Methodenartikel

Versterking van de absorptie van het intestinale recombinante adeno-geassocieerde virus door een traditionele Chinese medicijnformule

130 weergaven

⸱

DOI:

10.3791/70413

⸱

24 april 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Faculty of Traditional Chinese Medicine, Naval Medical University, 2Oncology Department of Traditional Chinese Medicine, Changhai Hospital, Naval Medical University, 3State Key Laboratory of Genetics and Development of Complex Phenotypes, School of Life Sciences, Zhongshan Hospital, Fudan University, 4Shanghai Key Laboratory of Gene Editing and Cell Therapy for Rare Diseases, Engineering Research Center of Gene Technology (Ministry of Education), Fudan University, 5Institutes of Integrative Medicine, Fudan University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

Hier presenteren we een protocol voor het opzetten van een model voor een omgekeerde darmzak om interacties tussen Traditionele Chinese Geneeskunde (TCM) en recombinant adeno-geassocieerd virus (rAAV) tijdens intestinale absorptie te evalueren, waarmee een ex vivo platform wordt geboden voor het optimaliseren van orale genafleveringsstrategieën.

Samenvatting

Orale levering van recombinant adeno-geassocieerd virus (rAAV) heeft aanzienlijk therapeutisch potentieel, maar wordt beperkt door inefficiënte intestinale opname. Traditionele Chinese Geneeskunde (TCM), die veel wordt gebruikt in orale formuleringen, is een veelbelovende bron van absorptieversterkers. De mogelijke effecten op rAAV-opname en transductie blijven echter grotendeels onontgonnen. Het everted darmzakmodel biedt een kwantitatief ex vivo platform om deze interacties te onderzoeken. Hier wordt een gedetailleerd protocol gepresenteerd waarbij het everted darmzakmodel wordt gebruikt om adeno-geassocieerd virus (rAAV) translocatie door het darmepitheel en daaropvolgende gentransductie in darmweefsel onder gecontroleerde experimentele omstandigheden kwantitatief te beoordelen. Belangrijke stappen zijn het oogsten van kleine darmsegmenten van laboratoriumknaagdieren, het everten van segmenten om zakken te vormen, en het vullen van elke zak met zuurstofgeoxygeneerde buffer. De omgekeerde zakken worden ondergedompeld in een zuurstofrijke buffer met rAAV-deeltjes en geïncubeerd bij 37 °C om luminale blootstelling en vectortransport mogelijk te maken. Eindpuntanalyses omvatten het bemonsteren van de interne (serosale) vloeistof om rAAV-deeltjes te meten die het epitraal zijn gepasseerd, evenals het analyseren van het zakweefsel op transgenexpressie om de transductie-efficiëntie te bepalen. Door meerdere darmregio's te testen, biedt het protocol inzicht in segmentspecifieke verschillen in rAAV-opname. Bovendien maakt de opname van GZNG, een klassieke TCM-formule, tijdens incubatie het mogelijk om de impact ervan op vectoropname en transductie te evalueren. De benadering van de everted darmzak biedt een waardevol platform voor het screenen van rAAV-serotypen, afgifteversterkers en interacties tussen rAAV-vectoren en TCM-componenten. Het eenvoudige en paralleliseerbare ontwerp maakt ook high-throughput screening mogelijk in preklinische studies.

Inleiding

Recombinant adeno-geassocieerd virus (rAAV) vormt een veelbelovend platform voor systemische gentherapie, met momenteel drie primaire toedieningsroutes die worden onderzocht: intraveneuze injectie1, intraperitoneale injectie2 en orale toediening3. Hoewel routes van intraveneuze en intraperitoneale injecties uitgebreid zijn bestudeerd, blijft orale toediening, een niet-invasieve benadering, relatief onderbelicht. De haalbaarheid van orale rAAV-toediening werd voor het eerst aangetoond door Xin et al.4, die succesvolle transductie van intestinale mucosa en het inducteren van een anti-HIV-immuunrespons rapporteerden na orale toediening van rAAV2. Evenzo toonden Hara et al.3,5 aan dat orale rAAV/Aβ gastro-intestinaal slijmvlies kan transduceren en hersenamyloïdepositie kan verminderen, terwijl Steel et al.6 vonden dat orale vaccinatie een superieure overleving en antitumorimmuniteit vertoonde vergeleken met intramusculaire injectie. Dezelfde studie rapporteerde dat rAAV6 een sterkere intestinale tropisme vertoonde dan rAAV5. Naast vaccintoepassingen is therapeutisch potentieel bereikt in andere ziektemodellen. Ma et al.7 en Hao et al.8 bewezen dat orale rAAV leidde tot tumorsuppressie en anti-fibrotische therapie in respectievelijk de lever en maag, na gastro-intestinale transductie. Huang et al.9 identificeerden het gemodificeerde serotype Rec2 als selectief transducerend bruin vetweefsel na orale toediening, in tegenstelling tot het overheersende levertropisme dat werd waargenomen bij intraveneuze levering10. Ondanks deze baanbrekende bevindingen blijft het onderzoek naar orale rAAV-afgifte beperkt, deels vanwege het ontbreken van in vitro screeningssystemen voor grootschalige evaluatie.

