Name: Bioluminescentie beeldvorming van heem oxygenase-1 opregulatie in de Gua Sha Procedure (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-28T09:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 39 s
Description: Leer bioluminescentiebeeldvorming van heem oxygenase-1 opregulatie bij muizen na Gua Sha-behandeling. Deze methode toont systemische effecten van traditionele Chinese therapieën in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

K. Wong, STC Wong worden ondersteund door de financiering van de Functionele en Molecular Imaging Center, Brigham and Women&#39;s Hospital K. Wong, STC Wong worden ondersteund door het Centrum voor Biotechnologie en Informatica, The Methodist Hospital Research Institute, Weill Cornell Medical College. KK Kwong, I. Chen, JQ Ren worden ondersteund door de financiering van de Athinoula A. Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital. Lenuta Kloetzer, Braden Kuo worden ondersteund door financiering uit het Neuroenteric Research Center, Massachusetts General Hospital De auteurs danken Drs. Q. Zeng en X. Xu van Optical Imaging Lab, Brigham and Women&#39;s Hospital voor technische hulp.

<ol><li> Vrouwelijke HO-1-luciferase transgene muizen (leeftijd van 4-6 weken) kunnen worden gekocht bij Taconic Farms, Inc Bij aankomst worden muizen geplaatst in een huisvesting van de dieren faciliteit voor ten minste 4 dagen naar de accommodatie mogelijk te maken. </li><li> Voorbereiding voor bioluminescentie beeldvorming: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Weeg iedere HO-1 muis. Dier gewicht is nodig voor het berekenen van de dosering van luciferine. </li><li> Ontharen: Gebruik een katoenen swap om haar remover Nair ® toe te passen op de buik en / of rug van het dier. Wachten op 5 tot 10 seconden. Gebruik een schone katoenen swap te vegen haar. Dip een stukje weefsel in gedestilleerd water schoon te maken de resterende haren schoon te vegen. </li><li> Plaats een niet-fluorescerende zwart papier (Strathmore Artagain ® zwart papier) op de beeldvorming platform van een IVIS 100 station om achtergrondgeluid te verminderen. </li><li> Bereid luciferine (vanaf Xenogen Corporation) oplossing bij een concentratie van 7,5 mg / ml (opgelost in steriel H 2 O). De dosering van luciferine is 65,5 mg / kg lichaamsgewicht. Zo, een 20 gram muis vereist intraperitoneale injectie van 0,175 ml luciferine oplossing. Om dit te bereiken, is een enkele injectie volume van luciferine oplossing (0.175ml) voorgeladen met een injectiespuit met een 26-gauge naald </li></ol></li><li> Gua Sha procedure: Gua Sha is slechts een keer toegepast voor het uitvoeren van de bioluminescentie imaging protocol. Omdat Gua Sha is niet pijnlijk, de muis hoeft alleen maar even verdoofd worden door isofluraan kalm te blijven. Gua Sha procedure omvat de volgende stappen: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Toe te passen olie of gedistilleerd water op de huid gebieden het doelwit van Gua Sha een paar keer tijdens de Gua Sha procedure te smeren. </li><li> Herhaaldelijk schraap het haar-vrij gebied van de achterkant van de muis in zachte maar stevige kracht met behulp van een keramische soep lepel of een plastic lepel. </li><li> Het schrapen gaat door totdat de achterkant huid wordt rood, wat een teken is van de onderhuidse bloed extravasatie, gewoonlijk bereikt binnen 2 tot 3 minuten. </li></ol></li><li> Bioluminescentie beeldvorming kan onmiddellijk of enkele uren worden gestart na Gua Sha als HO-1 opregulatie is opgebouwd langzaam over een paar uur. De procedure voor bioluminescentie beeldvorming: <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> Verdoven van de muis in een anesthesie inductie kamer gevuld met een mengsel van isofluraan (1,5%) en medische kwaliteit lucht. </li><li> Zodra de muis wordt verdoofd, beweeg de muis naar de beeldvorming kamer op de IVIS 100 optische beeldvorming station. Plaats de muis in een liggende positie (buik omhoog). De imaging