Methodenartikel

Een vereenvoudigd en robuust protocol voor de isolatie en langdurige uitbreiding van primaire menselijke endometriumepitheelcellen

DOI:

10.3791/70429

⸱

10 april 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The International Education College of Zhejiang Chinese Medical University, 2The First Clinical Medical College of Zhejiang Chinese Medical University, 3Department of Breast Surgery, The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University (Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine), 4Quzhou TCM Hospital at the Junction of Four Provinces Affiliated to Zhejiang Chinese Medical University, 5Bozhou District Hospital of Traditional Chinese Medicine, 6The Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Shihezi University

* These authors contributed equally

In dit artikel

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De primaire kweek van menselijke endometriumepitheelcellen (HEEC's) is technisch uitdagend. Dit protocol combineert gemengde enzymdigestion met ROCK-remmer (Y-27632) om de celoverleving en -uitbreiding te verbeteren, terwijl de epitheelidentiteit behouden blijft, wat een robuust platform biedt voor endometriumonderzoek en regeneratieve toepassingen.

Samenvatting

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Onderzoek naar endometriumaandoeningen, waaronder tamoxifen-geassocieerde endometriumhyperplasie, is beperkt door het ontbreken van robuuste in vitro epitheelmodellen. Conventionele methoden voor het isoleren van menselijke endometriumepitheelcellen (HEEC's) zijn vaak inefficiënt, technisch veeleisend en slecht schaalbaar. Hier wordt een vereenvoudigd, feeder-vrij protocol beschreven dat de behandeling van gemengde enzymdigestion, erytrocytenlyse en aanhoudende ROCK-inhibitorbehandeling (Y-27632) integreert om efficiënte isolatie en uitbreiding van primaire HEEC's mogelijk te maken. De opname van Y-27632 is cruciaal voor het verminderen van door dissociatie veroorzaakte apoptose en het verbeteren van de celadhesie in een vroeg stadium. Deze aanpak ondersteunt seriële passaging terwijl de epitheelidentiteit behouden blijft voor ten minste 3 passages, waarbij de morfologie behouden blijft na 10 passages. Karakterisering met Western blot en immunofluorescentie bevestigt een hoge expressie van cytokeratine 18 en E-cadherine, met een progressieve vermindering van vimentine-positieve stromale verontreinigingen onder selectieve kweekomstandigheden. Door belangrijke technische beperkingen aan te pakken, biedt deze methode een betrouwbare, schaalbare bron van epitheelcellen voor mechanistische studies, ziektemodellering, geneesmiddelscreening en regeneratieve toepassingen in endometriumonderzoek. De gestandaardiseerde workflow biedt een alternatief voor complexe co-cultuursystemen en maakt bredere toegang tot hoogwaardige primaire celmodellen mogelijk.

Inleiding

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Betrouwbare in-vitro modellen zijn essentieel voor het bevorderen van het onderzoek naar endometriumaandoeningen, met name die geassocieerd met tamoxifen (TAM)1. Hoewel TAM veel wordt gebruikt als endocriene therapie voor borstkanker, verhoogt de gedeeltelijke oestrogeen-agonistactiviteit in het endometrium aanzienlijk de incidentie van endometriumhyperplasie, poliepen en in sommige gevallen maligne transformatie2. De huidige klinische behandeling van tamoxifen-geassocieerde endometriumpathologie is voornamelijk afhankelijk van progesterontherapie of chirurgische ingrepen, die beide aanzienlijke beperkingen hebben. Progesteronbehandeling wordt vaak geassocieerd met bijwerkingen zoals doorbraakbloedingen en gewichtstoename, terwijl chirurgische methoden onomkeerbare endometriumschade kunnen veroorzaken en de vruchtbaarheid kunnen aantasten3. Deze beperkingen onderstrepen de noodzaak van robuuste epitheelmodellen die mechanistische studies kunnen ondersteunen en kunnen bijdragen aan de ontwikkeling van verbeterde therapeutische strategieën. De vooruitgang op dit gebied is echter vooral beperkt door technische uitdagingen bij het verkrijgen van hoogzuivere, uitbreidbare menselijke endometriumepitheelcellen (HEEC's).

