Name: Muis bijnier Chromaffinecellen Cell Isolatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-01-05T00:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Leer chromaffiene cellen isoleren uit de bijnier van muizen voor onderzoek naar excitatie-secretiekoppeling. Deze methode biedt een betrouwbaar in-vitro-systeem voor neuro-endocriene studies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Afkortingen: ACC - bijnier Chromaffinecellen cellen, E. Soln - Enzyme Solution, E. DMEM - Verrijkt Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium <ol><li> Voorbereiding <ol><li> Voeg papaïne om de gewenste hoeveelheid van E. Soln (40 eenheden papaïne / 1ml E. Soln.). </li><li> Activeer papaïne met carbogen voor ongeveer 15 minuten op ijs. Zuurstof Lockes buffer op ijs ook. </li></ol></li><li> Ontleding <ol><li> Gebruik 8-10 weken muis. </li><li> Voorafgaand aan de spijsvertering te verwijderen zuurstofrijk Locke&#39;s buffer en leg ze op ijs. </li><li> Raadpleeg de video voor dissectie procedure. </li><li> Eenmaal uitgesneden, plaats klieren in zuurstofrijk Locke&#39;s buffer. </li></ol></li><li> De voorbereiding van Gland <ol><li> Verwijder vet uit klier. </li><li> Strip cortex van de klier. </li></ol></li><li> Enzymatische vertering <ol><li> Steriel filter zuurstof papaïne. </li><li> Maak vier zwembaden van zuurstofrijk papaïne op een petrischaal. <ol><li> 3 zwembaden moet ongeveer 100uls. </li><li> Een van de zwembaden moet ongeveer 400uls. </li></ol></li><li> Was medullae via zwembaden <ol><li> 1e door de 3 100ul zwembaden. </li><li> Vervolgens door de 400ul pool </li><li> Pippette 300ul E. Soln en merg stukken uit 400ul zwembad in microfugebuis. </li><li> Qrap parafilm op microfugebuis en plaats het in 37 ° C waterbad gedurende 20min. </li><li> Vergeet niet door te gaan met zuurstof resterende E. Soln met papaïne. </li><li> Na 20 minuten steriel filter meer E. Soln. </li><li> Vervang de oude E. Soln baden medullae met nieuw gefilterd E. Soln. </li></ol></li></ol></li><li> Verwrijvingen <ol><li> Zuig en gooi E. Soln. </li><li> Was medullae in 1 ml E. DMEM. </li><li> Zuig en gooi E. DMEM. </li><li> Voeg 300ul E. DMEM en vermaal 20X met 1 ml tip. </li><li> Gesneden 200ul tip met een steriele scheermesje. </li><li> Vermaal 5-10X met cut 200ul tip. </li><li> Gooi E. DMEM baden medullae stukken. Medium zal bevatten puin. </li><li> Voeg 300uls verse E. DMEM aan stukken medullae. </li><li> Vermaal met 200ul tip 20x </li><li> Pippette E. DMEM tot buis withough medullae stukken microfuge. Medium bevat gratis Accs. </li><li> Voeg 300uls verse E. DMEM aan stukken medullae. </li><li> Vermaal medullae met een 23,5 meter injectienaald 20x. </li><li> Combineer E. DMEM van beide verwrijvingen. Medullae stukken moeten niet aanwezig zijn en moet nu een featherlike uiterlijk. </li></ol></li><li> Plating <ol><li> Microfuge E. DMEM van de laatste twee tritureren stappen voor 2,5 minuten bij 3,7 g s. </li><li> Resuspendeer pellet in 50uls-200 E. DMEM, afhankelijk van de volgende experimenten. </li><li> Plaat 10-30uls op een glazen dekglaasje aan. </li><li> Wacht 15 minuten voor de cellen om zich te houden. </li><li> Voeg 750uls van E. DMEM. </li></ol></li></ol>

De auteurs hebben niets te melden.

muis bijnier chromaffinecellen cell isolatie

Mouse Adrenal Chromaffin Cell Isolation

Bijniermerg chromaffin celkweek systemen zijn uiterst nuttig voor de studie van de excitatie-secretie koppeling in een in vitro setting. Dit protocol geeft de methode die wordt gebruikt om de bijnieren ontleden en vervolgens de medullaire regio te isoleren door het strippen van weg de bijnierschors. De vertering van de medulla in enkele chroomaffiene cellen wordt dan aangetoond.

Muis bijnier Chromaffinecellen Cell Isolatie

Kweeksystemen van chromaffiene cellen uit het bijniermerg zijn uiterst nuttig voor het bestuderen van de excitatie-secretiekoppeling in een in vitro-setting. Deze ...

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates an enzyme-free protocol to isolate macrophages from mouse dorsal root ganglion (DRG) using a mechanical dissociation technique. Upon homogenization of the freshly collected DRG tissue, antibodies against the cell-surface receptors on the macrophages are used to label the cells fluorescently, followed by performing flow cytometry to confirm the presence of macrophages in the sample.

