Dit protocol beschrijft de chirurgische techniek voor het oogsten van een menselijk perforatorflapmodel gebaseerd op de diepe inferieure epigastrische arteriepedicle, bedoeld voor experimenteel onderzoek.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Dit protocol beschrijft de chirurgische techniek voor het oogsten van een menselijk perforatorflapmodel gebaseerd op de diepe inferieure epigastrische arteriepedicle, bedoeld voor experimenteel onderzoek.
Recentelijk zijn conserveringsmethoden zoals cytoprotectieve middelen injecteren, ex vivo machine perfusie en superkoeling opgedoken als strategieën om het langetermijnbehoud van zowel standaard- als marginale organen te verbeteren door ischemische en hypoxische schade te beperken. Hoewel bemoedigend, blijft de toepassing ervan in het vakgebied van vascularized composite allotransplantatie (VCA) grotendeels beperkt tot preklinisch onderzoek. Tot nu toe hebben de meeste studies naar VCA-perfusiestrategieën zich gebaseerd op diermodellen, met name varkens- of knaagdiercomposieten. Hoewel deze modellen waardevolle mechanistische inzichten bieden, beperken hun anatomische, immunologische en fysiologische verschillen de reproduceerbaarheid en de translatierelevantie voor menselijke toepassingen.
In dit protocol wordt elke chirurgische stap die nodig is voor het verkrijgen van een menselijke deep inferior epigastric perforator (DIEP) flap voor conserveringsstudies uitvoerig beschreven. De perforator wordt boven de fascia doorgesneden zonder subfasciale dissectie, wat resulteert in een korte maar voldoende pedicle voor katheterisatie. Dit model maakt gebruik van afgedankt weefsel van standaard abdominoplastiekprocedures en vormt geen extra risico voor de patiënt. Kritieke stappen worden uiteengezet om ervoor te zorgen dat een functionele flap wordt geoogst zonder de operatietijd te verlengen of de patiëntveiligheid in gevaar te brengen. Functionele beeldvorming wordt vervolgens uitgevoerd om de levensvatbaarheid van de flap te bevestigen vóór experimenteel gebruik, en sequentiële biopten kunnen worden uitgevoerd om de weefselintegriteit te controleren. Dit model is bijzonder geschikt voor onderzoek waarbij spierbesparende VCA-procedures betrokken zijn – zoals partiële gezichtstransplantatie – en kan ook relevant zijn voor het onderzoek naar autoloog vrije flapbehoud.
Vasculariseerde composietallotransplantatie (VCA) is een veelbelovende reconstructieve oplossing voor patiënten met complex weefseldefect, met name in het gezicht en de bovenste ledematen1. VCA is echter zeer vatbaar voor ischemie-reperfusieletlast, wat de levensvatbaarheid van de transplantatie en de langetermijnresultaten kan aantasten2. In deze context zijn conserveringsbenaderingen zoals injectie van cytoprotectieve middelen, ex vivo machine perfusie en superkoeling ontstaan als strategieën om de conserveringstijd te verlengen, de kwaliteit van de transplantatie te optimaliseren en levensvatbaarheidsbeoordeling vóór transplantatie mogelijk te maken 3,4,5,6,7. Hoewel normotherme ex vivo perfusie van vaste organen in het afgelopen decennium met succes is vertaald van een experimentele laboratoriumtechniek naar klinische praktijk8, met veelbelovende resultaten, blijft het grotendeels beperkt tot de onderzoeksomgeving op het gebied van VCA9.
Tot nu toe hebben de meeste studies naar VCA-perfusieprotocollen zich gebaseerd op diermodellen, met name varkens- of knaagdiercomposieten10. Hoewel deze modellen waardevolle inzichten bieden, beperken ze inherent reproduceerbaarheid en translationele relevantie vanwege anatomische, immunologische en fysiologische verschillen11,12. Menselijke weefselmodellen bieden relevantere inzichten, maar verse weefsels van hersendode donoren zijn extreem moeilijk toegankelijk voor onderzoeksdoeleinden, vereisen complexe logistiek, strikte goedkeuring door de regelgeving en roepen ethische zorgenop 13,14. Een ideaal alternatief zou een niet-kadaverisch, ethisch acceptabel, mensgebaseerd flapmodel zijn dat niet de complexiteit of het risico van een volledige VCA-procedure met zich meebrengt en volledig veilig is voor de patiënt. Belangrijk is dat het ook gemakkelijk toegankelijk moet zijn om reproduceerbaar en schaalbaar onderzoek mogelijk te maken.
Hierin wordt een human deep inferior epigastric perforator (DIEP) lapmodel beschreven voor VCA-behoudsonderzoek, waarbij afgedankt weefsel wordt gebruikt van abdominoplastiekprocedures zonder extra risico voor de patiënt.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Alle patiënten kregen standaard humane zorg in overeenstemming met de Helsinki-verklaring, en het protocol werd goedgekeurd door de institutionele ethische commissie (project nr. IRB00014528_2025_32). De patiënt gaf geïnformeerde toestemming voor het gebruik van afgedankt weefsel voor onderzoeksdoeleinden.
