Name: Voorbereiding van de Acute hippocampus Plakjes van ratten en transgene muizen voor de Studie van Synaptic Wijzigingen bij het ouder worden en amyloïdpathologie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-23T14:15:00.000+00:00
Duration: 14 min 57 s
Description: Leer hoe u acute hippocampusplakjes bereidt van oude ratten en transgene muizen om synaptische veranderingen bij veroudering en amyloïdpathologie te bestuderen. Deze methode minimaliseert beschadiging tijdens dissectie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Werk ondersteund door de NIH subsidie ​​AG027297, een prijs van de Kentucky Spinal Cord en Head Injury Research Trust, en een geschenk van de Kleberg Foundation.

<ol><li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase%2Fphosphatase+activities+parallel+reduced+synaptic+strength+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase/phosphatase activities parallel reduced synaptic strength during aging.</a> J Neurophysiol. 80, 1567-1570 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Korol, D. L., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+and+long-term+potentiation+reversal+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Increased susceptibility to induction of long-term depression and long-term potentiation reversal during aging.</a> J Neurosci. 16, 5382-5392 (1996).</li>
<li>Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hippocampal+%27zipper%27+slice+studies+reveal+a+necessary+role+for+calcineurin+in+the+increased+activity+of+L-type+Ca%282%2B%29+channels+with+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Hippocampal 'zipper' slice studies reveal a necessary role for calcineurin in the increased activity of L-type Ca(2+) channels with aging.</a> Neurobiol Aging. 31, 328-338 (2010).</li>
<li>Burke, S. N., Barnes, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+synapses+and+hippocampal+circuit+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Senescent synapses and hippocampal circuit dynamics.</a> Trends Neurosci. 33, 153-161 (2010).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+homeostasis+and+modulation+of+synaptic+plasticity+in+the+aged+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Calcium homeostasis and modulation of synaptic plasticity in the aged brain.</a> Aging Cell. 6, 319-325 (2007).</li>
<li>Foster, T. C., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-associated+changes+in+Ca%282%2B%29-dependent+processes%3A+relation+to+hippocampal+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Age-associated changes in Ca(2+)-dependent processes: relation to hippocampal synaptic plasticity.</a> Hippocampus. 7, 602-612 (1997).</li>
<li>Thibault, O., Gant, J. C., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+the+calcium+hypothesis+of+brain+aging+and+Alzheimer%27s+disease%3A+minding+the+store%5BTitle%5D)+AND+%22Aging+Cell%22%5BJournal%5D)">Expansion of the calcium hypothesis of brain aging and Alzheimer's disease: minding the store.</a> Aging Cell. 6, 307-317 (2007).</li>
<li>Demuro, A., Parker, I., Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+signaling+and+amyloid+toxicity+in+Alzheimer+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Calcium signaling and amyloid toxicity in Alzheimer disease.</a> J Biol Chem. 285, 12463-12468 (2010).</li>
<li>Green, K. N., LaFerla, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Linking+calcium+to+Abeta+and+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Linking calcium to Abeta and Alzheimer's disease.</a> Neuron. 59, 190-194 (2008).</li>
<li>Kumar, A., Thinschmidt, J. S., Foster, T. C., King, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aging+effects+on+the+limits+and+stability+of+long-term+synaptic+potentiation+and+depression+in+rat+hippocampal+area+CA1%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Aging effects on the limits and stability of long-term synaptic potentiation and depression in rat hippocampal area CA1.</a> J Neurophysiol. 98, 594-601 (2007).</li>
<li>Norris, C. M., Halpain, S., Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+age-related+alterations+in+synaptic+plasticity+by+blockade+of+L-type+Ca2%2B+channels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reversal of age-related alterations in synaptic plasticity by blockade of L-type Ca2+ channels.</a> J Neurosci. 18, 3171-3179 (1998).</li>
<li>Norris, C. M., Scheff, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+of+afferent+function+and+synaptic+strength+in+hippocampal+CA1+following+traumatic+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurotrauma%22%5BJournal%5D)">Recovery of afferent function and synaptic strength in hippocampal CA1 following traumatic brain injury.</a> J Neurotrauma. 26, 2269-2278 (2009).</li>
<li>Sama, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interleukin-1beta-dependent+signaling+between+astrocytes+and+neurons+depends+critically+on+astrocytic+calcineurin%2FNFAT+activity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Interleukin-1beta-dependent signaling between astrocytes and neurons depends critically on astrocytic calcineurin/NFAT activity.</a> J Biol Chem. 283, 21953-21964 (2008).</li>
<li>Ye, H., Jalini, S., Mylvaganam, S., Carlen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+large-conductance+Ca%282%2B%29-activated+K%28%2B%29+channels+depresses+basal+synaptic+transmission+in+the+hippocampal+CA1+area+in+APP+%28swe%2Find%29+TgCRND8+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Activation of large-conductance Ca(2+)-activated K(+) channels depresses basal synaptic transmission in the hippocampal CA1 area in APP (swe/ind) TgCRND8 mice.</a> Neurobiol Aging. 31, 591-604 (2010).</li>
<li>Bear, M. F., Malenka, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity%3A+LTP+and+LTD%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity: LTP and LTD.</a> Curr Opin Neurobiol. 4, 389-399 (1994).</li>
<li>Foster, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+hippocampal+synaptic+plasticity+in+age-related+memory+decline%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Brain+Res+Rev%22%5BJournal%5D)">Involvement of hippocampal synaptic plasticity in age-related memory decline.</a> Brain Res Brain Res Rev. 30, 236-249 (1999).</li>
<li>Foster, T. C., Kumar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Susceptibility+to+induction+of+long-term+depression+is+associated+with+impaired+memory+in+aged+Fischer+344+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Learn+Mem%22%5BJournal%5D)">Susceptibility to induction of long-term depression is associated with impaired memory in aged Fischer 344 rats.</a> Neurobiol Learn Mem. 87, 522-535 (2007).</li>
