Name: Een In Vitro Test op huidirritatie (SIT) het gebruik van de EpiDerm gereconstrueerde humane epidermale (RHE) Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-07-13T21:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 16 s
Description: Leer de EpiDerm huidirritatietest uitvoeren met gereconstrueerde humane epidermis. Deze gevalideerde methode vervangt dierproeven voor cosmetica en farmaceutische producten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag naar ZEBET bij de BfR (Duitsland), BASF SE (Duitsland), IIVS Inc (USA), Zet-LSL (Oostenrijk) bedanken voor deelname aan de Multi-center International validatie studie van de Modified EpiDerm SIT (5 ).

I. Tissue conditioning - Dag 0 <ol><li> Na ontvangst van de EpiDerm EPI-200-SIT kit, controleer alle componenten van de kit voor integriteit (voor kit details zie Tabel van specifieke reagentia en apparatuur). </li><li> Voor elke drie EpiDerm weefsels, bereiden een steriele 6-well plaat voorgevuld met 0,9 ml van de voedingsbodem. </li><li> Onder steriele omstandigheden, open de plastic zak met de 24-wells plaat met de EpiDerm weefsels en verwijder het steriele gaas. </li><li> Gebruik steriele pincet om elke insert met de EpiDerm weefsel te verwijderen en van de insert in het lege 24-wells plaat plaats. Tijdens deze stap, verwijder alle resterende verzendkosten agarose dat aan de buitenkant van de insert kleeft door zachte blotting op steriel filtreerpapier. </li><li> Binnen de komende vijf minuten, visueel de weefsels. Gebruik geen defecte weefsels of weefsels die volledig bedekt zijn met vloeistof. </li><li> Met behulp van een steriel wattenstaafje wattenstaafje voorzichtig droog het oppervlak van de weefsels. Probeer niet om het weefsel direct touch - capillaire effecten voldoende zijn om het vocht te verwijderen uit het weefsel oppervlak. </li><li> Na het drogen van het weefsel oppervlak, transfer drie weefsels naar de bovenste rij van de 6-well platen voorgevuld met 0,9 ml van de voedingsbodem. Laat eventuele luchtbellen gevangen onder de inserts. </li><li> Plaats de 6-well platen met de inserts in de incubator voor een 60 ± 5 min pre-incubatie bij 37 ± 1 ° C, 5 ± 1% CO 2, 95% RV (relatieve vochtigheid). </li><li> Aan het einde van de 60 ± 5 min pre-incubatieperiode, overdracht van de inserts van de bovenste putten in de onderste putten van de 6-wells plaat. Plaats de platen in de incubator (37 ± 1 ° C, 5 ± 1% CO 2, 95% RV) voor een overnachting pre-incubatie (18 ± 3 uur). </li><li> Leg de rest van de voedingsbodem in de koelkast (5 ± 3 ° C). Na de nacht pre-incubatie, kan de test chemicaliën worden toegepast op de EpiDerm weefsels. Opmerking: De pre-incubatie procedure kan worden ingekort in geval van te late levering weefsel (bijvoorbeeld als weefsels aankomst op woensdag in plaats van dinsdag). </li></ol> II. Blootstelling aan chemische stoffen - Dag 1 <ol><li> Bereid een 6-wells plaat per teststof door het vullen van de bovenste rij alleen met 0.9 ml per putje van de voedingsbodem. </li><li> Ongeveer 5 minuten voor de geplande blootstelling aan chemicaliën, verwijder dan de 6-well platen met de pre-geconditioneerde weefsels van de incubator. </li><li> Evalueer het oppervlak van weefsels en verwijder alle vocht met behulp van steriele katoenen tips. </li><li> Label alle 6-wells plaat deksels met het testmateriaal codes of namen. </li><li> Dosis van de weefsels met de test chemicaliën op intervallen van 1 minuut te faciliteren spoelen van de test chemicaliën na blootstelling. Houd de platen met gedoseerde weefsels in de steriele kap, totdat de laatste weefsel wordt gedoseerd. </li><li> Om te testen vloeibare chemicaliën, ontheffing 30 pi van de oplossing direct boven op het weefsel en plaats de nylon mesh op de weefsels oppervlak. Indien nodig, voorzichtig de positie van de mesh met behulp van de lamp onder leiding glas Pasteur pipet. Druk niet op het weefsel oppervlak. </li><li> Voor het testen van halfvaste stoffen, gebruik van een verdringerpomp pipet tot 30 pi direct boven het weefsel afzien. Indien nodig verspreiden van de chemische met Pasteur pipet, om het weefsel oppervlak zo veel mogelijk. Dekken </li><li> Voor vaste stoffen, kort voor de toepassing van de teststof, bevochtigen het weefsel oppervlak met 25 pi van steriele DPBS. Dit zal contact van het weefsel oppervlak met de teststof. Vul een 25 mg gekalibreerd scherp toepassing lepel (of een ander geschikt instrument) met ongeveer 25 mg van fijn gemalen testmateriaal. Van toepassing zijn de vaste teststof aan het weefsel oppervlak. Indien nodig, gebruik dan een gloeilamp leiding Pasteur pipet om de lepel helemaal leeg. Schud de inserts voor de verspreiding van de vaste op het oppervlak te verbeteren. </li><li> Voor teststoffen met een wasachtige consistentie, proberen een vlakke &quot;cookie achtige&quot; vorm stuk ongeveer 8 mm in diameter en plaats het boven op het weefsel, die voorheen werd bevochtigd met een steriele DPBS. Ter verbetering van het contact tussen de teststof en weefsel, wegen op de &quot;cookie&quot; met een roestvrij stalen of kunststof hulp. </li><li> Toe te passen DPBS als de negatieve controle en 5% SDS als de positieve controle van de controle weefsels. </li><li> Na inname van de laatste weefsel, de overdracht van alle platen van 35 ± 1 minuut aan de bevochtigde incubator (37 ± 1 ° C, 5 ± 1% CO 2, 95% RH). </li><li> Na de 35 ± 1 minuut incubatie bij 37 ° C verwijder alle platen uit de couveuse. Leg de platen in de steriele motorkap en wacht tot een periode van 60 minuten blootstelling aan chemische stoffen is voltooid voor de eerste gedoseerd weefsel. </li><li> Daarna start het wassen met behulp van de een insert per minuut tijdsinterval (tot verzekeringe dat de totale belichtingstijd voor elke insert is 60 minuten). </li><li> Gebruik een wasfles naar de weefsels te spoelen met steriel DPBS. Vul het weefsel insert 15 keer met behulp van een constante stroom van DPBS en maak dit leeg. (Opmerking: voor weefsels met een nylon mesh, was het weefsel oppervlak 5 keer en verwijder voorzichtig het gaas met de puntige, scherpe tang Daarna verder met de resterende 10 wasbeurten). </li><li> Na de 15e Spoel met behulp van de wasfles, volledig onderdompelen insert 3 keer in 150 ml DPBS en schud om de rest van het testmateriaal te verwijderen. </li><li> Ten slotte, wanneer Spoel het weefsel te voegen aan de binnenkant en een keer van buiten met een steriele DPBS. </li><li> Verwijder eventuele overmaat van DPBS uit het weefsel door voorzichtig schudden van de insert, en blotting het op het steriele vloeipapier. </li><li> Breng de afgevloeid weefsel voegt aan de nieuwe 6-wells plaat eerder voorgevuld met voedingsbodem. Al deze stappen (14-18) moet worden gedaan binnen 1 minuut voor elke insert. </li><li> Na de laatste weefsel is gespoeld, zorgvuldig droog het oppervlak van elk weefsel met een steriele katoenen tip wattenstaafje. </li><li> Incubeer de weefsels in de incubator voor de komende 24 ± 2 uur (37 ± 1 ° C, 5 ± 1% CO 2, 95% RH). Opmerking: Elke assay technicus mag niet testen meer dan 6 te testen stoffen, met inbegrip van de negatieve en positieve controles in een enkele test run (set), te kunnen volgen het protocol zoals hieronder beschreven </li></ol> III. Medium wisselen - Dag 2 <ol><li> Na de 24 ± 2 uur na de incubatie, de overdracht van de inserts in het onderste deel van de 6-well plaat, vooraf gevuld met 0,9 ml van de media. Media van de bovenste rijen kunnen