Name: In-vivo detectie van eiwit-eiwit interacties op de Micro-oppervlakken met een patroon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-03-19T17:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 42 s
Description: Leer een micro-patroontechniek voor kwantitatieve analyse van eiwit-eiwitinteracties in levende cellen. Deze methode detecteert zwakke interacties en ondersteunt hoogdoorvoeronderzoek naar cellulaire mechanismen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We willen graag Quentina Beatty, Universiteit van Linz, Oostenrijk, bedanken voor haar vriendelijke hulp, Katharina Strub, Universiteit van Genève, Zwitserland, voor de hCD71-GFP te bouwen, en Daniel Legler, Universiteit van Konstanz, Zwitserland, voor het GPI-GFP DAF-construct. Dit werk werd ondersteund door de Oostenrijkse Science Fonds (FWF, project Y250-B03) en het GEN-AU-project van het Oostenrijkse ministerie van Wetenschap en Onderzoek.

Microcontact Afdrukken: <ol><li> Knip gebied van micropattern van de PDMS stempel met behulp van een scalpel </li><li> Was het veld met de micropattern door deze te spoelen met ethanol (100%) en gedestilleerd water. </li><li> Droog de PDMS stempel met stikstof of argon gas. </li><li> Pipetteer 50 ul BSA-Cy5 werk-oplossing (0,67 mg / ml) op de PDMS stempel zodat de hele micropattern veld is bedekt met oplossing. Incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Was de micropattern veld door te spoelen met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) en gedestilleerd water. </li><li> Droog de PDMS met stikstof of argon gas. </li><li> Plaats de PDMS stempel onder zijn eigen gewicht op het midden van een epoxy-coating dekglaasje en incubeer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur in een petrischaal. </li><li> Label de positie van de PDMS stempel op de achterkant van de dekglaasje en strip de stempel van de dia met een pincet. </li><li> Stick een Secure Seal Hybridisatie kamer over de microcontact gedrukt veld op het dekglaasje. Het label helpt bij het lokaliseren het midden van het veld. </li><li> Pipetteer 60 ul streptavidine werk-oplossing (50 ug / ml) in de reactie kamer en incubeer het monster gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Was het monster met 1 ml PBS door het toevoegen van de buffer in een poort van de kamer en het verwijderen van het tegelijkertijd op de tweede poort met een pomp. </li><li> Pipetteer 60 ul gebiotinyleerd antilichaam werk-oplossing (10 ug / ml in PBS aangevuld met 0,1% Tween 20; "PBST") in de reactie kamer en incubeer gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Was het monster met 1 ml PBST en vervolgens 1 ml PBS door het toevoegen van de buffer in een poort van de kamer en het verwijderen van het weer op de tweede poort met een pomp. </li><li> Bewaar de micropatterned oppervlakken in PBS in het donker bij kamertemperatuur totdat cellen zijn klaar voor het zaaien. </li></ol> Incubatie van de cellen op het oppervlak micropatterned: <ol><li> Grow hechtende cellen tot 50% confluentie in een 3 cm weefselkweek plaat. </li><li> Los cellen die lokaas en prooi eiwitten van belang met Ethyleendiaminetetra-azijnzuur (EDTA) oplossing en centrifugeer 5 min bij 1000 rpm. </li><li> Verwijder het supernatant en los de cel pellet in de volgens groeimedium. </li><li> Centrifugeer 5 min bij 1000 rpm. </li><li> Verwijder het supernatant en los de celpellet in de juiste groeimedium. </li><li> Wisselen de PBS van de reactie kamer op de micropatterned dekglaasje met 60 ul van de celsuspensie. </li><li> Maak een vochtige kamer door het weken een steriel gaasje in gedestilleerd water en het in het petrischaaltje het monster te voorkomen dat drooglopen. </li><li> Incubeer de cellen over-nacht bij 37 ° C in een 5% CO 2 sfeer op het micropatterned oppervlakken. </li><li> Voor het analyseren van de cellen op de microscoop, wisselen het medium door gebufferde zoutoplossing Hank s waaronder Ca 2 + en Mg 2 +. </li></ol> Microscopie: <ol><li> Het dekglaasje wordt geplaatst op een geschikte mount en de cel morfologie wordt gecontroleerd onder wit licht. </li><li> De kwaliteit van de BSA-Cy5 patronen wordt gecontroleerd door excitatie bij 647 nm. </li><li> Micropatterns van TL-prooi eiwit (GFP of YFP) worden gewaardeerd tegen 488 of 514 nm onder Total Internal Reflection (TIR) ​​excitatie. </li></ol> Representatieve resultaten: Als er interactie tussen het doelwit eiwitten in cellen gekweekt op een micropatterned oppervlak, zal de prooi volgen het aas herverdeling. De resulterende micropattern kan worden gevisualiseerd door de fluorescentie label van de prooi eiwit. Belangrijk is dat de verkregen contrast biedt een directe maat voor de interactie sterkte (zie figuur 1). Daarom is een eenvoudige evaluatie van de interactie van twee eiwitten mogelijk wordt - zonder de noodzaak van verdere verwerking van de gemeten primaire gegevens. <img src="/files/ftp_upload/1969/1969fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Herinrichting van het aas in de levende cellen plasmamembraan in verschillende sterktes interactie. TIR-beelden van de T24-cellen getransfecteerd met (een), CD71-GFP op CD71-antilichaam, (b) CD4 en cytosolische YFP op CD4-antilichaam en (c) GPI-GFP-DAF op de CD59-antilichaam microbiochips worden weergegeven. De gegevens zijn kenmerkend voor sterke (een), geen (b) of zwakke interactie (c). (A) is overgenomen uit (Weghuber et al.., In press), (b) uit (Schwarzenbacher et al.., 2008).

