloyHINMAYhttps://www.amazon.com/Positioni
ng-Aluminium-Woodworking-Carp
enter-Clamping/dp/B08294FZ7L/r
ef=sr_1_6?crid=1I97TLVRYREPQ
&dchild=1&keywords=corner+squ
are&qid=1625683905&sprefix=co
rner+squ%2Caps%2C182&sr=8-6
agaroseavantor97062-244
band sawSKIL
Birthright Milk Replacer (Pipestone)PipestoneSKU 8229https://pipevet.com/birthright-baby-pig-milk-replacer
bucketavantor89233-340
Dremel 4300-5/40 High Performance Rotary Tool KitDremelhttps://www.amazon.com/dp/B
01M1SJNVU/?coliid=IMLRI62Z
LTSJ&colid=2XZ304Y9M7PV7
&psc=1&ref_=lv_ov_lig_dp_it
Drill Bits for Plastic (Acrylic, plexiglass, ABS, lexan, Polycarbonate, PVC)FTMhttps://www.amazon.com/dp/B
07D1B3B51/?coliid=I26RS6UP
UJ3P1Y&colid=2XZ304Y9M7P
V7&psc=1&ref_=lv_ov_lig_dp_it
glass beaker x 2avantor470335-854
glass containerWheaton staining dishesWHEATON® 900303
Graph Paper Notebook: 1 mm thin and 10 mm thicker light gray grid lines (metric, 120 pages):https://www.amazon.com/
Graph-Paper-Notebook-
double-sided-non-perforated
/dp/154319026X/ref=sr_1_13?
dchild=1&keywords=millimeter +paper&qid=161763

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jelsing, J., et al. The postnatal development of neocortical neurons and glial cells in the Gottingen minipig and the domestic pig brain. J Exp Biol. 209 (Pt 8), 1454-1462 (2006).
  2. Conrad, M. S., Dilger, R. N., Johnson, R. W. Brain growth of the domestic pig (Sus scrofa) from 2 to 24 weeks of age: a longitudinal MRI study. Dev Neurosci. 34 (4), 291-298 (2012).
  3. Conrad, M. S., Dilger, R. N., Nickolls, A., Johnson, R. W. Magnetic resonance imaging of the neonatal piglet brain. Pediatr Res. 71 (2), 179-184 (2012).
  4. Dobbing, J. The later growth of the brain and its vulnerability. Pediatrics. 53 (1), 2-6 (1974).
  5. Sorby-Adams, A. J., Vink, R., Turner, R. J. Large animal models of stroke and traumatic brain injury as translational tools. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 315 (2), R165-R190 (2018).
  6. Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. H. The pig model in brain imaging and neurosurgery. Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).
  7. Huang, C., et al. Speckle contrast diffuse correlation tomography of cerebral blood flow in perinatal disease model of neonatal piglets. J Biophotonics. 14 (4), 2021(2021).
  8. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch Dis Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  9. Lossi, L., D'Angelo, L., De Girolamo, P., Merighi, A. Anatomical features for an adequate choice of experimental animal model in biomedicine: II. small laboratory rodents, rabbit, and pig. Ann Anat. 204, 11-28 (2016).
  10. Lind, N. M., et al. The use of pigs in neuroscience: modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31 (5), 728-751 (2007).
  11. Andersen, A. D., et al. Delayed growth, motor function and learning in preterm pigs during early postnatal life. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 310 (6), R481-R492 (2016).
  12. Desantis, S., Minervini, S., Zallocco, L., Cozzi, B., Pirone, A. Age-related changes in the primary motor cortex of newborn to adult domestic pig Sus scrofa domesticus. Animals (Basel). 11 (7), 2019(2021).
  13. Pond, W. G., et al. Perinatal ontogeny of brain growth in the domestic pig. Proc Soc Exp Biol Med. 223 (1), 102-108 (2000).
  14. Huang, C. C., Chen, Y. Y., Fang, Y. T., Chen, Y. C., Hung, C. M. Generating brain matrices for zebra finch brain sectioning using three-dimensional printing technology. J Neurosci Methods. 327, 108399(2019).
  15. Yamazaki, Y., Yuguchi, M., Honjo, B., Isokawa, K. Design and fabrication of customized brain slice matrices using CAD and 3D printing technology. PLoS One. 20 (1), e0317616(2025).
  16. Lattin, C. R., et al. A 3D-printed modular device for imaging the brain of small birds. J Neurosci Methods. 293, 183-190 (2018).
  17. Fleming, S. A., Monaikul, S., Mudd, A. T., Jacob, R., Dilger, R. N. Extraction and dissection of the domesticated pig brain. J Vis Exp. (170), e62030(2021).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Fabricage van hersenmatriceshersendoorsneden van biggenaanpasbare hersenmatrixacrylplaatmatrixagarose hersenvormcoronale hersendoorsnijdingsagittale hersendoorsnijdingneurowetenschappen bij grote dierenontwikkelingsmodel van de hersenen

Gerelateerde artikelen