Name: Isolatie van de Mens navelstreng endotheel cellen (HUVEC) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-04-28T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 19 s
Description: Leer de isolatie van humane navelstreng veneuze endotheelcellen (HUVEC) voor vaatbiologisch onderzoek met behulp van collageenase en Hank's oplossing. Deze methode ondersteunt angiogenese assays in vitro.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Procedure <ol><li> Leg het snoer op schone pad en dep het overtollige bloed. Het maken van verse snijdt aan beide uiteinden van het snoer. </li><li> Plaats 21 1 / 2 G naald met de plastic beschermhuls rond de naald ON, in de ader. (De ader is de grootste opening, de twee kleinere zijn slagaders) </li><li> Klem de naald op zijn plaats met een hemostat en bevestig de 20CC spuit van Hanks om de naald. </li><li> Duw de Hanks door de ader met matige druk. Verzamel het afval in het bekerglas met bleekmiddel. (Holding de naald en het snoer met een hand terwijl u de naald zou knallen uit de ader te voorkomen.) Als er veel bloed in de ader, was een tweede keer. </li><li> Leg het snoer op pad en klem het andere uiteinde van de ader. Vullen met een paar ml Hanks om te controleren op lekkage langs het snoer. Trek de 5 ml en verwijder de onderste klem. </li><li> Koppel de 20CC spuit. Verwijder de zuiger van de 10cc spuit. Bevestig de 10cc spuit aan de naald, giet 10 ml collagenase en vervang zuiger. Duw collagenase in de ader tot je de eerste bedrag af te sluiten het open einde. Re-klem het open einde en vullen met collagenase totdat er een matige uitzetting van ader. Te veel uitzetting resulteert in een gladde spieren besmetting. </li><li> Zachtjes masseren aan het snoer. </li><li> Incubeer snoer (met hemostats, naald en spuit bevestigd) in DPBS bij 37 ° C gedurende 15 minuten. </li><li> Terwijl de incubatie, ga dan verder met stap 1-8 2 e koord. </li><li> Na de incubatie nemen koord uit beker en terwijl het snoer over de 50 ml buis knip het uiteinde boven de onderste klem. Zorg ervoor dat u alles te verzamelen in de buis. Duw de resterende collagenase via de kabel, dan bevestig de 20CC spuit en druk Hanks door met matige druk. </li><li> Als er geen gladde spiercellen nodig zijn, gooi het koord op dit moment. Anders, plaats op dezelfde kabel in een seconde 50 ml buis met ~ 5 ml collagenase en incubeer bij 37 ° C gedurende 30-60 minuten. </li><li> Houd de tube totdat alle snoeren worden gedaan. </li><li> Spin buizen op ~ 1200 rpm gedurende 5 minuten. </li><li> Aspireren supernatant (met uitzondering van ~ 1-2 ml). Resuspendeer de pellet in 5mls PHEC + en plaat in een T25. </li><li> Incubeer bij 37 ° C met 5% CO 2 &#39;s nachts. </li><li> De volgende dag te verwijderen en te vervangen supernatant met verse media. Als er veel rode bloedcellen, een keer wassen met M199, dan PHEC + toe te voegen. Ga verder incuberen zoals gewoonlijk totdat de plaat is samenvloeiing (1-4 dagen). Gesplitst in een ontsloten T75. </li><li> Zodra T75 is confluent, verdeeld in drie T75s. Freeze twee flacons per fles. </li></ol> Let op: endotheelcellen (niet-geactiveerde) hebben een geplaveide uiterlijk. Endotheelcellen worden soms geactiveerd (lange en puntige) direct na isolatie, na een paar passen ze meestal terug in een unactive staat. Schoonmaken <ol><li> Heel voorzichtig, gooi naalden in naaldencontainer. </li><li> Gooi spuiten in grote biohazard container. </li><li> Zet alle weefsel in kleine biohazard tas. Sluit zak en invriezen bij -20 ° tot verbranding. </li><li> Geniet van alle instrumenten in virucide gedurende minstens 10 minuten. </li><li> Voeg incubatie media / bleekmiddel beker afval. Laat zitten voor ten minste 10 minuten. </li><li> Gooi de bank pads in biologisch afval. </li><li> Spray langs de binnenkant en de buitenkant van bekers, werktafel, en het waterbad deksel met vircide. Laten we zitten 10 min, daarna schoon te vegen. </li><li> Spoel bekers en instrumenten met warm water en hangen op het rek te drogen (blot uit de instrumenten zodat ze niet roesten). </li><li> Afvoeren van gedecontamineerd afval in de gootsteen. </li><li> Ongebruikte media koelkast. </li><li> Gooi de handschoenen in biologisch afval. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>0,1% Collagenase </td><td></td><td></td><td>10 mL per navelstreng, opgewarmd tot 37 &amp;deg;C</td></tr><tr><td>Weefkweekflessen</td><td></td><td></td><td>T75, één per navelstreng.</td></tr><tr><td>Hanks medium</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>scharen</td><td></td><td></td><td>steriel</td></tr><tr><td>bekerglas</td><td></td><td></td><td>steriel</td></tr><tr><td>50 mL buizen</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie van de mens navelstreng endotheel cellen (huvec)