<ol><li>Brameshuber, M., Schwarzenbacher, M., Kaltenbrunner, M., Hesch, C., Paster, W., Weghuber, J., Heise, B., Sonnleitner, A., Stockinger, H., Schuetz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reply+to+%22Uncoupling+diffusion+and+binding+in+FRAP+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Reply to "Uncoupling diffusion and binding in FRAP experiments.</a> Nat. Methods. 6, 183-184 (2009).</li>
<li>Kim, P. W., Sun, Z. J., Blacklow, S. C., Wagner, G., Eck, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Zinc+Clasp+Structure+Tethers+Lck+to+T+Cell+Coreceptors+CD4+and+CD8%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Zinc Clasp Structure Tethers Lck to T Cell Coreceptors CD4 and CD8.</a> Science. 301, 1725-1728 (2003).</li>
<li>Ramm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image-based+screening%3A+a+technology+in+transition%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Image-based screening: a technology in transition.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 16, 41-48 (2005).</li>
<li>Schwarzenbacher, M., Kaltenbrunner, M., Brameshuber, M., Hesch, C., Paster, W., Weghuber, J., Heise, B., Sonnleitner, A., Stockinger, H., Schutz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Micropatterning+for+quantitative+analysis+of+protein-protein+interactions+in+living+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Methods%22%5BJournal%5D)">Micropatterning for quantitative analysis of protein-protein interactions in living cells.</a> Nat. Methods. 5, 1053-1060 (2008).</li>
<li>Weghuber, J., Brameshuber, M., Sunzenauer, S., Lehner, M., Paar, C., Haselbruebler, T., Schwarzenbacher, M., Kaltenbrunner, M., Paster, W., Heise, B., Sonnleitner, A., Stockinger, H., Schutz, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+protein-protein+interactions+in+the+live+cell+plasma+membrane+by+quantifying+prey+redistribution+upon+bait+micropatterning%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Enzymology%22%5BJournal%5D)">Detection of protein-protein interactions in the live cell plasma membrane by quantifying prey redistribution upon bait micropatterning.</a> Methods in Enzymology. , Forthcoming Forthcoming.</li>
</ol>

De video bevat beelden die werden geleverd door Olympus, genomen vanaf de homepage van de Visualisatie Research Lab, Brown University of overgenomen uit (Kim et al.., 2003).

