Name: Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-05-02T20:17:00.000+00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Leer axonale trajecten visualiseren in het embryonale ruggenmerg van kippenembryo's met behulp van in ovo elektroporatie. Deze methode maakt gedetailleerde studies van genetisch gedefinieerde neuronale populaties mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies aan AK van de Israel Science Foundation, het Israëlische Ministerie van gezondheid, en DFG (de Duitse Research Foundation).

I. Elektroporatie Eierbehandeling <ol><li> Leg de eieren in een vochtige incubator ingesteld op 37-38 ° C, bij voorkeur een incubator met een rockende laden. </li><li> Embryo worden geëlektroporeerd na ongeveer 66 uur van de incubatietijd, wanneer zij hebben bereikt Hamburger &amp; Hamilton (HH) fase 18-20. In dit stadium het hoofd ligt in een rechte hoek ten opzichte van de romp (aandoening, de zogenaamde cervicale buiging) en een uitgebreide set van extra-embryonale bloedvaten, zoals de voorste, achterste, rechts en links vitelline aderen moet worden gezien. Dit is een optimale podium voor enhancer-afhankelijke specifieke expressie 1,3,4. Het is belangrijk om de temperatuur en vochtigheid van de incubator te controleren, om levensvatbare en gesynchroniseerd embryo&#39;s te verkrijgen. </li><li> Na 66 uur incubatie, verwijder dan de eieren van de incubator. Horizontaal plaatsen van de eieren. Wacht 5-10 minuten. Het embryo is nu gevestigd op de bovenste pool van het ei. </li></ol> Voorbereidingen <ol><li> Bereid Hank&#39;s oplossing met penicilline / streptomycine (P / S) (1:100 verdunning). </li><li> Trek de glazen capillairen (0,5 mm diameter) aan microcapillaire. </li><li> Plaats de elektroden (tungsten) in micromanipulator en sluit elektroden op de pulsgenerator (ECM 830). </li><li> Stel de pulsgenerator met de volgende parameters: spanning 30V, aantal pulsen - 3, lengte van de impuls 50 ms. </li><li> Bereid een mond pipet, een injectienaald en een tape. </li><li> Bereid een gewenste mix van DNA (2-5μg/μl) en voeg een snel groen kleurstof. </li></ol> Windowing en elektroporatie <ol><li> Met behulp van een spuit, moet u 5-6 ml van albumine uit elk ei. </li><li> Met een kleine schaar opent een ovale venster aan de bovenzijde van het ei. </li><li> Vochtig het embryo met 0,5-1ml Hank&#39;s + P / S-oplossing. </li><li> Gebruik een mond pipet, het laden van de glazen microcapillaire met DNA mengsel. </li><li> Plaats de embryo met zijn staart naar u toe. In dit stadium is het embryo&#39;s ruggenmerg duidelijk te zien. Vandaar dat er geen contrasterende technieken die nodig zijn. Het ruggenmerg is afgedicht aan beide uiteinden, de kop en de staart, maar als je microcapillaire is dun genoeg is, zul je in staat om het doorprikken een klein gaatje en dringen de neurale buis op een ondiepe hoek. Een microcapillaire van de juiste diameter moet gemakkelijk worden geladen met DNA, de buis binnen te dringen zonder het te beschadigen en laat het DNA met een gewone uitademing. </li><li> Injecteer het DNA met behulp van een pipet mond. De groene kleurstof moet zich vanaf het uiteinde van de staart tot aan de blaasjes van de zich ontwikkelende hersenen. </li><li> Plaats de elektroden in parallel aan de neurale buis, zo dicht als je kunt, zonder het aanraken van de buis zelf en pols. Op het moment van de puls, moeten de elektroden worden afgedekt met een vloeistof voor het toestaan ​​van elektrische geleidbaarheid. Meestal is het bedrag van Hank&#39;s toegevoegd aan het bedelen is voldoende. Als dat niet een druppel van Hank&#39;s net voor de puls. </li><li> Verwijder voorzichtig de elektroden en sluit het venster met een tape. Het is belangrijk om het ei volledig zegel om uitdroging te voorkomen van het embryo tijdens de volgende incubatietijd. </li><li> Leg het ei terug in de incubator. </li></ol> II. Ruggenmerg open-boek voorbereiding Onthechting van het ruggenmerg van het embryo <ol><li> Verwijder de eletroporated embryo, op E6, uit het ei en plaats deze in een petrischaal gecoat met siliconen met PBS. </li><li> Knip de membranen en rek het embryo aan zijn buikzijde met behulp van pinnen om het te houden. </li><li> Met behulp van een scherpe wolfraam microcapillaire maken een longitudinale incisie langs de dakplaat van de achterhersenen tot aan de staart. </li><li> Maak een extra twee longitudinale incisies aan beide zijden van het ruggenmerg, het losmaken van de achterwortelganglia (DRG) van het ruggenmerg. </li><li> Maak de vloerplaat van het weefsel vanaf de staart naar de achterhersenen, waardoor het ruggenmerg intact. </li><li> Snijd het ruggenmerg in een dwarsdoorsnede van de achterhersenen met behulp van fijne schaar en scheiden van het lichaam. </li></ol> Bevestiging <ol><li> Spreid de geïsoleerde ruggenmerg in een nieuwe petrischaal gecoat met siliconen met PBS, met behulp van pinnen om het te houden, uit de achterhersenen tot de staart het produceren van een flat-mount voorbereiding. </li><li> Giet de PBS uit de schotel en vervang deze met 4% paraformaldehyde in fosfaat-gebufferde zoutoplossing. </li><li> Incubeer bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. </li></ol> Immunohistochemie <ol><li> Breng de vaste ruggenmerg in een flacon met primair antilichaam in PBS. </li><li> Incubeer met zachte onrust &#39;s nachts bij 4 ° C. </li><li> Was het antilichaam X5 maal met PBS, elke wasbeurt gedurende 1 uur met zachte onrust. </li><li> Voeg secundair antilichaam en incubeer met zachte onrust &#39;s nachts bij 4 ° C. </li><li> Was het antilichaam X5 keer met PBS, elkWas gedurende 1 uur met zachte beroeringen. </li></ol> Montage open boek voor de beeldvorming <ol><li> Smeer vet of siliconen in een rechthoek op een dia en druppel PBS binnen. </li><li> Plaats het ruggenmerg uitgerekt in het midden van de rechthoek met een pincet en trek uit de vloeistof rond met een Pasteur pipet. </li><li> Plaats 1-2 druppels van de montage van media op het ruggenmerg en dek af met deksel slip. Squash is om luchtbellen te voorkomen. </li><li> Houd de dia&#39;s in het donker in 4 ° C. </li><li> Inspecteer het ruggenmerg met behulp van confocale microscopie. </li></ol>