Het model van de omgekeerde darmzak, ontwikkeld door Wilson en Wiseman in 1954, blijft een waardevol in vitro platform voor het onderzoeken van intestinale geneesmiddelenabsorptiemechanismen. In tegenstelling tot andere absorptiesimulatorapparaten houdt dit systeem uniek rekening met meerdere fysiologische processen buiten eenvoudige passieve diffusie12. Deze eigenschap maakt het bijzonder voordelig voor het bestuderen van TCM13. Met dit systeem is gedocumenteerd dat TCM-verbindingen vaak segmentafhankelijke intestinale absorptiepatronen vertonen in het hele maag-darmkanaal. Zo toonde een studie aan dat meerdere alkaloïden van Wuwei Qingzhuo San selectief worden opgenomen in verschillende darmsegmenten, waarbij het jejunum en ileum de meest actieve opname14 vertonen. Daarnaast kan co-toediening van TCM-bestanddelen de intestinale opname moduleren. Liao et al.15 rapporteerden dat co-toediening met Radix Angelicae dahuricae-extract de intestinale opname van puerarin significant verhoogde, wat de invloed van TCM-interacties op segmentale opname benadrukt. Daarom dient het everted gut sac-model als een ideaal instrument om de complexe absorptiegedragingen en synergetische interacties inherent aan TCM-formuleringen en andere geneesmiddelen te verduidelijken.

Het selecteren van een geschikt model voor rAAV-absorptieonderzoek vereist een genuanceerd begrip van de afwegingen tussen fysiologische nauwkeurigheid, technische complexiteit en doorvoer. De onderstaande tabel vat de primaire experimentele modellen samen die worden gebruikt om intestinale absorptie te bestuderen.

Deze studie levert het bewijs dat het everted darmzakmodel kan worden gebruikt om de intestinale absorptie van recombinante adeno-geassocieerde virus (rAAV) vectoren te onderzoeken. Het biedt waardevolle inzichten in hoe co-toediening van TCM de intestinale absorptie van rAAV-vectoren beïnvloedt, wat de noodzaak onderstreept van verdere karakterisering van hun mechanistische interacties onder fysiologisch relevante omstandigheden. Het optimaliseren van TCM-verbeterde orale toedieningsstrategieën via deze aanpak kan de ontwikkeling van niet-invasieve rAAV-therapieën bevorderen, waardoor patiënttherapietrouw en behandelingstoegankelijkheid verbeteren.

Onderzoekers dienen het everted darmzakmodel te evalueren op basis van de volgende criteria om te waarborgen dat het aansluit bij hun experimentele doelstellingen. Geschikte toepassingen zijn snelle screening van serotypen, evaluatie van adjuvans/versterkers en regionale kinetiek, terwijl ongeschikte toepassingen en beperkingen langlopende expressiestudies (>48 h) en systemische farmacologie omvatten.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

Alle dierprocedures werden uitgevoerd in strikte overeenstemming met de door de Naval Medical University Animal Ethics Committee goedgekeurde richtlijnen (goedkeuring CHEC (A.E)-2025011).

