Cel Capture Met behulp van een apparaat Microfluïdische
1 oktober 2007
De apparaten zoals we ze voorbereid hebben, worden verpakt in kits van 10 of 20, en wanneer ze aankomen, worden ze koud verzonden in een doos en de kit bevat alle componenten die je nodig hebt om te draaien. Het experiment in de kit zijn, is een pakket met alle spuiten en buffers, die op kamertemperatuur kunnen blijven. Er is ook een kopie van het protocol dat we in dit experiment gaan volgen.
Er is ook een gekoelde doos, die de eigenlijke apparaten en alle buffers bevat die moeten worden gekoeld. Meestal worden kits verpakt in groepen van 10 of 20. Wanneer ze niet in gebruik zijn, moeten de kits worden gekoeld.
Elke spuit en elk kit-onderdeel is zorgvuldig gelabeld en de labels komen overeen met de tabel in het protocol dat we volgen. Dus er is geen dubbelzinnigheid over welke spuit of kit-onderdeel moet worden gebruikt in de individuele stappen. Na het uitpakken van de apparaten en het plaatsen ervan in een biologische veiligheidskast, zullen we de procedure uitvoeren om de neutrofielen te isoleren en ze te lyseren voor downstream genomische toepassingen omdat we dat gaan doen, omdat de levenstijd die we krijgen wordt gebruikt voor het isoleren van of, of we zullen het RNA uit het cellysaat extraheren.
Daarom willen we ervoor zorgen dat ons gebied schoon is, niet alleen in de steriele zin, maar ook schoon van eventuele RNA's die typisch in het milieu aanwezig zijn. Het is dus erg belangrijk om al je gebied en je apparaten af te vegen met de oplossing die RNA's vernietigt. Dus vegen we typisch al onze gereedschappen en onze werkoppervlakken af met RNA SAP of RNAs away, die je bij een aantal fabrikanten kunt krijgen.
Het apparaat is verpakt in een zak met warmtesluiting. Elk apparaat is verzegeld en voorzien van een streepjescode. U moet deze streepjescode noteren als u met klinische monsters werkt.
Dus het apparaat is ontsloten, de klep wordt verwijderd en het wordt in de pomp geplaatst. Het houder van het manifold apparaat. Het bloedmonster dat we gebruiken, is een monster van vol bloed. We gaan het door de standaard een mil BD-spuit laten stromen, en dit is spuit een gelabeld.
Meestal wordt er het volgende gedaan: de spuit wordt uit de verpakking gehaald en de dop wordt voorzichtig van de bloedbuis verwijderd. En wat je doet, is dat je 700 microliter of 0,7 ml bloed laat vallen en de helft daarvan of 350 microliter in een 1,5 ml buis injecteert. Bedankt. Op die manier kan je bloed verder worden verwerkt.
Je buis met bloed kan worden doorgestuurd en toch heb je nog meer bloed over voor het geval het apparaat faalt. Dus wat we nu gaan doen, is dat we de spuit die bloed bevat, inladen op deze naald, die is verbonden met een stuk buis met dit apparaat. We willen heel voorzichtig zijn met de microfluïdische isolatieapparatuur.
We willen er heel voorzichtig mee zijn om geen luchtbellen in het apparaat of in het apparaat te introduceren, anders zal het apparaat defect raken. Dus wat we meestal doen, is dat we de spuit nemen en op de zuiger drukken en de vloeistof toevoegen aan het bovenoppervlak van het apparaat, ervoor zorgen dat het volledig is verbonden voordat we alle vloeistof hebben uitgeworpen. We stoppen en verwijderen voorzichtig het spuitlichaam van de naald en vullen in feite de naaldtip of de connector van de naald met de resterende buffer in deze spuit.
We gooien die weg. We nemen dan onze spuit met bloed en we steken hem in deze lure hub. Wees voorzichtig om het bloed niet te morsen en wees voorzichtig om geen luchtbellen te introduceren.