<li>Hsu, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+in+the+balance+of+protein+kinase+and+phosphatase+activities+and+age-related+impairments+of+synaptic+transmission+and+long-term+potentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Hippocampus%22%5BJournal%5D)">Alterations in the balance of protein kinase and phosphatase activities and age-related impairments of synaptic transmission and long-term potentiation.</a> Hippocampus. 12, 787-802 (2002).</li>
<li>Vouimba, R. M., Foy, M. R., Foy, J. G., Thompson, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((17beta-estradiol+suppresses+expression+of+long-term+depression+in+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">17beta-estradiol suppresses expression of long-term depression in aged rats.</a> Brain Res Bull. 53, 783-787 (2000).</li>
<li>Abdul, H. M., Furman, J. L., Sama, M. A., Mathis, D. M., Norris, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NFATs+and+Alzheimer%27s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">NFATs and Alzheimer's Disease.</a> Mol Cell Pharmacol. 2, 7-14 (2010).</li>
<li>Abdul, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cognitive+decline+in+Alzheimer%27s+disease+is+associated+with+selective+changes+in+calcineurin%2FNFAT+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Cognitive decline in Alzheimer's disease is associated with selective changes in calcineurin/NFAT signaling.</a> J Neurosci. 29, 12957-12969 (2009).</li>
<li>Anantharaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beta-amyloid+mediated+nitration+of+manganese+superoxide+dismutase%3A+implication+for+oxidative+stress+in+a+APPNLH%2FNLH+X+PS-1P264L%2FP264L+double+knock-in+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Beta-amyloid mediated nitration of manganese superoxide dismutase: implication for oxidative stress in a APPNLH/NLH X PS-1P264L/P264L double knock-in mouse model of Alzheimer's disease.</a> Am J Pathol. 168, 1608-1618 (2006).</li>
<li>Gengler, S., Hamilton, A., Holscher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+plasticity+in+the+hippocampus+of+a+APP%2FPS1+mouse+model+of+Alzheimer%27s+disease+is+impaired+in+old+but+not+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Synaptic plasticity in the hippocampus of a APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease is impaired in old but not young mice.</a> PLoS One. 5, e9764-e9764 (2010).</li>
<li>Stringer, J. L., Lothman, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+effects+of+extracellular+calcium+concentrations+on+hippocampal+pyramidal+cell+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">In vitro effects of extracellular calcium concentrations on hippocampal pyramidal cell responses.</a> Exp Neurol. 101, 132-146 (1988).</li>
<li>Landfield, P. W., Pitler, T. A., Applegate, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effects+of+high+Mg2%2B-to-Ca2%2B+ratios+on+frequency+potentiation+in+hippocampal+slices+of+young+and+aged+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">The effects of high Mg2+-to-Ca2+ ratios on frequency potentiation in hippocampal slices of young and aged rats.</a> J Neurophysiol. 56, 797-811 (1986).</li>
<li>Ames, A. 3rd, Sakanoue, M., Endo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NA%2C+K%2C+CA%2C+MG%2C+AND+C1+CONCENTRATIONS+IN+CHOROID+PLEXUS+FLUID+AND+CISTERNAL+FLUID+COMPARED+WITH+PLASMA+ULTRAFILTRATE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">NA, K, CA, MG, AND C1 CONCENTRATIONS IN CHOROID PLEXUS FLUID AND CISTERNAL FLUID COMPARED WITH PLASMA ULTRAFILTRATE.</a> J Neurophysiol. 27, 672-681 (1964).</li>
<li>Gant, J. C., Sama, M. M., Landfield, P. W., Thibault, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+and+simultaneous+emergence+of+multiple+hippocampal+biomarkers+of+aging+is+mediated+by+Ca2%2B-induced+Ca2%2B+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Early and simultaneous emergence of multiple hippocampal biomarkers of aging is mediated by Ca2+-induced Ca2+ release.</a> J Neurosci. 26, 3482-3490 (2006).</li>
<li>Thibault, O., Hadley, R., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elevated+postsynaptic+%5BCa2%2B%5Di+and+L-type+calcium+channel+activity+in+aged+hippocampal+neurons%3A+relationship+to+impaired+synaptic+plasticity%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Elevated postsynaptic [Ca2+]i and L-type calcium channel activity in aged hippocampal neurons: relationship to impaired synaptic plasticity.</a> J Neurosci. 21, 9744-9756 (2001).</li>
<li>Thibault, O., Landfield, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increase+in+single+L-type+calcium+channels+in+hippocampal+neurons+during+aging%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Increase in single L-type calcium channels in hippocampal neurons during aging.</a> Science. 272, 1017-1020 (1996).</li>
<li>Stutzmann, G. E., Caccamo, A., LaFerla, F. M., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dysregulated+IP3+signaling+in+cortical+neurons+of+knock-in+mice+expressing+an+Alzheimer%27s-linked+mutation+in+presenilin1+results+in+exaggerated+Ca2%2B+signals+and+altered+membrane+excitability%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Dysregulated IP3 signaling in cortical neurons of knock-in mice expressing an Alzheimer's-linked mutation in presenilin1 results in exaggerated Ca2+ signals and altered membrane excitability.</a> J Neurosci. 24, 508-513 (2004).</li>
<li>Stutzmann, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+ryanodine+receptor+recruitment+contributes+to+Ca2%2B+disruptions+in+young%2C+adult%2C+and+aged+Alzheimer%27s+disease+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Enhanced ryanodine receptor recruitment contributes to Ca2+ disruptions in young, adult, and aged Alzheimer's disease mice.</a> J Neurosci. 26, 5180-5189 (2006).</li>
<li>Lee, H. K., Min, S. S., Gallagher, M., Kirkwood, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NMDA+receptor-independent+long-term+depression+correlates+with+successful+aging+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">NMDA receptor-independent long-term depression correlates with successful aging in rats.</a> Nat Neurosci. 8, 1657-1659 (2005).</li>
<li>McNaughton, B. L., Douglas, R. M., Goddard, G. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+enhancement+in+fascia+dentata%3A+cooperativity+among+coactive+afferents%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Synaptic enhancement in fascia dentata: cooperativity among coactive afferents.</a> Brain Res. 157, 277-293 (1978).</li>
</ol>

De productie van deze video-artikel werd gesponsord door Leica Microsystems.

