Name: Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-22T14:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 1 s
Description: Leer de isolatie van primordiale kiemcellen uit muizenembryo's voor reproductieve genetica en stamcelbiologie. Deze methode biedt inzichten in vruchtbaarheidsonderzoek en kankerstudies.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag de onschatbare hulp van luidt: dr. Neal Eerste en Kourtney Wilkinson voor het manuscript te bewerken; dr. Lucy Senter, dr. Brigit Willeford en Mike Basett voor hulp bij training en verzorging van dieren op de MSU ALAC geaccrediteerde muis faciliteit; Dr Dwayne Wise voor zijn hulp bij microscopie en beeld vast te leggen, Cesar Monroy, Hannah Swoope en Bobbie Huddleston voor hun hulp met een video productie MSU. Dit onderzoek werd gefinancierd door het Bureau van Institutioneel Onderzoek en het Departement van Biologische Wetenschappen aan de Mississippi State University.

Deel 1: Zwanger Mouse Laparotomie <ol><li> Met behulp van cervicale dislocatie, euthanaseren een zwangere C57BL6J vrouwelijke muis op 10,5-11,5 DPC. </li><li> Maak de buik met antimicrobiële zeep, en dan, scheer het. </li><li> Na het scheren, wassen de buik met een zoutoplossing. </li><li> Dan, droog de buik met een steriel gaasje. </li><li> Bedek de muis met een nieuwe steriele veld. </li><li> Maak een ventrale incisie met behulp van een tang en dissectie schaar. </li><li> Identificeren en te verwijderen van de gehele baarmoeder uit de buikholte. Muis embryo's zullen zichtbaar zijn in de baarmoeder. </li><li> Overdracht van de baarmoeder in een petrischaal gevuld met D-PBS, en houd het op ijs. </li><li> Met behulp van een steriele scalpel en pincet, verwijder de placenta en extra embryonale weefsels van elk embryo. </li><li> Transfer embryo's in een frisse petrischaal gevuld met D-PBS. </li><li> Meet de lengte van de muis embryo's. We vonden dat de maten verschilden op basis van de embryo's leeftijd. Bijvoorbeeld 8,5 dpc gemeten op een gemiddelde van 6 mm, 10,5 dpc gemeten op een gemiddelde van 11mm, en 12,5 DPC gemeten op een gemiddelde van 16 mm. </li><li> Verwijder vervolgens hun staart voor DNA-extractie. </li></ol> Deel 2: Gonadale Ridge Dissection Onder stereomicroscoop en Lichtbron Schott Fostec <ol><li> Plaats een papieren filter in een petrischaal. Vervolgens plaatst u de muis embryo op de top van het filter papier naar de embryo drogen en voor dissectie immobiliseren. </li><li> Met behulp van een steriel scalpel, maken een dwarse snede van de muis embryo boven de oorsprong van de navelstreng. </li><li> Onder een stereomicroscoop, met steriele fijne pincet en een steriele naald fijne plagen, dus verwijder de darmen en de lever dat de urinewegen zichtbaar is. De nieren zijn zijdelings gelegen in de buikholte, en de blaas is gelegen mediaal en caudaal in vergelijking met de nieren. Het embryo kan worden geïdentificeerd als man, omdat de gonadale richels bevinden zich aan weerszijden van de blaas. Bij de vrouw zijn de gonadale richels stevig aan de caudale laterale einde van de nieren. </li><li> Schil de gonadale kam door een naald te schuiven achter de rug. De gonadale ridge wordt verwijderd door het wegsnijden van de weefsels die dit ondersteunen. </li><li> Breng de gonadale richels om een ​​nieuwe petrischaal gevuld met verse D-PBS. Microscopisch, moeten de mannelijke gonadale nok worden gestript, groot en ovaal van vorm. In tegenstelling tot de vrouwelijke gonadale nok moet worden gezien, zijn langgerekte vorm en kleiner zijn in vergelijking met de mannelijke geslachtshormonen nok. </li></ol> Deel 3: Gonadale Ridge Spijsvertering Onder stereomicroscoop: <ol><li> Mesonephros Dissection: Haal de gonaden van de mesonephros en nok met een fijne en scherpe naald. <ul><li> Het is belangrijk om de mesonephros te verwijderen uit de gonadale nok want het is een somatische weefsel dat zal overwoekeren in het PGC afleiding proces. </li></ul></li><li> Gonadale Ridge Spijsvertering: Verzamel schone gonadale richels in een 0.5ul daling van verse D-PBS. Voeg 20 ml Collagenase / Dispase Solution (Final concentratie 1mg/ml). <ul><li> Embryo's moet individueel worden verwerkt. Elk embryo moet zijn eigen aparte en gelabeld petrischaal. </li></ul></li><li> Gonadale Ridge dribbelen: Snijd de gonadale nok in kleine stukjes met behulp van een steriele naald en steriele fijne tang nr. 4. </li><li> Incubatie: petrischalen worden overgebracht naar een incubator bij 37 ° C gedurende 15 minuten. <ul><li> De incubatietijd kan variëren tussen de weefsels. </li></ul></li><li> Pipetteren: Na 15 minuten wordt het weefsel kan gescheiden worden door pipetteren. Met behulp van getrokken glas capillair pipetten met een