Isolation of Macrophages from Mouse Dorsal Root Ganglion Using Mechanical Dissociation

This video demonstrates a peritoneal lavage method for isolating mature connective tissue-type mast cells from the peritoneal cavity of adult mice. Upon isolating a mixture of primary immune cells from the peritoneal cavity, selective proliferation of mast cells is performed under appropriate culture conditions.

A Technique to Isolate Primary Mast Cells from a Murine Peritoneal Cavity

Een sleutel tot succesvolle onderzoek van microglia biologie is het behoud van microglia immunofunction ex vivo tijdens isolatie van CZS-weefsel. Isoleren microglia via roterende schudden resulteert in zeer zuivere en immunofunctional celculturen zoals beoordeeld door fluorescerende beeldvorming, immunocytochemie, en ELISA na microglia-activatie met de pro-inflammatoire stimuli lipopolysaccharide (LPS) en Pam 3 CSK 4 (Pam).

Isolatie van corticale Microglia met Conserven immunofenotype en functionaliteit van Muriene Pasgeborenen

-Polarisatie gebaseerde Total Internal Reflection Fluorescentie microscopie (pTIRFM) maakt real-time detectie van celmembraan dynamiek. Dit artikel beschrijft de uitvoering van pTIRFM voor de studie van membraan remodeling tijdens gereguleerde exocytose. De techniek is generaliseerbaar naar andere celbiologische processen die veranderingen in de membraan vorm direct of indirect te betrekken.

Imaging Plasma Membraan Vervormingen Met pTIRFM

Na exocytose wordt het gefuseerde plasmamembraan teruggewonnen via een proces dat bekend staat als endocytose. Dit mechanisme vormt nieuwe synaptische blaasjes voor de volgende ronde van afgifte. Individuele endocytische gebeurtenissen worden vastgelegd en geanalyseerd door middel van cel-gebonden capacitieve opnames in muisbijnierchromaffinecellen.

Methoden voor-Cell bevestigd Capaciteitsmetingen in Muis bijnier Chromaffinecellen Cell

Hier presenteren we een methode om te isoleren van de bijnieren van muizen, repareren de weefsels, sectie hen en uitvoeren immunofluorescentie kleuring.

Afzondering, fixatie en immunofluorescentie beeldvorming van muis bijnieren

Het hormoon afgescheiden door de bijnierschors is van vitaal belang voor dieren tegen stress en ziekten. Hier presenteren we een protocol bij de cultuur de primaire rat bijnier cellen. Het zou een goede in-vitro platform voor onderzoek naar de mechanismen van het reagens van belang in de bijnier steroidogenesis en lipide biosynthese.

Primaire cultuur van Rat Adrenocortical cellen en testen van Steroidogenic functies

Hier presenteren we een mechanisch dissociatie protocol om macrofagen snel te isoleren van de dorsale wortel ganglion voor fenotypering en functionele analyse.

Snelle isolatie van dorsale wortel ganglion macrofagen

Dit protocol beschrijft een confocale beeldvormingstechniek om drie fusiemodi in boviene bijnierchromaffinecellen te detecteren. Deze fusiemodi omvatten 1) close-fusion (ook wel kiss-and-run genoemd), waarbij fusieporiën worden geopend en gesloten, 2) stay-fusion, waarbij fusieporie wordt geopend en de geopende porie wordt gehandhaafd, en 3) krimpfusie, waarbij gesmolten blaasjeskrimp betrokken zijn.

Confocale microscopie om drie modi van fusieporiëndynamiek in bijnierchromaffinecellen te meten

Deze studie ontwikkelde een geoptimaliseerd protocol voor de isolatie van muizen mesangiale cellen (MC's) en hun ex vivo celcultuur. Deze cellen kunnen meerdere keren worden gepasseerd, ingevroren, nieuw leven ingeblazen en gekweekt zonder de celgroei of eiwitexpressie in gevaar te brengen.

Optimalisatie van isolatie en zuivering van muriene glomerulaire mesangiale cellen

Een robuuste en reproduceerbare methode om 2D-primaire culturen van met zona glomerulosa- en zona-fasciculata-verrijkte cellen te vestigen werd ontwikkeld voor de bijnierschors van de muis. Dit systeem behoudt belangrijke moleculaire en functionele kenmerken van elke zone, waardoor gericht onderzoek mogelijk is naar signaalroutes, hormoonproductie en bijniercorticale celgedrag ex vivo.

Vestiging van zone-verrijkte primaire culturen uit de bijnierschors van de muis

Leer chromaffiene cellen isoleren uit de bijnier van muizen voor onderzoek naar excitatie-secretiekoppeling. Deze methode biedt een betrouwbaar in-vitro-systeem voor neuro-endocriene studies.

Muis bijnier Chromaffinecellen Cell Isolatie

Meer video's verkennen