kamer wordt continu doordrenkt met 1,5% van isofluraan. De imaging platform wordt verwarmd bij 37 ° C te houden de muis te warm. </li><li> Stel de beeldvorming acquisitie op &quot;medium binning&quot; en de belichting tijd om 30 seconden. Start om beelden te verwerven. Stel de machine naar de beeldvorming worden herhaald om de drie minuten, handmatig of automatisch. Na de overname van het eerste beeld, is een regio van belang (ROI) gevestigd op de buik, borst en hoofd te bedekken. Dit ROI is dan gekopieerd en geplakt om de volgende beelden met behulp van &quot;Living Image ®&quot;, software die bij de IVIS 100 station. </li><li> Intensiteit van het signaal wordt gemeten in fotonen per seconde. Markeer tijd voor de intensiteit van het signaal om de piekwaarde te bereiken en te houden op de beeldvorming van de muis voor ongeveer 5 tot 10 minuten na de piek tijd. </li><li> Wanneer de beeldvorming overname op de rugligging klaar is, draait u de muis over en leg hem in buikligging (back-up). Ga door beeldvorming het dier 5 tot 10 minuten met de ROI nu gevestigd op de rug en het hoofd gebied in het gebruik van de software &quot;Living Image ®&quot; te dekken. De keuze van de beeldvorming van de buikligging na de rugligging is arbitrair. Men kan ervoor kiezen om te beginnen met de buikligging, afhankelijk van de primaire organen van belang. Een andere optie is om het imago van de rug en naar voren gebogen posities bij verschillende experimenten. </li><li> Wanneer de beeldvorming overname op de buikligging is voltooid, schakelt u isofluraan en beweeg de muis van de beeldvorming kamer naar de inductie kamer om te herstellen. De inductie kamer is nu doordrenkt met medische lucht alleen en de muis meestal wakker in minder dan een minuut. </li><li> Sparen beeldgegevens voor post-processing. </li><li> Na de eerste Imaging studie, zijn aanvullende beeldvormende overnames uitgevoerd gedurende enkele dagen na de Gua Sha. Een monster schema wordt herhaald beeldvorming op de 12 e uur, 24 ste uur, 36 e uur, 48 ste uur, 72 e en 120 e uur uur, maar de exacte timing van de imaging schema is flexibel. Bijkomende beeldvorming sessies kunnen worden toegevoegd indien een langere follow-up nodig is. Voor de beeldvorming, herhaal dan de haren te verwijderen procedure als het haar weer gegroeid. </li></ol></li><li> Voor de controle groep, alles herhalen, maar de procedure over te slaan Gua Sha (stap 3). Als dezelfde groep muizen wordt gebruikt voor zowel controle en Gua Sha, de controle experiment dient te worden uitgevoerd bij voorkeur vóór de Gua sha procedure of ten minste een maand erna. </li></ol> Representatieve resultaten: De bioluminescentie afbeeldingen in figuur 1 show in vivo opregulatie van HO-1 in reactie op Gua Sha. De grafiek in Figuur 2 toont de kwantitatieve tijdelijke verandering meer dan 120 uur in optische flux (fotonen / sec) van het hele lichaam van dezelfde muis met betrekking tot Gua Sha ... <img src="/files/ftp_upload/1385/figure1tmb.jpg" alt="figuur 1" border="0" /> Figuur 1. Van links naar rechts, representatief beeld van het vooraanzicht (rug) van dezelfde muis voor Gua Sha, om 18 uur, 36 uur en 120 uur na de Gua Sha, respectievelijk. Na Gua Sha, een observeert de voortgang van de aanzienlijke toename van de intensiteit van het signaal meerdere organen welke regio&#39;s van het maagdarmkanaal, de voortplantingsorganen, de lever, de nieren (aan de achterkant te bekijken, niet afgebeeld), en anderen omvatten. Gelieve <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure1.jpg">Klik hier</a> voor een grotere versie van figuur 1. <img src="/files/ftp_upload/1385/figure2tmb.jpg" alt="figuur 2" border="0" /> Figuur 2. Kwantitatieve verandering van de flux (fotonen / sec) van het hele lichaam gevolgd meer dan 120 uur na Gua Sha in dezelfde muis van Figuur 1. Gelieve <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1385/figure2.jpg">Klik hier</a> voor een grotere versie van figuur 2 te zien.