<ol><li>Zisman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteolysis+and+membrane+capture+of+F-spondin+generates+combinatorial+guidance+cues+from+a+single+molecule%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Proteolysis and membrane capture of F-spondin generates combinatorial guidance cues from a single molecule.</a> J Cell Biol. 178 (7), 1237-1249 (2007).</li>
<li>Arakawa, T., Iwashita, M., Matsuzaki, F., Suzuki, T., Yamamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paths%2C+elongation%2C+and+projections+of+ascending+chick+embryonic+spinal+commissural+neurons+after+crossing+the+floor+plate%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Paths, elongation, and projections of ascending chick embryonic spinal commissural neurons after crossing the floor plate.</a> Brain Res. 1223, 25-33 (2008).</li>
<li>Avraham, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+control+of+axonal+guidance+and+sorting+in+dorsal+interneurons+by+the+Lim-HD+proteins+Lhx9+and+Lhx1%5BTitle%5D)+AND+%22+Neural+Dev%22%5BJournal%5D)">Transcriptional control of axonal guidance and sorting in dorsal interneurons by the Lim-HD proteins Lhx9 and Lhx1.</a> Neural Dev. 4 (1), 21(2009).</li>
<li>Timmer, J., Johnson, J., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+use+of+in+ovo+electroporation+for+the+rapid+analysis+of+neural-specific+murine+enhancers%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">The use of in ovo electroporation for the rapid analysis of neural-specific murine enhancers.</a> Genesis. 29 (3), 123-132 (2001).</li>
<li>Reeber, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manipulating+Robo+expression+in+vivo+perturbs+commissural+axon+pathfinding+in+the+chick+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Manipulating Robo expression in vivo perturbs commissural axon pathfinding in the chick spinal cord.</a> J Neurosci. 28 (35), 8698-8708 (2008).</li>
</ol>