Fundamenteel werk op dit gebied werd gerapporteerd door Arnold et al. (2001), die stromale en epitheliale celpopulaties isoleerden via collagenase-vertering en sequentiële zeeffiltratie, waarbij meer dan 98% zuiverheid werd bereikt, zoals bevestigd door immunokleuring4. Ondanks het succes was de methode afhankelijk van enkel-enzym digestie, vereiste langdurige verwerking en was het afhankelijk van stapsgewijze filtratie om stromale en erytrocyten te verwijderen, waardoor de workflow arbeidsintensief werd en moeilijk te standaardiseren4. Later stelden Yokomizo et al. (2002) een primair HEEC-kweeksysteem op van hysterectomie-monsters met behulp van een driedimensionale co-kweek met stromale feedercellen5. Hoewel de feeder-gebaseerde microomgeving gedeeltelijk epitheelgroei ondersteunde, stond het systeem slechts beperkte doorgang toe, meestal niet meer dan vijf doorgangen, wat het nut ervan beperkte voor toepassingen die grootschalige, stabiele epitheelexpansievereisten.

Om deze beperkingen te overwinnen, werd een vereenvoudigd en zeer reproduceerbaar protocol ontwikkeld voor HEEC-isolatie en langdurige kweek. Geleid door eerder werk dat aantoonde dat de ROCK-remmer Y-27632 de efficiëntie van primaire kweek voor menselijke keratinozyten, gingivale epitheelcellen en melkepitheelcellen aanzienlijk verbetert, werd hetzelfde principe toegepast op endometriumweefsel 6,7,8. Deze aanpak omvat drie belangrijke kenmerken: de vertering van gemengde enzymen om efficiënte weefseldissociatie te bevorderen, een essentiële stap in erytrocyten-lyse om vroege besmetting te verminderen en epitheelhechting te bevorderen, en continue suppletie met Y-27632 om apoptose te onderdrukken, adhesie te ondersteunen en de proliferatieve capaciteit te vergroten. Met deze strategie kunnen HEEC's over meerdere passages worden uitgebreid, terwijl de epitheelmorfologie en hoge expressie van CK18 en E-cadherine 9,10 behouden blijven. Opmerkelijk is dat seriële passaging gedurende minstens 3 generaties niet resulteerde in detecteerbare fenotypische drift, wat de stabiliteit en schaalbaarheid van het kweeksysteem aantoont.

Deze methode pakt direct langdurige technische uitdagingen in de primaire HEEC-cultuur aan, waaronder hoge weefselinputvereisten, complexe workflows, lage reproduceerbaarheid en beperkte uitbreidingspotentieel. Door de epitheliale identiteit en functionele kenmerken gedurende het passeren te behouden, biedt het protocol een betrouwbaar platform voor onderzoek naar endometriumregeneratie, pathofysiologie, high-throughput geneesmiddelenscreening en cel–biomateriaalinteracties. Door weefselverwerking te integreren met seriële uitbreiding, pakt deze gestandaardiseerde workflow een langdurige bottleneck in de voortplantingsbiologie aan en ondersteunt toekomstige toepassingen in weefselengineering, regeneratieve geneeskunde en gepersonaliseerde therapie.

Dit protocol vereist verse weefselmonsters, bij voorkeur binnen 24 uur na de verzameling verwerkt. Celopbrengst en groeikenmerken kunnen variëren afhankelijk van de weefselbron, zoals endometriumpoliepen versus normaal endometrium. Veelvoorkomende oorzaken van falen zijn onvolledige weefselvertering, overmatige erytrocytencontaminatie of onvoldoende Y-27632-suppletie. Hoewel het systeem expansie over meerdere gangen ondersteunt, kan verdere optimalisatie nodig zijn om fenotypische stabiliteit tijdens uitgebreide kweek te behouden.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Verse endometriumweefselmonsters werden afgenomen van baarmoederpoliepmonsters die chirurgisch werden verwijderd van patiënten in het First Affiliated Hospital van de Zhejiang Chinese Medical University. Alle procedures werden uitgevoerd volgens de richtlijnen goedgekeurd door de Medische Ethische Commissie van het Eerste Geaffilieerde Ziekenhuis van de Zhejiang Chinese Medische Universiteit (Protocol nr. 2025-KLS-569-01; goedgekeurd 14 september 2025). De behandeling van primaire menselijke monsters vond plaats in een biologische veiligheidskast van klasse II met geschikte persoonlijke beschermingsmiddelen, waaronder laboratoriumjassen, handschoenen en oogbescherming. Alle enzymatische reagentia werden behandeld volgens de institutionele veiligheidsvoorschriften en de richtlijnen van Material Safety Data Sheets (MSDS).