De bijhorende video toont een methode voor het detecteren van eiwit-eiwit interacties in de plasma-membraan van levende cellen (Schwarzenbacher et al., 2008;. Brameshuber et al., 2009;.. Weghuber et al., in press). In principe kan elk TIRF-gebaseerde microscopie platform worden gebruikt als uitlezen systeem. Alleen wanneer een hoge gevoeligheid is gewenst (bijvoorbeeld voor het opsporen van enkele moleculen), zullen geavanceerde microscopen nodig zijn. Om dit te bereiken de beste resultaten de volgende kritieke punten tijdens de voorbereiding vereisen speciale aandacht: <ol class="lroman"><li> Store Cy5-stock-oplossing onder donkere omstandigheden om te voorkomen dat bleken van de fluorofoor en vers bereiden van de BSA-Cy5 werken oplossing voor de microcontact afdrukken. </li><li> Let erop dat u de micropattern kras op de PDMS met de pipetpunt en het monster onder donkere omstandigheden om te voorkomen dat bleken van de fluorofoor incuberen. </li><li> Doe de dekglaasje op een steriel gaasje om plakken te voorkomen van het glaasje aan de petrischaal. Zodra de PDMS stempel heeft gehandeld op grond van het glas glijden, niet verplaatsen. </li><li> Voorkomen dat luchtbellen in de reactie kamer en incubeer het monster onder donkere omstandigheden om te voorkomen dat bleken van de fluorofoor. </li><li> Niet laten de steekproef drogen meer dan 2 minuten om de vorming van zoutkristallen te voorkomen. </li><li> Voor het losmaken van de cellen geen gebruik maken van trypsine omdat het klieven het extracellulaire domein van tot nu toe tot uitdrukking membraaneiwitten. Het vermijden van trypsine zal nuttig zijn voor eiwitten met een lage omloopsnelheid te micropatterns formulier direct na bevestiging van de cellen op het oppervlak. </li><li> Controle het aantal ingelegde cellen in een microscoop en zorg ervoor dat cellen niet meer dan 30-50% confluentie bereiken. Zorg ervoor dat excessieve cellen direct worden verwijderd als gevolg van de snelle bevestiging van cellen op het antilichaam-gecoate oppervlak. </li><li> Alleen dia&#39;s met een hoge kwaliteit BSA-Cy5 patronen kan worden gebruikt voor verdere analyse. </li><li> Stabiele expressie van het fluorescerende eiwit prooi heeft de voorkeur te wijten aan een groter aantal cellen dat kan worden geanalyseerd per scan. </li><li> Adequate TIRF aanpassing is noodzakelijk om patronen te wijten aan cytosolische achtergrond te visualiseren. </li></ol> De micro-patronen techniek biedt verschillende mogelijkheden voor de analyse van eiwit-eiwit interacties. Ten eerste, samen met de kwantificering van de lokale, ruimtelijk opgelost eiwit-eiwit interacties ook het opsporen van zwakke of indirecte interacties mogelijk is zonder het nadeel van het geven van een groot aantal valse positieven of negatieven. Ten tweede stelt de onderzoeker om eiwit-eiwit interacties te analyseren in de plasma-membraan van levende cellen, die moeilijk te bereiken is door biochemische methoden, zoals de twee-hybride scherm. Ten derde is de aanpak maakt het mogelijk voor de detectie van aas-prooi interacties die worden gemoduleerd door veranderingen in het milieu, zoals de temperatuur, de aanwezigheid van verschillende eiwitten of andere moleculen of post-translationele modificaties. Dus de test maakt voor de screening modulatoren van een bepaalde interactie paar in de context van levende cellen. Bovendien, door het verminderen van de oppervlakte dichtheid van de vangst ligand of het gebruik van monovalente liganden, de analyse van de toestand van rust wordt het mogelijk te maken. Tot slot, als er voldoende scanplatformen worden gebruikt, het aantal geanalyseerde cellen hoog genoeg is om high throughput eisen van de farmaceutische bedrijven voor drug discovery (Ramm, 2005) match.

in-vivo detectie van eiwit-eiwit interacties op de micro-oppervlakken met een patroon