<ol><li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selection+of+potential+therapeutics+based+on+in+vivo+spatiotemporal+transcription+patterns+of+heme+oxygenase-1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Selection of potential therapeutics based on in vivo spatiotemporal transcription patterns of heme oxygenase-1.</a> J Mol Med. 80, 655-6564 (2002).</li>
<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+in+vivo+functional+analysis+of+transgenes+in+mice+using+whole+body+imaging+of+luciferase+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Rapid in vivo functional analysis of transgenes in mice using whole body imaging of luciferase expression.</a> Transgenic Res. 10, 423-434 (2001).</li>
<li>Contag, C. H., Stevenson, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+patterns+of+heme+oxygenase-1+transcription%5BTitle%5D)+AND+%22J+Perinatol%22%5BJournal%5D)">In vivo patterns of heme oxygenase-1 transcription.</a> J Perinatol. 21, Suppl 1. 119-1124 (2001).</li>
<li>Nielsen, A., Knoblauch, N. T., Dobos, G. J., Michalsen, A., Kaptchuk, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+Gua+Sha+treatment+on+the+microcirculation+of+surface+tissue%3A+a+pilot+study+in+healthy+subjects%5BTitle%5D)+AND+%22Explore+%28NY%29%22%5BJournal%5D)">The effect of Gua Sha treatment on the microcirculation of surface tissue: a pilot study in healthy subjects.</a> Explore (NY). 3, 456-466 (2007).</li>
<li>Schwickert, M. E., Saha, F. J., Braun, M., Dobos, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gua+Sha+for+migraine+in+inpatient+withdrawal+therapy+of+headache+due+to+medication+overuse%5BTitle%5D)+AND+%22Forsch+Komplementmed%22%5BJournal%5D)">Gua Sha for migraine in inpatient withdrawal therapy of headache due to medication overuse.</a> Forsch Komplementmed. 14, 297-300 (2007).</li>
<li>Tsai, P. S., Lee, P. H., Wang, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Demographics%2C+training%2C+and+practice+patterns+of+practitioners+of+folk+medicine+in+Taiwan%3A+a+survey+of+the+Taipei+metropolitan+area%5BTitle%5D)+AND+%22J+Altern+Complement+Med%22%5BJournal%5D)">Demographics, training, and practice patterns of practitioners of folk medicine in Taiwan: a survey of the Taipei metropolitan area.</a> J Altern Complement Med. 14, 1243-1248 (2008).</li>
<li>Nielsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gua+sha+research+and+the+language+of+integrative+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bodyw+Mov+Ther%22%5BJournal%5D)">Gua sha research and the language of integrative medicine.</a> J Bodyw Mov Ther. 13, 63-72 (2009).</li>
<li>Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+gene+expression+in+living+mammals+using+a+bioluminescent+reporter%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem+Photobiol%22%5BJournal%5D)">Visualizing gene expression in living mammals using a bioluminescent reporter.</a> Photochem Photobiol. 66, 523-531 (1997).</li>
<li>Cui, K., Xu, X., Zhao, H., Wong, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+study+of+factors+affecting+in+vivo+bioluminescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Luminescence%22%5BJournal%5D)">A quantitative study of factors affecting in vivo bioluminescence imaging.</a> Luminescence. 23, 292-295 (2008).</li>
<li>Shibahara, S., Yoshida, T., Kikuchi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanism+of+increase+of+heme+oxygenase+activity+induced+by+hemin+in+cultured+pig+alveolar+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Biochem+Biophys%22%5BJournal%5D)">Mechanism of increase of heme oxygenase activity induced by hemin in cultured pig alveolar macrophages.</a> Arch Biochem Biophys. 197, 607-617 (1979).</li>