De stappen in dit protocol zal helpen verzekeren dat de hersenen ontledingen worden uitgevoerd ten minste zo snel en efficiënt in leeftijd, zoals bij jonge volwassen ratten. We bieden ook voldoende detail voor de beginner tot het opzetten van hun eigen stukje studies over LTP en LTD. Als verdere exploratie van het ouder worden en AD veranderingen in de synaptische plasticiteit en functie is een van je doelen, zijn er ten minste twee andere methodologische kwesties, zinspeelde hierboven, dat er meer aandacht verdienen. Eerste, een aantal laboratoria hebben aangetoond dat de Ca 2 +: Mg2 +-verhouding in de opname ACSF kan een duidelijk effect op de inductie synaptische plasticiteit hebben in de hippocampus plakken 2,10,24,25. In zoogdieren CSF, de Ca 2 +: Mg2 +-ratio is ongeveer een (zie bijvoorbeeld 26). Echter, ACSF Ca 2 +: Mg2 + ratio&#39;s dichter bij de twee worden vaak gebruikt in slice studies van synaptische plasticiteit en functie. In het begin van studies, deze praktijk waarschijnlijk was aangepast aan de inductie van LTP te optimaliseren, en vervolgens werd routine voor alle plasticiteit onderzoeken. Dit kan echter de praktijk problematisch zijn bij veroudering en AD studies omwille van goed gekarakteriseerde verschillen in neuronale Ca 2 +-regeling. In het bijzonder, Ca 2 + influx en / of Ca 2 +-geïnduceerde Ca 2 +-release is verhoogd in oude ratten-en / of AD model muizen tijdens neuronale activering 3,27-31. Inductie van LTD is bijzonder gevoelig voor subtiele veranderingen in ACSF Ca 2 + levels. Ons protocol, dat 2 mM Ca 2 + en 2 mM Mg2 +, resulteert gewoonlijk in LTD voor de leeftijd, maar geen jonge volwassen dieren 2, terwijl studies met behulp van een Ca 2 + maakt gebruik van: Mg2 +-verhouding dichter bij de twee, hebben waargenomen robuuste LTD bij volwassenen in de afwezigheid van een verschil in leeftijd 2,10 of in combinatie met verminderde LTD in oude ratten 32. Deze observaties onderstrepen de noodzaak om zorgvuldig te overwegen ACSF Ca 2 + en Mg2 + niveau bij het ​​vergelijken van Ca 2 +-afhankelijke plasticiteit in leeftijd en jonge volwassen dieren. Het tweede methodologische kwestie betreft de sterke afhankelijkheid van LTP op postsynaptische depolarisatie 33 en de mogelijke veroudering / genotype verschillen in de synaptische sterkte. In een typisch experiment LTP, baseline en LTP stimulatie-intensiteit is over het algemeen aangepast aan een half maximale (of drie kwart maximaal) EPSP amplitude te produceren. Het potentieel probleem is dat oude ratten en muizen APP/PS1 meestal tonen synaptische sterkte in vergelijking met hun jongere en / of het wild type tegenhangers verminderd, wat betekent dat baseline EPSP waarden ook zullen kleiner zijn in de leeftijd van ratten en muizen APP/PS1. Kleinere EPSPS kan vertalen naar minder depolarisatie tijdens de LTP stimulatie, wat resulteert in een verminderde kans voor het induceren van LTP 33. Omwille van dit potentieel te beschamen, is het moeilijk om te bepalen of deze dieren een throughput tekort, een tekort of beide plasticiteit vertonen. Dat wil zeggen dat LTP inductie mechanismen in leeftijd en / of APP/PS1 muizen worden functioneel intact (geen plasticiteit tekort), maar onvoldoende gestimuleerd (throughput tekort) onder deze omstandigheden. Dit onderscheid is van cruciaal belang, zoals mechanismen voor de doorvoer en de mechanismen voor plasticiteit kan heel verschillend reageren op een specifieke farmacologische behandeling. We proberen het effect van verlaagde doorstroming op LTP inductie te minimaliseren door het normaliseren van de EPSP amplitude op hetzelfde niveau (bijv. 1 mV) over alle segmenten voorafgaand aan de LTP stimulatie. Andere strategieën effectief kan zijn als ook (bijvoorbeeld gebruik van spanning of stroom klem om de membraanpotentiaal gelijk in groepen tijdens LTP stimulatie), en moet worden beschouwd bij het onderzoeken van LTP in deze dierlijke modellen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Visser </td><td> BP358-1 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> Visser </td><td> BP366-500 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 (monobasisch) </td><td> Sigma </td><td> P5379-100G </td></tr><tr><td> MgSO 4 </td><td> Sigma </td><td> M2643-500G </td></tr><tr><td> CaCl 2 (dihydraat) </td><td> Sigma </td><td> C3306-250G </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Visser </td><td> S233-500 </td></tr><tr><td> C 6 H 12 O 6 (dextrose) </td><td> Visser </td><td> BP350-1 </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Reagentia vereist <table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het apparaat </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Erlenmeyers </td><td> Visser </td><td> FB-500-2000 