Waarom is membraanfocussering cruciaal vóór micro-injectie?

Door te focussen op het membraan dat de follikel en de voedercellen scheidt, wordt een nauwkeurige plaatsing van de naald gewaarborgd en wordt schade aan omliggende structuren tijdens de injectie voorkomen.

Hoe beïnvloedt de selectie van het ontwikkelingsstadium het succes van de micro-injectie?

Eikamers in het midden- tot late stadium bevatten grote, zichtbare voedercellen en oocyten-dooier, wat de zichtbaarheid en injectienauwkeurigheid verbetert voor een consistente plaatsing van de probe.

Welke rol speelt compensatiedruk bij het micro-injectieproces?

Compensatiedruk houdt een continue vloeistofstroom vanuit de naald in stand, waardoor verstoppingen worden voorkomen en reproduceerbare injectievolumes worden gegarandeerd tijdens de afgifte van molecular beacons.

Waarom wordt de naald gereinigd vóór de injectie?

Het uitvoeren van een reinigingsfunctie verwijdert lucht uit de naaldpunt, wat de doorstroming zou kunnen blokkeren of kan leiden tot een inconsistente afgifte van de molecular beacon-oplossing.

Hoe ondersteunt het wisselen van objectieven na injectie de imaging-workflows?

Door na de injectie over te schakelen naar de gewenste vergroting kan de beeldverwerving van getransfecteerde nurse-cellen worden geoptimaliseerd zonder het monster te verstoren.

Micro-injection van Drosophila Verpleegkundige Cellen: Een Methode van Intracellulaire Levering

JoVE Encyclopedia of Experiments

Biologie

0 weergaven • 3:32 min • April 30th, 2023

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- Place a coverslip with dissected egg chambers onto the microscope stage. Locate an egg chamber of the appropriate developmental stage and orientation for microinjection. Mid to late-stage egg chambers have a large visible oocyte yolk, and those in the correct orientation are with their anterior-posterior axis perpendicular to the direction of injection.

Drosophila nerve cells are a group of 15 cells inside the egg chamber responsible for depositing maternally derived nutrients and biomolecules into the developing oocyte. Set up the microinjector system to the appropriate injection and compensation pressure to ensure consistent injection volume and outward flow. Carefully bring a previously loaded capillary needle into the field of view so that the cells and needle are in the same focal plane.

Ensure that there is no air trapped in the tip of the capillary and that there is a continuous flow of the solution. Then adjust the Z-position of the objective to focus on the membrane separating the follicle cells from the nurse cells, insert the needle into a nurse cell and perform the injection.

The following protocol demonstrates microinjecting Drosophila nurse cells with fluorescent oligonucleotide probes, called molecular beacons, against maternally contributed mRNA transcripts for live cell imaging.

- For molecular beacon microinjection, select the 40x oil objective and mount a cover slip with the dissected egg chamber onto the microscope stage. Locate an egg chamber at the mid to late developmental stage that is properly oriented for microinjection, then set up a microinjector with the appropriate injection and compensation pressures.

Using the micromanipulator joystick, gently lower a needle loaded with one microliter of molecular beacon solution into the oil drop. Bring the tip into focus toward the periphery of the field of view. Perform a clean function to remove the air from the needle tip and to ensure that there is flow from the needle, and bring the needle to the home position.

Focus on the egg chamber to be microinjected, and bring the needle back into focus near the edge of the egg chamber. Perform a fine adjustment of the Z-position of the objective such that the membrane separating the follicle cells from the nurse cells is in focus. Insert the needle into a nurse cell for injection of the molecular beacons over a period of two to five seconds.

Gerelateerde video's

0 Bekeken

Laatst bijgewerkt: 15 augustus 2026

Micro-injection van Drosophila Verpleegkundige Cellen: Een Methode van Intracellulaire Levering

Overzicht

Belangrijkste componenten van de studie

Wetenschapsgebied

Achtergrond

Doel van de studie

Gebruikte methoden

Belangrijkste resultaten

Conclusies

Veelgestelde vragen

Industriële relevantie voor leidinggevenden

Strategische toepassingen in biofarmaceutische R&D

Vroege ontdekking & targetvalidatie

Screening & Assay-ontwikkeling

Translationeel & Preklinisch Onderzoek

Integratie van Pipeline & Workflow

Operationele & Bedrijfsimpact

Overwegingen voor de implementatie

Biopharma Veelgestelde Vragen

Imaging Cel Vorm wijzigen in Living Drosophila Embryo's

2D en 3D Chromosoom schilderen in Malaria Muggen

Het bestuderen van mitochondriale structuur en functie in Drosophila Eierstokken

Micro-injectie van de Xenopus laevis Eicellen

Micro-injectie technieken voor het bestuderen van mitose in de Drosophila melanogaster Syncytieel Embryo

Injectie van volwassen Drosophila-vliegen: een methode voor samengestelde of labelafgifte

Micro-injection van Levende Embryo's Drosophila: Vroege Levering van Reagentia aan het Ontwikkelende Embryo

Micro-injectie wondproef en In vivo Lokalisatie van epidermale Wound Response Verslaggevers in Drosophila Embryo's.

Levering van nucleïnezuren door middel van Embryo micro-injectie in de Worldwide Landbouw Pest Insect, Middellandse-Zeevlieg

Visualisering en opvolging van endogene Mrna's in levende Drosophila melanogaster Eier kamers