Elektroporatie van plasmide DNA in het kippenembryo ontwikkelt zich als een krachtige techniek voor in vivo ectopische expressie. De combinatie van specifieke enhancers, en chick elektroporatie biedt een snelle en efficiënte tool voor het ontcijferen van axonale paden van een genetisch bepaalde groep neuronen 1,3,5. Gebruik makend van de Cre / loxP en de Gal4/UAS versterking systemen kunnen vergroten het niveau en de duur van meningsuiting. De opkomende beeld is van een complex divergentie van axonale signale...

ontcijfering axonale pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de chick neural tube door gebruik te maken in ovo elektroporatie

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Tewerkstelling van enhancer elementen om de expressie van reportergenen rijden in neuronen is een veel gebruikt model voor het bijhouden van axonale projectie. Voor het volgen van axonale projectie van spinale interneuronen in gewervelde dieren, kiemlijn gerichte reportergenen opbrengst bilateraal symmetrisch etikettering. Daarom is het moeilijk om onderscheid te maken tussen de ipsi-en contra-lateraal uitstekende axonen. Eenzijdige elektroporatie in het kuiken neurale buis is een nuttig middel om de expressie van een reportergen te beperken tot een kant van het centrale zenuwstelsel, en om axonale projectie te volgen aan beide zijden<sup&gt; 1 ,2-5</sup&gt;. Deze video toont eerste hoe om te gaan de eieren voorafgaand aan de injectie. Bij HH stadium 18-20, DNA wordt geïnjecteerd in de sacrale niveau van de neurale buis, dan wolfraamelektroden zijn parallel geplaatst om het embryo en korte elektrische pulsen worden toegediend met een pulsgenerator. Het ei is afgedicht met tape en teruggeplaatst in een incubator voor verdere ontwikkeling. Drie dagen later (E6) het ruggenmerg wordt verwijderd als een open boek voorbereiding van embryo&#39;s, vaste en verwerkt voor de ganse berg antilichaam kleuring. De gebrandschilderde ruggenmerg is gemonteerd op dia en gevisualiseerd met behulp van confocale microscopie.

Deze video laat zien hoe axonale paden van genetisch bepaalde groepen neuronen te visualiseren in de embryonale kuiken ruggenmerg gebruik te maken van<em&gt; In ovo</em&gt; Elektroporatie van de reportergenen onder de controle van specifieke enhancer elementen.

Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie

Het gebruik van enhancer-elementen om de expressie van reportergenen in neuronen aan te sturen, is een veelgebruikt paradigma voor het volgen van axonale projecties. Voor het volgen van...