1. Aanname van weefsel

  1. Verzamel vers endometriumweefsel van chirurgische monsters afkomstig van volwassen vrouwen. Breng het weefsel over in steriele buizen met 10 mL fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), aangevuld met 3% penicilline/streptomycine (P/S).
    OPMERKING: Al het weefsel moet binnen 24 uur na chirurgische opname worden verwerkt.

2. Voorbehandeling van weefsel

  1. Beweeg het weefsel in wasoplossing (Tabel 1) twee opeenvolgende wasbeurten van elk 2 minuten om slijm en bloedstolsels te verwijderen.
  2. Spoel het weefsel kort af met 5 mL 75% ethanol gedurende 5 seconden om het oppervlak te desinfecteren.
  3. Breng het weefsel onmiddellijk over in 20 ml wasmiddel en was twee keer wasbeurten van 5 minuten om de restanten van ethanol te verwijderen.
    OPMERKING: Omdat ethanol brandbaar is, moet u deze stap weg van open vlammen uitvoeren en ethanolhoudend afval afvoeren volgens de institutionele chemische veiligheidsrichtlijnen.

3. Weefselvertering en celoogst

  1. Weefselhakken
    1. Fijnsnijd het endometriumweefsel met twee steriele bladen totdat fragmenten (~2 mm3) via een 1 mL pipettip kunnen worden geaspireerd (ongeveer 10 min).
    2. Breng het gemalen weefsel over in een 50 mL centrifugebuis.
  2. Enzymatische vertering
    1. Voeg 10 ml verteringsoplossing (Tabel 1) toe aan de buis met de weefselfragmenten.
    2. Incubeer de buis in een 37 °C waterbad gedurende 30 minuten. Schud de tube voorzichtig elke 15 minuten om de spijsvertering te vergemakkelijken.
    3. Blijf incuberen totdat de weefselfragmenten zichtbaar gedissocieerd zijn en de oplossing troebel lijkt door vrijgekomen cellen.
  3. Beëindiging van de spijsvertering
    1. Voeg 10 ml neutraliserende oplossing toe om de enzymatische vertering te beëindigen.
    2. Meng grondig door ongeveer 15 keer omhoog en omlaag te pipetten met een P1000-pipet ingesteld op 800 μL.
  4. Filtratie en centrifugatie
    1. Filter de verteerde suspensie door een 100 μm gaasfilter.
    2. Centrifugeer op 156 × g gedurende 5 minuten bij 25 °C.
  5. Rode bloedcellen (RBC) lyse
    1. Aspireer het supernatant voorzichtig zonder de pellet te verstoren.
    2. Susse de celpellet opnieuw in 2 mL voorgekoelde RBC-lysisbuffer.
    3. Breng 3–5 minuten uit op ijs (ongeveer 4 °C) met zachte roering.
  6. Beëindiging van de lysis
    1. Voeg ≥10 mL PBS of volledig medium toe om de lysereactie te stoppen.
    2. Centrifugeer op 156 × g gedurende 5 minuten op 25 °C.