In-vivo Detection of Protein-protein Interactions on Micro-patterned Surfaces

Het ontrafelen van de interactie netwerk van moleculen<em&gt; In-vivo</em&gt; Is de sleutel tot het begrijpen van de mechanismen die celfunctie en metabolisme regelen. Een veelheid van methodologische opties voor het aanpakken van moleculaire interacties in cellen zijn ontwikkeld, maar de meeste van deze methoden lijden nogal indirect en daarom nauwelijks kwantitatief. Integendeel, een aantal high-end kwantitatieve benaderingen werden geïntroduceerd, die echter moeilijk uit te breiden tot high throughput. Te combineren hoge doorvoersnelheid mogelijkheden met de mogelijkheid om kwantitatieve informatie halen, hebben we onlangs een nieuw concept ontwikkeld voor het identificeren van eiwit-eiwit interacties (Schwarzenbacher<em&gt; Et al.</em&gt;., 2008). We beschrijven hier een gedetailleerd protocol voor het ontwerp en de bouw van dit systeem die het mogelijk maakt voor het analyseren van interacties tussen een fluorofoor-gelabeld eiwit (&quot;prooi&quot;) en een membraan eiwit (&quot;lokaas&quot;)<em&gt; In-vivo</em&gt;. Cellen worden uitgeplaat op micropatterned oppervlakken gefunctionaliseerd met antilichamen tegen de aas exoplasmic domein. Bait-prooi interacties getest via de herverdeling van de fluorescerende prooi. De methode wordt gekenmerkt door een hoge gevoeligheid tot op het niveau van afzonderlijke moleculen, de mogelijkheid om zwakke interacties te detecteren, en hoge doorvoer capaciteit, waardoor het van toepassing screening tool.

Deze video laat zien experimenten met daarop volgende analyse van eiwit-eiwit interacties door het gebruik van micro-oppervlakken met een patroon. De aanpak biedt de mogelijkheid om eiwit interacties op te sporen in levende cellen en combineert een hoge doorvoer-mogelijkheden met de mogelijkheid te extraheren kwantitatieve informatie.

In-vivo detectie van eiwit-eiwit interacties op de Micro-oppervlakken met een patroon

Het ontrafelen van het interactienetwerk van moleculen in vivo is essentieel voor het begrijpen van de mechanismen die de celfunctie en het metabolisme reguleren. Een veelvoud aan...

