Name: Murine Bioluminescent Lever Tumor Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-17T17:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 23 s
Description: Leer een chirurgische techniek voor het induceren van orthotopische bioluminescente levertumoren bij muizen. Deze methode maakt niet-invasieve monitoring van tumorontwikkeling mogelijk via live beeldvorming.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gefinancierd door de Cork South Ziekenhuis Victoria University Hospital Borst fonds, de Ierse Cancer Society (CRI07TAN) en de Cork Cancer Research Centre. Lewis long cellijn stabiel tot expressie luciferase was een vriendelijke gift van Dr Karin Jooss, Cell Genesys, Inc, San Francisco, USA.

Introductie De lever is vaak de eerste plaats van gemetastaseerde ziekte en kan de enige site van verspreiding in maar liefst 30 40% van de patiënten met gevorderde ziekte. Maar opties voor de behandeling van gemetastaseerde levertumoren zijn maar weinig met een minderheid van de patiënten die geschikt zijn voor resectie en slechts 23% de belangrijkste responders aan chemotherapeutica. Preklinische onderzoek op dit gebied is beperkt door de afwezigheid van een geschikte muis model om geïsoleerde lever-ziekte te bestuderen. Beschrijven we een split-milt benadering die kan worden gebruikt om op betrouwbare wijze een uniforme, diffuse levermetastasen. Resectie van deze helft van de milt voorkomt de gevolgen van de milt tumorgroei en de andere helft van de milt is terug met een intacte portale circulatie naar milt immuun beschermende eigenschappen behouden. Het model dat we beschrijven is vrij eenvoudig uit te voeren en kan snel worden gedaan door middel van een enkele incisie. De bioluminescente eigenschappen van de tumor-cellijn maakt nauwkeurige kwantificering van de respons op de behandeling, zonder opoffering van de dieren. Protocol I. celpreparaat <ol><li> Lewis longcarcinoom cellen worden gekweekt Modified Essential Dulbecco's medium aangevuld met 10% foetaal kalf serum bij 37 ° C, 5% CO 2 en geoogst door trypsinisation bij de sub-samenvloeiend. </li><li> Cellen werden geteld met behulp van een Nucleocounter (Chemo-Metec, Denemarken) en een enkele celsuspensie van 1 X 10 6 cellen in 200 ui werd voorbereid in serum vrije media. </li></ol> II. Muis Voorbereiding Opmerking: Alle procedures werden goedgekeurd door de ethische commissie van het University College Cork. In ons laboratorium hebben we gebruik van injecteerbare anesthetica om de muis te verdoven, als alternatief, kan men gebruiken inhalatie anesthetica om hetzelfde effect te bereiken. De muis stam we gebruikten is de haarloze MF1 nu / nu stam verkregen van Harlan Laboratories (Oxfordshire, Engeland). Vrouw MF1 nu / nu muizen met een gewicht 16 tot 22 g en van 6-8 weken oud werden opgenomen in dit experiment. Andere stammen, zoals de C57 en Balb / c kan ook gebruikt worden met de juiste tumorcellijnen. <ol><li> Anesthesie werd geleverd door intraperitoneale injectie van 100ul van 1,5 mg ketamine en 300 ug xylazine. </li><li> De diepte van de anesthesie wordt beoordeeld op basis teen knijpen. Er mag geen terugtrekking reflex met teen knijpen worden. </li><li> De verdoofde muis is goed gepositioneerd en geplakt over een verwarmings-pad. </li><li> De buik is voorbereid met een 10% Betadine-oplossing. </li><li> De buik en chirurgische site zijn gedrapeerd in een steriele manier. </li></ol> III. Abdominale incisie <ol><li> Een kleine subcostal incisie gemaakt in de huid. </li><li> De incisie wordt uitgebreid tot 2-3 cm. </li><li> De buikwand musculatuur werden verdeeld en de buikholte ingevoerd. </li></ol> IV. Blootstelling en de afdeling van Milt <ol><li> De milt is gemobiliseerd en voorzichtig exteriorized op een pre-cut steriel gaasje. </li><li> Twee 4-0 Vicryl ligaturen zijn gebonden rond het midden van de body van de milt. </li><li> Milt is verdeeld tussen de twee ligaturen het creëren van twee hemi-milt. </li></ol> V. Injectie van cellen in de Hemi-milt <ol><li> A 27 G wordt gebruikt om een ​​100 ul volume van de cellen te injecteren in een hemi-milt. </li><li> Tumor cellen mogen naar de lever afvoer voor tien minuten met voldoende tijd voor het grootste deel van de geïnjecteerde cellen om de lever te bereiken. </li></ol> VI. Excisie van Hemi-milt, Abdominale sluiting en herstel <ol><li> De geïnjecteerde hemi-milt is weggesneden. </li><li> De andere hemi-milt is terug naar de buikholte. </li><li> De spierlaag is gesloten met 4-0 PDS hechting met behulp van een eenvoudige rijgsteek. </li><li> De buikhuid wordt afgesloten met 4-0 Prolene gebruik van onderbroken steken. </li><li> Fluid bolus wordt toegediend en post-operatieve analgesie, Carpofen (5 mg / kg) wordt toegediend door IP injectie gedurende 24 uur na de operatie. </li><li> De muis is toegestaan ​​om te herstellen van narcose </li></ol> VII. IVIS Whole Body Imaging Bioluminescent <ol><li> Muis is verdoofd met behulp van injecteerbare verdoving. </li><li> Luciferine substraat wordt gegeven door intraperitoneale injectie tien minuten voor de beeldvorming </li><li> Muizen worden geplaatst op het podium en verbeelde gedurende 3 minuten met behulp van IVIS Gehele lichaam imaging-systeem </li><li> Luminescentie van de lever kan worden gemeten met behulp van een regio van belang gereedschap </li></ol> VIII. Blootstelling van muizenlever <ol><li> Muis is verdoofd met behulp van injecteerbare verdoving. </li><li> Een incisie in de buik op het dak maakt visualisatie van diffuse levermetastasen in vivo. </li><li> De muis is gedood door cervicale dislocatie en de lever kan worden uitgesneden voor verdere analyse. </li></ol>_upload/1977/1977fig1.jpg "alt =" Afbeelding 1 "/&gt; Figuur 1. Gekloneerde muriene onbehandeld en tumor-geïnfiltreerd levers. <img src="/files/ftp_upload/1977/1977fig2.jpg" alt="Figuur 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 2"> Figuur 2. Kinetiek van de lever tumorgroei, zoals blijkt uit IVIS het gehele lichaam.