4. Initiatie van primaire cultuur

  1. Wassen en centrifugeren
    1. Aspireer het supernatant voorzichtig zonder de pellet te verstoren.
    2. Suspendeer de pellet opnieuw in 20 mL neutraliserende oplossing.
    3. Meng door ongeveer 15 keer te pipetten.
    4. Centrifugeer op 156 × g gedurende 5 minuten bij 25 °C.
  2. Resuspension en zaaien
    1. Aspireer het supernatant.
    2. Suspenseer de celpellet voorzichtig opnieuw in 10 mL initiële kweekmedium met 10 μM Y-27632 door langzaam 8–10 keer op en neer te pipetteren met een pipet van 1 mL.
    3. Plat de celsuspensie in een kweekschaal van 100 mm.
      OPMERKING: Voor een optimale initiële zaaidichtheid kies je het kweekvat volgens de geschatte celopbrengst. Als de verwachte opbrengst >1 × 106 cellen is, gebruik dan een schotel van 100 mm en voor lagere opbrengsten een schotel van 60 mm. Stel het medium volume dienovereenkomstig aan (bijv. 10 mL voor een schotel van 100 mm; 4 ml voor een schotel van 60 mm).
  3. Cultuuromstandigheden
    1. Incubeer de schotel op 37 °C in een bevochtigde atmosfeer met 5%CO2.
    2. Vervang het medium elke 3 dagen door vers epitheelkweekmedium zonder Y-27632.
      OPMERKING: Monitor celhechting en morfologie; Vernieuw het medium elke 2 dagen zodra cellen beginnen te vermenigvuldigen.

5. Celpassage

  1. Voorbereiding op trypsinisatie
    1. Wanneer de culturen 80%–90% samenvloeiing bereiken, verwijder je de 100 mm schaal uit de broedmachine.
    2. Gooi het verbruikte medium weg.
    3. Spoel de cellen twee keer af met 2 ml PBS.
    4. Aspireer voorzichtig en verwijder eventuele resterende PBS.
  2. Trypsinisatie
    1. Voeg 2 ml 0,05% trypsine toe aan het gerecht.
    2. Draai zachtjes om een gelijkmatige dekking van de cellaag te garanderen.
    3. Broed 7 minuten op 37 °C.
    4. Onderzoek de cellen onder een microscoop (40x objectief) om loslating te bevestigen.
  3. Neutralisatie en verzameling
    1. Voeg 8 ml neutraliserende oplossing toe om de spijsvertering van trypsine te stoppen.
    2. Breng de celsuspensie over naar een 15 mL centrifugebuis.
    3. Pipette ongeveer 15 keer om een single-cell suspension te verkrijgen.
    4. Centrifugeer op 156 × g gedurende 5 minuten op 25 °C.
  4. Herophanging en herzaaiing
    1. Aspiraat het supernatant zonder de pellet te verstoren.
    2. Suspendeer de celpellet voorzichtig opnieuw in 10 mL epitheelcelmedium door ongeveer 10 keer op en neer te pipetteren met een pipet van 1 mL.
    3. Zaad 1 × 106 cellen in 10 mL epitheelcelmedium in een nieuwe schaal van 100 mm.
    4. Pas de zaaidichtheid aan om de volgende dag geïsoleerde, goed verspreide enkelcellige of kleine clusters te bevorderen, zodat overbevolking wordt voorkomen.
  5. Onderhoud na de passage
    1. Incubeer onder standaard kweekomstandigheden (37 °C, 5%CO2).
    2. Bekijk de kweek regelmatig en vervang het epitheelcelmedium elke 2 dagen.
      OPMERKING: Cellen zijn doorgaans klaar voor downstream toepassingen na de eerste of tweede passage, zodra een gezonde, hechtende monolaag met ≥80% samenvloeiing is verkregen.
      VOORZICHTIG: Alle materialen die in contact kwamen met primaire menselijke cellen werden behandeld als potentiële biohazards. Voorafgaand aan verwijdering of verdere verwerking werden deze materialen gedesinfecteerd met 10% bleekmiddel in overeenstemming met de institutionele bioveiligheidsrichtlijnen.

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Resultaten

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De succesvolle vestiging van het primaire HEEC-kweeksysteem werd bevestigd door morfologische, proliferatieve en moleculaire beoordelingen, zoals beschreven in Figuur 1. Door het combineren van gemengde enzymdigestion, erytrocytenlyse en een ROCK-remmer maakte dit protocol efficiënte isolatie en stabiele expansie van epitheelcellen uit menselijk endometriumweefsel mogelijk.

Morfologische waarnemingen toonden de essentiële rol van ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Discussie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Het opzetten van een betrouwbaar in vitro model van menselijke endometriumepitheelcellen (HEEC's) is essentieel voor het onderzoeken van endometriumbiologie en pathologie11. Hoewel er verschillende methoden zijn ontwikkeld voor HEEC-isolatie, blijven de meeste beperkt door technische complexiteit, lage efficiëntie en een beperkt uitbreidingspotentieelvan 4,5. Veel protocollen zijn ook afhankelijk ...