Het is van bijzonder belang om het interactienetwerk van moleculen in levende cellen te ontrafelen om de mechanismen te begrijpen die het celmetabolisme en de celfunctie reguleren. Een toenemend aantal methodologieën die kwalitatieve en kwantitatieve informatie verschaffen, vormen de drijvende kracht op weg naar het verkrijgen van een holistisch beeld van de celfunctie. Co-ip, TAP-tagging of photo-crosslinking essays maken de zuivering van pre-moleculen in vitro mogelijk.Daarnaast zijn verschillende benaderingen ontworpen voor de analyse van proteïne-interacties in de levende cel. Deze omvatten twee hybride screens of complementatie-assays van fluorescerende proteïnen. Bovendien zijn er enkele spectroscopische benaderingen, zoals FRET of FCS, en ook niet-spectroscopische methoden ontwikkeld om deze vraag te beantwoorden.De bovengenoemde technieken zijn ontwikkeld voor het registreren van grote celpopulaties, maar zijn echter vrij indirect en daarom nauwelijks kwantitatief. In tegenstelling hiermee zijn enkele geavanceerde kwantitatieve benaderingen geïntroduceerd. Het is echter moeilijk om high-throughput-mogelijkheden te combineren met de mogelijkheid om kwantitatieve informatie te extraheren.Onlangs hebben we een nieuw concept ontwikkeld voor het identificeren van eiwit-eiwitinteracties. De micropatroontechniek hier is een schematische illustratie van de micropatroon SA-roosters van BSA Sci vijf, die zijn geprint op gefunctionaliseerde glazen dekglasplaatjes waarbij de tussenruimtes zijn gevuld met streptavidine, gevolgd door gebiotineerde liganden. In de meeste gevallen zijn dit antilichamen tegen het membraan.Eiwit-aas in cellen gekweekt op dergelijke microbioomchips. Het aas wordt in het plasmamembraan gerangschikt volgens het antilichaam-micropatroon. Interacties met een tweede fluorescent gelabeld eiwit-prooi worden onderzocht door de graad van co-patronering te meten met behulp van een silicium-master PDMS-stempel met een array van vierkanten met een specifieke kenmerkmaat en -diepte.De drie micrometerstempels worden uit een gel geproduceerd en uitgesneden. De stempels worden gespoeld met 100% ethanol en dubbel gedestilleerd water en vooraf gedroogd met stikstof. Ze worden geïncubeerd met 0,67 mg/mL sci-fi.Gelabelde BSA-oplossing gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur tijdens incubatie; epoxy-gemodificeerde glazen dekglasjes worden op dezelfde wijze gereinigd. Op dezelfde manier worden de stempels na het inkten gewassen met PBS en water. Voor BSA sci vijf overdracht.Een stempel wordt gedroogd met stikstof en direct daarna gedurende 30 minuten onder zijn eigen gewicht onder een glazen dekglas geplaatst. De locatie van het micropatroonveld wordt op de achterzijde van het dekglas gemarkeerd. Na het verwijderen van de stempels worden de dekglazen afgesloten met adhesieve siliconenmaskers.De kamers worden gevuld met een streptavidine-oplossing van 50 µg/mL, gedurende één uur geïncubeerd en vervolgens gespoeld met 1 mL PBS. Daarna worden de streptavidine-patronen één uur geïncubeerd met 10 µg/mL gebiotinyleerd antilichaam; na het wassen met PBS worden de cellen in de kamer geladen. Zodra de cellen aan het oppervlak zijn gehecht, is het monster klaar voor metingen.De enige vereiste voor de uitlezing is een fluorescentiemicroscoop die in staat is om het monster te belichten in een configuratie voor totale interne reflectie. Dergelijke systemen zijn commercieel verkrijgbaar bij verschillende leveranciers en zijn de afgelopen jaren gebruiksvriendelijker geworden. Ons detectiesysteem is opgezet op een epifluorescentiemicroscoop.Argon- en krypton-ionlasers worden gebruikt voor selectieve fluorescentie-excitatie van de gebruikte fluoroforen; monsters worden verlicht in een configuratie voor totale interne reflectie via een objectief, waarbij gebruik wordt gemaakt van een olie-immersie-objectief met 100-voudige vergroting en een hoge NA. Na passende filtering met standaard filtersets wordt de fluorescentie afgebeeld op een camera met achterverlichte CCD. De uitlezing vindt plaats in de tijdvertraging- en integratiemodus (TDI), waardoor grote monstergebieden gescand kunnen worden. Hiervoor worden de monsters verschoven met een gemotoriseerde XY-tafel die is gesynchroniseerd met de regelverschuiving van de camera.De teruggekaatste laserstraal wordt afgebeeld op een tweedelige fotodiode en het differentiële signaal wordt gebruikt om een Z-piezo aan te sturen voor snelle herfocussering. De reader is uitgerust met een geautomatiseerd focus-behoudsysteem dat werkt tijdens het scanproces, waarbij één scan plaatsvindt bij 488 nanometer voor selectieve excitatie van GFP en de tweede scan bij 647 nanometer voor selectieve excitatie van PS Five. Voor de data-analyse gebruiken we een contrastberekeningsprogramma geschreven in MATLAB, gebaseerd op de fluorescentie-intensiteit binnen en buiten de regio van het gevangen antilichaam.Het contrastniveau en daarmee de mate van proteïne-interactie wordt geanalyseerd voor een snelle analyse van een groot aantal cellen. Ook commercieel verkrijgbare geautomatiseerde software kan worden gebruikt. Zo is de scan R imaging-software van Olympus succesvol getest voor de contrastevaluatie van micropatterning-experimenten.We analyseren de bekende interactie tussen CD4 en LCK-eiwitten in vroege T-cel-signalering, zoals hier wordt getoond. Fluorescerend LCK herverdeelt zich duidelijk op regio's die zijn gecoat met CD4-antilichamen. Verstoring van de zink-clasp-structuur, een belangrijke interactieplaats van deze twee eiwitten, door toevoeging van een zinkchelator, vermindert vervolgens het contrast van de LCK-micropatronen.Samenvattend zijn de belangrijkste voordelen van de micropatterning-techniek als volgt: de kwantificering van lokale, ruimtelijk opgeloste eiwitinteracties. Daarnaast zijn dit de detectie van zwakke interacties, ook in het plasmamembraan van levende cellen, de detectie van gemoduleerde bait-prey-interacties, de analyse van de rusttoestand en de toepasbaarheid van de methode voor high-throughput.

in-vivo-detection-protein-protein-interactions-on-micro-patterned

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol wordt beschreven hoe u foto eiwit-eiwit interacties met behulp van een FRET-gebaseerde nabijheid assay.

Imaging eiwit-eiwit interacties In vivo</em

Het testen van eiwit-eiwit interacties is onmisbaar voor dissectie van eiwitten functionaliteit. Hier introduceren we...

Eiwit Membraan Overlay Test: een protocol om interactie tussen oplosbare en onoplosbare eiwitten Test In vitro</em

Met behulp van eiwit microarrays met bijna het hele S. cerevisiae proteoom wordt gesondeerd voor snelle onpartijdige ondervraging van duizenden proteïne-proteïne interacties in parallel. Deze werkwijze kan worden gebruikt voor eiwit-kleine molecule, posttranslationele modificatie, en andere assays high-throughput.