FB-500-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Aquarium Bubbler </td><td></td><td></td><td> Gebruikt voor zuurstof media. Verkrijgbaar bij de meeste dierenwinkels </td></tr><tr><td> 50 ml Glazen beker </td><td> Visser </td><td> 02-540g </td><td> Voor de hersenen storarge in ACSF </td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Visser </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Small Animal Guillotine </td><td> Wereld precisie-instrumenten (WPI) </td><td> DCAP-M </td><td></td></tr><tr><td> Flat papieren handdoek </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> # 11 Feather chirurgische mes </td><td> Visser </td><td> 08-916-5B </td><td></td></tr><tr><td> Beebee bot schaar </td><td> Fine Science Tools (FST) </td><td> 16044-10 </td><td></td></tr><tr><td> Lempert Rongeurs </td><td> Roboz </td><td> RS-8,321 </td><td> Gebruik voor ratten </td></tr><tr><td> Friedman-Pearson Rongeurs </td><td> FST </td><td> 16020-14 </td><td> Gebruik voor muizen of ratten </td></tr><tr><td> Hippocampus gereedschap </td><td> FST </td><td> 10099-15 </td><td></td></tr><tr><td> Lepel </td><td></td><td></td><td> Een plastic theelepeltje zal doen </td></tr><tr><td> Spatel </td><td> Visser </td><td> 21 tot 401-25A </td><td> Spatel </td></tr><tr><td> Chirurgische iris schaar </td><td> FST </td><td> 14058-09 </td><td></td></tr><tr><td> plastic overdracht pipetten </td><td> Visser </td><td> 13-711-43 </td><td></td></tr><tr><td> 110mm Whatman filter papier </td><td> Visser </td><td> 09-805E </td><td> Whatman kat. 1001-110 </td></tr><tr><td> Glazen petrischaal </td><td> Visser </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica VT1000P Manual Vibrating Microtoom </td><td> Vibratome </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0.1mm FA-10 Feather S mes </td><td> Ted Pella </td><td> 121-9 </td><td> 0.1mm FA-10 Feather S mes </td></tr><tr><td> Borosilicaatglas Pasteur Pipet (met rubber bol) </td><td> Visser </td><td> 13 tot 678-20A </td><td> Voor het overdragen van plakjes: Tip is afgebroken en warmte-gepolijst voor een grotere opening </td></tr><tr><td> 35 mm Polysterine Cultuur schotel </td><td> Corning </td><td> 430588 </td><td> Gebruikt voor het verzamelen van plakjes na dissectie </td></tr></tbody></table> Tabel 2. Gereedschappen en materialen voor dissectie <table border="1"><tbody><tr><td> Apparatuur / materialen </td><td> Vennootschap </td><td> Commentaar (optioneel) </td></tr><tr><td> Holding kamer </td><td> Custom Built </td><td></td></tr><tr><td> P-97 Horizontale Pipette Puller </td><td> Sutter Instrument Co </td><td></td></tr><tr><td> Trillingsisolatie tafel </td><td> Technische Manufacturing Corporation (TMC) </td><td></td></tr><tr><td> Kooi van Faraday </td><td> Maatwerk </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex Aspirator Fles met Bottom Sidearm (Product # 1220-1L) </td><td> Corning </td><td></td></tr><tr><td> Zwaartekracht rondtrekken IV set met regelaar (Product # 2C8891) </td><td> Baxter </td><td></td></tr><tr><td> Central Line Vacuum </td><td></td><td> Verkrijgbaar in de meeste moderne laboratoria </td></tr><tr><td> 95% O 2 / 5% CO 2 Gas Mix </td><td> Schott-Gross Co </td><td></td></tr><tr><td> TygonTM Lab buis Voor O 2 / CO 2 levering </td><td> Fisher Scientific </td><td> Niet-giftig, niet-oxiderende, komt in een verscheidenheid van formaten. </td></tr><tr><td> Eclipse E600FN Microscoop </td><td> Nikon </td><td> met de 10x en 40x objectieven, in de buurt infared filter, en GFP, DS-Red2 filters </td></tr><tr><td> Cool Snap ES Digitale Camera </td><td> Lichttechniek </td><td> Cool Snap ES Digitale Camera </td></tr><tr><td> X-Cite Fluorescent Illuminator </td><td> Exfo </td><td> X-Cite Fluorescent Illuminator </td></tr><tr><td> Microscoop Platform </td><td> Siskiyou </td><td> Op maat samengesteld </td></tr><tr><td> RC-22 Onderwater opname kamer (Product # 64-0228) </td><td> Warner Instruments (WI) </td><td> Vereist P-1 platform en podium adapter (Product # 64-0277 Van Warner) </td></tr><tr><td> TC2BIP 2/3Ch Temperatuurregelaar </td><td> Cel Microcontrols </td><td> TC2BIP 2/3Ch Temperatuurregelaar </td></tr><tr><td> 4 Axis Manual Miniatuur manipulator </td><td> Siskiyou </td><td></td></tr><tr><td> Platinum Iridium Wire (0.002 in) (Item # PTT0203) </td><td> WPI </td><td></td></tr><tr><td> A365 Stimulus Isolator </td><td> WPI </td><td> A365 Stimulus Isolator </td></tr><tr><td> Multiclamp 700b versterker </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Digidata 1322A A / D-omzetter </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> PClamp software </td><td> Axon Instruments </td><td></td></tr><tr><td> Personal Computer (Pentium 4) </td><td> Dell </td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 3. Elektrofysiologie apparatuur en materialen