diameter tussen de 40 -100 mm Verdeel de stukken door en neer te pipetteren. Dit zal kleine bosjes. Breng de klompen aan 0,5 ml van een vooraf verwarmde D-PBS laten vallen voor een laatste wasbeurt. </li><li> Na het wassen, overdracht van de klompen aan eppendorf buizen. <ul><li> Niet over het weefsel bloot aan collagenase. </li><li> Maak geen enkele celsuspensie. Dit is belangrijk voor de kolonie de vorming. Als het een enkele celsuspensie, PGC's hebben de neiging om te differentiëren en te migreren. </li><li> Dit proces mag niet langer dan 20 minuten, of je cellen zal verliezen levensvatbaarheid. </li></ul></li><li> Centrifugeer bij 2000 rpm gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Na centrifugeren, verwijder het supernatans, en resuspendeer de pellet in 0,5 ml aangevuld knock-out media (Pre-verwarmd bij 37 ° C). </li></ol> Deel 4: Primordial Germinal Cellen Cultuur "Je moet snel uit te voeren de volgende stappen uit om de levensvatbaarheid van PGC's voor de isolatie en afleiding te behouden. <ol><li> 24 uur voordat dit proces moet je voor te bereiden een mitotisch geïnactiveerd MEF-CF1 feeder layer volgens het protocol van Zhang J. et al., 2008. <ul><li> Bereid je 20 gerechten voor een pregnant vrouwelijke muis (6-8 embryo's). </li><li> MEF verliezen de mogelijkheid om een ​​feeder laag zijn (de groei te bevorderen en te voorkomen dat differentiatie) na 5-6 passages. </li><li> Gebruik geen MEFs ouder is dan 48 uur. </li></ul></li><li> Onmiddellijk voorafgaand aan plating PGC's, moet de MEF medium langzaam worden verwijderd van de MEF feeder-laag. </li><li> Voeg vervolgens 0,5 ml / putje van de voorverwarmde aangevuld met knock-out medium op de MEF feeder-laag. <ul><li> MEF media bevat foetaal runderserum dat differentiatie van de PGC's induceert. </li><li> Knockout medium moet worden aangevuld met specie specifieke groeifactoren onmiddellijk voor gebruik om de activiteit van de groei factor te verzekeren. </li></ul></li><li> Met behulp van symmetrische verdeling, plaat PGC's over de MEF feeder-laag. <ul><li> Als deze stukken zijn te dicht, ze de neiging te aggregeren en maken dichte kolonies die slecht hechten of beginnen differentiëren. </li><li> Cultuur gerechten moeten worden geëtiketteerd met Embryonale Germinal cellijn naam, passage nummer en datum. </li></ul></li><li> Voorzichtig, overdracht van de cultuur gerechten in een incubator bij 37 ° C en 5% CO 2. </li><li> Monitor de cellen elke 24 uur. </li><li> Na 48 uur verwijdert 250 ml van media uit de top van de cultuur om te voorkomen dat verstoring van de kolonie bijlage. Dan, voeg 250 ml vers aangevuld met knock-out media (voorverwarmd bij 37 ° C). </li><li> Na stap 7, wacht nog 48 uur, en daarna, volledig te verwijderen alle media en vervang deze door verse aangevuld knock-out media (voorverwarmd bij 37 ° C). Doe dit om de 2 dagen voor 8-10 dagen tot de PGC kolonies te vormen. </li></ol> Deel 5: Embryonale Cellen Germinal <ol><li> Na 10 dagen van PGC isolatie, zijn embryonale germinal cel kolonies gevormd. </li><li> Embryonale germinale cellijnen worden in leven gehouden door handmatige passages elke 8-10 dagen. Ze blijven een ongedifferentieerde morfologie huidige en pluripotentie markers, zoals alkalyne fosfatase, Oct-4, SSEA-1, en SOX-2 express </li></ol> Opmerkingen <ul><li> Steriele / aseptische omstandigheden zijn essentieel in de cultuur van ruimte. </li><li> Voor de afleiding en cultuur, zijn PGC's verwerkt in een Purifier klasse II Bio veiligheid kabinet. </li><li> Incubaties worden in een vochtige 37 ° C en 5% CO 2 incubator. </li><li> Alle media en reagentia zijn voorafgaand gefilterd om te gebruiken in een 0,2 um filter, bewaard bij 4 ° C, en voorverwarmd bij 37 ° C voor gebruik. </li><li> Tijdens de dissectie stappen, moeten alle embryo's en weefsels worden bewaard op ijs. </li><li> Alle reagens kolven worden ontsmet met ethanol voor plaatsing in een kast. </li><li> Gebruik van handschoenen, laboratoriumjas, en verpleegkundige caps zijn verplicht. </li></ul> Conclusie We hebben een video die laat zien hoe te isoleren, afleiden, en de cultuur embryonale kiemcellen van gonadale bergkammen van 10,5-11,5 DPC muizenembryo's. De reproduceerbare isolatie en de lange termijn de cultuur van embryonale germinal cellijnen levert een essentiële grondslag voor de studie van de vroege embryonale ontwikkeling, genetische en epigenetische Germinal patronen, gonaden vorming, milieu-effecten van omliggende organen tijdens het ontwikkelingsproces van gametogenese in de mannelijke en vrouwelijke embryo's, en de bepaling van paden dat leidt tot kanker en onvruchtbaarheid. <img src="/files/ftp_upload/1635/1635figure1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1">

