Murine Bioluminescent Lever Tumor Model

Hallo iedereen. Mijn naam is Simon Regenron. Ik ben een van de arts-assistenten chirurgie in het onderzoekscentrum voor kanker in Ierland.

Vandaag laat ik u een chirurgische techniek zien voor het induceren van levermetastasen. In een neuron-model is de lever een veelvoorkomende plek voor metastatische verspreiding en een belangrijke oorzaak van kankergerelateerde mortaliteit. Slechts een klein percentage van de patiënten met een gevorderde leverziekte komt in aanmerking voor chirurgische resectie.

Daarom zijn nieuwe therapeutische middelen nodig voor de behandeling van deze aandoening. Veel diermodellen voor levermetastasen resulteren niet in een ziektebeeld dat overeenkomt met de klinische situatie. Het model dat ik u vandaag laat zien is een klinisch relevant model dat relatief eenvoudig aan te leren is en zeer goede succespercentages heeft.

Bij dit model wordt de milt verdeeld in twee hemimilten. Eén hemimilt wordt gebruikt voor de inoculatie van tumorcellen. Deze tumorcellen verplaatsen zich via de poortadercirculatie naar de lever.

De andere milthelft blijft intact om de immunologische eigenschappen te behouden. De cellijn die ik gebruik, tot expressie brengt luciferase op stabiele wijze, wat bioluminescente analyse van tumorgroei in vivo mogelijk maakt. Daarom zal dit model toestaan om therapieën voor leverziekten niet-invasief te monitoren.

Oké, laten we beginnen met de procedure van vandaag. De instrumenten die we nodig hebben zijn dissectiescharen, een naaldhouder, twee kleine pincetten, een scalpel maat 10, 5-0 Prolene-hechtmateriaal voor de huidsluiting, 4-0 PDS-hechtmateriaal voor de sluiting van de peritoneale laag, 3-0 Vicryl-ligaturen voor het afbinden van de milt, zoutoplossing, een insulinenaald van 29 gauge voor de injectie van het anestheticum, een insulinenaald van 26 gauge voor de injectie van de tumorsuspensie, tumorsuspensie in serumvrij medium, injecteerbaar anestheticum, een huidmarkeerstift en voorgesneden steriele gaasjes. Het muismodel dat ik vandaag zal gebruiken is de athyme MF1 naakte muis.

Andere modellen, zoals de C 57 en BC, kunnen worden gebruikt met geschikte tumorcellijnen. In het laboratorium wordt gebruikgemaakt van een warmtematje en een injecteerbaar algemeen anestheticum. De diepte van de anesthesie wordt beoordeeld met de tenenknijptest.

Er mag geen teenwithdrawalreflex optreden bij het knijpen in de teen. De muis is correct gepositioneerd en vastgezet, en de buik is voorbereid met Betadine en op steriele wijze afgedekt. Er wordt een subcostale incisie gemaakt, de buikholte wordt geopend, en de milt wordt geïdentificeerd en geëxternaliseerd.

De milt wordt met behulp van een voorgesneden steriel gaasje gescheiden van de rest van de muis. Twee verticale ligaturen worden tussen de twee vasculaire pedikels geplaatst en voorzichtig aangetrokken. De milt wordt verdeeld in twee gelijke milthelften.

Eén helft van de milt wordt gebruikt voor de inoculatie van tumorcellen. De tumorcellen worden langzaam in de milthelft geïnjecteerd om lekkage te voorkomen. De tumorcellen transporteren via de poortadercirculatie naar de lever.

Na 10 minuten incubatie wordt de geïnjecteerde milthelft verwijderd en de andere milthelft teruggeplaatst in de buikholte. Voor het sluiten van de peritoneale holte worden absorbeerbare hechtingen en een doorlopende hechting gebruikt, en voor de huidsluiting wordt een niet-absorbeerbare 5-0 proline hechting gebruikt. Het herstel verloopt volgens de routine.

De ontwikkeling van leverziekten kan in de loop van de tijd worden beoordeeld met behulp van 2D ivus-beeldvorming. De muis wordt zoals voorheen geanestheseerd en Lucifer-substraat wordt intraperitoneaal toegediend. De muis wordt op de tafel in de kamer van 37 °C geplaatst.

De beeldvorming wordt gedurende drie minuten uitgevoerd, waarbij een supergeponeerd beeld van de muis met gedetecteerde luminescentie wordt gegenereerd. Drie weken na de behandeling wordt de buikholte geopend en wordt diffuse leverziekte vastgesteld. Concluderend maakt deze techniek de inductie van gelokaliseerde metastatische tumorcelgroei in de lever mogelijk, waarbij luminescente beeldvorming de visualisatie en kwantificering van tumorgroei faciliteert en toepassing bij de beoordeling van therapeutische responsen mogelijk maakt.