worden verzameld voor de analyse van de bijkomende eindpunten (cytokines, chemokines, etc.). Analyse van de secundaire eindpunten is optioneel. </li><li> Ga verder met de post-incubatie (37 ± 1 ° C, 5 ± 1% CO 2, 95% RV) voor een andere 18 ± 3 uur. </li></ol> IV. MTT Levensvatbaarheid test - Dag 3 <ol><li> Label twee 24-wells platen met de chemische namen of codes. Een plaat zal dienen voor de tissue incubatie met MTT en de andere voor de extractie stap. </li><li> Bereid de MTT-oplossing door het ontdooien van de MTT concentraat (5 mg / ml) en verdunnen met de MTT verdunningsmiddel. Uiteindelijke concentratie van MTT-oplossing is 1 mg / ml. </li><li> Pipetteer 300 ul van de MTT-oplossing in elk putje van de 24 wells plaat. </li><li> Verwijder de 6-well platen van incubator, blot de onderkant van de inserts op een vloeipapier, en breng ze in de 24-wells plaat voorgevuld met MTT. </li><li> Plaats de 24-wells plaat in de incubator (37 ± 1 ° C, 5 ± 1% CO 2, 95% RV) en incubeer gedurende 3 uur ± 5 minuten. Strikt aan de 3 uur ± 5 min incubatie tijd om afwijking tussen de verschillende MTT metingen te voorkomen. </li><li> Als de MTT incubatietijd is voltooid, gebruik dan een zuigpomp aan de MTT medium Zuig voorzichtig uit alle bronnen. </li><li> Vul de putten met DPBS en weer aspireren. Herhaal dit spoelen nog twee keer en zorg ervoor dat de weefsels droog zijn na de laatste aspiratie. </li><li> Na de overdracht wast de inserts om een ​​nieuwe 24-well plaat. Dompel de inserts door voorzichtig pipetteren 2 ml extractiemiddel oplossing (Isopropanol) in elkaar te voegen. Het niveau zal stijgen boven de bovenste randen van de voegen, dus volledig onder te dompelen de weefsels. </li><li> Sluit de 24-well plaat (bijv. met Parafilm of met behulp van afdichting zak) om extractiemiddel verdamping te remmen. Extract van de MTT van de weefsels voor minimaal 2 uur bij kamertemperatuur onder zacht schudden op een bord shaker (~ 120 rpm). &#39;S nachts extractie zonder schudden kan ook worden gebruikt. </li><li> Na de extractie periode is voltooid, doorboren de inzetstukken met een injectienaald of bol kralen Pasteur pipet en laat het extract deze in de bron waaruit het insert werd genomen. </li><li> Gooi de lekke voegen en pipet de oplossing in de put omhoog en omlaag drie keer totdat het homogeen is. </li><li> Voor elk weefsel, overdracht twee 200 pi aliquots van de paarse formazan oplossing in een 96-well microtiterplaat vlakke bodem. Breng de duplicaten op basis van de vaste plaat ontwerp gegeven in de spreadsheet bij deze video protocol. Voor blanks, gebruik isopropanol. </li><li> Lees de optische dichtheid (OD) van de MTT extracten in een 96-well plaat spectrofotometer met behulp van een golflengte van 570 nm (540-580) zonder een referentie-filter. </li><li> Voer de resultaten in de spreadsheet voor automatische berekening van de resultaten (Figuur 1). </li><li> Een test chemische stof wordt het label &quot;irriterend&quot; (R38 of GHS-categorie 2) als het percentage levensvatbaarheid van het weefsel wordt bepaald door MTT assay is &lt;50% ten opzichte van de negatieve controle. Let op: MTT giftig is, dus zorg ervoor dat beschermende handschoenen te dragen bij het ​​hanteren. Beschermen MTT en zijn zolutions van licht, omdat MTT is lichtgevoelig. Gebruik MTT-oplossing binnen een paar uur na de bereiding, omdat het na verloop van tijd. </li></ol> V. Assay Quality Controls <ul><li> EpiDerm EPI-200-kit SIT Acceptatiecriteria: In vitro RHE-modellen moeten consistente, hoogwaardige gegevens na verloop van tijd, niet alleen tijdens het validatieproces (8). Aanbevolen richtlijnen op lange termijn assay reproduceerbaarheid en prestaties te garanderen onder meer &quot;volledige karakterisering van cellen of weefsels, bemonstering van elke partij ... voor prestaties, en het regelmatig gebruik van de controles en benchmark-chemicaliën voor borging van de consistentie van de assay prestaties te leveren&quot; (9) . Naast de test acceptatiecriteria hieronder uiteengezet, elke productie heel veel EpiDerm is de kwaliteitscontrole door de fabrikant getest tegen een extra referentie chemische (1% Triton X-100). De belichtingstijd nodig is om levensvatbaarheid van het weefsel te verminderen tot 50% (ET-50) voor Triton X-100 wordt bepaald. Voor EpiDerm, hebben jaarlijks gemiddelde ET-50-waarden varieerden van 5,9 uur tot 7,5 uur. De partij tot partij CV voor negatieve controle weefsels (dwz de variabiliteit in de referentie levensvatbaarheid) is gemiddeld minder dan 7,5% voor elk jaar sinds 1996. De ET50 waarde van elke productie partij moet binnen twee standaarddeviaties van het historische gemiddelde Triton X-100 ET50 opgericht in 1996 (dat wil zeggen ET-50 = 6,7 uur; Onderste acceptatie limiet = 4.8h; bovenste acceptatie limiet = 8.7h) met het oog worden vrijgegeven voor gebruik door de fabrikant. </li><li> EPI-200-SIT-assay Acceptatie Criterium 1: Negatieve controle: De absolute OD van de negatieve controle (NC) weefsels (die behandeld worden met steriele DPBS) in de MTT-test is een indicator van de levensvatbaarheid van het weefsel verkregen in het testlaboratorium na verzending en opslag van de procedures en onder specifieke voorwaarden voor het gebruik. De test voldoet aan de aanvaarding criterium als de gemiddelde OD 570 van het NC-weefsels is ≥ 1,0 en ≤ 2,5. </li><li> EPI-200-SIT Assay Acceptatie Criterium 2: de positieve controle Een 5% SDS (in H 2 O)-oplossing wordt gebruikt als positieve controle (PC) en tegelijkertijd getest met de test chemicaliën. Gelijktijdige betekent dat de pc moet worden getest in elke test, maar niet meer dan een PC nodig per dag testen. Levensvatbaarheid van positieve controle moet worden binnen de 95%-betrouwbaarheidsinterval van de historische gegevens. De test voldoet aan de aanvaarding criterium als het gemiddelde levensvatbaarheid van PC weefsels uitgedrukt als% van de negatieve controle weefsels is 20%. </li><li> EPI-200-SIT Assay Acceptatie Criterium 3: standaardafwijking (SD) De huidirritatie is voorspeld op basis van de gemiddelde levensvatbaarheid bepaald op 3 single weefsels en dus ook de variabiliteit van weefselmonsters worden aanvaardbaar klein is. De test voldoet aan de aanvaarding criterium als de SD-berekend op basis van individuele% weefsel de levensvatbaarheid van de drie identiek behandeld repliceert is &lt;18%. </li></ul> Representatieve resultaten <div style="border:1px #000000 solid; width:100%; padding-bottom:5px;"><img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> <img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1_2.jpg" alt="Figuur 2" /> <img src="/files/ftp_upload/1366/1366fig1_3.jpg" alt="Figuur 3" /> </div> Figuur 1 De resultaten voor de zes te testen, NC en PC controle. - Een deel van de geautomatiseerde spreadsheet voor de berekening van de resultaten. Test chemicaliën die levensvatbaarheid van het weefsel onder de 50% gerelateerd aan NC verminderd worden als irriterend ingedeeld. De test is geoptimaliseerd om de resultaten die voldoende ver van de indeling cut-off (50% levensvatbaarheid) waardoor de robuustheid van de test geven. <div style="background-image:url(../index_RES_1me8j21/c1vzp1s1_strip23px.png); background-position:0 100%; background-repeat:repeat-x; height:24px; width:100%;"><div style="padding-left:26px; padding-right:4px; padding-top:4px; width:100%;"> Materialen </div></div><img src="/files/ftp_upload/1366/materialstable.jpg" alt="Materialen Lijst" />