<ol><li>DeFelici, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDeFelici%2C+M+%22Cell+Biology%3A+A+laboratory+Handbook%22">Cell Biology: A laboratory Handbook</a>. 1, Second Edition, 73-85 (1998).</li>
<li>Donovan, P. J., De Miguel, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Turning+Germ+Cells+into+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Genetics+and+Development%22%5BJournal%5D)">Turning Germ Cells into Stem Cells.</a> Current Opinion in Genetics and Development. 13, 463-471 (2003).</li>
<li>Labosky, P. A., Hogan, B. L. M. Part 12: Mouse Primordial Germ Cells: isolation and in vitro culture. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aLabosky%2C+PA+%22Molecular+embryology%3A+methods+and+protocols%22">Molecular embryology: methods and protocols</a>. Sharp, P. T., Mason, I. 97, Humana Press. Totowa, NJ. (1999).</li>
<li>Mc Laren, A., Southee, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Entry+of+Mouse+Embryonic+Germ+Cells+into+Meiosis%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Entry of Mouse Embryonic Germ Cells into Meiosis.</a> Developmental Biology. 187, 107-113 (1997).</li>
<li>Yoshimizu, T., Obinata, M., Matsui, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stage-specific+tissue+and+cell+interactions+play+key+roles+in+mouse+germ+cell+specification%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Stage-specific tissue and cell interactions play key roles in mouse germ cell specification.</a> Development. 128, 481-490 (2001).</li>
<li>Zhang, J., Hhvorostov, I., Teitell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+MEFs+to+Matrigel+I%3A+Passaging+hESCs+in+the+Presence+of+MEFs%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">From MEFs to Matrigel I: Passaging hESCs in the Presence of MEFs.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

Dit onderzoek werd uitgevoerd na nazicht en Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) goedkeuring van onze mouse protocol # 08030 (de rol van reactieve zuurstof-ROS in kiemlijn ontwikkeling en tumorvorming: Holding en fokken protocol) van Mississippi State University.