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Openbaarmakingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

De auteurs verklaren dat er geen belangenconflicten zijn met betrekking tot de publicatie van dit artikel.

Dankbetuigingen

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dit werk werd ondersteund door het Quzhou Science and Technology Program (nr.2024ZD046), de Guizhou Provincial Science and Technology Cooperation Foundation ZK (2025) General 023, het Bingtuan Science and Technology Program (nr.2024ZD059; Nr.2026YD026).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel
NaamBedrijfCatalogusnummerOpmerkingen
Dispase SolarbioCAS:42613-33-2Voor HEECs isolatie
Collagenase Type IMerckSKU:SCR103Voor HEECs isolatie
100 µm mesh filterSolarbio431752Voor HEECs filtratie
rabbit anti CK18abcamab133263Voor immunofluorescentiekleuring om differentiatiemarker van HEECs te controleren
rabbit anti CDH1abcamab40772Voor immunofluorescentiekleuring om differentiatiemarker van HEECs te controleren
rabbit anti VIMabcamab16700Voor immunofluorescentiekleuring om differentiatiemarker van HEECs te controleren
4% paraformaldehydesolarbioP0099Voor immunofluorescentiekleuring om differentiatiemarker van HEECs te controleren
CO2 IncubatorThermo Scientific42820906Voor celincubatie
CentrifugeEppendorf5404HN133048Celcentrifuge
100mm Cel Cultuur SchaalCorning430167Voor celcultuur
50 ml CentrifugeerbuisCorning430829Voor celcentrifugatie
1,5 ml microcentrifugebuisjesNEST081722CK01Voor celdigestie
Cel ZeefSolarbio431752Celfiltratie
Fosfaat gebufferde oplossingTecono20201033Wasoplossing
DMEMGibco8122622Component van neutralisatiemedium
Penicilline/StreptomycineThermo Scientific15140-122Antibiotica
Foetaal bovien serumGibco2556132PComponent van neutralisatiemedium
0,05% TrypsineBasalmediaK431010Voor HEECs  dissociatie
Y-27632SolarbioIY0040ROCK inhibitor
Rode Bloedcel Lysis BufferSolarbioR1010Rode bloedcel lysis
1% Triton X-100 Thermo ScientificHFH10Membraan permeabilisatie
Donkey anti-Rabbit IgGThermo ScientificA32790TRSecundaire antilichaam
DAPIThermo Scientific62248DNA kleuring
1 x PBSTSolarbioP1031Wasbuffer
Speciaal Medium voor Primaire HEECsiCelliCell-f004-002hVoor HEECs cultuur
Inverted Confocal MicroscopeZeiss LSM880Gebruikt voor het verkrijgen van immunofluorescentie beelden; uitgerust met 40x
MRC-5 cel lijniCelliCell-h146 Menselijke endometriaal adenocarcinoomcel lijn; STR geprofileerd.
Ishikawa cel lijniCelliCell-h113 Menselijke endometriaal adenocarcinoomcel lijn; STR geprofileerd.