1. Bereiding van Tyrode's oplossing en virale oplossingen

  1. Tyrode's oplossing preconditionering:
    1. Bereid twee 500 mL aliquoten van Tyrode's oplossing voor (pH 7,4) (zie Materiaaltabel).
    2. Koel één aliquot tot 4 °C en de andere tot 37 °C.
    3. Bel elke aliquot met 95% O₂/5% CO₂.
  2. Voorbereiding van virale oplossingen:
    1. Voeg recombinant AAV9-CMV-EGFP toe aan de 37 °C Tyrode-oplossing om een uiteindelijke concentratie van 1 x 1011 vg/mL te bereiken (controleconditie).
    2. Voor de experimentele conditie vul je de AAV9-CMV-EGFP-preparaat aan met een TCM-formule GZNG (Tabel 2) opgelost in het voertuig tot een uiteindelijke concentratie van 200 mg/mL.
    3. Voor de GZNG-only controle, voeg GZNG (200 mg/mL) toe aan Tyrode's oplossing zonder AAV9 CMV-EGFP.
      OPMERKING: Bereid virale verdunningen direct voor gebruik voor om de infectie te behouden. De pH van de GZNG-oplossing is ongeveer 5,0–6,0.

2. Diervoorbereiding en het oogsten van darmweefsel

  1. Vasten: Vasten de 8 weken oude Sprague–Dawley-ratten 24 uur voorafgaand aan de operatie. Zorg voor vrije toegang tot water gedurende deze periode om hydratatie te behouden.
    OPMERKING: Vasten helpt de darminhoud te minimaliseren en zorgt voor nauwkeurige meting van de darmopname tijdens ex vivo experimenten.
  2. Controleer de gezondheid van dieren voordat je vasten en zorg dat ze in goede conditie verkeren. Sluit dieren met tekenen van stress of ziekte uit van het onderzoek.
  3. Dien natriumpentobarbital toe (200 mg/kg, intraperitoneaal) om diepe anesthesie op te wekken. Controleer of het dier volledig verdoofd is door te controleren op een gebrek aan reflexen en een gelijkmatige ademhaling.
    VOORZICHTIG: Pentobarbital is een gevaarlijke gecontroleerde stof; hanteer met handschoenen en PBM in een dampkap om huidcontact/inademing te voorkomen en volg de institutionele richtlijnen voor veilige verwijdering en noodhulp.
  4. Voer euthanasie uit door cervicale dislocatie zodra diepe anesthesie is bevestigd.
  5. Swab de buik- en thoracale gebieden met 75% ethanol om de huid te desinfecteren en microbiële besmetting tijdens de operatie te verminderen.
  6. Maak een middenlijnincisie langs het buikgebied met een steriele chirurgische schaar om de peritoneale holte bloot te leggen.
  7. Scheid voorzichtig en ontbloot de maag en darmen. Gebruik een steriel doekje om het omliggende weefsel en de organen tijdens de ingreep te beschermen.
  8. Snijd voorzichtig de pylorische sluitspier door om de maag te scheiden van de proximale duodenum. Zorg ervoor dat de duodenum intact blijft voor volgende procedures.
  9. Dissectie de distale colon bij de recto-anale overgang zonder schade aan het omliggende weefsel te voorkomen.
  10. Maak voorzichtig de mesenteriale aanhechtingen los van de dunne darm met fijne tangen of schaar. Wees voorzichtig dat je de mesenterie niet uitrekt of scheurt.
  11. Onmiddellijk overbrengen van de intacte dunne darm naar een ijskoude oplossing van zuurstofhoudende Krebs-Ringer Buffer (Tyrode-oplossing, 4 °C).