Probing hoge dichtheid functioneel eiwit Microarrays om eiwit-eiwit interacties Detect

Peptide array screening is een hoogdoorlaattest voor het identificeren van interactieplaatsen tussen eiwitten. Dit maakt het mogelijk om meerdere interacties van een doeleiwit in kaart te brengen en kan dienen als een methode voor het identificeren van plaatsen voor remmers die een eiwit aanspreken. Hier beschrijven we een protocol voor het screenen en analyseren van peptide arrays.

Het identificeren van eiwit-eiwit interacties sites maken met Peptide Arrays

Hier, laten we zien hoe een nabijheid afbinding Assay (PLA) gebruiken om te visualiseren van MST1/MST2 heterodimerization in vaste cellen met hoge gevoeligheid.

Detectie van Heterodimerization van eiwit Isoforms met behulp van een in Situ nabijheid afbinding Assay

Hier presenteren we een protocol voor het controleren van de montage en demontage van de toxine van de bloedzweer met behulp van biolayer interferometrie (BLI). Na montage/demontage op de biosensor oppervlak, de grote eiwitcomplexen worden vrijgegeven uit het oppervlak voor visualisatie en identificatie van onderdelen van de complexen met behulp van elektronenmicroscopie en massaspectrometrie, respectievelijk.

Analyseren van de dynamische eiwitcomplexen op gemonteerd en vrijgelaten uit Biolayer interferometrie Biosensor met behulp van spectrometrie van de massa en elektronenmicroscopie

Hier presenteren we een protocol bij scherm extracellulaire proteïne microarrays voor de identificatie van nieuwe receptor-ligand interacties in hoge-doorvoer. Ook beschrijven we een methode ter verbetering van de opsporing van voorbijgaande eiwit-eiwitinteractie met behulp van eiwit-microbead complexen.

Extracellulaire eiwit Microarray technologie voor detectie van High Throughput van lage affiniteit Receptor-Ligand interacties

Hier presenteren we een protocol voor een verterings techniek op membraan voor de bereiding van monsters voor massaspectrometrie. Deze techniek vergemakkelijkt de gemakkelijke analyse van eiwit-eiwit interacties.

Evaluatie van eiwit-eiwit interacties met behulp van een on-membraan Vergistings techniek

Ons algemene doel is om te begrijpen hoe cellen extracellulaire signalen voelen die leiden tot gerichte axonale groei. Hier beschrijven we de methodologie van licht-geïnduceerde moleculaire adsorptie van eiwitten, gebruikt om gedefinieerde micro-patronen van extracellulaire matrix componenten te produceren om specifieke gebeurtenissen te bestuderen die axon-uitgroei en pathfinding beheersen.

Lichtgeïnduceerde moleculaire adsorptie van eiwitten met behulp van het PRIMO-systeem voor micro patronen om Celresponsen te bestuderen op extracellulaire matrix eiwitten

Van veel intrinsiek ongeordende eiwitten is aangetoond dat ze deelnemen aan de vorming van zeer dynamische biomoleculaire condensaten, een gedrag dat belangrijk is voor tal van cellulaire processen. Hier presenteren we een op beeldvorming gebaseerde methode met één molecuul voor het kwantificeren van de dynamiek waarmee eiwitten met elkaar interageren in biomoleculaire condensaten in levende cellen.

Meting van de dynamiek van eiwitinteracties in biomoleculaire condensaten

Het protocol presenteert een methode voor in vivo covalente hechting van biotine aan eiwitten op basis van hun nabijheid tot een biotineligase die is gefuseerd met een interessant eiwit. Deze modificatie maakt een selectieve verrijking van de eiwitten mogelijk met behulp van streptavidinekorrels als dat nodig is in eiwitinteractiestudies.

In vivo Nabijheidsbiotinylering voor onderzoek naar eiwitinteractie in Paramecium tetraurelia

Leer een micro-patroontechniek voor kwantitatieve analyse van eiwit-eiwitinteracties in levende cellen. Deze methode detecteert zwakke interacties en ondersteunt hoogdoorvoeronderzoek naar cellulaire mechanismen.

In-vivo detectie van eiwit-eiwit interacties op de Micro-oppervlakken met een patroon

Meer video's verkennen