Isolation of Human Umbilical Vein Endothelial Cells (HUVEC)

Angiogenese is een complexe multi-step proces, waar in reactie op de angiogene stimuli, nieuwe schepen worden gemaakt van de bestaande bloedvaten. Deze stappen zijn: afbraak van de basale membraan, proliferatie en migratie (ontspruiten) van endotheelcellen (EC) in de extracellulaire matrix, de uitlijning van de EC in de koorden, lumen vorming, anastomose, en de vorming van een nieuwe kelder membraan. Velen in vitro testen zijn ontwikkeld om dit proces te bestuderen, maar de meeste alleen maar na te bootsen bepaalde stadia van de angiogenese, en morfologisch de schepen vaak niet lijken op schepen in vivo. Hier laten we zien een geoptimaliseerd in vitro angiogenese-test dat de menselijke navelstreng EG en fibroblasten gebruikt. Dit model recapituleert alle van de belangrijkste vroege stadia van angiogenese, en vooral de schepen weer te geven patent intercellulaire lumen, omringd door gepolariseerd EC. Schepen kunnen gemakkelijk worden waargenomen door de fase-contrast-en time-lapse microscopie, en teruggewonnen in zuivere vorm voor downstream-toepassingen.

Deze video protocol illustreert de isolatie en de cultuur van humane navelstreng endotheel cellen (HUVEC) van menselijke navelstreng. Eenmaal geïsoleerd deze cellen kunnen worden gebruikt voor in-vitro angiogenese assays, zoals de Optimized fibrinegel Bead Assay ook aangetoond door de Hughes lab.

Isolatie van de Mens navelstreng endotheel cellen (HUVEC)

Angiogenese is een complex proces met meerdere stappen, waarbij er als reactie op angiogene stimuli nieuwe vaten worden gevormd vanuit de bestaande vasculatuur. Deze stappen ...

Hallo, mijn naam is Jager Davis en vandaag laat ik u zien hoe u menselijke navelstrengader-endotheelcellen isoleert, ook wel bekend als HUVEC. We maken gebruik van verschillende media, beginnend met Hank's gebalanceerde zoutoplossing, die wordt gebruikt om onze cellen te reinigen van eventuele rode bloedcellen of andere verontreinigingen die in de ader aanwezig kunnen zijn. Ten tweede gebruiken we collagenase resuspendeerd in DPBS; deze oplossing wordt gebruikt om de HUVEC uit de ader los te maken. Vervolgens enten we de cellen in 20% EGM-2 medium, wat bestaat uit M199 met hitte-geïnactiveerd FBS en een pen-strep oplossing.We zullen onze Resus-suspensie daarnaast aanvullen met een groeisupplement voor endotheelcellen van BD Biosciences. Oké, ik heb een dissectieschaar. Ik maak een snee recht over de navelstreng, zoals hier.Vervolgens ga ik de navelstreng schoonmaken. Hiervoor ga ik de slagaders en de ader identificeren. Er zijn twee slagaders en één ader.Meestal identificeer ik de slagaders aan de hand van deze twee. Ze komen naar u toe. We hebben er dus één hier en nog een slagader hier.En zoals u kunt zien, loopt de ader daadwerkelijk in de navelstreng, en dat is waar we onze vli

isolation-of-human-umbilical-vein-endothelial-cells-huvec

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

De navelstrengen worden gebruikt om de gladde spiercellen isoleren door op verschillende manieren. In dit werk gebruikten we de enzymatische behandeling voor geïsoleerde gladde spiercellen.