Hallo, ik ben Ham van het laboratorium van Dr. Review Klar van de afdeling medische neurobiologie aan de Hebreeuwse Universiteit van Jeruzalem. Hallo, ik ben Sophie Esman en ik kom ook uit het laboratorium van Lars. Vandaag gaan we u een procedure laten zien voor in vivo electroporatie en de open-book preparatie van het ruggenmerg.Wij gebruiken deze procedure in ons laboratorium om axonale trajecten van genetisch gedefinieerde neuronale populaties in het embryonale ruggenmerg te bestuderen. Laten we beginnen. Om deze procedure te starten, verplaatst u bevruchte witte leghenneneieren van kamertemperatuur naar een bevochtigde incubator, bij voorkeur met schommelende trays bij 37 tot 38 °C.Het is belangrijk om de temperatuur en vochtigheid van de incubator te bewaken om levensvatbare en gesynchroniseerde embryo's te verkrijgen. De kiजemembryo's worden geëlektroporeerd wanneer ze het Hamburger-Hamilton-stadium (HH-stadium) 18 tot 20 hebben bereikt, wat een optimaal stadium is voor enhancer-afhankelijke specifieke expressie. In dit stadium staat de kop in een rechte hoek ten opzichte van de romp.Tevens moeten er bij HH-stadium 18 tot 20 een groot aantal extra-embryonale bloedvaten zichtbaar zijn, zoals de anterieure en posterieure vitellijnvaten aan de rechter- en linkerzijde. De kiजemembryo's bereiken HH-stadium 19 tot 20 na 66 uur incubatie; haal de eieren op dat moment uit de incubator. Plaats de eieren na het verwijderen horizontaal en wacht vijf tot 10 minuten. Het embryo bevindt zich nu aan de bovenpool van het ei.Voorafgaand aan de electroporatie bereiden de embryo's de Hank's-oplossing met 100 units per milliliter penicilline en 0,1 milligram per milliliter streptomycine. Bereid het gewenste DNA-mengsel voor bij twee tot vijf microgram per microliter en voeg enkele korrels fast green-kleurstof toe voor een eenvoudige visualisatie van het geïnjecteerde DNA. Zorg daarnaast dat een mondpipet, een steriele injectienaald, een klein schaartje en plakband klaarliggen.Bereid microcapillairen voor door glazen capillairen met een diameter van 0,5 millimeter uit te trekken met een pipette-puller. Plaats de wolfraamelektroden in de micromanipulatoren en verbind de elektroden met de pulsgenerator. Stel de spanning op de pulsgenerator in op minus 30 volt, de lengte van elke puls op 50 milliseconden en het aantal pulsen op drie.Ga over tot electroporatie voordat de embryo's worden blootgesteld en gehanteerd. Plaats een spuit bij de smalle pool van het ei en verwijder vijf tot zes milliliter albumine uit elk ei. De albumine wordt verwijderd om morsen te voorkomen.Gebruik bij het snijden in de volgende stap de kleine schaar. Maak een ovaal venster aan de bovenzijde van het ei nadat het kiजenembryo is blootgelegd en bevochtig dit met 0,5 tot 1 mL hanks en penicilline-streptomycine-oplossing. Gebruik vervolgens een mondpipet om de glazen microcapillair te vullen.Met een DNA-kleurstofmengsel moet een microcapillair van de juiste diameter gemakkelijk met DNA te laden zijn. Positioneer het embryo onder een binoculaar om het DNA in de neurale buis te injecteren. Plaats het embryo met de staart naar u toe.In dit ontwikkelingsstadium is het ruggenmerg duidelijk zichtbaar, waardoor er geen contrasttechnieken nodig zijn. Het ruggenmerg is zowel aan het kop- als aan het staartuiteinde afgesloten. Maak echter met de microcapillaire puncties gaten in de neurale buis door deze onder een flauwe hoek te penetreren; een microcapillair die dun genoeg is en de juiste diameter heeft, moet de buis kunnen penetreren zonder deze te beschadigen.Injecteer het DNA met behulp van een mondpipet. Een microcapillair van de juiste diameter dient het DNA af te geven bij een gelijkmatige uitademing. De groene kleurstof moet zich verspreiden vanaf de punt van de staart tot aan de blaasjes van de ontwikkelende hersenen.Inject tot de neurale buis is gevuld; DNA-electroporatie is vereist om het geïnjecteerde DNA in