<ol><li>Kandárová, H., Liebsch, M., Genschow, E., Gerner, I. ngrid, Traue, D., Slawik, B., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+the+EpiDerm+Test+Protocol+for+the+upcoming+ECVAM+Validation+Study+on+In+Vitro+Skin+Irritation+Tests%5BTitle%5D)+AND+%22ALTEX%22%5BJournal%5D)">Optimization of the EpiDerm Test Protocol for the upcoming ECVAM Validation Study on In Vitro Skin Irritation Tests.</a> ALTEX. 21, 107-114 (2004).</li>
<li>Kandárová, H., Liebsch, M., Gerner, I., Schmidt, E., Genschow, E., Traue, D., Spielmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol+-+Assessment+of+the+performance+of+the+optimized+test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">EpiDerm Skin Irritation Test Protocol - Assessment of the performance of the optimized test.</a> ATLA. 33, 351-367 (2005).</li>
<li>Kandárová, H., Hayden, P., Klausner, M., Kubilus, J., Kearney, P., Sheasgreen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Vitro+Skin+Irritation+Test%3A+Improving+the+Sensitivity+of+the+EpiDerm+Skin+Irritation+Test+Protocol.Accepted+for+publication%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">In Vitro Skin Irritation Test: Improving the Sensitivity of the EpiDerm Skin Irritation Test Protocol.Accepted for publication.</a> ATLA. , Forthcoming (2009).</li>
<li>Spielmann, H., Hoffmann, S., Liebsch, M., Botham, P., Fentem, J., Eskes, C., Roguet, R., Cotovi, J., Cole, T., Worth, A., Heylings, J., Jones, P., Robles, C., Kandárová, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ECVAM+International+Validation+Study+on+In+Vitro+Tests+for+Acute+Skin+Irritation%3A+Report+on+the+Validity+of+the+EPISKIN+and+EpiDerm+Assays+and+on+the+Skin+Integrity+Function+Test%5BTitle%5D)+AND+%22ATLA%22%5BJournal%5D)">The ECVAM International Validation Study on In Vitro Tests for Acute Skin Irritation: Report on the Validity of the EPISKIN and EpiDerm Assays and on the Skin Integrity Function Test.</a> ATLA. 35, 559-601 (2007).</li>
<li>Follow-up validation of the modified EpiDerm Skin Irritation Test (SIT): results of a multicentre study of twenty reference test substances. Liebsch, M., Gamer, A., Curren, R., Frank, J., Genschow, E., Tharmann, J., Remmele, M., Bauer, B., Raabe, H., Barnes, N., Hilberer, A., Wilt, N., Lornejad-Schäfer, M. R., Schäfer, C., Spiller, E., Hayden, P., Kandárová, H. 15th Congress on Alternatives to Animal Experimentation, 2008 September 19-21, Linz Austria, , (2008).</li>
<li>United Nations. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Globally+Harmonized+System+of+Classification+and+Labeling+of+Chemicals+%28GHS%29%22">Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals (GHS)</a>. , Second revised edition, UN. New York and Geneva. (2007).</li>
<li>ESAC. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Statement+on+the+Scientific+Validity+of+In-Vitro+Tests+for+Skin+Irritation+Testing%22">Statement on the Scientific Validity of In-Vitro Tests for Skin Irritation Testing</a>. , ESAC. (2008).</li>
<li>Gupta, K., Rispin, A., Stitzel, K., Coecke, S., Harbell, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Issues+and+answers%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Issues and answers.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 43, 219-224 (2005).</li>
<li>Rispin, A., Stitzel, K., Harbell, J., Klausner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ensuring+quality+of+in+vitro+alternative+test+methods%3A+Current+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Regul+Toxicol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Ensuring quality of in vitro alternative test methods: Current practice.</a> Regul Toxicol Pharmacol. 45, 97-103 (2006).</li>
</ol>