Referenties

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gompel, A. Progesterone, progestins and the endometrium in perimenopause and in menopausal hormone therapy. Climacteric. 21 (4), 321-325 (2018).
  2. Prat, A., et al. Clinical implications of the intrinsic molecular subtypes of breast cancer. Breast. 24 (Suppl 2), S26-S35 (2015).
  3. Chen, J., Cao, D. Fertility-sparing re-treatment for endometrial cancer and atypical endometrial hyperplasia patients with progestin-resistance: A retrospective analysis of 61 cases. World J Surg Oncol. 22 (1), 169(2024).
  4. Arnold, J. T., Kaufman, D. G., Seppälä, M., Lessey, B. A. Endometrial stromal cells regulate epithelial cell growth in vitro: A new co-culture model. Hum Reprod. 16 (5), 836-845 (2001).
  5. Yokomizo, R., et al. Endometrial regeneration with endometrial epithelium: Homologous orchestration with endometrial stroma as a feeder. Stem Cell Res Ther. 12 (1), 130(2021).
  6. Liu, Z., et al. A simplified and efficient method to isolate primary human keratinocytes from adult skin tissue. J Vis Exp. (138), e57784(2018).
  7. Xie, Z., et al. Isolation and culture of primary human gingival epithelial cells using Y-27632. J Vis Exp. (177), e62978(2021).
  8. Qian, L., et al. Isolation and culture of primary human mammary epithelial cells. J Vis Exp. (207), e66638(2024).
  9. Moll, R., et al. Cytokeratins of normal epithelia and some neoplasms of the female genital tract. Lab Invest. 49 (5), 599-610 (1983).
  10. Shimoyama, Y., et al. Cadherin cell-adhesion molecules in human epithelial tissues and carcinomas. Cancer Res. 49 (8), 2128-2133 (1989).
  11. Fitzgerald, H. C., Schust, D. J., Spencer, T. E. In vitro models of the human endometrium: Evolution and application for women's health. Biol Reprod. 104 (2), 282-293 (2021).
  12. Riaz, M. A., et al. Long-term maintenance of viable human endometrial epithelial cells to analyze estrogen and progestin effects. Cells. 13 (10), 811(2024).
  13. Wen, J., Zu, T., Zhou, Q., Leng, X., Wu, X. Y-27632 simplifies the isolation procedure of human primary epidermal cells by selectively blocking focal adhesion of dermal cells. J Tissue Eng Regen Med. 12 (2), e1251-e1255 (2018).
  14. Zhu, Y., et al. Therapeutic effect of Y-27632 on tumorigenesis and cisplatin-induced peripheral sensory loss through rhoa-nf-κb. Mol Cancer Res. 17 (9), 1910-1919 (2019).
  15. Brosens, I., Brosens, J. J., Benagiano, G. The eutopic endometrium in endometriosis: Are the changes of clinical significance. Reprod Biomed Online. 24 (5), 496-502 (2012).
  16. Najar, M., et al. Proliferative and phenotypical characteristics of human adipose tissue-derived stem cells: Comparison of ficoll gradient centrifugation and red blood cell lysis buffer treatment purification methods. Cytotherapy. 16 (9), 1220-1228 (2014).
  17. Tam, W. L., Weinberg, R. A. The epigenetics of epithelial-mesenchymal plasticity in cancer. Nat Med. 19 (11), 1438-1449 (2013).
  18. Loh, C. Y., et al. The e-cadherin and n-cadherin switch in epithelial-to-mesenchymal transition: Signaling, therapeutic implications, and challenges. Cells. 8 (10), 1118(2019).
  19. Rubio, S., Cazares, O., Macias, H., Hinck, L. Generation of mosaic mammary organoids by differential trypsinization. J Vis Exp. (157), e60742(2020).
  20. Chen, S. Y., Hayashida, Y., Chen, M. Y., Xie, H. T., Tseng, S. C. A new isolation method of human limbal progenitor cells by maintaining close association with their niche cells. Tissue Eng Part C Methods. 17 (5), 537-548 (2011).
  21. Li, X., et al. Prolonged treatment with Y-27632 promotes the senescence of primary human dermal fibroblasts by increasing the expression of IGFBP-5 and transforming them into a caf-like phenotype. Aging. 12 (16), 16621-16646 (2020).
  22. Hu, R., Hilakivi-Clarke, L., Clarke, R. Molecular mechanisms of tamoxifen-associated endometrial cancer (review). Oncol Lett. 9 (4), 1495-1501 (2015).
  23. Wu, X., et al. Conditional reprogramming: Next generation cell culture. Acta Pharm Sin B. 10 (8), 1360-1381 (2020).
  24. Turco, M. Y., et al. hormone-responsive organoid cultures of human endometrium in a chemically defined medium. Nat Cell Biol. 19 (5), 568-577 (2017).

Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.

Herprints en machtigingen

Toestemming aanvragen om de tekst of afbeeldingen van dit JoVE-artikel te hergebruiken

Toestemming aanvragen

Trefwoorden

Endometrial Epithelial CellsCell IsolationPrimary Cell ExpansionFeeder Free CultureMixed Enzyme DigestionROCK InhibitorErythrocyte LysisSerial PassagingWestern BlotImmunofluorescence

Gerelateerde artikelen