de cellen te doen dringen. Plaats eerst de elektroden parallel aan de neurale buis en zo dicht mogelijk bij de buis zonder deze aan te raken. Zorg ervoor dat de elektroden bedekt zijn met vloeistof om de elektrische geleidbaarheid tijdens de puls te waarborgen.Normaal gesproken is de Hank-oplossing die direct na het blootstellen van het embryo wordt toegevoegd voldoende. Indien dit niet het geval is, voeg dan vlak voor de puls een druppel Hank-oplossing toe terwijl de elektroden zijn geplaatst en ondergedompeld in de vloeistof, voer de puls uit voor de elektroporatie, en verwijder vervolgens voorzichtig de elektroden en sluit het venster en het ei af met tape. Het is belangrijk om het ei volledig af te sluiten om uitdroging van het embryo tijdens de daaropvolgende incubatieperiode te voorkomen.Plaats het ei terug in de incubator en incubeer dit totdat het kikenbryo de embryonale ontwikkelingsfase van dag zes (E6) heeft bereikt, het moment waarop beeldvorming plaatsvindt nadat het ge-elektroporeerde embryo dag zes (E6) heeft bereikt. Verwijder het embryo drie dagen na electroporatie met een fijne schaar uit het ei en plaats het in een met silicone gecoate Petrischaal met PBS.Snijd de membranen weg en span het embryo aan de ventrale zijde op met pinnen die in de siliconen zijn geduwd om het op zijn plaats te houden. Maak met een scherpe wolfraam-microcapillair een longitudinale incisie langs de dakplaat, vanaf de ruitbrein tot aan de staart.Maak twee extra longitudinale incisies aan beide zijden van het ruggenmerg, waarbij de dorsale wortelganglia of DRG's van het ruggenmerg worden losgemaakt. Maak de floor plate los van het weefsel, beginnend bij de staart tot aan de hindbrain, terwijl het ruggenmerg intact blijft. Gebruik tot slot een fijne schaar om het ruggenmerg in een transversale sectie bij de hindbrain door te snijden en scheid het ruggenmerg van het lichaam.Nu het ruggenmerg is geïsoleerd, wordt het in een nieuwe siliconen gecoate Petrischaal met PBS uitgespreid. Gebruik spelden om het ruggenmerg van de achterhersenen tot aan de staart vast te zetten, zodat een plat preparaat (flat mount) ontstaat. Fixeer het ruggenmerg gedurende één uur bij kamertemperatuur in 4% par Formaldehyde in PBS. Voer de immunokleuring uit volgens de immunohistochemische procedure, zoals beschreven in het bijbehorende schriftelijke protocol, om het ruggenmerg open te monteren. Bereid het preparaat voor voor beeldvorming.Breng vet of silicone in een rechthoekige vorm aan op een objectglas en druppel PBS binnen de rechthoek. Gebruik een pincet om het ruggenmerg in het midden van de rechthoek te plaatsen en uit te strekken, en trek de vloeistof eromheen weg. Breng met een pipet één tot twee druppels monteermedium aan op het ruggenmerg en dek dit af met een dekglas.Oefen druk uit op het dekglas om luchtbellen te voorkomen. Bewaar de objectglazen in het donker bij vier graden Celsius.Inspecteer het ruggenmerg met behulp van confocale microscopie. Hier zijn enkele representatieve resultaten van axonale rejecties van spinale interneuronen van kuikens in controle-experimenten waarin RFP wordt tot expressie gebracht in alle neuronen door gebruik te maken van een ubiquitair enhancer-element van CMV; de meeste neuronen en hun axonen zijn gelabeld. Het is onmogelijk om het axonale traject van neuronale subpopulaties te ontcijferen.Wanneer echter specifieke versterkingselementen worden toegepast, wordt een gedefinieerd axonaal pad van een specifieke subpopulatie DI twee neuronen in dit voorbeeld zichtbaar. We hebben zojuist gedemonstreerd hoe u een neurale buis van een embryo kunt elektroporeren met een specifieke neuronale enhancer bij E3 en hoe u een spinal cord in de open-book-configuratie kunt prepareren bij E6. Bij het uitvoeren van deze procedure dient u zorgvuldig en geduldig te werk te gaan.Dit was alles. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw experimenten. Veel succes.