De auteurs zijn werknemers van de MatTek corporation, die de reagentia en instrumenten produceert die in dit artikel worden gebruikt.

In deze video, hebben we aangetoond dat de EpiDerm Test op huidirritatie (EpiDerm SIT) ontwikkeld en gevalideerd voor in-vitro huidirritatie testen van chemische stoffen, waaronder cosmetische en farmaceutische ingrediënten. Bij het uitvoeren van deze methode, is het belangrijk om te werken in aseptische omstandigheden en strikt volgen van de gevalideerde protocol, omdat afwijking van het protocol kan leiden tot verschillende uitkomsten. Een aantal wijzigingen van de test mogelijk zijn, moet echter wijzigingen in het protocol direct worden besproken met de auteurs. De enige beperking van deze methode is een mogelijke inmenging van de teststof met de MTT eindpunt. Een gekleurde teststof of een die direct vermindert MTT (en daarmee bootst dehydrogenase activiteit van de mobiele mitochondriën) kunnen interfereren met de MTT eindpunt. Echter, deze te onderzoeken stof een probleem alleen als op het moment van de MTT test (dwz 42 uur na de teststof blootstelling) voldoende hoeveelheden van de teststof zijn nog steeds aanwezig op (of in) de weefsels. In het geval van dit onwaarschijnlijke geval, de (true) metabole MTT-reductie en de bijdrage van een gekleurde testmateriaal of (false) rechtstreekse MTT-reductie door het testmateriaal kan worden gekwantificeerd door een procedure in detail beschreven in de test Standard Operation Procedure verstrekt door MatTek Corp

een in vitro test op huidirritatie (sit) het gebruik van de epiderm gereconstrueerde humane epidermale (rhe) model

An In Vitro Skin Irritation Test (SIT) using the EpiDerm Reconstructed Human Epidermal (RHE) Model

De EpiDerm Test op huidirritatie (EpiDerm SIT) is ontwikkeld<sup&gt; (1,2,3)</sup&gt; En gevalideerd<sup&gt; (4,5)</sup&gt; Voor<em&gt; In vitro</em&gt; Huidirritatie testen van chemische stoffen, waaronder cosmetische en farmaceutische ingrediënten. De EpiDerm SIT maakt gebruik van de 3D-<em&gt; In vitro</em&gt; Gereconstrueerd humaan epidermale (RHE) model EpiDerm. De procedure beschreven in dit protocol zorgt voor discriminatie tussen irriterende stoffen van GHS-categorie 2 en niet-irriterende stoffen<sup&gt; (6)</sup&gt;. De test wordt uitgevoerd in de loop van een 4-daagse periode, bestaande uit pre-incubatie, 60 minuten blootstelling, 42 uur na incubatie en MTT assay levensvatbaarheid. Na het weefsel ontvangst en &#39;s nachts pre-incubatie (Day 0), zijn weefsels lokaal blootgesteld aan de test chemicaliën (dag 1), die kan worden vloeibare, semi-vaste stoffen, vast of wax. Drie weefsels worden gebruikt voor elke test chemische, evenals voor de positieve controle (5% aq. SDS-oplossing) en een negatieve controle (DPBS). Chemische blootstelling duurt 60 minuten, 35 minuten waarvan de weefsels worden in een incubator bewaard bij 37 ° C. De teststoffen worden vervolgens verwijderd uit het weefsel oppervlak door een uitgebreid wassen procedure. Het weefsel inserts zijn uitgewist en overgebracht naar vers medium. Na een 24 uur incubatie periode (dag 2), is het medium uitgewisseld. Het medium kan worden opgeslagen voor verdere analyse van cytokinen of andere eindpunten van belang. Na het medium te wisselen, zijn weefsel geïncubeerd voor een extra 18 uur. Aan het einde van de gehele 42h post-incubatie (dag 3), worden de weefsels omgezet in geel MTT-oplossing en geïncubeerd gedurende 3 uur. De resulterende paars-blauw formazan zout, voornamelijk gevormd door mitochondriaal metabolisme, is gewonnen voor 2 uur gebruik van isopropanol. De optische dichtheid van het gewonnen formazan wordt bepaald met behulp van een spectrofotometer. Een chemische stof wordt aangemerkt als een irriterend als de levensvatbaarheid van het weefsel ten opzichte van de negatieve controle behandelde weefsels wordt verlaagd tot onder 50%. Deze procedure kan worden gebruikt als volledige vervanging van de in vivo konijnen huidirritatie test voor identificatie van gevaren en etikettering van chemische stoffen in overeenstemming met de EU-regelgeving<sup&gt; (7)</sup&gt;.