Pincet nr. 14 en 15, scalpel 35 mm, dissectie schaar, chirurgische velden, antimicrobiële zeep, zoutoplossing 0,9%, gaas, schuim ijs container, scheermesje, scalpel 35 mm, fijne pincet nr. 4 en 5, fijne naald met pesten handvat, filter papieren vellen, en trok glazen pipetten.<br /<br /&gt; Uitrusting: het ontleden van stereomicroscoop, lichtbron Schott Fostec, omgekeerde microscoop, micropipet 10 en 200ul, centrifuge, bio-veiligheid kabinet.

isolatie en afleiding van muis embryonale cellen germinal

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Het vermogen van embryonale kiemcellen (EG) om te differentiëren in primordiale kiemcellen (PGC) en later in de gameten tijdens de vroege ontwikkelingsstadia is een perfect model om onze hypothese te pakken over kanker en onvruchtbaarheid. Dit protocol laat zien hoe primordiale kiemcellen van de ontwikkeling van gonaden isoleren in 10.5-11.5 dagen na coitum (DPC) muizenembryo&#39;s. Het ontwikkelen van gonadale richels van muis embryo&#39;s (C57BL6J) zijn gedissocieerd door een mechanische storing met collagenase, en afgewerkt in een muis embryo fibroblast feeder layer (MEF-CF1) die eerder mitotisch was met mitomycine C geïnactiveerd in de aanwezigheid van knock-out media en aangevuld met leukemie Inhibitor Factor (LIF), basic fibroblast groeifactor (bFGF), en Stem Cell Factor (SCF). Met behulp van deze geoptimaliseerde methoden voor PCG identificatie, isolatie, en de vestiging van de kweekomstandigheden vergunningen op lange termijn culturen van EG-cellen voor meer dan 40 dagen. De embryonale germinale cellijnen toonde embryonale fenotype en expressie van de gemeenschappelijke gebruikte markers van de pluripotente staat. Isolatie en afleiding van germinale cellen in de cultuur een middel om hun ontwikkeling te begrijpen in vitro en bieden de mogelijkheid om cumulatieve schade monitor genetische en epigenetische niveaus na blootstelling aan oxidatieve stress.

Het vermogen van embryonale kiemcellen om in primordiale kiemcellen differentiëren tijdens de vroege ontwikkelingsstadia is een perfect model om onze hypothese te pakken over kanker en onvruchtbaarheid. Dit protocol laat zien hoe primordiale kiemcellen van de ontwikkeling van gonaden isoleren in 10.5-11.5 dagen na coitum muizenembryo&#39;s.

Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal

Het vermogen van embryonale kiemcellen (EG) om te differentiëren in primordiale kiemcellen (PGC's) en later in gameten tijdens de vroege ontwikkeling...