3. Ex vivo everted darmzakvoorbereiding

  1. Selecteer de darmsegmenten als volgt: een segment van 8 cm, gelegen 10 cm distaal van de pylorus, werd aangeduid als het duodenale segment.
  2. Verzamel een jejunaal segment van 8 cm, beginnend 16 cm distaal van het duodenale segment.
  3. Verkrijg een 8 cm lang ileale segment dat verder 16 cm distaal van het jejunale segment begint.
  4. Voor de dikke darm verzamel je een segment van 8 cm dat zich 5 cm proximaal van het cecale blinde uiteinde bevindt.
    OPMERKING: Zorg ervoor dat het weefsel elastisch en intact is, geschikt voor omkering tijdens de voorbereiding.
  5. Spoel het darmlumen af met een 2 ml spuit gevuld met ijskoude, zuurstofrijke Tyrode-oplossing.
  6. Voer het afvalwater af volgens institutionele protocollen voor biohazard afval om de steriliteit te behouden en besmetting te voorkomen.
    VOORZICHTIG: Behandel biologisch afval met handschoenen en passende beschermingsmiddelen om blootstelling aan mogelijk besmettelijk materiaal te voorkomen. Voer al het biologische afval en afvalwater af volgens de institutionele veiligheidsrichtlijnen voor biohazards om milieuverontreiniging te voorkomen.
  7. Breng het proximale uiteinde van het darmsegment in op een 4 mm gepolijste glazen staaf. Zorg dat het oppervlak van de staaf glad is om slijmvliesscheuren te voorkomen.
  8. Bind het distale uiteinde van het segment vast met een 2-0 zijden hechting om het weefsel aan de staaf vast te maken. Controleer of het weefsel stabiel blijft tijdens de inversie.
  9. Beweeg voorzichtig het darmsegment door het weefsel langs de staaf te schuiven totdat het slijmvlies volledig blootligt. Vermijd overmatig uitrekken of draaien om de integriteit van het weefsel te behouden.
  10. Breng 2 ml ijskoude Tyrode-oplossing in het lumen om lekkage te controleren. Acceptabele lekkage moet binnen 1 minuut <5% zijn. Als lekkage wordt vastgesteld, stel dan de hechtingen aan en controleer de volledige inversie van het slijmvliesoppervlak.
    OPMERKING: Voer de eversie uit in een koude omgeving om enzymatische afbraak te minimaliseren en de levensvatbaarheid van het weefsel te behouden.
  11. Steek een 5 cm lange glazen capillair van 3 mm in het open uiteinde van het uitgetrokken segment om als inlaat voor perfusie te dienen. Schuif de canule voorzichtig naar voren om slijmvliesscheuren te voorkomen.
  12. Bevestig de canule met 2-0 zijden hechtingen. Zorg ervoor dat de canule op zijn plaats blijft zonder in te storten of de vloeistofstroom te belemmeren.
  13. Breng zachte spanning aan op de hechtingen om de juiste vorm van de darmzak te behouden. Voorkom knikken of draaien, omdat deze de perfusie kunnen verstoren en de absorptieresultaten kunnen beïnvloeden.
  14. Vermijd overmatig aandraaien, omdat dit het weefsel kan beschadigen of de zak kan vervormen. Houd de gelijkmatige spanning gedurende het hele experiment. Controleer regelmatig de uitgetrokken darmzak op lekkage of structurele schade. Als de lekkage meer dan 5% beduurt, herstel of vervang dan het segment voordat je verder gaat.

4. AAV-transductie en incubatie

  1. Plaats elke uitgetrokken zak in een 7 mL conische buis met 4 mL 37 °C zuurstofhoudende Tyrode-oplossing.
  2. Voeg virale oplossing toe als volgt: Controle: AAV9-CMV-EGFP alleen; Experimenteel: AAV9-CMV-EGFP + GZNG.
  3. Incubeer statisch bij 37 °C gedurende 2 uur, waarbij een gasmengsel van 95% O2/5% COcontinu in de oplossing werd gebubbelt.