In deze video, tonen we de EpiDerm Test op huidirritatie (EpiDerm SIT) ontwikkeld en gevalideerd voor<em&gt; In vitro</em&gt; Huidirritatie testen van chemische stoffen, waaronder cosmetische en farmaceutische ingrediënten.

Een In Vitro Test op huidirritatie (SIT) het gebruik van de EpiDerm gereconstrueerde humane epidermale (RHE) Model

De EpiDerm Skin Irritation-test (EpiDerm SIT) is ontwikkeld (1,2,3) en gevalideerd (4,5) voor in vitro huidirritatietests van chemicaliën, waaronder ...

Epiderm is een in vitro gereconstrueerd model van de menselijke epidermis, ontwikkeld door de Matt Tech Corporation en afgeleid van normale menselijke cellen. Het gevalideerde EC VM-protocol voor de Epiderm-huidirritatietest vervangt traditionele dierproeven voor producten zoals cosmetica, grondstoffen en industriële middelen die in contact komen met de menselijke huid. Deze test begint op dag nul, wanneer de huidirritatiekit en het Epiderm-weefsel in het laboratorium aankomen en vervolgens worden geconditioneerd in een assay-medium na een incubatie van een nacht.Op dag één wordt het atypische oppervlak van het epidermale weefsel gedurende één uur blootgesteld aan een vermoedelijke irriterende verbinding, waarna de irriterende stof op dag twee met een wasstap wordt verwijderd. Na een incubatie van 24 uur wordt de cultuurinsert in vers medium geplaatst en kan het oude medium worden gebruikt voor de analyse van vrijgekomen cytokinen en chemokinen. Het weefsel wordt behandeld met een verbinding die bekend staat als MTT, welke door mitochondriale reductase wordt omgezet in een donkerpaarse kleur voor maoz en zout.Het biedt een uitslag voor de cellevensvatbaarheid. Het ontbreken van een donjpaarse kleur in het monster is een indicator voor een afgenomen levensvatbaarheid. Wanneer de colorimetrische uitslag voor een testverbinding minder dan 50% van de negatieve controles bedraagt, kan de testverbinding worden geclassificeerd als een irritant.Hallo, ik ben Helena Kava van Matt Corporation. Vandaag laten we u de procedure zien voor in vitro huidirritatietests met behulp van het gereconstrueerde menselijke huidmodel epiderm. Deze procedure kan, afhankelijk van de regelgevende vereisten, worden gebruikt als volledige of gedeeltelijke vervanging van de in vivo rapid skin irritation test.Deze nieuwe in vitro procedure kan worden gebruikt voor de identificatie van gevaren en de etikettering van chemicaliën en cosmetische grondstoffen. Laten we beginnen. Epiderm is afgeleid van een kweek van menselijke epidermale keratinocyten om een driedimensionaal, meerlaags en sterk gedifferentieerd model van de menselijke epidermis te vormen.De weefsels zijn mitotisch en metabool actief, bootsen hun in vivo tegenhangers zowel structureel als biochemisch nauwgezet na, en doen dit met een gegarandeerde reproduceerbaarheid, zoals bij de menselijke epidermis. De Epiderm bestaat uit georganiseerde basale, spinose en granulaire lagen en een meerlaags stratum corneum. Dat laatste bevat intercellulaire lamellaire lipidenlagen die zijn gerangschikt in patronen die analoog zijn aan die welke in vivo worden aangetroffen.Deze weefsels worden gekweekt in serumvrij medium. Elk weefsel wordt gegroeid in een individuele celluctuurinzet. Andere configuraties zijn beschikbaar, waaronder een 96-wells high-throughput formaat.De weefselproductie duurt ongeveer drie weken om te voltooien; op een specifiek punt in dit proces wordt het weefsel naar de lucht-vloeistofinterface gebracht en wordt alle vloeistof van het apicale oppervlak van het weefsel verwijderd. Het weefsel wordt uitsluitend gevoed via het basolaterale oppervlak, dat in contact blijft met het gepatenteerde kweekmedium van MatTec. Een typische Epiderm-kit bevat 24 weefsels, elk negen millimeter in diameter in een eigen weefselkweekinsert, plus voldoende assay-medium om deze huidirritatietest uit te voeren.De 24 inserts zijn stevig geplaatst op medium-geïnfuseerde AGA rozengelei, met één weefsel in elke well van een standaard 24-well plaat; verzending vindt plaats via een overnight-koerier bij een temperatuur van 3 tot 4 °C. Voorafgaand aan het testen van chemicaliën met behulp van het EPIDERM-testsysteem moeten alle instrumenten en hulpmiddelen die in de assay worden gebruikt, worden klaargemaakt en gesteriliseerd zoals beschreven in het geschreven protocol. Een deel van de materialen, zoals wattenstaafjes, moet in steriele verpakkingen worden geleverd of worden geautoclaveerd.70% ethanol moet worden gebruikt om instrumenten zoals pincetten te steriliseren, en UV- of gammastraling moet worden gebruikt om de spoelflessen te steriliseren. Twee kritische oplossingen die in de assay worden gebruikt, moeten vooraf worden bereid: DPBS en een 5% SDS-oplossing. In gedestilleerd water zullen ongeveer twee liter steriele DPBS pH zeven in de assay worden gebruikt voor één kit die 24 epidermale weefsels bevat.Steriel DPBS dient als negatieve controle en als waslossing. 5% SDS dient te worden bereid en gebruikt als positieve controle. De huidirritatietest begint zodra de EPIDERM EPI 200 SIT-kit is ontvangen.Controleer alle componenten van de kit op integriteit en neem bij eventuele zorgen onmiddellijk contact op met de Mat Tech corporation; als alles aanwezig is, ga dan door naar de volgende stap. Om de test te starten, laat het bij de kit geleverde assay-medium op kamertemperatuur komen. Voorverwarm dit niet in de laminaire flowkap.Bereid voor elke drie epidermale weefselinserts één steriele six-wellplaat voor en pipetteer onder steriele omstandigheden 0,9 milliliters van het assaymedium in elke well. Open de plastic zak met de 24-wellplaat die de epidermale weefsels bevat onder een steriele luchtstroom. Verwijder het steriele gaas en gebruik een steriele pincet om elke insert met het epidermale weefsel voorzichtig uit te nemen.Verwijder