<ol><li>Kasuya, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+subcutaneous+spleen+reservoir+for+multiple+portal+venous+injections+to+treat+liver+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of subcutaneous spleen reservoir for multiple portal venous injections to treat liver malignancies.</a> Cancer Res. 65, 3823-3827 (2005).</li>
<li>Liu, Q. Z., Tuo, C. W., Wang, B., Wu, B. Q., Zhang, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liver+metastasis+models+of+human+colorectal+carcinoma+established+in+nude+mice+by+orthotopic+transplantation+and+their+biologic+characteristic%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Liver metastasis models of human colorectal carcinoma established in nude mice by orthotopic transplantation and their biologic characteristic.</a> World J Gastroenterol. 4, 409-411 (1998).</li>
<li>Li, Z. Y., Ni, S., Yang, X., Kiviat, N., Lieber, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Xenograft+models+for+liver+metastasis%3A+Relationship+between+tumor+morphology+and+adenovirus+vector+transduction%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Ther%22%5BJournal%5D)">Xenograft models for liver metastasis: Relationship between tumor morphology and adenovirus vector transduction.</a> Mol Ther. 9, 650-657 (2004).</li>
<li>Cashman, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune+gene+therapy+as+a+neoadjuvant+to+surgical+excision+to+control+metastatic+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Lett%22%5BJournal%5D)">Immune gene therapy as a neoadjuvant to surgical excision to control metastatic cancers.</a> Cancer Lett. , (2008).</li>
</ol>