1. Preoperatieve zorg
OPMERKING: Deze cutane perforatorflappen, exclusief fascia en spier, zijn afkomstig van chirurgisch afval bij patiënten, meestal post-bariatrisch, en kunnen alleen worden geoogst bij een eerdere dermolipectomie met voorspelbare navelverplaatsing (d.w.z. een significante abdominale pannus). Geplande liposuctie tijdens de ingreep is een uitsluitingscriterium. Gelijktijdige diastaseherstel is geen contra-indicatie, omdat deze procedure plaatsvindt na het oogsten van de flap. De abdominale pannus biedt over het algemeen ten minste gedeeltelijke dekking van het schaamgebied. Patiënten mogen geen voorgeschiedenis van trombo-embolische gebeurtenissen hebben en de body mass index (BMI) moet onder de 30 kg/m² liggen, aangezien hogere waarden geassocieerd worden met obesitas en een ongunstige risico-batenverhouding voor electieve niet-vitale ingrepen onder algehele anesthesie. Eerdere buikoperaties, behalve liposuctie, is meestal geen contra-indicatie, mits een perforator wordt geïdentificeerd door Doppleronderzoek of direct intraoperatief wordt gevisualiseerd. Deze onderzoeksprocedure moet ook worden vermeden bij echte klinische unilaterale DIEP free-flap reconstructies, die al langdurige en complexe operaties zijn waarbij aanvullende preoperatieve stappen irrationeel zouden zijn en het procedurele risico zouden verhogen.

Figuur 1: Preoperatieve evaluatie vóór postbariatrische abdominale dermolipectomie met DIEP-flapoogst. (A) Preoperatieve markering uitgevoerd met een akoestische Doppler en een dermografische pen om de paraumbilicale perforatoren aan weerszijden van de middenlijn te identificeren en af te tekenen. (B) De chirurg toont de laxiteit van de buikhuid en het te verwijderen subcutane weefsel aan, waarbij de adipocutane panniculus wordt gemarkeerd vóór de incisie langs de horizontale markeringslijn. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
2. Klepinkoop

Figuur 2: Intraoperatieve weergave van de abdominale dermolipectomieprocedure met skelettisering van de diepe epigastrice perforator pedicles in de inferieure. De afbeelding toont het operatieve veld vóór supraumbilicale dissectie en longitudinale infraumbilicale deling. De twee dominante bilaterale paraumbilicale diepe inferieure epigastrische perforatoren worden blootgelegd en gemarkeerd met chirurgische instrumenten. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 3: Intraoperatief beeld na supraumbilicale dissectie met de bilaterale diepe epigastrice perforatoren. De perforatoren zijn niet geligeerd, en hun subfasciale koers en lengte zijn beter te waarderen bij zachte grip (witte pijlen). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 4: Intraoperatief beeld met de DIEP-flappen die op de huid in een elliptische vorm zijn omlijnd vóór de ligatie. (A) De huidpaddle wordt afgesteld en in een elliptische vorm omlijnd met een dermografische pen (witte cirkel) om te zorgen dat de perforator langs de mediale rand van de flap aan weerszijden van de adipocutane panniculus wordt opgenomen. (B) Vergrote weergave met de omtrek van de DIEP-flap en de perforator gemarkeerd met een "x" volgens preoperatieve Dopplermapping (witte pijl). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Aanvullende Figuur 1: Naar beneden gerichte tractie op de bovenbuikflap helpt bepalen hoeveel overtollige huid verwijderd moet worden. Het lange uiteinde van de middenlijn, niet-absorberbare hechting die de supraumbilicale en pubische regio's verbindt, wordt als leidraad gebruikt. Met een dermografische pen tekent u de resectielijn langs het verloop van de hechting (witte pijlen) op de redundante adipocutane panniculus. Strek deze lijn zijwaarts uit naar elke voorste bovenste iliacale wervelkolom. De DIEP-flaps bevinden zich onder deze gemarkeerde resectielijn. Klik hier om dit bestand te downloaden.