Hallo, mijn naam is Har Moreno van het Reproductive Genetics and Stem Cell Laboratory van Mississippi State University. Hallo, mijn naam is Clara St., ook van het Reproductive Genetics and Stem Cell Laboratory van Mississippi State University. Primordiale kiemcellen of PGC's zijn de voorlopers van oöcyten en spermatogonia in respectievelijk de ovaria en de testis.In muisembryo's migreren PGC's vanuit de achterdarm en over de genitaliale richel tussen dag 8,5 en 9,5. Postume PGC's komen aan bij de genitaliale richel tussen dag 10,5 en 11,5.TAs Postum en het vormen van de gonadale riches begint in het vrouwelijke embryo. De pg cs migreren naar het laterale uiteinde van de nier om de vrouwelijke gonadale riches te vormen. Daarentegen migreren PGCs bij het mannetje naar beide zijden van de blaas.Om te beginnen: de mannelijke alrigde-kiemcellen zijn een uitstekend onderzoeksmodel om onische ontwikkelingspaden te bestuderen in de aanwezigheid van oxidatieve stress als oorzaak van onvruchtbaarheid en kanker. Laten we beginnen.Vandaag laten we u zien hoe u PV Cs kunt verzamelen en isoleren uit ontwikkelende gonadale richels van muisembryo's van 10,5 tot 11,5 dagen postum. Gonadale richels worden gedissocieerd door mechanische destructie om ze te implanteren op een fibroblastenlaag van muisembryo's. Na 10 dagen kweek onder geoptimaliseerde omstandigheden zullen embryonale kiemkolonies embryonale fenotypes vertonen. Na passages kunnen ze bovendien worden geïdentificeerd aan de hand van hun expressie van pluripotente markers.De volgende materialen zijn nodig voor deze stap van de steriele dissectie. Een pakket dat steriele velden, pincetten, scharen, scheermesjes, antimicrobiële zeep, zoutoplossingen, een Petri-schaal gevuld met PBS Pep op ijs en gaas bevat; een drachtige vijf zeven BL six vrouwelijke muis op 10,5 tot 11 dagen post-coitum, geëuthanaseerd door cervicale dislocatie. Reinig de buik met antimicrobiële zeep en scheer deze vervolgens.Was de buikholte met zoutoplossingen. Droog deze af met een steriel gaasje. Dek de muis af met een nieuw steriel veld.Maak een ventrale incisie met een pincet en een dissectieschaar. Identificeer en verwijder de gehele uterus uit de buikholte. De embryo's zullen zichtbaar zijn in de uterus.Zeer voorzichtig. Snijd door de ligamenten die nog aan de uterine hoorn vastzitten. Voltooi de dissectie door een transversale snede langs de vagina te maken.Breng de uterus over naar een Petrischaal verzegeld met GPVS en bewaar deze op ijs. Scheid de extra-embryonale weefsels van de embryo's met behulp van een steriel scalpel en een pincet.Breng de mondembryo's over naar een schone Petrischaal gevuld met DPBS. Meet de lengte van de mondembryo. We stelden vast dat de afmetingen verschilden afhankelijk van de leeftijd van het embryo.Bijvoorbeeld, 8,5 dagen na coum bedroeg de gemiddelde maat zes millimeter, 10,5 dagen na coum bedroeg de gemiddelde maat 11 millimeter en 12,5 dagen na coum bedroeg de gemiddelde maat 16 millimeter. Verwijder hun staarten via DNA-extractie. De volgende materialen zijn nodig voor de dissectie: stereomicroscoop, biologische veiligheidskabinet, PDS, steriel scalpel.Steriele fijne pincet, steriele fijne ontleednaald met handvat, petrischaal, filterpapiervellen. Plaats een filterpapier in een petrischaal en plaats vervolgens het mondembryo op het filterpapier om het embryo te drogen en te immobiliseren voor dissectie. Maak met een steriel scalpel onder een stereomicroscoop een transversale snede in het mondembryo boven de aanhechting van de navelstreng.Verwijder de darmen en de lever met een steriele fijne pincet en een steriele fijne dissectienaald, zodat het urinair systeem zichtbaar wordt. De blaas bevindt zich in het mediale vlak.Het embryo kan als mannelijk worden geïdentificeerd omdat de gonadale bruggen zich aan weerszijden van de blaas bevinden. Verwijder de rechter mannelijke gonadale richel door met steriele fijne pincetten en een steriele fijne naald het weefsel weg te snijden dat deze ondersteunt. Gebruik dezelfde procedure om de linker mannelijke genitalienrichel te verwijderen.Overbreng microscopisch beide mannelijke