voorbereiding van de acute hippocampus plakjes van ratten en transgene muizen voor de studie van synaptic wijzigingen bij het ouder worden en amyloïdpathologie

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

Het knaagdier hippocampus plak voorbereiding is misschien wel de meest breed gebruikte tool voor het onderzoek van zoogdieren synaptische plasticiteit en functie. De hippocampus kunnen snel en eenvoudig worden geëxtraheerd uit ratten en muizen en plakjes levensvatbaar te blijven voor het uur in zuurstofrijk kunstmatige cerebrospinale vloeistof. Bovendien zijn fundamentele electrophysisologic technieken makkelijk kan worden toegepast voor het onderzoek van synaptische functie in de hippocampus plakjes en hebben enkele van de beste biomarkers voor cognitieve stoornissen. De hippocampus slice is vooral populair voor de studie van synaptische plasticiteit mechanismen die betrokken zijn bij leren en geheugen. Veranderingen in de inductie van de lange termijn potentiëring en depressie (LTP en LTD) van synaptische werkzaamheid in hippocampale plakken (of het gebrek daarvan) worden vaak gebruikt om de neurologische fenotype van cognitief-gestoorde dieren en / beschrijven of om het werkingsmechanisme van de te evalueren nootropische verbindingen. Dit artikel schetst de procedures die we gebruiken voor het bereiden van de hippocampus segmenten van ratten en transgene muizen voor de studie van synaptische veranderingen geassocieerd met hersen veroudering en de ziekte van Alzheimer (AD) 1-3. Het gebruik van oude ratten en AD model muizen kunnen presenteren een unieke reeks uitdagingen voor onderzoekers gewend zijn aan het gebruik van jongere ratten en / of muizen in hun onderzoek. Oude ratten hebben dikkere schedels en harder bindweefsel dan jongere ratten en muizen, die de hersenen extractie en / of dissectie kunnen vertragen en daarmee ontkennen of overdrijf echt leeftijdsgebonden verschillen in de synaptische functie en plasticiteit. Veroudering en amyloid pathologie kan ook verergeren hippocampus schade tijdens de dissectie procedure, opnieuw complicerende eventuele gevolgtrekkingen getrokken uit fysiologische beoordeling. Hier bespreken we de stappen die tijdens de dissectie procedure om deze problemen te minimaliseren. Voorbeelden van synaptische reacties verworven in &quot;gezond&quot; en &quot;ongezonde&quot; segmenten van ratten en muizen zijn voorzien, alsmede representatieve synaptische plasticiteit experimenten. Het mogelijke effect van andere methodologische factoren op de synaptische functie in deze diermodellen (bijvoorbeeld het opnemen van componenten van de oplossing, stimulatie parameters) worden ook besproken. Terwijl de focus van dit artikel is op het gebruik van oude ratten en transgene muizen, beginners tot fysiologie slice moeten vinden genoeg detail hier aan de slag met hun eigen studies, met behulp van een verscheidenheid aan diermodellen.

Dit artikel schetst de procedures voor het bereiden van de hippocampus segmenten van ratten en transgene muizen voor de studie van synaptische veranderingen geassocieerd met de hersenen ouder worden en leeftijd-gerelateerde neurodegeneratieve ziekten, zoals de ziekte van Alzheimer.

Voorbereiding van de Acute hippocampus Plakjes van ratten en transgene muizen voor de Studie van Synaptic Wijzigingen bij het ouder worden en amyloïdpathologie

De preparatie van hippocampale sneden van knaagdieren is wellicht het meest breed gebruikte instrument voor het onderzoek naar synaptische functie en plasticiteit bij zoogdieren. De ...