Isolatie van de Mens Umbilical arteriële gladde spiercellen (HUASMC)

Wij bieden een methode voor het isoleren en kweken van zuivere populaties van hartklep endotheelcellen (VEC). VEC kan worden geïsoleerd uit beide zijden van de cusp of bijsluiter en onmiddellijk na de onderliggende interstitiële cel (VIC) isolatie is eenvoudig.

Isolatie van Valvulaire endotheelcellen

In dit artikel wordt eerst een procedure voor het isoleren van humane endotheelcellen van de navelstreng aderen en dan laat zien hoe deze cellen te gebruiken om neutrofielen transmigratie onderzoeken op stromingscondities. Door een laag volume stromingskamer gemaakt van een polymeer met de optische eigenschappen van glas levende cellen fluorescerende beeldvorming zeldzame celpopulaties is ook mogelijk.

Isolatie van humane navelstreng endotheel cellen en hun gebruik in de studie van de neutrofielen transmigratie onder stroomtoestanden

Werkwijze voor het kwantificeren neutrofieladhesie gerapporteerd. Deze methode een dynamisch omgeving vergelijkbaar met die aangetroffen in een bloedvat. Het maakt het onderzoek neutrofieladhesie ofwel gezuiverd adhesiemoleculen (ligand) of endotheelcel substraat (HUVEC) in een context vergelijkbaar met de in vivo omgeving met afschuifspanning.

Human Neutrophil Flow Kamer adhesietest

Dit protocol is opgesteld om onze methode voor het isoleren van muizen coronaire endotheelcellen te delen, met als doel beeldvorming of om moleculair-biologische experimenten uit te voeren.

Isolatie van muis coronaire endotheelcellen

Protocollen voor de kweek van humane navelstrengveneuze endotheelcellen (HUVEC), tijdelijke transfectie van fluorescerend gelabelde markers van microtubulusgroei, beeldvorming van levende cellen en geautomatiseerde analyse van interfase-microtubulusgroeidynamiek worden gedetailleerd beschreven.

Hoge-resolutie time-lapse beeldvorming en geautomatiseerde analyse van de dynamiek van microtubuli in Living humane navelstreng endotheelcellen

Het doel van dit protocol is te isoleren van endotheliale voorlopercellen van bloed van de navelstreng. Enkele van de toepassingen zijn het gebruik van deze cellen als een biomarker voor het identificeren van patiënten met cardiovasculaire risico, behandeling van ischemische ziekten, en creëren weefsel-engineered vasculaire en hart ventiel construeert.

Isolatie van endotheliale voorlopercellen van menselijke navelstrengbloed

Hier presenteren we een geïntegreerde protocol die maatregelen monocyt subpopulatie mensenhandel onder stroom in vitro door gebruik van specifieke oppervlakte markers en confocal fluorescentie microscopie. Dit protocol kan worden gebruikt om te verkennen sequentiële werving stappen ook over andere subtypen van de leukocyten met behulp van andere specifieke oppervlakte markers profile.

Gelijktijdige studie van de aanwerving van monocyt subpopulaties onder stroom In Vitro

Hoewel uitdagend, is de isolatie van pulmonale endotheelcellen essentieel voor studies naar longontsteking. Dit protocol beschrijft een procedure voor de hoogproductieve, zeer zuivere isolatie van macrovasculaire en microvasculaire endotheelcellen.

Microvasculaire en macrovasculaire endotheliale celisolatie en zuivering van longmonsters

De huidige studie beschrijft een protocol om de veranderingen in endotheelcellen van de menselijke navelstrengader (HUVEC's) tijdens virale infectie te volgen met behulp van een real-time celanalysesysteem (RTCA).

Monitoring van veranderingen in endotheelcellen van de menselijke navelstrengader bij virale infectie met behulp van op impedantie gebaseerde real-time celanalyse

We beschrijven een protocol om menselijke venaeuze veneuze endotheelcellen (hSVECs) te isoleren en te kweken. We bieden ook gedetailleerde methoden om schuifspanning en rek te produceren om mechanische spanning in hSVECs te bestuderen.

Isolatie van menselijke sapheneuze ader-endotheelcellen en blootstelling aan gecontroleerde niveaus van schuifspanning en rek

Leer de isolatie van humane navelstreng veneuze endotheelcellen (HUVEC) voor vaatbiologisch onderzoek met behulp van collageenase en Hank's oplossing. Deze methode ondersteunt angiogenese assays in vitro.

Isolatie van de Mens navelstreng endotheel cellen (HUVEC)

Meer video's verkennen