genitaliale richels naar een kleine Petrischaal met vers DPDS. De mannelijke gonadale richel aan de miso ne brace is zichtbaar. Onder een stereomicroscoop moeten de mannelijke gonadale richels groot en ovaal van vorm zijn.Verwijder de darmen met behulp van steriele fijne pincetten en een steriele fijne dissectienaald. De nieren bevinden zich lateraal in de buikholte en de blaas bevindt zich meer mediaal en caudaal in vergelijking met de nieren. De gonadale richel bij vrouwtjes verschilt van die bij mannetjes vanwege de morfologie en de anatomische locatie.De gonadale richels van het vrouwtje zijn stevig verbonden met het caudale laterale uiteinde van de nier. Verwijder de linker gonadale richel van het vrouwtje door met een steriele fijne pincet en een steriele fijne naald de weefsels weg te snijden die deze aan de nier bevestigen.Herhaal dezelfde procedure om de rechter vrouwelijke gonadale richel te verwijderen. Draag beide vrouwelijke genitalierichelen microscopisch over naar een kleine Petrischaal met vers PDS. U kunt de mannelijke gonadale richel zien die aan de Neso Nera is bevestigd.Deze gonadale rupten van vrouwtjes zouden een verlengde vorm moeten vertonen en kleiner moeten zijn in vergelijking met de gonadale rupten van mannetjes, waarbij gebruik wordt gemaakt van steriele, fijne en scherpe naalden. Scheid de gonadale rupten van de vrouwtjes van het mesonefros en ander somatisch weefsel met behulp van steriele, fijne en scherpe naalden. Scheid de gonadale rupten van de mannetjes van de mesonefros en andere somatische weefsels.Het is belangrijk om de meso-Neros uit de gonadale kam te verwijderen, omdat dit somatisch weefsel is dat tijdens het proces van PGC-derivatie zal overgroeien. Verzamel de gonadale kam in een druppel van 0,5 µL verse DPVS met collagenase-oplossingen. Onder een stereomicroscoop worden de gonadeweefsels met steriele, fijne en scherpe naalden in kleine stukjes gesneden.De petrischalen worden overgebracht naar een incubator bij 37 °C gedurende 15 minuten. Na 15 minuten kan het weefsel worden gedissocieerd door middel van pipetteren met uitgetrokken glazen capillaire pipetten met verschillende diameters tussen 40 en 100 µm. Breek de stukjes op door herhaaldelijk op en neer te pipetteren.Hierdoor ontstaan kleine klontjes. Deze kleine klontjes worden na het wassen gewassen in 0,5 µL DPDX. Deze worden vervolgens gedurende vijf minuten bij 2000 RPM overgebracht naar Eend-cubes.Na centrifugatie bij kamertemperatuur wordt het supernatant verwijderd en de pellet opgelost in 0,5 milliliters voorverwarmd aangevuld knockout-medium bij 37 degrees Celsius gedurende 24 hours. Voorafgaand aan dit proces dient men een mitotisch geïnactiveerde muizenebryo-fibroblasten MEF CCF1-feedellaag voor te bereiden, direct voor het uitplaten van de PGC. Het medium moet worden verwijderd uit de voorbereide MEF-feedellaag.Voeg vervolgens enkele milliliters van het aangevulde knockout-medium, dat vooraf is opgewarmd tot 37 °C, toe aan de meth-feederlaag. Onder een stereomicroscoop worden kleine hoeveelheden PT GC met een symmetrische verdeling over de meth-feederlagen geplaatst. Als deze stukjes te dicht bij elkaar liggen, hebben ze de neiging om te aggregeren en dichte kolonies te vormen die slecht hechten of beginnen te differentiëren in de kweek.De schalen moeten worden gelabeld met de naam van de embryonale kiemcellijn, het passagenummer en de datum. Plaats de kweekschalen voorzichtig in een incubator bij 37 °C en 5% CO₂. Tien dagen na isolatie kunnen de embryonale kiemcelkolonies worden geïdentificeerd op basis van hun karakteristieke morfologie. Daarnaast kunnen ze na de eerste passage worden geïdentificeerd door hun expressie van pluripotente markers zoals alkalische fosfatase, Oct4, SSEA1 en SSEA4.Vandaag laten we u zien hoe u primordiale kiemcellen (PGC's) kunt isoleren en kweken. Embryonale kiemcellen uit muizen op 10,5 en 11,5 dagen post-conceptie. De karakterisering van embryonale kiemcellen als voorlopers van gameten is essentieel voor onderzoek naar gametogenese bij fertiliteit en kanker.Bedankt voor het bekijken van onze video. Veel succes met uw experiment.