<li>Lee, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-inducible+factor-1+mediates+transcriptional+activation+of+the+heme+oxygenase-1+gene+in+response+to+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-inducible factor-1 mediates transcriptional activation of the heme oxygenase-1 gene in response to hypoxia.</a> J Biol Chem. 272, 5375-5381 (1997).</li>
<li>Maines, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heme+oxygenase+system%3A+a+regulator+of+second+messenger+gases%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Pharmacol+Toxicol%22%5BJournal%5D)">The heme oxygenase system: a regulator of second messenger gases.</a> Annu Rev Pharmacol Toxicol. 37, 517-554 (1997).</li>
<li>Wunder, C., Potter, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heme+oxygenase+system%3A+its+role+in+liver+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Drug+Targets+Cardiovasc+Haematol+Disord%22%5BJournal%5D)">The heme oxygenase system: its role in liver inflammation.</a> Curr Drug Targets Cardiovasc Haematol Disord. 3, 199-208 (2003).</li>
<li>Hoekstra, K. A., Godin, D. V., Cheng, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+of+heme+oxygenase+in+the+blood+vessel+wall+during+atherogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Protective role of heme oxygenase in the blood vessel wall during atherogenesis.</a> Biochem Cell Biol. 82, 351-359 (2004).</li>
<li>Yang, N. C., Lu, L. H., Kao, Y. H., Chau, L. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1+attenuates+interleukin-1beta-induced+nitric+oxide+synthase+expression+in+vascular+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomed+Sci%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1 attenuates interleukin-1beta-induced nitric oxide synthase expression in vascular smooth muscle cells.</a> J Biomed Sci. 11, 799-809 (2004).</li>
<li>Morse, D., Choi, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heme+oxygenase-1%3A+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Heme oxygenase-1: from bench to bedside.</a> Am J Respir Crit Care Med. 172, 660-670 (2005).</li>
<li>Ryter, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+functions+of+heme+oxygenase-1+and+carbon+monoxide+in+the+respiratory+system%5BTitle%5D)+AND+%22Antioxid+Redox+Signal%22%5BJournal%5D)">Protective functions of heme oxygenase-1 and carbon monoxide in the respiratory system.</a> Antioxid Redox Signal. 9, 2157-2173 (2007).</li>
<li>Wilson, K., Yu, J., Lee, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+and+in+vivo+bioluminescence+reporter+gene+imaging+of+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">In vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
<li>Calabrese, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitagenes%2C+dietary+antioxidants+and+neuroprotection+in+neurodegenerative+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Biosci%22%5BJournal%5D)">Vitagenes, dietary antioxidants and neuroprotection in neurodegenerative diseases.</a> Front Biosci. 14, 376-397 (2009).</li>
<li>Contag, P. R., Olomu, I. N., Stevenson, D. K., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescent+indicators+in+living+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescent indicators in living mammals.</a> Nat Med. 4, 245-247 (1998).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