5. Bemonstering, eindpuntverwerking en analyse

  1. Tijdbaanbemonstering
    1. Haal 50 μL serosale vloeistof uit elke darmzak bij 0, 30, 60, 90 en 120 minuten met een gekalibreerde microspuit. Zorg voor nauwkeurige bemonstering zonder luchtbellen toe te voegen.
    2. Vervang onmiddellijk de teruggetrokken vloeistof door 50 μL voorverwarmde (37 °C) Tyrode-oplossing om het osmotische evenwicht en het interne volume te behouden. Minimaliseer de tijd tussen terugtrekking en vervanging om consistente experimentele omstandigheden te behouden.
      OPMERKING: Bij gebruik van een microspuit (bijv. Hamilton-spuit), houd dan de steriele sterielheid en behandel voorzichtig om schade aan het darmzakmembraan te voorkomen.
    3. Voer op elk tijdstip snel bemonstering uit om verstoring van de incubatieomgeving te minimaliseren.
  2. Bepaling van virustiter
    1. Haal het volledige DNA uit de serosale vloeistof met behulp van een commercieel verkrijgbare Animal Genomic DNA Extraction Kit volgens de instructies van de fabrikant.
    2. Voer absolute kwantificatie uit van het kopieernummer van het rAAV-vectorgenoom met qPCR. Gebruik een SYBR Green Kit met ITR-primers. Voer de qPCR-versterking uit in een standaard 96-wellplaat met een thermische cycler onder de volgende cyclische condities: Initiële denaturatie: 95°C gedurende 10 minuten; Denaturatie: 95°C gedurende 15 seconden; Gloeien en verlenging: 60°C voor 1 minuut; In totaal 40 cycli
    3. Om het genoomkopienummer te kwantificeren, genereer je een standaardcurve met seriële verdunningen van plasmide rAAV-CMVp-gfp (1 ng, 0,1 ng en 0,01 ng). Gebruik deze verdunningen om het kopieergetal van het virale genoom te berekenen op basis van hun overeenkomstige cyclusdrempel (Ct) waarden.
    4. Bepaal het aantal kopieën van het vectorgenoom in de verzamelde serosale vloeistof met behulp van de standaardcurve. De resultaten werden gerapporteerd als genoomkopieën per 100 ng geëxtraheerd DNA.
      OPMERKING: Zorg ervoor dat alle reagentia en apparatuur steriel zijn om besmetting tijdens DNA-extractie en qPCR-analyse te voorkomen. Gebruik passende controles om qPCR-nauwkeurigheid te verifiëren, inclusief no-template controls (NTC) en plasmidestandaarden.
    5. Voer qPCR drievoudig uit voor elk monster om reproduceerbaarheid en betrouwbaarheid van de resultaten te waarborgen.
  3. Terminale weefselverwerking
    1. Aspireer alle resterende luminale vloeistof uit elke darmzak met een steriele pipet. Behandel voorzichtig om te voorkomen dat het weefsel scheurt.
    2. Spoel elke zak drie keer met fosfaatgevulde zoutoplossing (PBS) die 1% penicilline–streptomycine (P/S) bevat om restmateriaal, bacteriën en onzuiverheden te verwijderen. Zorg voor grondige wasbeurt om de steriliteit te behouden voor latere toepassingen.
    3. Snijd het darmweefsel in fragmenten van 2 mm3 (2 mm * 2 mm * 0,5 mm) met steriele chirurgische schaar of messen. Houd de fragmenten gelijkmatig groot voor een consistente incubatie.
    4. Incubeer de weefselfragmenten in 10 mL DMEM aangevuld met 10% FBS en 1% (v/v) P/S bij 37 °C gedurende 48 uur in een bevochtigde incubator met 5% CO₂. Het kweekmedium moet elke 12 uur tijdens de incubatie worden vernieuwd.
      OPMERKING: Deze stap houdt de levensvatbaarheid van het weefsel en maakt celherstel na het experiment mogelijk. Zorg ervoor dat het slijmvlies intact blijft tijdens het snijden en wassen. Voer drie volledige PBS-wasbeurten uit om vuil en microbiële verontreinigingen te verwijderen. Handhaven een constante temperatuur (37 °C) en hoge luchtvochtigheid ter ondersteuning van de metabole activiteit en de gezondheid van het weefsel.
      VOORZICHTIG: Behandel weefselfragmenten met steriele gereedschappen en vermijd mechanische stress om de epitheelintegriteit te behouden.
  4. Post-incubatieanalyses
    1. Aliquot A (Histologische analyse):
      1. Fixeer de weefselmonsters in 4% paraformaldehyde (PFA) gedurende 24 uur bij 4 °C om de cellulaire architectuur te behouden.
      2. Na fixatie wordt het weefsel in de OCT-verbinding ingebed en een Hematoxyline- en Eosine-kleuring (H&E) uitgevoerd om de weefselintegriteit en morfologie te beoordelen.
        VOORZICHTIG: Paraformaldehyde is een gevaarlijk fixeermiddel; behandel het in een dampkap met geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen
    2. Aliquot B (Fluorescentie-analyse en genoomkwantificatie):
      1. Vries het resterende weefsel in vloeibare stikstof en bewaar bij -80 °C tot verdere verwerking.
      2. Gebruik de bevroren monsters voor fluorescentiemicroscopie om EGFP-expressie te detecteren en de transfectie-efficiëntie of virale opname te beoordelen.
      3. Voer DNA-extractie uit gevolgd door qPCR om het aantal kopieën van het virale genoom of de expressie van transgene te bepalen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

Dit protocol werd gebruikt om de efficiëntie van AAV9-gemedieerde genlevering over verschillende segmenten van de dunne darm te beoordelen, evenals de impact van de GZNG-behandeling op het verbeteren van genoverdracht en expressie. Er werden verschillende belangrijke uitkomsten waargenomen, die zowel de succesvolle toepassing van het protocol als enige variabiliteit die onder bepaalde omstandigheden kan optreden, aantoonden.