Hippocampale plakjes van knaagdieren worden frequent gebruikt bij het bestuderen van de synaptische functie en plasticiteit van zoogdieren. Hier presenteren wij een protocol voor het verkrijgen en bestuderen van plakjes van oudere ratten en muizen, die dikkere schedels en taaier bindweefsel hebben dan jongere ratten en muizen. Deze kenmerken kunnen de extractie en/of dissectie van de hersenen vertragen, waardoor werkelijke leeftijdsverschillen in synaptische functie en plasticiteit kunnen worden tenietgedaan of overdreven.Daarnaast kunnen veroudering en amyloïde pathologie de hippocampale schade die tijdens de dissectieprocedure is opgelopen verergeren, wat elke inferentie op basis van fysiologische beoordeling verder compliceert. In deze demonstratie bespreken we de stappen die tijdens de extractie- en dissectieprocedures zijn genomen om deze problemen te minimaliseren. Ten eerste wordt het brein snel geëxtraheerd en geplaatst in ijskoud, kunstmatig cerebrospinaal vocht met een laag calciumgehalte.De hippocampusgebieden worden vervolgens voorzichtig verwijderd op een ijskoude dissectietafel, waarna hippocampale plakjes worden geprepareerd met behulp van een vibratoom en geïncubeerd in gezuursstofrijke, calciumbevattende A CSF. Ten slotte worden synaptische potentialen en stromen opgewekt in meerdere hippocampale subregio's en geregistreerd; de verkregen resultaten tonen de effecten van veroudering en/of Alzheimer-achtige pathologie op de synaptische functie en plasticiteit aan. Correct gebruik van deze techniek heeft implicaties voor leeftijdsgerelateerde cognitieve achteruitgang en dementie als gevolg van de ziekte van Alzheimer.Dit is omdat synaptische dysfunctie een van de vroegste biomarkers is van deze klinische symptomen, wat deze procedure demonstreert. Vandaag zal Dr. Chris Norris, de PI van het lab, naast een grote gootsteen staan. Bereid het dissectiegebied voor op de verwijdering van de hersenen en de dissectie van de hippocampus.Zorg voor een gevouwen papieren handdoek, een scalpellamaasje nummer 11, BB-scharen, botstangen en een hippocampusinstrument, een gespecialiseerde dubbele spatel van fine surgical tool. Plaats daarnaast kleine chirurgische scharen, een dunne spatel, plastic peerpipetten, Watman filterpapier, een glazen petrischaal van 100 millimeter gevuld met ijs, een plastic lepel en een bekerglas met gedeeltelijk ontdooid calciumvrij CSF, bedekt met param.Na de decapitatie van de rat moet de hersenen zo snel mogelijk worden verwijderd. Plaats de kop op het keukenpapier en maak met het scalpel snel een incisie in het midden van de hoofdhuid, van het neusbeen tot het achterhoofdsbeen.Zorg ervoor dat de cutane spieren volledig worden doorgesneden, zodat de schedelnaden volledig bloot komen te liggen. Houd de kop stevig vast en snijd door de occipitale, pariëtale en frontale platen langs de middellijnnaad. Zorg ervoor dat de onderste schaar stevig tegen het binnenoppervlak van de schedel wordt gehouden en uit de buurt van de hersenen blijft.Dit is van essentieel belang om onbedoeld uithakken te voorkomen. Volgende dia. Plaats de kaken onder de linker pariëtale plaat en knijp de kaken samen, terwijl u naar boven en naar voren rolt om de pariëtale en occipitale platen weg te trekken.Gebruik indien nodig de Ron-curretten om ook de linker frontale plaat te verwijderen. Herhaal dit voor het andere hemisfeer. Zodra de platen zijn verschoven, kunnen de Ron-curretten of een schaar worden gebruikt om voorzichtig de dura mater weg te trekken of door te knippen die mogelijk aan de temporale platen vastzit en over het oppervlak van de hersenen is gespannen.Schuif nu de Ron-jurors tussen de hersenen en de rechter temporale plaat, waarbij druk wordt uitgeoefend richting de schedel en weg van de hersenen. Knijp en draai de temporale plaat weg totdat er een krakend geluid wordt gehoord of gevoeld. Herhaal dit voor de linkerzijde.Schuif de brede spatel vóór het hippocampus-instrument tussen het ventrale oppervlak van de hersenen en de onderste schedelplaten totdat deze volledig onder de hersenen ligt. Beweeg de spatel een paar keer zijwaarts van links naar rechts en naar voren en achteren om de intacte hersenzenuwen door te snijden met behulp van het hippocampus-instrument. Schep de hersenen eruit en dompel deze onder in calciumvrije A CSF bedekt met Parfum en laat dit ongeveer één minuut afkoelen.Om de hippocampi te extraheren, gebruikt u een lepel om de hersenen uit het A CSF te halen en plaatst u deze op watmanpapier dat is bevochtigd met CSF op het deksel van een ijskoude petrischaal. Verwijder met het scalpelblad het cerebellum en ongeveer een kwart van de rostrale frontale lobben. Snijd vervolgens door de intrahemisferische fissuur om de twee hemisferen volledig van elkaar te scheiden.Plaats één hemisfeer terug in de A CSF-slushie en zet de andere rechtop op de dissectietafel, zodanig dat het coronale vlak van de frontale kwab naar beneden is gericht; de witte hersenstam en middenhersenen moeten gemakkelijk te onderscheiden zijn van de roze of grijzige bovenliggende cortex. Lokaliseer de colliculi op de middenhersenen. Deze zien eruit als twee witte knobbeltjes en bevinden zich aan de bovenzijde van de hersenen.Houd in deze positie de middenhersenen voorzichtig op hun plaats met een schaar en schuif de spatel tussen de calli en de cortex. Trek vervolgens voorzichtig de hersenstam, de middenhersenen en de thalamus weg. Bindweefsel of bloedvaten moeten mogelijk met een schaar worden doorgeknipt.Gebruik de scherpe rand van de spatel om de fornix door te snijden, een wit vezelbundel die zich bevindt aan het anterieur dorsale deel van de hippocampus. Trek met de schaar voorzichtig de hersenstam, midbrain en thalamus weg zonder deze volledig los te snijden van de rest van de hersenen.De witte vezels die aan de onderzijde van de hippocampus een ondiepe hyperbool vormen, zouden in deze oriëntatie nu zichtbaar moeten zijn. Gebruik de transferpipet om voorzichtig wat A CSF in de opening onder de FIA te spuiten om de hippocampus van de cortex te scheiden. Schuif de spatel voorzichtig in deze opening en terwijl de hersenstam, middenhersenen en thalamus stevig met de schaar worden vastgehouden, wordt de hippocampus voorzichtig weggerold; trim vervolgens eventuele resterende cortex, bloedvaten en witte stof weg van de hippocampus.Spoel met een paar milliliters A CSF. Houd het weefsel met de transferpipet nat en koud met een CSF-slush. Verwijder vervolgens de andere hemisfeer en herhaal de dissectie om de ratten hippocampus te sectioneren.Vul het reservoir van de vibratoom met ijskoude, calciumvrije A CSF zodat de snijplaat en het mes volledig ondergedompeld zijn. Gebruik een scalpel om de rostrale en caudale uiteinden van elke hippocampus af te snijden en plaats ze tegen elkaar aan op de rostrale vlakken, waarbij de gyrus dentatus van elke hippocampus naar elkaar toe is gericht. Lijm het hersenweefsel op een montageblok en breng dit over naar de snijplaat van de vibratoom.Voor experimenten naar synaptische fysiologie worden secties van 400 micrometer