De ontwikkeling van betrouwbare in vivo modellen voor de studie van de lever metastase wordt steeds steeds belangrijker met de komst van nieuwe therapeutische strategieën. Voor de nauwkeurige studie van nieuwe strategieën, diermodellen moeten relatief gemakkelijk uit te voeren, vormen een aanzienlijk aantal van de metastase, omvatten alle stappen van de metastatische cascade en hebben een verslaggever systeem dat de detectie en telling van een beperkt aantal metastatische cellen mogelijk maakt. De split-milt aa...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6429</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Carprofen</td><td>V&amp;eacute;toquinol</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Videne</td><td>Ecolab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vicryl 4-0 hechtdraad</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>PDS 4-0 hechtdraad</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Prolene 4-0 hechtdraad</td><td>Ethicon Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Firefly Luciferine</td><td>Biosynth International, Inc</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

murine bioluminescent lever tumor model

Murine Bioluminescent Hepatic Tumour Model

Deze video beschrijft de oprichting van levermetastasen in een muismodel die vervolgens kunnen worden geanalyseerd door bioluminescente beeldvorming. Tumor-cellen zijn specifiek toegediend aan de lever om een ​​gelokaliseerde tumor lever veroorzaken, via mobilisatie van de milt en splitsen in twee, waardoor intact de vasculaire pedikel voor elk de helft van de milt. Lewis longcarcinoom cellen die constitutief uitdrukken van de vuurvlieg luciferase gen (luc1) zijn geënt in een hemi-milt, die vervolgens wordt 10 minuten later gereseceerd. De andere hemi-milt is intact gelaten en keerde terug naar de buik. Lever groei van de tumor kan worden gecontroleerd door bioluminescentie beeldvorming met behulp van de IVIS hele lichaam imaging-systeem. Kwantitatieve beeldvorming van de groei van tumoren met behulp van IVIS zorgt voor een nauwkeurige kwantificering van levensvatbare tumorcellen. Tumor celdood en necrose als gevolg van medicamenteuze behandeling is vroeg aangegeven door een vermindering van de lichtgevende signaal. Deze muis model maakt voor het onderzoeken van de mechanismen die ten grondslag liggen aan uitgezaaide tumor-cel overleving en de groei en kan worden gebruikt voor de evaluatie van therapeutica van levermetastasen.

Dit artikel beschrijft een procedure voor de inductie van orthotope bioluminescente levertumoren bij muizen, en daaropvolgende analyse van groei van de tumor beperkt tot de lever met behulp van live-hele lichaam luminescentie beeldvorming.

Murine Bioluminescent Lever Tumor Model

Deze video beschrijft de vestiging van levermetastasen in een muismodel dat vervolgens geanalyseerd kan worden middels bioluminescentie-imaging. Tumorcellen worden ...