eventuele resterende agar die aan de buitenkanten van de insert kleeft door voorzichtig te droogdeppen met steriel gaas of filterpapier. Plaats de weefsels vervolgens binnen vijf minuten in de lege steriele 24-wellplaat. Inspecteer de inserts visueel.Noteer eventuele weefseldefecten en een teveel aan vocht op het oppervlak. Gebruik geen defecte weefsels of weefsels die volledig met vloeistof zijn bedekt.Optimale weefselinzetten. Deze dienen een droog oppervlak te hebben en vrij te zijn van loslatingen, ongelijkheden of overtollige vloeistof aan het oppervlak. Droog vervolgens met een steriele wattenstaaf voorzichtig het oppervlak van de weefsels.Probeer het weefsel niet rechtstreeks aan te raken. Capillaire effecten zijn voldoende om het vocht van het oppervlak te verwijderen nadat het oppervlak is gedroogd. Breng drie weefsels over naar de bovenste rij van elke zes.Wellplaat vooraf gevuld met 0,9 milliliter assaymedium. Verwijder eventuele luchtbellen die onder de inserts vastzitten. Plaats vervolgens de zes wellplaten met de inserts gedurende één uur in de incubator.Pre-incubatie bij 37 °C. Aan het einde van de eerste pre-incubatieperiode worden de inserts uit de bovenste wells overgebracht naar de onderste wells van de six-well plaat. Plaats de platen terug in de incubator voor een pre-incubatie gedurende de nacht.Plaats de rest van het assaymedium in de koelkast. Na de overnachtse pre-incubatie kunnen de testchemicaliën worden aangebracht op de epidermale weefselinserts. Plaats alle benodigde apparatuur, oplossingen en testchemicaliën op kamertemperatuur voordat de chemische expositie-assay wordt gestart.Veeg in de steriele zuigkast alle niet-steriele flesjes met materiaal af met 70% ethanol voordat u ze in de kast plaatst. De negatieve controle steriele DPBS, de positieve controle, 5% SDS en gedestilleerd water moeten eveneens in de kast bij kamertemperatuur worden geplaatst. Zet een groot vial apart voor het afval.Bereid per chemische stof één six-wellplaat voor door alleen de bovenste rij te vullen met 0,9 milliliters assaymedium per well. Label elke plaat met het weefselnummer en de naam van de chemische stof.Ongeveer vijf minuten vóór de geplande blootstelling aan chemicaliën. Haal de zeswellplaten met de geconditioneerde weefsels uit de incubator. Beoordeel vervolgens visueel het oppervlak van de weefsels.Verwijder eventueel vocht met steriele wattenstaafjes en druk niet op het weefseloppervlak. Label tot slot de deksels van de six-wellplaat met de codes of namen van het testmateriaal. Test niet meer dan zes chemicaliën per testronde, inclusief negatieve en positieve controles, elk in drievoud.Gebruik een interval van één minuut voor de chemische applicatie en het wassen bij het hanteren van bekende testsubstantiën. Volg de instructies in het veiligheidsinformatieblad of MSDS voor gecodeerde of onbekende monsters. Volg de richtlijnen voor chemische veiligheid en gebruik een geventileerde kast.Draag handschoenen en bescherm uw ogen en gezicht; doseer de weefsels met chemicaliën in tijdsintervallen van één minuut om het spoelen van de testchemicaliën na blootstelling te vergemakkelijken. Houd de platen met de gedoseerde weefsels in de laminaire flowkast tot het laatste weefsel is gedoseerd. Gedurende de gehele procedure wordt een pipette met een bolvormige kop gebruikt om het weefsel en de testverbindingen te manipuleren. Een Bunsenbrander kan worden gebruikt om de bolvormige tip voor de vloeibare testchemicaliën te vormen.Breng 30 µL van het vloeibare testartikel direct aan op het weefsel en start onmiddellijk de timer. Plaats het nylon gaas op het oppervlak van het weefsel. Wanneer de timer één minuut bereikt, wordt de tweede vloeibare verbinding toegevoegd. Gebruik drie weefsels per testchemische stof, waarbij elke verbinding met tussenpozen van één minuut wordt toegevoegd.Gebruik voor het testen van halfvaste stoffen een positive displacement pipet om 30 µL direct op het weefsel aan te brengen. Verspreid de stof indien nodig met een Pasteurpipet zodat deze overeenkomt met de grootte van het weefsel. Bevochtig vlak voor het aanbrengen van de vaste stof het weefseloppervlak met 25 µL steriele DPBS om het contact tussen het weefseloppervlak en de teststof te verbeteren; vul vervolgens een scherpe applicatielepel van 25 mg met het fijn gemalen testmateriaal.Breng de vaste testchemische stof aan op het weefseloppervlak. Gebruik indien nodig een steriele pipetteerbol om de lepel volledig te legen. Schud de inserts voorzichtig om de verspreiding van de vaste stof op het oppervlak te verbeteren.U kunt ook de kop van de pipet gebruiken om deze af te stemmen op de grootte van het weefsel. Druk niet op het weefseloppervlak. Breng ten slotte DPBS aan als negatieve controle en 5% SDS als positieve controle op de weefselinserts, eveneens in triplikaat. Nadat het laatste weefsel is gedoseerd, worden alle platen gedurende 35 ± 1 minuten geplaatst in de bevochtigde incubator bij 37 °C.Zorg er tijdens deze incubatie voor dat alle materialen die nodig zijn voor de wasstappen in de zuurkast staan. Verwijder na de incubatie van 35 minuten alle platen uit de incubator. Plaats ze in de steriele zuurkast en wacht 60 minuten tot de chemische blootstelling voor het weefsel van de eerste dosis is voltooid.Start vervolgens met de wasprocedure. Spoel de weefsels 15 keer af met steriele DPBS. Om eventueel resterend testmateriaal te verwijderen, vult u de weefselinsert door een constante stroom DPBS op 1,5 centimeter afstand van het weefseloppervlak toe te dienen en deze vervolgens te legen.Zorg ervoor dat de DPBS-stroom niet te zwak is, anders wordt de testsubstantie niet verwijderd. Houd vast aan het tijdsinterval van één minuut voor het viermaal wassen van weefsels met een nylon gaas; was vijf keer en verwijder het gaas voorzichtig met de