aanbevolen. Gebruik een overbrengpipet met een brede opening om de coupes over te brengen naar een kleine petrischaal met ijskoud, calciumvrij CSF.Zodra het snijden is voltooid, worden de coupes overgebracht naar de bewaarkamer, gevuld met zuurstofrijk calciumhoudend A CSF. Breng de temperatuur in de kamer geleidelijk van 27 °C naar 32 °C om basis extracellular opnames uit te voeren. Bij acute coupes wordt de opnamekamer op de microscooptafel geplaatst, zodanig dat voorverwarmd A CSF via een stroomregelaar door zwaartekracht wordt toegevoerd en via een centrale vacuümleiding wordt afgevoerd.Breng met een klein schilderspenseel een slice over naar de opnamekamer, zodat deze is ondergedompeld in A CSF en rust op het geplaatste netje. Laat de slice 10 tot 15 minuten acclimatiseren. Terwijl de slice acclimatiseert, schakelt u de stimulator of stimulus-isolator in en draait u de output terug naar nul.Plaats vervolgens een stimulerende elektrode boven de slice in de regio van het stratum radiatum van ca2, nabij de grens met ca3. Laat de registreerelektrode zakken in het stratum radiatum van ca1, net tot het oppervlak van de slice wordt doorbroken. Zet de output van de stimulator hier op een gematigd niveau.De stimulus-isolator wordt ingesteld op ongeveer 150 microamps. Laat de stimulerende elektrode langzaam in kleine intervallen zakken totdat er een stimulus-artefact wordt geregistreerd. In CA1 worden zowel de stimulerende als de registrerende elektroden langzaam in intervallen verder verlaagd terwijl de CA1-responsen worden vastgelegd.Stel een curve voor de synaptische sterkte op totdat de amplitudes van de fiber volley en het excitatoire postsynaptische potentiaal maximale niveaus bereiken met behulp van een softwareprogramma voor acquisitie zoals clamp X. Gebruik vervolgens de software om stimuli af te geven bij een reeks intensiteiten en registreer de overeenkomstige activiteit in ca one. Het bereik en het aantal gebruikte stimulusintensiteitsniveaus moeten voldoende zijn om een sigmoïdale curve te genereren wanneer deze worden uitgezet tegen respectievelijk de FV- of EPSP-waarden.Om vervolgens de synaptische plasticiteit te onderzoeken, wordt de stimulusintensiteit voor elk plakje opnieuw ingesteld zodat een respons van 1 mV wordt opgewekt. Begin met de baseline-stimulatie bij een frequentie van 0,033 hertz EPSP. De hellingswaarden moeten gedurende ten minste 20 minuten stabiel zijn voorafgaand aan de inductie van respectievelijk langetermijnpotentiëring (LTP) of langetermijndepressie (LTD).Gebruik om een baseline-periode vast te leggen een clamp X-parameterbestand om elke 30 seconden te stimuleren en op te nemen. Open vervolgens om LTP te induceren een apart parameterbestand voor het induceren van LTP met een trein van 100 hertz stimulatie van één seconde, of meerdere korte bursts van 200 hertz stimulatie elke 200 milliseconden voor LTD-inductie. Dien 900 stimuluspulsen toe met een frequentie van 1 hertz.Schakel na de stimulus-trainen terug naar het baseline-parameterbestand en verzamel gedurende 60 minuten of langer synaptische responsen. Vergelijk de EPSP-hellingswaarden die vóór en 60 minuten na hoogfrequente of laagfrequente stimulatie zijn verkregen om de aanwezigheid van LTP, aangegeven door een toename in synaptische sterkte, of LTD, aangegeven door een afname in synaptische sterkte, vast te stellen. Men gaat er algemeen van uit dat beide processen kritieke mechanismen voor leren en geheugen weerspiegelen.Hier worden representatieve curven van de synaptische sterkte getoond van twee verschillende hippocampale coupes van twee APP PS.One-muizen. Eén muus werd behandeld met een nieuw ontstekingsremmend adeno-geassocieerd viraal reagens. De andere werd behandeld met een controle-viraal reagens.Zoals kan worden gezien wanneer een vergelijkbaar aantal presynaptische vezels wordt geactiveerd over de behandelcondities heen. Wanneer groepen vergelijkbare FV-amplitudes vertonen, zoals aangegeven op de x-as, is de curve van de met reagens a behandelde slice naar links verschoven, wat duidt op grotere EPSP-amplitudes. Deze gegevens tonen aan dat de basale synaptische sterkte groter is in de getoonde met reagens a behandelde slice.Hier zijn de resultaten van de LTP-experimenten die zijn uitgevoerd op dezelfde coupes. Let op dat de EPSP-hellingswaarden in de coupe met reagens a veel groter zijn ten opzichte van de controlecoupe tijdens de baseline van één uur na toediening van 100 hertz stimulatie, wat aangeeft dat de LTP aanwezig was in de coupe met reagens a, maar niet in de controlecoupe. Deze figuur laat zien hoe de EPSP-golfvormen eruitzagen in de muiscoupes met reagens A en de controlecoupes vóór en 60 minuten na toediening van 100 hertz stimulatie.De toename van de EPSP-helling in de periode na 100 hertz is zeer duidelijk in een plakje met reagens a, wat duidt op een gelijktijdige LTP. De tot nu toe getoonde experimenten in de figuren geven aan dat reagens A de synaptische sterkte verhoogt en LTP-tekorten verbetert. In een PP PS one-muis werden soortgelijke experimenten uitgevoerd op hippocampale LACS van oudere ratten.Hier worden de curven van de synaptische sterkte getoond van twee verschillende hippocampussnedes van een rat die is behandeld met een nieuw ontstekingsremmend geneesmiddel en een andere rat die is behandeld met een controle-voertuigreagens. Let op dat deze curven voor de twee snedes zeer vergelijkbaar zijn, wat aangeeft dat geneesmiddel A weinig effect heeft op de basale synaptische sterkte. Deze figuur toont de resultaten van LTD-experimenten die op dezelfde snedes zijn uitgevoerd.Let op dat, zoals gebruikelijk voor oudere ratten, de EPSP-hellingwaarden in de met vehicle behandelde slice zijn gedaald tijdens de baseline van één uur na toediening van een 1 Hz stimulatie. Echter vertonen de EPSP-hellingwaarden in de slice met geneesmiddel A weinig tot geen daling, wat duidt op de afwezigheid van LTD. Hier worden de EPSP-golfvormen getoond van de met geneesmiddel A en vehicle behandelde rat-slices vóór en 60 minuten na toediening van een 1 Hz stimulatie. De afname van de EPSP-helling in de periode na de 1 Hz stimulatie is zeer duidelijk in de vehicle-slice, maar niet in de slice met geneesmiddel A.De resultaten in deze figuren tonen aan dat geneesmiddel a de verschillen in plasticiteit bij oudere ratten verbetert door de inductie van LTD te blokkeren, maar de basale synaptische functie niet beïnvloedt. Deze gegevens laten zien dat meerdere parameters van de synaptische functie en plasticiteit bij oudere ratten en Alzheimer-modelmuizen gemoduleerd kunnen worden door experimentele behandelingen, en benadrukken het nut van acute hippocampale coupes voor het onderzoeken van het noötrope en/of neuroprotectieve potentieel van nieuwe experimentele geneesmiddelen en reagentia. Bij het uitvoeren van deze procedure is het belangrijk om een balans te vinden tussen de snelheid van het extraheren van de hersenen en de precisie en voorzichtigheid bij het dissekeren, snijden en hanteren van de hippocampus voor elektrofysiologische metingen.