isolation-and-derivation-of-mouse-embryonic-germinal-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video demonstrates a protocol for isolating and culturing primary cerebral cortex cells from the dorsolateral telencephalon of mouse embryos.

Isolation and Culturing of Cells from Mouse Embryo Dorsolateral Telencephalons

In de afgelopen jaren de vorming van kiemcellen middels in vitro kweekmethoden is aangetoond met behulp van verschillende soorten van somatische stamcellen. Dit artikel zal visueel presenteren de differentiatie van pasgeboren muizen afgeleide stamcellen om vroeg eicel-achtige cellen.

Differentiatie van pasgeboren muis Skin afgeleide stamcellen in Germ-achtige cellen<em&gt; In vitro</em

We hebben een protocol ontwikkeld om aggregaten van muizen embryonale stamcellen te genereren die zelforganisatie, symmetrie-breking en verlenging vertonen die parallel loopt met axiale ontwikkeling. Deze techniek maakt de studie van axiale ontwikkelingsprocessen en de generatie van celtypen mogelijk die anders moeilijk uit te voeren zijn in monolaagcultuur.

Generatie Aggregaten van muis embryonale stamcellen die Toon symmetriebreking, polarisatie en Emergent Collective Gedrag<em&gt; In Vitro</em

Dit protocol geeft een werkwijze kwantitatieve eencellige voeren in situ analyse van eiwitexpressie van afstamming specificatie mouse pre-implantatie embryo bestuderen. De noodzakelijke voor het verzamelen van blastocysten procedures, whole-mount immunofluorescentie detectie van eiwitten, beeldvorming van de monsters op een confocale microscoop, en nucleaire segmentatie en beeldanalyse worden beschreven.

Kwantitatieve Analyse van eiwitexpressie aan Lineage Specificatie studie in muizenmodellen preimplantatie embryo&#39;s

Hematopoietische stamcellen en progenitorcellen (HSPC) afgeleid van gespecialiseerde (hemogenic) endotheelcellen tijdens de ontwikkeling, maar weinig bekend over het proces waarbij sommige endotheelcellen specificeren bloedvormende worden. We tonen een stroom-cytometrie-gebaseerde methode waarmee gelijktijdige isolatie van hemogenic endotheelcellen en HSPC van muizen embryonale weefsels.

Isolatie van muizen embryonale Hemogenic endotheelcellen

Het hier beschreven protocol beschrijft de inductie van een hemogenetisch programma in muis embryonale fibroblasten via overexpressie van een minimale set transcriptiefactoren. Deze technologie kan worden toegepast op het menselijk systeem om platforms te bieden voor toekomstig onderzoek naar hematopoëse, hematologische ziekten en hematopoietische stamceltransplantatie.

Herprogrammeren muis embryonale fibroblasten met transcriptiefactoren een Hemogenic Program Laten

Dit artikel beschrijft een protocol om efficiënt ontlenen en cultuur pluripotente stamcellijnen uit muis embryo's in het blastocyst stadium.

Afleiding van stamcellijnen uit muis voor inplanting embryo 's

Hier introduceren wij een nieuwe microchirurgische techniek voor de isolatie van neurale stamcellen uit de E13 muis embryo ganglionaire eminentie.

Isolatie en cultuur van muis embryonale neurale stamcellen

Hier presenteren we een eenvoudige en efficiënte methode om levende meiotische en post-meiotische kiemcellen te isoleren van volwassen muispesten. Met behulp van een lage cytotoxiciteit, violet-opgewonden DNA bindende kleurstof en fluorescentie-geactiveerde celsorde, kan men zeer verrijkte spermatogene celpopulaties isoleren voor vele downstream toepassingen.

Isolatie van Murine Spermatogenic Cellen met behulp van een Violet-Excited Cell-Permeable DNA Binding Dye

Dit artikel is bedoeld om het gebruik van parthenogenetische haploïde embryonale stamcellen aan te tonen als vervanging voor sperma voor de bouw van semi-gekloonde embryo's.

Toepassing van muis parthenogenetische haploïde embryonale stamcellen als een substituut van sperma

Dit artikel stelt een pijplijn op voor hoogwaardige eencellige en kernsuspensies van gastrulerende muizenembryo's voor sequencing van individuele cellen en kernen.

Single-cell RNA-sequencing van gemuteerde hele muizenembryo's: van de epiblast tot het einde van de gastrulatie

Leer de isolatie van primordiale kiemcellen uit muizenembryo's voor reproductieve genetica en stamcelbiologie. Deze methode biedt inzichten in vruchtbaarheidsonderzoek en kankerstudies.

Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal

Meer video's verkennen