Hallo iedereen. Mijn naam is Simon Regenron. Ik ben een van de arts-assistenten chirurgie in het onderzoekscentrum voor kanker in Ierland.Vandaag laat ik u een chirurgische techniek zien voor het induceren van levermetastasen. In een neuron-model is de lever een veelvoorkomende plek voor metastatische verspreiding en een belangrijke oorzaak van kankergerelateerde mortaliteit. Slechts een klein percentage van de patiënten met een gevorderde leverziekte komt in aanmerking voor chirurgische resectie.Daarom zijn nieuwe therapeutische middelen nodig voor de behandeling van deze aandoening. Veel diermodellen voor levermetastasen resulteren niet in een ziektebeeld dat overeenkomt met de klinische situatie. Het model dat ik u vandaag laat zien is een klinisch relevant model dat relatief eenvoudig aan te leren is en zeer goede succespercentages heeft.Bij dit model wordt de milt verdeeld in twee hemimilten. Eén hemimilt wordt gebruikt voor de inoculatie van tumorcellen. Deze tumorcellen verplaatsen zich via de poortadercirculatie naar de lever.De andere milthelft blijft intact om de immunologische eigenschappen te behouden. De cellijn die ik gebruik, tot expressie brengt luciferase op stabiele wijze, wat bioluminescente analyse van tumorgroei in vivo mogelijk maakt. Daarom zal dit model toestaan om therapieën voor leverziekten niet-invasief te monitoren.Oké, laten we beginnen met de procedure van vandaag. De instrumenten die we nodig hebben zijn dissectiescharen, een naaldhouder, twee kleine pincetten, een scalpel maat 10, 5-0 Prolene-hechtmateriaal voor de huidsluiting, 4-0 PDS-hechtmateriaal voor de sluiting van de peritoneale laag, 3-0 Vicryl-ligaturen voor het afbinden van de milt, zoutoplossing, een insulinenaald van 29 gauge voor de injectie van het anestheticum, een insulinenaald van 26 gauge voor de injectie van de tumorsuspensie, tumorsuspensie in serumvrij medium, injecteerbaar anestheticum, een huidmarkeerstift en voorgesneden steriele gaasjes. Het muismodel dat ik vandaag zal gebruiken is de athyme MF1 naakte muis.Andere modellen, zoals de C 57 en BC, kunnen worden gebruikt met geschikte tumorcellijnen. In het laboratorium wordt gebruikgemaakt van een warmtematje en een injecteerbaar algemeen anestheticum. De diepte van de anesthesie wordt beoordeeld met de tenenknijptest.Er mag geen teenwithdrawalreflex optreden bij het knijpen in de teen. De muis is correct gepositioneerd en vastgezet, en de buik is voorbereid met Betadine en op steriele wijze afgedekt. Er wordt een subcostale incisie gemaakt, de buikholte wordt geopend, en de milt wordt geïdentificeerd en geëxternaliseerd.De milt wordt met behulp van een voorgesneden steriel gaasje gescheiden van de rest van de muis. Twee verticale ligaturen worden tussen de twee vasculaire pedikels geplaatst en voorzichtig aangetrokken. De milt wordt verdeeld in twee gelijke milthelften.Eén helft van de milt wordt gebruikt voor de inoculatie van tumorcellen. De tumorcellen worden langzaam in de milthelft geïnjecteerd om lekkage te voorkomen. De tumorcellen transporteren via de poortadercirculatie naar de lever.Na 10 minuten incubatie wordt de geïnjecteerde milthelft verwijderd en de andere milthelft teruggeplaatst in de buikholte. Voor het sluiten van de peritoneale holte worden absorbeerbare hechtingen en een doorlopende hechting gebruikt, en voor de huidsluiting wordt een niet-absorbeerbare 5-0 proline hechting gebruikt. Het herstel verloopt volgens de routine.De ontwikkeling van leverziekten kan in de loop van de tijd worden beoordeeld met behulp van 2D ivus-beeldvorming. De muis wordt zoals voorheen geanestheseerd en Lucifer-substraat wordt intraperitoneaal toegediend. De muis wordt op de tafel in de kamer van 37 °C geplaatst.De beeldvorming wordt gedurende drie minuten uitgevoerd, waarbij een supergeponeerd beeld van de muis met gedetecteerde luminescentie wordt gegenereerd. Drie weken na de behandeling wordt de buikholte geopend en wordt diffuse leverziekte vastgesteld. Concluderend maakt deze techniek de inductie van gelokaliseerde metastatische tumorcelgroei in de lever mogelijk, waarbij luminescente beeldvorming de visualisatie en kwantificering van tumorgroei faciliteert en toepassing bij de beoordeling van therapeutische responsen mogelijk maakt.

murine-bioluminescent-hepatic-tumour-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Luciferase-gemodificeerd menselijk brein tumor xenotransplantaten kan intracranially worden vastgesteld athymische muizen, met de daaropvolgende controle van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie beeldvorming. In combinatie met survival analyse, bioluminescentie monitoring is een essentieel onderzoeksinstrument voor pre-klinisch testen van therapieën worden overwogen voor de behandeling van hersentumoren.

Tot vaststelling van Intracraniële hersentumor xenotransplantaten Met verdere analyse van de tumorgroei en de respons op de therapie met behulp van bioluminescentie Imaging

Bioluminescentie beeldvorming van hypoxie induceerbare factor-1α-activiteit wordt toegepast op intracraniale tumor hypoxie ontwikkeling in een borstkanker hersenmetastasen muismodel te controleren.

In vivo bioluminescentie van Tumor Hypoxie Dynamiek van Borstkanker hersenmetastasen in een muismodel

This video demonstrates an orthotopic model of pancreatic cancer that utilizes Matrigel for localized cell delivery and in vivo bioluminescence imaging for non-invasive monitoring of tumor progression. The orthotopic model is suited to both syngeneic and xenograft models and could be used in pre-clinical trials to investigate the impact of novel anti-cancer therapeutics on the growth of the primary pancreatic tumor and metastasis.