scherpe pincet. Ga vervolgens verder met de resterende 10 wasbeurten; spoel na de 15e beurt met de spoelfles door de insert drie keer volledig onder te dompelen in 150 milliliters DPBS en schud om de resterende testmateriaal te verwijderen.Spoel ten slotte het weefsel. Voeg één keer vanaf de binnenzijde en één keer vanaf de buitenzijde steriele DPBS toe. Verwijder overtollige DPBS van het weefsel door het insert voorzichtig te schudden en het op steriel absorptiepapier te drogen.Breng vervolgens de gedroogde weefselinserts over naar de nieuwe zeswellplaat die vooraf is gevuld met assaymedium. Onthoud opnieuw dat al deze stappen binnen een interval van één minuut moeten worden uitgevoerd om de blootstellingstijd van 60 minuten voor elk blootgesteld monster te handhaven. Nadat het laatste weefsel is gespoeld, wordt het oppervlak van elk weefsel voorzichtig gedroogd met een steriel wattenstaafje.Indien er nog sporen van de chemicaliën op het oppervlak aanwezig zijn, probeer deze dan te verwijderen met behulp van het steriele wattenstaafje. Incubeer de weefsels vervolgens gedurende de volgende 24 uur in de incubator. Noteer het starttijdstip van de incubatie op het documentatieblad van de methoden.Noteer daarnaast alle verschillende toepassingen in het documentatieblad van de methode. Bijlage bij de standaardwerkwijze verstrekt door Mat Tech Corporation voor het verplaatsen van de platen in de zuurkast. Breng de insert over naar het onderste gedeelte van de zeswells-plaat die vooraf is gevuld met 0,9 milliliter medium.Verzamel het medium uit de bovenste rij en breng dit over in een vooraf gelabelde 24-wellplaat, die vervolgens bij -20 °C wordt bewaard. De analyse van cytokinen en/of chemokinen die in het cultuurmedium zijn vrijgekomen, is een optionele stap voorafgaand aan de verdere analyse. Zet de incubatie voort voor nog 18 ± 3 uur voor de MTT-assay; label twee 24-wellplaten met de chemische namen of codes.Houd er rekening mee dat MTT toxisch is, draag daarom altijd beschermende handschoenen tijdens het werken. Bereid de MTT-oplossing door het MTT-concentraat te ontdooien en te verdunnen met het MTT-verdunningsmiddel.Bescherm tegen licht, aangezien MTT lichtgevoelig is, en gebruik de oplossing binnen twee tot drie uur. Omdat MTT na verloop van tijd degradeert, pipetteert u 300 µL MTT-medium in elke put van de 24-wells plaat. Haal nu de zes-wells platen uit de incubator.Dep de onderkant van de inserts op blottingpapier en breng ze over naar de 24-wells plaat die vooraf is gevuld met MTT. Plaats de 24-wells plaat in de incubator en incubeer gedurende drie uur. Vergeet niet de starttijd van de MTT-incubatie in het MDS te noteren; houd de incubatietijd van drie uur strikt aan om variaties in de MTT-metingen te voorkomen. Wanneer de MTT-incubatie is voltooid, gebruik dan een vacuümpomp met een gifafvalval om het MTT-medium voorzichtig uit alle wells te aspireren.Vul de wells opnieuw met DPBS en aspireer dit. Herhaal dit spoelen nog twee keer en zorg ervoor dat de weefsels droog zijn na de laatste aspiratie. Breng na het wassen de inserts over naar een nieuwe 24-wells plaat en dompel de inserts onder door voorzichtig twee milliliters extractie-oplossing in elke insert te pipetteren.Het niveau zal boven de bovenranden van de insert stijgen, waardoor de weefsels aan beide zijden volledig worden bedekt. Seal de 24-wellplaat met een heat sealer of parafilm om lekkage van het extract en verdamping te voorkomen. Noteer het starttijdstip van de extractie in het methodedocument en extraheer gedurende ten minste twee uur bij kamertemperatuur met zachte schudbewegingen op een plaatshaker. Nadat de extractieperiode is voltooid, doorprikt u de inserts met een injectienaald of een pipet met bolvormige kop en laat u het extract in de well lopen waaruit de insert was gehaald.Gooi de doorboorde inserts weg en pipetteer de oplossing in de well drie keer op en neer tot deze homogeen is. Per weefsel kan ook een plaatshaker worden gebruikt, ingesteld op 120 RPMs. Breng twee aliquots van 200 µL van de blauwe forma-oplossing over naar een 96-well vlakbodige microtiterplaat.Breng de duplicaten over volgens het vaste plaatontwerp voor blanco's dat is vermeld in de spreadsheet bij dit videoprotocol. Gebruik ISO-propanol, lees de optische dichtheid of OD af met een 96-wellplaat-spectrofotometer bij een golflengte van 570 nanometers zonder gebruik van een referentiefilter. Voer de resultaten in de spreadsheet in voor automatische berekening van de resultaten.Houd rekening met correcties als gevolg van interferentie door de teststof zoals beschreven in het bijbehorende protocol; een teststof wordt geclassificeerd als irriterend indien het percentage weefselviabiliteit gelijk is aan of lager is dan 50% na spectrofotometrische analyse, de OD 570 van de NC-weefsels groter dan of gelijk is aan 1 en kleiner dan of gelijk is aan 2,5, en de gemiddelde viabiliteit van PC-weefsels uitgedrukt als een percentage van de negatieve controleweefsels minder dan 20% is, en de SD berekend uit de individuele percentages weefselviabiliteit van drie identiek behandelde replica's minder dan 18% is. Verbindingen die celviabiliteitswaarden van minder dan 50% opleveren, kunnen worden beschouwd als irriterend.We hebben zojuist aangetoond hoe u de gevalideerde huidirritatietest van 60 minuten en 42 uur uitvoert met het gereconstrueerde menselijke huidmodel Epiderm. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om te onthouden dat het grootste deel van de test onder steriele of aseptische omstandigheden wordt uitgevoerd. Indien er behoefte is aan enige aanpassing van de methode of als u een betere uitleg nodig heeft van een van de procedurestappen, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen voor hulp en advies.Dat was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