De beoordeling van AAV9-gemedieerde...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

In deze studie werd een nieuwe in vitro-benadering ontwikkeld om de absorptie van intestinale rAAV te evalueren door het klassieke model van de omgekeerde darmzak aan te passen. Deze methode maakt segmentspecifieke analyse van de efficiëntie van AAV-transductie in de dunne darm onder gecontroleerde omstandigheden mogelijk en evaluatie van de synergetische effecten tussen TCM en rAAV. Hier worden de kritieke stappen, probleemoplossing en aanpassingen, beperkingen en hun brede toe...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

De auteurs hoeven geen belangenconflicten aan te geven.

Dankbetuigingen

De auteurs willen alle collega's en medewerkers bedanken die waardevolle discussies en technische ondersteuning hebben verleend gedurende deze studie. We waarderen ook de institutionele steun die dit werk mogelijk heeft gemaakt. Dit werk werd financieel ondersteund door subsidie #82474349 van de National Natural Science Foundation of China (aan CL).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
DMEMWISENT319-005-CLVloeibaar, met 4,5 g/L D-Glucose, met L-Glutamine, fenol rood en natriumpyruvaat
EGFP CDS region qPCR primersTSINGKEF: 5’-ACTTCTTCAAGTCCGCCATG-3’; R: 5’-TGTCGGCCATGATATAGACG-3’
Fetal Bovine SerumWISENT086-550Superieure kwaliteit, primair celcultuur graad
Penicillin-Streptomycin(P/S)WISENT450-201-ELDeze oplossing bevat 10.000 eenheden/mL penicilline en 10.000 µg/mL streptomycine.
PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time)TaKaRaRR036A
TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction KitTaKaRa9767
TSINGKE TSE401 ArtiCanCEO SYBR qPCR MixTSINGKETSE401Dit product is geschikt voor fluorescentie kwantitatieve experimenten met behulp van de SYBR Green kleurmethode en is compatibel met verschillende real-time fluorescentie kwantitatieve PCR-instrumenten.
TSINGKE TSP202-200 Trelief Hi-Pure Animal Genomic DNA KitTSINGKETSP202-200
Tyrode's oplossingYuan YeR20268-500mlHet bestaat voornamelijk uit natriumchloride, kaliumchloride, magnesiumchloride, fosfaten, calciumchloride, glucose en HEPES.