Bioluminescent Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model: A Non-invasive Technique to Monitor Cancer Progression in Mice

Source: Marina Arantes Radicchi1, Victor Carlos Mello1, Victória Paz Machado1, Márcia Cristina Oliveira da Rocha1, Jaqueline Vaz de Oliveira1, Luana Cristina Camargo1,2, Luís Alexandre Muehlmann1, Ricardo Bentes Azevedo1, Sônia Nair Bao1, João Paulo Figueiró Longo11Institute of Biological Sciences, University of Brasília, 2Department of Basic Psychological Processes, Institute of Psychology, University of BrasíliaThis video demonstrates the procedure for tracking tumor progression in vivo by...

Bioluminescent Imaging of Breast Tumor Progression in a Female Mouse Model

Source: Clark, A.J., et al. Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)This video demonstrates bioluminescence imaging to track glioblastoma progression in an immunocompetent mouse model, using luciferase-expressing tumor cells and luciferin to quantify tumor growth non-invasively.

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Mouse Model for Glioblastoma

Beter begrip van alvleesklierkanker biologie is kritisch nodig om de ontwikkeling van betere therapeutische opties om pancreaskanker te behandelen mogelijk te maken. Om aan deze behoefte te pakken, zien we een orthotopic model van pancreaskanker die niet-invasieve monitoring van de progressie van kanker maakt gebruik...

Bioluminescent Orthotope Model van pancreaskanker Progression

GL261-glioomcellen bieden een bruikbaar immunocompetent diermodel van glioblastoom. De doelen van dit protocol zijn om de juiste technieken te demonstreren voor het monitoren van intracraniële tumorgroei met behulp van in vivo bioluminescentie-beeldvorming, en om de bruikbaarheid van luciferase-gemodificeerde GL261-cellen te verifiëren voor het bestuderen van tumorimmunologie en immunotherapeutische benaderingen voor de behandeling van glioblastoom.

Bioluminescentie beeldvorming van een Immunocompetente diermodel voor Glioblastoma

Bioluminescentie beeldvorming is een bekend hulpmiddel voor het lokaliseren van tumoren en metastasen, maar kwantificering van deze beelden zijn vaak complexe berekeningen en bijzondere instrumenten. We beschrijven de easy-to-use luminoscore methode, gebaseerd op een nauwkeurige overname voorwaarden, vereist geen berekeningen, en het mogelijk maken tumorlast en de respons op de behandeling te kunnen houden in muismodellen.

-Bioluminescentie Based Tumor kwantificatie methode voor de controle progressie van de tumor en de effecten van de behandeling in de muis lymfoom Models

Het vermogen van metastaserende klonen om verre locaties te koloniseren, hangt af van hun proliferatievermogen en/of hun vermogen om te overleven in de micro-omgeving van de gastheer zonder significante proliferatie. Hier presenteren we een diermodel dat kwantitatieve visualisatie van beide typen leverkolonisatie door metastaserende klonen mogelijk maakt.

Geavanceerde diermodel van colorectale metastase in de lever: Imaging technieken en eigenschappen van gemetastaseerde Clones

Wij introduceren een lymfkliertest orthotopic borst kanker en radicale mastectomie model met bioluminescentie technologie te kwantificeren van de last van de tumor om na te bootsen menselijke borst kanker progressie.

Het genereren van een lymfkliertest Orthotopic uitgezaaide borst kanker Model en het uitvoeren van lymfkliertest radicale mastectomie

Een grote uitdaging bij het ontwikkelen van nieuwe therapieën voor longkanker is het modelleren van de micro-omgeving van de tumor naarmate de regionale ziekte evolueert naar gemetastaseerde ziekte. Hier beschrijven we een eenvoudige methode om een orthotopisch syngeen model van longkanker op te stellen dat het mogelijk maakt om in vivo de ziekte in de loop van de tijd te volgen.

Een minimaal invasieve methode voor het genereren van een syngeen orthotopisch muismodel van longkanker

Leer een chirurgische techniek voor het induceren van orthotopische bioluminescente levertumoren bij muizen. Deze methode maakt niet-invasieve monitoring van tumorontwikkeling mogelijk via live beeldvorming.

Murine Bioluminescent Lever Tumor Model

Meer video's verkennen