an-vitro-skin-irritation-test-sit-using-epiderm-reconstructed-human

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In dit rapport beschrijven we de drie-dimensionale huid te reconstrueren model dat de menselijke huid nabootst in de architectuur en compositie. Melanocyt fysiologie, melanoomprogressie en het lot van dermale stamcellen zijn onderzocht met behulp van de huid te reconstrueren model. Het model is ook bruikbaar als een preklinische hulpmiddel voor drugs beoordeling.

De driedimensionale menselijke huid Reconstrueer model: een instrument om de normale huid en melanoomprogressie Study

This video describes the detailed protocol for generating in vitro 3D organotypic skin reconstructs to study melanoma progression. This skin model mimics both the architecture and multicellular complexity of organs in vivo.

Generation of Organotypic Full Skin Reconstructs: A Procedure to Establish 3D Skin Model Using Human Skin Samples

Het doel van dit protocol is om een driedimensionaal huidequivalent van volledige dikte op te bouwen, dat lijkt op natuurlijke huid. Met een speciaal geconstrueerd geautomatiseerd wondapparaat kunnen nauwkeurige en reproduceerbare wonden worden gegenereerd onder behoud van steriliteit.

Genereren van een drie-dimensionale volledige dikte huidequivalent en Automated Verwonden

We hebben een oogirritatie test die een driedimensionaal gereconstrueerd menselijk hoornvlies-achtige epitheliale (RHCE) weefsel model maakt gebruik ontwikkeld. De test is in staat onderscheid te maken tussen oculaire irriterende en bijtende stoffen (GHS-categorieën 1 en 2 gecombineerd) en degenen die geen etikettering (GHS geen categorie) vereisen.

Test op oogirritatie (EIT) voor Risico oog irriterende stoffen met gereconstrueerde humane Cornea-achtige Epithelial (RHCE) Tissue Model

Het doel van dit artikel is om een uitgebreid en gedetailleerd protocol te geven over hoe genetisch gemodificeerde humane organotypische huid te genereren uit epidermale keratinocyten en gedevitaliseerde humane dermis.

Generatie van genetisch gemodificeerde Organotypische Skin Culturen behulp gedevitaliseerde Human Dermis

We presenteren een protocol om cellen afgeleide matrices rijk aan extracellulaire matrix eiwitten te verkrijgen, met behulp van macromoleculaire Crowders (MMC). Bovendien presenteren we een protocol dat MMC in 3D organotypische co-kweek huid generatie, die kweektijd vermindert behoud looptijd construct omvat.

Verbetering van 2D- en 3D-Skin<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellen Met behulp van macromoleculaire Crowding

Dit protocol beschrijft een eenvoudige methode om driedimensionale gereconstitueerde menselijke epidermis op een reproduceerbare en robuuste manier te cultiveren. Bovendien kenmerkt het de structuur-functierelatie van het epidermale barrièremodel. De biologische reacties van de gereconstitueerde menselijke epidermis op pro-inflammatoire stimuli worden ook gepresenteerd.

Het cultiveren van een driedimensionale gereconstrueerde menselijke epidermis op grote schaal

Het doel van dit protocol is om de generatie- en volumetrische analyse van gevasculariseerde menselijke huidequivalenten te beschrijven met behulp van toegankelijke en eenvoudige technieken voor langetermijncultuur. Voor zover mogelijk wordt de reden voor stappen beschreven om onderzoekers in staat te stellen zich aan te passen op basis van hun onderzoeksbehoeften.

Generatie van zelfgeassembleerde vasculariseerde menselijke huidequivalenten

Hier presenteren we een protocol om een driedimensionaal vereenvoudigd en ongedifferentieerd huidmodel te genereren met behulp van een microgemachineerd microfluïdisch platform. Een parallelle stromingsbenadering maakt de in situ afzetting van een dermale compartiment mogelijk voor het zaaien van epitheelcellen bovenop, allemaal geregeld door spuitpompen.

Generatie van een vereenvoudigd driedimensionaal huid-op-een-chip-model in een microgemachineerd microfluïdisch platform

Hier presenteren we goedkope en eenvoudige procedures om verschillende 3D-huidmodellen te introduceren voor routineonderzoek in een celkweeklaboratorium. Onderzoekers kunnen modellen maken die zijn afgestemd op hun behoeften zonder afhankelijk te zijn van in de handel verkrijgbare modellen.

Opbouw van huidmodellen voor tal van toepassingen - van tweedimensionale (2D) monocultuur tot driedimensionale (3D) multicultuur

Het huidige protocol schetst de toepassing van organotypische weefselmodellen voor het onderzoeken van gastheer-pathogeen interacties in vitro. Concreet maakt het beschreven modelsysteem gebruik van een meerlagig oraal epitheel dat wordt blootgesteld aan micro-organismen geassocieerd met biofilms (tandplak) in de context van mondgezondheid versus ziekte.

Organotypische weefselmodelsystemen voor het onderzoeken van gastheer-pathogeen interacties in vitro

Leer de EpiDerm huidirritatietest uitvoeren met gereconstrueerde humane epidermis. Deze gevalideerde methode vervangt dierproeven voor cosmetica en farmaceutische producten.

Een In Vitro Test op huidirritatie (SIT) het gebruik van de EpiDerm gereconstrueerde humane epidermale (RHE) Model

Meer video's verkennen