deciphering-axonal-pathways-genetically-defined-groups-neurons-chick

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In utero elektroporatie is een waardevolle methode voor het transfecteren neuronale stamcellen in vivo. Afhankelijk van de plaatsing van de elektroden en de ontwikkeling meetpunt van elektroporatie, kunnen bepaalde subsets van corticale cellen worden gericht. Gerichte cellen kunnen vervolgens worden geanalyseerd in vivo of in vitro voor de effecten van genetische manipulatie.

In utero Elektroporatie gevolgd door primaire neuronale Cultuur voor het bestuderen van Gene Functie in subset van de corticale neuronen

In utero elektroporatie zorgt voor een snelle genafgifte in een ruimtelijk-temporeel en gecontroleerde wijze in de zich ontwikkelende centrale zenuwstelsel (CZS). Hier beschrijven we een groot aanpassingsvermogen in utero electroporatie protocol dat gebruikt kan worden om expressie constructen te leveren in meerdere embryonale CNS domeinen, waaronder de telencephalon, diencephalon en netvlies.

Efficiënte gen delivery in meerdere CNS Gebieden Het gebruik van In Utero Elektroporatie

Om de functie en de regulatie van genen tijdens de ontwikkeling van middenhersenen dopaminerge neuronen te beoordelen, beschrijven we een methode die inhoudt...

In ovo Elektroporatie in Chick middenhersenen voor het bestuderen van gen-functie in dopaminerge Neuron Ontwikkeling

Een methode waarmee genexpressie in de neurale buis downgereguleerd in een celtype-specifieke, traceerbare wijze beschreven. We laten zien...

In ovo Elektroporatie van miRNA gebaseerde Plasmiden in de ontwikkelingslanden neurale buis en Beoordeling van de fenotypes van Dil Injectie in de Open-boek Voorbereidingen

Hoe neuronale netwerken zijn in de embryonale hersenen opgericht is een fundamentele vraag in ontwikkelingsstoornissen neurobiologie. Hier combineerden we een electroporatietechniek met nieuwe genetische hulpmiddelen, zoals Cre / Lox-plasmiden en piggyBac-gemedieerde DNA omzetting systeem in de aviaire hindbrain om dorsale interneurons labelen en volgen hun axonale projecties en synaptische doelen op verschillende ontwikkelingsstadia.

Elektroporatie van de hindbrain om Axonale Trajectories en Synaptic Doelen Trace in de Chick Embryo

Deze video toont de basisstappen voor het uitvoeren van een volledige transcriptoomanalyse op gedissecteerde vogelembryonale ruggenmergmonsters na transfectie met in ovo elektroporatie.

RNA-Seq Analyse van differentiële genexpressie in Geëlektroporeerde Chick Embryonale Spinal Cord

Dit manuscript biedt protocollen die gebruik maken van in de baarmoeder elektroporatie (IUE) om de structurele connectiviteit van neuronen te beschrijven op het single-cell niveau en de prikkelbaarheid van fluorescent gelabelde neuronen. Histologie wordt gebruikt dendritische en axonale uitsteeksels karakteriseren. Whole-cell opname in acute plakjes wordt gebruikt om prikkelbaarheid te onderzoeken.

In Utero Elektroporatie benaderingen om de prikkelbaarheid van neuronale subpopulaties en Single-cell Connectivity Studie

Auditieve hersenstam neuronen van avians en zoogdieren zijn gespecialiseerd in snelle neurale codering, een fundamenteel proces voor normale gehoorfuncties. Deze neuronen ontstaan ​​uit duidelijke precursoren van embryonale hindbrain. We presenteren technieken die elektroporatie gebruiken om genen uit te drukken in het achterhoofd van kippenembryo's om de genfunctie tijdens de auditieve ontwikkeling te bestuderen.

In Ovo Electroporation in de Kip Auditory Brainstem

We beschrijven de methoden voor het labelen van fluorescerende tangentieel migreren cellen door electroporation, en voor time-lapse beeldvorming van de beweging van de gelabelde cel in een flat-mount cultuur om te visualiseren migreren cel gedrag in de ontwikkelingslanden chick optic tectum .

Visualisatie van tangentiële cel migratie in de ontwikkelingslanden Chick Optic Tectum

Het kuiken is een kosteneffectief, toegankelijk en algemeen beschikbaar modelorganisme voor verschillende onderzoeken. Hier wordt een reeks protocollen beschreven om de moleculaire mechanismen te begrijpen die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling en regeneratie van het aviaire binnenoor.

In Ovo en Ex Ovo methoden om aviaire binnenoorontwikkeling te bestuderen

Leer axonale trajecten visualiseren in het embryonale ruggenmerg van kippenembryo's met behulp van in ovo elektroporatie. Deze methode maakt gedetailleerde studies van genetisch gedefinieerde neuronale populaties mogelijk.

Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie (Video) | JoVE Journal

Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie

Meer video's verkennen