Murine Colitis Modeling met dextraansulfaat Natrium (DSS)

Muizen krijgen 3%DSS bij libido gedurende vier dagen. Terwijl gewicht en aanwezigheid van diarree en feces in het bloed dagelijks wordt geregistreerd, wordt TSS na vier dagen vervangen door autoclaaf water. Na drie dagen water worden de muizen geëuthanaseerd en worden hun colons verwijderd.

Colons worden gemeten en gewogen. De colons worden vervolgens gevormd tot Zwitserse rollen of worstjes en onder een microscoop onderzocht. Dit videoartikel zal de oogst en verwerking van colons in een muurmodel van colitis demonstreren.

Deze procedure wordt gebruikt om colitis te bestuderen in het laboratorium van Dr. Christopher Williams van de afdeling Cancer Biology aan Vanderbilt University voordat met dextrinsulfaatnatriumbehandeling wordt begonnen. Basisgewichten worden gedurende het verloop van het experiment verkregen. Dagelijkse gewichten worden genomen nadat de muizen zijn gewogen, maak een 3% gewicht per volume, dextrinsulfaatnatriumzout oplossing, of DSS in water.

De DSS moet van een laag molecuulgewicht zijn om dit model effectief te laten zijn, maak genoeg DSS-oplossing om een waterfles te vullen voor elke kooi met muizen en filter de oplossing met een 0,45 micrometer celluloseacetaatfilter. Vervang de drinkwaterfles in de muizenkooi door een fles met 3%DSS-oplossing. Als uw instelling een geautomatiseerd watersysteem gebruikt, plaats uitsluitingstips op watertuitjes om ervoor te zorgen dat de muizen geen toegang hebben tot een andere waterbron.

Na vier dagen worden de muizen opnieuw gewogen om systemische gevolgen van colitis te kwantificeren. Gewichtsverlies is gebruikelijk bij ernstige verwondingen, maar kan niet meteen duidelijk zijn. Op dezelfde dag, dag vier, vervang de DSS-oplossing door water gedurende drie extra dagen om enige colonische epitheliale herstel mogelijk te maken.

Drie dagen later, dag zeven, worden de muizen opnieuw gewogen. De colon kan vervolgens worden geoogst van de geëuthaniseerde muizen zoals weergegeven in de volgende sectie. Om de colon te oogsten, legt u de buikzijde van de geëuthaniseerde muis bloot om onbelemmerde toegang tot de buik te garanderen.

Maak de buik volledig nat met 70%ethanol. Grijp de middenlijn van de buik met weefseltang en verhef. Zo spant u de huid op met fijne schaarpunten.

Snijd de buik open om de inhoud van de buik bloot te leggen. Verleng de incisie tot aan de punt van het xiphoïde proces op de middenlijn en verleng vervolgens langs de onderste aspect van de costale marges bilateraal. Identificeer de dunne darm cecum en colon.

Dissecteer voorzichtig de colon uit het omringende mesenterium. Snijd daarna de colon in de diepten van het bekken om vrij te maken. De distale colon van het rectum.

Zorg ervoor dat er geen slagaders of aderen worden doorsneden. Wees ook op uw hoede dat de colon gemakkelijk kan scheuren. Verwijder daarom voorzichtig de colon uit het mesenterium.

Snijd de colon af aan de Colona sequel rand om de proximale colon vrij te maken. Verwijder de colon en het totaal met behulp van een 20 gauge voedingsnaald en 10 milliliter spuit, intubeer en spoel de colon met ijskoud PBS totdat de EIT volledig vrij is van ontlasting. Het is belangrijk om de juiste oriëntatie van de colon te behouden door de distale uiteinden van de colon het dichtst bij u te houden.

Begin met het meten van de lengte van de colon met een digitale schuifmaat. Colonlengte is een andere indicator van de ernst van de verwonding. Colitis verhoogt oedeem en verkort de totale lengte van de colon.

Op dit punt kunnen de geoogste colons worden verwerkt als worstjes voor macroscopische analyse of worden gemaakt in Zwitserse rol voor histologische analyse van acute colitis. We zullen deze technieken in de volgende secties demonstreren om de colon als een worstje te verwerken. Voor macroscopische analyse van de hele colon is het belangrijk om de juiste oriëntatie van de colon te behouden. Houd daarom het distale uiteinde van de colon het dichtst bij u.

Snij twee stukken niet-absorbeerbare hechtingdraad, één ongeveer een inch lang en de andere twee inch lang. Gebruik het twee inch lange stuk hechtingdraad om het distale uiteinde van de colon zo dicht mogelijk bij de rand af te binden terwijl nog steeds een goede afdichting wordt gehandhaafd. Plaats vervolgens een 20 gauge voedingsnaald met vijf milliliter 10% gebufferde formaline fosfaat in het proximale uiteinde van de colon.

Bind het resterende stuk hechtingdraad onmiddellijk voorzichtig proximal aan de bulb van de voedingsnaald vast. Grijp nu stevig de colon bij de bulb van de voedingsnaald en infuseer voldoende hoeveelheid formaline om ervoor te zorgen dat de colon wordt uitgebreid. Trek de naald terug terwijl u de knoop in het hechtingdraad aanhaalt, waardoor de geïnfuseerde uitgebreide colon achterblijft.

Als een worstje, vul een 15 milliliter conische buis met 10% gebufferde, formaline en fosfaat, en label de buis. Plaats de colon in de buis en fixeer gedurende 24 uur. Na 24 uur giet u de formaline in een geschikte afvalcontainer en vervangt u deze door 70% ethanol gedurende nog eens 24 uur.

Colons kunnen onbeperkt worden bewaard in 70% ethanol op kamertemperatuur. Wanneer u klaar bent om de colon te analyseren, verwijdert u deze uit de conische buis. Snijd de touwtjes aan elke kant door met een scalpel, zorg ervoor dat u de colon niet beschadigt.

Onthoud dat het distale uiteinde het langste stuk touw heeft. Snijd de colon longitudinaal van het distale naar het proximale uiteinde, zodat deze een lange laag vormt. De colon kan nu worden bekeken onder een dissectiescoop.

Snij de colon longitudinaal en leg de colon als een platte laag. Het rollen van de colon vereist twee paar pincetten en een techniek met twee handen. Grijp beide laterale randen van de distale colonmarge met pincetten en rol vervolgens de colon door de pincetten draaiend en los te laten, naar de proximale rand, waardoor een spiraal met een derde dimensie of Zwitserse rol wordt gevormd.

Als de colon aan het watmanpapier kleeft, maak het papier en de colon nat met een kleine hoeveelheid PBS om de vorm te behouden. Grijp de rol stevig met pincetten en snij door met een 27 en een