Transcriptie van HO-1, een induceerbare vorm van heem oxygenase, wordt opgereguleerd door vele factoren, waaronder heem, waterstof peroxide, UV-straling, hypoxie, en lichamelijke spanningen. Het gehele lichaam, zoals de gerapporteerde HO-1 bioluminescentie-protocol zorgt voor een snelle momentopname van systemische HO-1 expressie in meerdere organen. In kleine dieren, bioluminescentie imaging maakt het mogelijk hoge gevoeligheid in-vivo real-time kwantitatieve longitudinale optische beoordeling van veranderingen in de s...

<table><tbody><tr><td>Luciferine</td><td>Caliper Life Sciences</td><td>P/N 122796</td><td>Voorheen Xenogen</td></tr><tr><td>IVIS 100</td><td>Caliper Life Sciences</td><td></td><td>Voorheen Xenogen</td></tr></tbody></table>

bioluminescentie beeldvorming van heem oxygenase-1 opregulatie in de gua sha procedure

Bioluminescence Imaging of Heme Oxygenase-1 Upregulation in the Gua Sha Procedure

Gua Sha is een traditionele Chinese folk therapie die de huid heeft schrapen om onderhuidse microvasculaire bloed extravasatie en blauwe plekken veroorzaken. Het protocol voor bioluminescente optische beeldvorming van HO-1-<em&gt; Luciferase</em&gt; Transgene muizen die in dit handschrift geeft een snelle<em&gt; In vivo</em&gt; Test van de opregulatie van het heem oxygenase-1 (HO-1) genexpressie in reactie op de Gua Sha procedure. HO-1 is al lang bekend dat cytoprotection te bieden tegen oxidatieve stress. De opregulatie van HO-1, beoordeeld door de bioluminescentie output, wordt gedacht aan een anti-oxidatieve reactie op circulerende hemoglobine producten vrijgegeven door Gua Sha vertegenwoordigen. Gua Sha werd toegediend door herhaalde slagen van een gladde lepel voorsprong op gesmeerd huid op de rug of andere gerichte lichaamsdeel van de transgene muis tot petechiën (splinterbloedingen) of bloeduitstortingen (blauwe plekken) indicatie van de extravasatie van bloed van subcutane haarvaten waargenomen. Na Gua Sha, werden bioluminescentie beeldvorming sessies dagelijks uitgevoerd gedurende enkele dagen aan de dynamiek van HO-1 expressie te volgen in meerdere interne organen.

Gua Sha, de traditionele Chinese therapeutische huid schrapen, veroorzaakt onderhuidse microvasculaire bloed extravasatie. Wij rapporteren een protocol van bioluminescentie beeldvorming van HO-1-<em&gt; Luciferase</em&gt; Transgene muizen aan te tonen dat Gua Sha heem upregulates oxygenase-1 (HO-1) in meerdere organen.

Bioluminescentie beeldvorming van heem oxygenase-1 opregulatie in de Gua Sha Procedure

Gua Sha is een traditionele Chinese volksgeneeskundige therapie waarbij gebruik wordt gemaakt van huidschrapen om subcutane microvasculaire bloedextravasatie en blauwe plekken te veroorzaken. Het protocol ...