Figuur 5: Intraoperatief beeld van de diepe inferior epigastrische arterieperforator (DIEP) flappen tijdens de oogst, na pedicle-ligatie. (A) De DIEP-flap, ongeveer 10 cm × 6 cm, wordt omlijnd met een chirurgische marker na lokalisatie van de perforator. (B) Huidincisie en flapoogst worden uitgevoerd langs de vooraf vastgestelde markeringen. De eerste incisie wordt gemaakt met een No. 15 mes, gevolgd door dissectie met een monopolaire elektrocauterie ingesteld op ongeveer 50-60 °C, en 80 W in stollingsmodus, wanneer het overtollige cutaneus-vetweefsel aan de patiënt blijft vastzitten. Wanneer het weefsel volledig is losgemaakt, wordt een steriele, eenmalige, batterij-aangedreven wegwerpcauteriepen (grote punt, ongeveer 1.200 °C) gebruikt om de scheiding te voltooien. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
3. Voorbereiding van de flap

Figuur 6: Na-oogst weergave van een onderzoeks-DIEP-lap. (A) De geoogste DIEP-lap wordt getoond met de vasculaire pedicle ontleed en geïsoleerd met behulp van microchirurgische tangen. Het arteriële uiteinde wordt met enkele millimeters afgeknipt om een schone snede te verkrijgen, en het lumen wordt voorzichtig geopend met een micro-dilator tang. (B) Close-up afbeelding van microchirurgische tangen die de dominante perforatorslagader vastzetten, met een 24-G katheter die in het lumen wordt ingebracht voor contrastmiddelinjectie. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 7: Katheterisatie van de DIEP-flap pedicle. (A) De katheter wordt op zijn plaats gezet met een 5-0 zijden hechting die zachtjes wordt vastgebonden om te voorkomen dat het lumen van de pedicle wordt belemmerd. (B) Zicht op de katheter zonder de spuit bevestigd, die de mate van katheterinsertie in het vasculaire lumen toont. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 8: Post-harvest fluoroscopie van de DIEP-flap die de vasculaire anatomie aantoont. (A,B) Contrastmiddel wordt via een 24-G katheter geïnjecteerd in de dominante perforatorslagader, waarbij het vertakkingspatroon en het vascularisatiegebied worden weergegeven, wat de levensvatbaarheid van de flap op twee verschillende flaps bevestigt. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Elf flappen werden geoogst van zes vrouwelijke patiënten die in deze studie waren opgenomen. Twee ervaren plastisch chirurgen, ervaren in flapchirurgie en buikcorrectie, voerden de dissecties uit. Bij één patiënt werd de flap eenzijdig geoogst vanwege een dissectieprobleem. De geoogste flappen hadden een gemiddeld gewicht van 198,6 ± 24,4 g (n = 11) en een gemiddelde grootte van 10 cm × 6 cm, wat overeenkwam met de monstervereisten voor de conserveringsstudie waarin deze flappen werden gebruikt. De pedikellengte, gemeten...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Menselijke modellen helpen bevindingen van dierstudies te overbruggen naar klinische praktijk, waardoor de relevantie en voorspellende kracht van preklinisch onderzoek verbeterd 16,17,18. Ze moeten zorgvuldig worden ontworpen om veiligheid en ethische naleving te waarborgen, waarbij vaak de reikwijdte en invasieve aard van experimentenworden beperkt. Over de vier geoogste flappen was geen extra dissectie ...
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
De auteurs hebben niets te onthullen.
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| 1 mL and 5 mL Luer-Lok spuit | Becton Dickinson | https://www.bd.com/en-us/products-and-solutions/products/product-page.309646 | |
| 11.5” Medium en Small Premium Surgiclip II Auto Suture vat clip applier | Covidien | N/A | |
| 22–24 G vat cannula stomp tip | Medtronic Inc | N/A | |
| 5-0 zijden hechtdraad | N/A | Elke compatibele hechtdraad | |
| Een wegwerpbare cauteriseringspen, aangedreven door een batterij | Helpmedical, Europa | N/A | 1200 °C, grote punt |
| Adson Forceps | MPM | 106-2112A | |
| Bipolar Coagulation Forceps | Olsen | 20-1320I | |
| Wegwerp scheermes #15 & #21 | Sklar | N/A | |
| Eosine | Microm Microtech | U/C0363 | |
| Faraboeuf retractors | Medicta Instruments | N/A | |
| Fijne naald cauterisering | Cormedica | N/A | |
| OEC MiniView Max | GE Healthcare | N/A | Fluoroscopiesysteem |
| Forceps dilatoren | WPI | 15910 | |
| Hematoxyline | Microm Microtech | U/C0303 | |
| Iohexol 300 mg I/mL | GE Healthcare Canada Inc. | N/A | |
| Micro schaar | WPI | 504492 | |
| Valleylab Monopolaire Diathermie | Medtronic Inc | ||
| Niet-ionisch gejodeerd contrastmiddel, Omnipaque 300 mg I/mL | GE Healthcare | N/A | |
| Draagbare akoestische Doppler, 8 MHz | Parks Medical Electronics | https://www.parksmed.com/ | |
| Zoutoplossing 0,9% | GenDepot | S0600-101 | |
| Standaard plastic chirurgie instrumentenset | Aesculap | N/A | inclusief scheermes handvat No. 3, Metzenbaum en Mayo schaar, Adson en Gillies forceps, dissectieschaar, hemostatische klemmen en naaldhouders. |
| Strabismus schaar | Surtex | 102-4109 | |
| Chirurgische markeerpen | Cardinal health | 212PR | |
| Hechtdraad Ethilon 4.0 en 3.0 | Ethicon | 1667G | |
| Weefsel forceps | MPM | 106-0511 |
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.