preparation-acute-hippocampal-slices-from-rats-transgenic-mice-for

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

Een kenmerk van de ziekte van Alzheimer is de hoogte van...

Voorbereiding van oligomere β-amyloïde 1-42 En Inductie van synaptische plasticiteit Waardevermindering op hippocampus Slices

Source: McLeod, F., et al. Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices. J. Vis. Exp. (2017).This video demonstrates a method for visualizing synaptic markers in hippocampal brain slices using confocal immunofluorescence analysis. The slices are immunostained with primary antibodies targeting presynaptic and postsynaptic markers, followed by fluorophore-conjugated secondary antibodies. The labeled markers are then visualized using confocal microscopy to evaluate the synaptic...

Microscopic Analysis of Synapses in Mouse Hippocampal Slices Using Immunofluorescence

Dit document presenteert een complete methodiek voor te bereiden en te...

Betere voorbereiding en Conservering van hippocampus Mouse Slices voor een zeer stabiele en reproduceerbare opname van langlopende Potentiëring

Deze video-artikel beschrijft experimentele procedures om langetermijnplasticiteit en de daarmee geassocieerde processen zoals synaptische tagging, capture en cross-tagging in de CA1-piramideneuronen te bestuderen met behulp van acute hippocampus-sneden van knaagdieren.

Onderzoek van Synaptic Tagging / Capture en Cross-capture met Acute hippocampus Plakjes van Knaagdieren

Dit protocol laat zien op de uitvoering van een geoptimaliseerde N-methyl-D-glucamine (NMDG) beschermende herstelmethode van hersenen segment voorbereiding. Een formulering van één medium wordt gebruikt om op betrouwbare wijze het verkrijgen van gezonde hersenen segmenten van dieren van alle leeftijden en voor diverse experimentele toepassingen.

Voorbereiding van Acute hersenen segmenten met behulp van een geoptimaliseerde N-Methyl-D-glucamine beschermende herstelmethode

Dit protocol beschrijft de stabilisatie van het zuurstofgehalte in een klein volume van gerecycled buffer en methodologische aspecten van de opname van de activiteit-afhankelijke synaptische plasticiteit in verzonken acute hippocampal plakjes.

Synaptische plasticiteit opnemen in Acute Hippocampal plakjes onderhouden in een kleine volumes Recycling-, perfusie-, en onderdompeling-type kamer systeem

Een protocol voor het nauwkeurig identificeren en analyseren van synapsen in hippocampal plakjes met immunofluorescentie wordt in dit artikel beschreven.

Evaluatie van SYNAPS dichtheid in Hippocampal knaagdier hersenen plakjes

Dit is een protocol voor acute slice voorbereiding van volwassen en veroudering muis hippocampi die gebruik maakt van transcardiale perfusie en slice snijden met ijskoude NMDG-aCSF om hypoxische schade aan het weefsel te verminderen. De resulterende plakjes blijven gedurende vele uren gezond en zijn geschikt voor langdurige patch-clamp en field-recordings.

Het minimaliseren van Hypoxie in Hippocampal Slices van volwassen en oudere muizen

Dit artikel is bedoeld om een systematisch protocol te beschrijven om horizontale hippocampale hersenplakken bij muizen te verkrijgen. Het doel van deze methodologie is om de integriteit van hippocampale vezelroutes te behouden, zoals het perforantpad en het bemoste vezelkanaal om deukende gyrusgerelateerde neurologische processen te beoordelen.

Horizontale Hippocampal Plakjes van de Hersenen van de Muis

We presenteren een protocol om acute plakjes te bereiden van de dorsaal-intermediaire hippocampus van muizen. We vergelijken dit transversale preparaat met coronale snijden in termen van kwaliteit van opnames en behoud van morfologische kenmerken van opgenomen neuronen.

Voorbereiding van acute plakjes van Dorsale Hippocampus voor hele celopname en neuronale reconstructie in de dentaat gyrus van volwassen muizen

Leer hoe u acute hippocampusplakjes bereidt van oude ratten en transgene muizen om synaptische veranderingen bij veroudering en amyloïdpathologie te bestuderen. Deze methode minimaliseert beschadiging tijdens dissectie.

Voorbereiding van de Acute hippocampus Plakjes van ratten en transgene muizen voor de Studie van Synaptic Wijzigingen bij het ouder worden en amyloïdpathologie (Video) | JoVE Journal

Voorbereiding van de Acute hippocampus Plakjes van ratten en transgene muizen voor de Studie van Synaptic Wijzigingen bij het ouder worden en amyloïdpathologie

Meer video's verkennen