Hallo, ik ben Jeffrey Young van de afdeling Neuroradiologie van de afdeling Radiologie van het Brigham Women's Hospital, een opleidingsziekenhuis van de Harvard Medical School. Hallo, ik ben Brad Quo. Ik kom van de gastro-intestinale unit en de afdeling Geneeskunde, evenals het Martino Center for Radiology aan het Massachusetts General Hospital.Vandaag tonen we u een procedure voor bioluminescentie-imaging van de regulatie van heemoxygenase-1 in een levend muismodel. We gebruiken deze techniek in ons laboratorium om de systemische upregulatie van heemoxygenase-1 te bestuderen met een procedure genaamd guasha, een traditionele Chinese geneeskundige techniek waarbij de huid wordt geschraapt.Laten we beginnen. Vrouwelijke HO1-luciferase transgene muizen worden gewogen voordat ze worden geanestheseerd, zodat de juiste dosis Lucifer later kan worden berekend voordat de ontharing begint. Bevestig dat de muizen volledig geanestheseerd zijn door het ontbreken van een kuitreflex.Gebruik vervolgens een wattenstaafje om een haarverwijderingslotion aan te brengen op de rug van het dier. Wacht vijf tot 10 seconden en gebruik daarna een schoon wattenstaafje om de haren weg te vegen. Doop vervolgens een stukje tissue in gedestilleerd water en gebruik de tissue om de resterende haren weg te vegen. Breng tijdens de procedure een aantal keren gedestilleerd water aan om de huidgebieden die door gua worden getarget te smeren.Schraap de haarloze regio op de rug van de muis voorzichtig maar stevig met een plastic lepel. Ga door met schrapen tot de huid op de rug rood wordt, wat een teken is van subcutane bloedextravasatie. Dit wordt gewoonlijk binnen twee tot drie minuten bereikt.Plaats de muizen in de inductiekamer terwijl u de Lucifer-oplossing bereidt, wat in de volgende sectie zal worden getoond. Bereid een Lucifer-oplossing van 7,5 mg/mL door de Lucifer op te lossen in steriel water. De dosis Lucifer is 65,5 mg/kg lichaamsgewicht.Vul een spuit met een naald van 26 gauge vooraf met een enkel aliquot dat de volledige dosis Lucifer-oplossing bevat. Injecteer de naald snel in de buikholte van de muis en dien de volledige dosis toe in één enkele injectie. Plaats een stuk niet-fluorescerend zwart papier op de imaging van een IVIS 100-station.Om achtergrondruis tijdens de beeldvorming te verminderen. Om te beginnen met de beeldvorming, brengt u de muis over naar de beeldvormingskamer op het IVUS 100 optische beeldvormingsstation. De beeldvormingskamer wordt continu geïnfuseerd met 1,5% isofluraan om de muis onder narcose te houden; positioneer de muis in rugligging.Abdomen omhoog. Stel de beeldacquisitie in op medium binning en de belichtingstijd op 30 seconden. Stel het apparaat zo in dat de beeldacquisitie elke drie minuten wordt herhaald, dit kan handmatig of automatisch.Start met het verkrijgen van beelden na de acquisitie van het eerste beeld. Teken een region of interest (ROI) die de buik-, borst- en hoofdgebieden beslaat. Kopieer vervolgens deze ROI en plak deze in de daaropvolgende beelden.Met behulp van de living image-software wordt de signaalintensiteit gemeten in fotonen per seconde. Noteer de tijd die het signaal nodig heeft om zijn piekwaarde te bereiken en ga door met het imagen van de muis gedurende ongeveer vijf tot 10 minuten. Nadat de piektijd is bereikt en de beeldacquisitie in rugligging is voltooid, wordt de muis omgedraaid en in buikligging geplaatst.Ga nu een stap terug en teken de ROI zodanig dat deze de rug- en hoofgebieden beslaat. Nadat het eerste beeld is verkregen, gaat u het dier nog vijf tot 10 minuten lang beelden. Wanneer de beeldacquisitie in buikligging is voltooid, schakelt u de isoflooraanvoer uit.Verplaats de muis van de beeldvormingskamer naar de inductiekamer voor herstel. De inductiekamer wordt nu enkel gevuld met medische lucht en de muis zou binnen één minuut moeten ontwaken.Sla de beeldata op voor post-processing. Na de initiële beeldvorming wordt gedurende enkele dagen na de gua-procedure aanvullende beeldvorming uitgevoerd. Herhaal vóór de beeldvorming de procedure voor het verwijderen van de haren op de rug van de muizen.Indien het haar in vivo is teruggegroeid, wordt een upregulatie van HO1 waargenomen als reactie op gu sha. Het vooraanzicht van dezelfde muis wordt getoond vóór gu sha en respectievelijk 18 uur, 36 uur en 120 uur na gu sha, van links naar rechts. Zoals te zien is, neemt de intensiteit van het bioluminescentiesignaal in meerdere organen progressief toe na gu sha.Deze grafiek toont de kwantitatieve temporele verandering over 120 uur in de optische flux van het gehele lichaam van dezelfde muis. Als reactie op de guha-procedure heeft u zojuist gezien hoe de in vivo upregulatie van heemoxygenase-1 kan worden gevisualiseerd met bioluminescentie-imaging. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om het te beelden gebied schoon te houden, om interferentie door stof en haar te voorkomen.Zorgvuldige controle van de belichting. Er is tijd nodig om verzadiging in de beelden te voorkomen. Dat is alles.Hartelijk dank voor het kijken en veel succes met uw experimenten.

bioluminescence-imaging-heme-oxygenase-1-upregulation-gua-sha

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Bioluminescentie beeldvorming van hypoxie induceerbare factor-1α-activiteit wordt toegepast op intracraniale tumor hypoxie ontwikkeling in een borstkanker hersenmetastasen muismodel te controleren.

In vivo bioluminescentie van Tumor Hypoxie Dynamiek van Borstkanker hersenmetastasen in een muismodel

NADPH oxidase is de belangrijkste bron van reactieve zuurstof species (ROS) in fagocyten. Vanwege de vluchtigheid van ROS is moeilijk te meten en te controleren ROS levels in levende dieren. Een minimaal invasieve methode voor seriële kwantificering van ROS in levende muizen beschreven.

