Visualisatie en groottebepaling van Faustovirus met behulp van elektronenmicroscopie

Neem een cultuur van amoeben die zijn geïnfecteerd met een reuzenvirus dat bekend staat als het Faustovirus.

Verzamel het cultuursupernatans dat het Faustovirus bevat.

Breng het supernatant aan op een glow-discharged elektronenmicroscopie-grid.

Incubeer om de adsorptie van virusdeeltjes op het rooster mogelijk te maken.

Dep de grid op filterpapier om ongebonden viruspartikels te verwijderen.

Breng een druppel ammoniummolybdaat aan.

Ammoniummolybdaat fungeert als een negatieve kleuring door zich aan het raster rond het virus te binden en de achtergrond te verduisteren om het contrast tijdens de beeldvorming te verhogen.

Verwijder overtollig ammoniummolybdaat door het raster op filterpapier te blotten.

Plaats het grid in een petrischaal en laat het drogen.

Plaats vervolgens het raster op de monsterhouder.

Plaats de houder in de elektronenmicroscoop.

Maak een afbeelding van het Faustovirus en meet de grootte van het Faustovirus voor verdere analyse.

Voor het uitvoeren van elektronenmicroscopie brengt u vijf microliter van de positieve monsteroplossing aan op een glow-discharged grid en incubeert u dit gedurende ongeveer 20 minuten bij kamertemperatuur. Droog het grid zorgvuldig en voeg vervolgens een kleine hoeveelheid 1% ammoniummolybdaat toe; incubeer dit gedurende 10 seconden. Nadat de druppel voorzichtig is verwijderd, laat u het grid vijf minuten drogen. Stel vervolgens de elektronenmicroscoop in op 20 kiloelectronvolt. Plaats daarna het grid op de houder en voer de houder in de microscoop in. Klik op het pictogram voor het vacuümoverzicht en controleer het vacuüm. Sluit vervolgens de kleppen en stel een spot size van vijf en een vergroting van 25.0 in voordat u begint met de observatie. Nadat u een reuzenvirus op het acquisitiescherm heeft gelokaliseerd, gebruikt u de meettool om het virus te meten.

Voer de moleculaire biologie en sequencing van het virale genoom uit volgens het tekstprotocol.