Referenties

  1. Wang, J. H., et al. Adeno-associated virus as a delivery vector for gene therapy of human diseases. Signal Transduct Target Ther. 9 (1), 78(2024).
  2. Durbacz, M. Z., et al. Optimized genomic editing of a common Duchenne muscular dystrophy mutation in patient-derived muscle cells and a new humanized mouse model. Mol Ther Nucleic Acids. 36 (2), 102569(2025).
  3. Hara, H., et al. An oral Aβ vaccine using a recombinant adeno-associated virus vector in aged monkeys: reduction in plaque amyloid and increase in Aβ oligomers. J Alzheimers Dis. 54 (3), 1047-1059 (2016).
  4. Xin, K. Q., et al. Oral administration of recombinant adeno-associated virus elicits human immunodeficiency virus-specific immune responses. Hum Gene Ther. 13 (13), 1571-1581 (2002).
  5. Hara, H., et al. Development of a safe oral Abeta vaccine using recombinant adeno-associated virus vector for Alzheimer's disease. J Alzheimers Dis. 6 (5), 483-488 (2004).
  6. Steel, J. C., et al. Oral vaccination with adeno-associated virus vectors expressing the neu oncogene inhibits the growth of murine breast cancer. Mol Ther. 21 (3), 680-687 (2013).
  7. Ma, H., et al. Oral adeno-associated virus-sTRAIL gene therapy suppresses human hepatocellular carcinoma growth in mice. Hepatology. 42 (6), 1355-1363 (2005).
  8. Hao, Z. M., et al. Oral administration of recombinant adeno-associated virus-mediated bone morphogenetic protein-7 suppresses CCl4-induced hepatic fibrosis in mice. Mol Ther. 20 (11), 2043-2051 (2012).
  9. Huang, W., et al. Genetic manipulation of brown fat via oral administration of an engineered recombinant adeno-associated viral serotype vector. Mol Ther. 24 (6), 1062-1069 (2016).
  10. Liu, X., et al. Adipose tissue insulin receptor knockdown via a new primate-derived hybrid recombinant AAV serotype. Mol Ther Methods Clin Dev. 1, 8(2014).
  11. Alam, M. A., Al-Jenoobi, F. I., Al-Mohizea, A. M. Everted gut sac model as a tool in pharmaceutical research: limitations and applications. J Pharm Pharmacol. 64 (3), 326-336 (2012).
  12. Lassoued, M. A., Khemiss, F., Sfar, S. Comparative study of two in vitro methods for assessing drug absorption: Sartorius SM 16750 apparatus versus everted gut sac. J Pharm Pharm Sci. 14 (1), 117-127 (2011).
  13. Yang, Y. N., Zhan, J. G., Cao, Y., Wu, C. M. From ancient wisdom to modern science: Gut microbiota sheds light on property theory of traditional Chinese medicine. J. Integr. Med. 22 (4), 413-444 (2024).
  14. Liao, C. P., et al. Intestinal absorption components and absorption characteristics of Wuwei Qingzhuo San by everted intestinal sac models. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 49 (2), 509-517 (2024).
  15. Liao, Z. G., et al. Transport properties of puerarin and effect of extract of Radix Angelicae Dahuricae on puerarin intestinal absorption using in situ and in vitro models. Phytother Res. 28 (9), 1288-1294 (2014).
  16. During, M. J., Xu, R., Young, D., Kaplitt, M. G., Sherwin, R. S., et al. Peroral gene therapy of lactose intolerance using an adeno-associated virus vector. Nat. Med. 4 (10), 1131-1135 (1998).
  17. Hao, Z., Yang, X., Lv, Y., Li, S., Purbey, B. K., et al. Intracolonically administered adeno-associated virus-bone morphogenetic protein-7 ameliorates dextran sulphate sodium-induced acute colitis in rats. J. Gene Med. 14 (7), 482-490 (2012).
  18. Meng, J. S., et al. Melittin analog p5RHH enhances recombinant adeno-associated virus transduction efficiency. J. Integr. Med. 22 (1), 72-82 (2024).
  19. Sun, H., et al. The Caco-2 cell monolayer: usefulness and limitations. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 4 (4), 395-411 (2008).
  20. Meneses, A. M. C., et al. Intestinal organoids—current and future applications. Vet Sci. 3 (4), 31(2016).
  21. Thomson, A., et al. The Ussing chamber system for measuring intestinal permeability in health and disease. BMC Gastroenterol. 19 (1), 98(2019).
  22. Caldeira, T. G., et al. Determination of intestinal permeability using in situ perfusion model in rats: challenges and advantages to BCS classification applied to digoxin. Int J Pharm. 551 (1-2), 148-157 (2018).
  23. Dahlgren, D., Lennernäs, H. Intestinal permeability and drug absorption: predictive experimental, computational and in vivo approaches. Pharmaceutics. 11 (8), 411(2019).
  24. Mateer, S. W., et al. Ex vivo intestinal sacs to assess mucosal permeability in models of gastrointestinal disease. J Vis Exp. (108), e53250(2016).
  25. Liu, W., et al. Developments in methods for measuring the intestinal absorption of nanoparticle-bound drugs. Int J Mol Sci. 17 (7), 1171(2016).
  26. Lengler, J., et al. Crucial aspects for maintaining rAAV stability. Sci Rep. 14, 27923(2024).
  27. Benskey, M. J., et al. Targeted gene delivery to the enteric nervous system using AAV: a comparison across serotypes and capsid mutants. Mol Ther. 23 (3), 488-500 (2015).
  28. Polyak, S., et al. Gene delivery to intestinal epithelial cells in vitro and in vivo with recombinant adeno-associated virus types 1, 2, and 5. Dig Dis Sci. 53 (5), 1261-1270 (2008).
  29. Dudhatra, G. B., et al. A comprehensive review on pharmacotherapeutics of herbal bioenhancers. Scientific World Journal. 2012, 637953(2012).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Intestinale absorptiege verteerde darmzakorale rAAV toedieninggentransductieintestinaal epitheelvectoropnametransgene expressietoedieningsbevorderaars

Gerelateerde artikelen