Bioluminescentie beeldvorming van NADPH-oxidase activiteit in verschillende diermodellen

Bioluminescent Bacteriële Imaging<em&gt; In Vivo</em

Source: Hunt, A. M. A., et al. Come to the Light Side: In Vivo Monitoring of Pseudomonas aeruginosa Biofilm Infections in Chronic Wounds in a Diabetic Hairless Murine Model. J. Vis. Exp.(2017).This video demonstrates the procedure for assessing infection clearance and healing progression in a wounded diabetic mouse using bioluminescent and microscopic images.

Bioluminescence Imaging to Track Bacterial Infection and Wound Healing in a Mouse Model

We beschrijven een niet-invasieve beeldvorming methode voor het onderscheiden van inflammatoire fasen. Systemische toediening van luminol onthult gebieden van acute ontsteking afhankelijk MPO-activiteit in neutrofielen. Daarentegen injectie lucigenine maakt visualisatie van chronische inflammatie afhankelijk Phox activiteit in macrofagen.

In vivo beeldvorming methode om acute en chronische ontsteking Onderscheid

Dit manuscript beschrijft het gebruik van genetisch-gecodeerde fluorogenic verslaggevers in een toepassing voor live-cel imaging voor de behandeling van xenobioticum-geïnduceerde oxidatieve stress. Deze experimentele aanpak biedt ongeëvenaarde Spatio resolutie, gevoeligheid en specificiteit terwijl het vermijden van veel van de tekortkomingen van conventionele methoden voor de detectie van toxicologische oxidatieve stress.

Imaging benaderingen van evaluaties van toxicologische oxidatieve Stress met behulp van genetisch-gecodeerde Fluorogenic sensoren

Dit protocol beschrijft de oprichting van een tumor-lager muismodel om te controleren van de progressie van de tumor en angiogenese in real-time door dubbele bioluminescentie beeldvorming.

Dubbele bioluminescentie beeldvorming van tumor progressie en angiogenese

Het doel van dit protocol is om voorbijgaande in vivo productie van niet-dodelijke niveaus van reactieve zuurstofsoorten (ROS) in de huid van muizen te induceren, waardoor fysiologische reacties in het weefsel verder worden bevorderd.

Stimulatie van stamcelniches en weefselregeneratie in muizenhuid door schakelbare protoporfyrine IX-afhankelijke fotogeneratie van reactieve zuurstofsoorten in situ

Bioluminescentie - licht uitgezonden door een luciferase-enzym dat een substraat met kleine moleculen oxideert, een luciferine - kan worden gebruikt om fotosensorische eiwitten te activeren, waardoor een andere dimensie wordt toegevoegd aan lichtstimulatie en de manipulatie van een veelheid aan lichtgemedieerde functies in cellen op temporele en ruimtelijke schalen mogelijk wordt.

Bioluminescente optogenetica 2.0: Bioluminescentie benutten om fotosensorische eiwitten in vitro en in vivo te activeren

We presenteren een protocol om metabole activiteiten in cellen gereguleerd door aminozuren direct te visualiseren met behulp van deuteriumoxide (zwaar water D2O) gesondeerde gestimuleerde Raman-verstrooiing (DO-SRS) microscopie, die is geïntegreerd met twee-foton excitatie fluorescentiemicroscopie (2PEF).

Bioorthogonale chemische beeldvorming van celmetabolisme gereguleerd door aromatische aminozuren

Dit protocol beschrijft een gestandaardiseerde, stapsgewijze procedure voor het uitvoeren van koper Bian-steen Gua Sha bij mensen met chronisch vermoeidheidssyndroom. De techniek omvat het aanbrengen van een koperlegeringsschraper op specifieke meridiaanbanen (Governor Vessel en Blaasmeridiaan) en aangewezen acupuncurs. Representatieve observatiegegevens vóór en na de interventie worden opgenomen om de procedurele workflow en methoden van gegevensverzameling te illustreren.

Een gestandaardiseerd koperbian-steen Gua Sha-protocol voor de behandeling van chronisch vermoeidheidssyndroom bij mensen

Leer bioluminescentiebeeldvorming van heem oxygenase-1 opregulatie bij muizen na Gua Sha-behandeling. Deze methode toont systemische effecten van traditionele Chinese therapieën in vivo.

Bioluminescentie beeldvorming van heem oxygenase-1 opregulatie in de Gua Sha Procedure

Meer video's verkennen