Het is het beste om een kemo te gebruiken die het lichaam van de spuit en de buis vasthoudt voor het geval er bloed morst. Zodra de spuit is verbonden met de buisbehuizing of de naald, geven we een paar scherpe tikjes om eventuele luchtbellen te verwijderen die zich mogelijk bij de connector bevinden. Deze spuit wordt vervolgens op de spuitpomp geladen en is beveiligd met de vergrendelingsschroef.
De spuitpomp wordt ingeschakeld en is al voorgeprogrammeerd op onze stromingscondities. We gaan dit bloed door het apparaat laten stromen met 30 microliter per minuut. Zodra het spuitlichaam in de spuitpomp is geladen, gaan we de knop indrukken op de, de beweegbare zuigerarm en deze naar beneden schuiven totdat deze de bovenkant van de zuiger raakt en vloeistof door de punt hiervan begint te drukken.
Het is een stompe punt, roestvrijstalen naald. Zodra we weten dat het systeem is voorbereid, gaan we op 'run' drukken. Om de bloedstroom te beginnen, drukt u op 'stop' om deze te stoppen en vervolgens neemt u een schone 1,5 ml centrifugebuis of fendorbuis en we gaan voorzichtig loskoppelen.
Ontkoppelen slechts één, ontkoppel de buis van één poort van het apparaat. Zodra deze buis is losgekoppeld, steken we deze in de 1,5 ml fendorbuis. We drukken op 'run' om de bloedstroom opnieuw te starten.
En wanneer we een druppel bloed zien vormen, stoppen we de pomp en steken we deze in de inlaat die we zojuist in het apparaat hebben geopend. We drukken op 'run' om de bloedstroom te beginnen en we stellen een timer in voor vijf minuten. We willen ervoor zorgen dat het bloed alle kamers gelijkmatig vult en dat er geen duidelijke luchtbellen in het apparaat zijn.
Als er luchtbellen zijn die de stroom in een van de kamers blokkeren, kunt u een paar pincetten nemen en deze langs de kleine kanalen laten lopen die leiden naar de opvangkamers of de kleine kanalen die de opvangkamers verlaten. Dit apparaat vult zich mooi, dus na vijf minuten drukt u op 'stop' op de spuitpomp om de bloedstroom te stoppen, u maakt de klemmen voor de spuit los en haalt deze uit de houder van de spuitpomp. Dan gaan we spuitnummer drie gebruiken, die is geladen met nuclease-vrij PBS. We gaan, we gaan, we gaan opnieuw ervoor zorgen dat het oppervlak van het apparaat is verbonden om eventuele luchtbellen te voorkomen, we tikken op de sp
Bekijk het volledige transcript en krijg toegang tot duizenden wetenschappelijke video's
Overzicht
Dit artikel bespreekt de voorbereiding en verpakking van experimentele kits voor neurowetenschappelijk onderzoek. Elke kit bevat essentiële componenten, inclusief spuiten, buffers en protocollen, zodat onderzoekers alles hebben wat ze nodig hebben voor hun experimenten.
Belangrijke studiecomponenten
Wetenschapsgebied
- Neurowetenschappen
- Experimentele methoden
- Onderzoeksprotocollen
Achtergrond
- Kits zijn ontworpen voor een efficiënte experimentele opstelling.
- Componenten zijn verpakt om stabiliteit en bruikbaarheid te behouden.
- Protocollen begeleiden onderzoekers door het experimentele proces.
- Juiste opslagomstandigheden zijn cruciaal voor de componenten van de kit.
Doel van het onderzoek
- Om een uitgebreid overzicht te geven van het voorbereidingsproces van de kit.
- Om ervoor te zorgen dat onderzoekers het belang van componentopslag begrijpen.
- Om reproduceerbaarheid in neurowetenschappelijke experimenten te faciliteren.
Gebruikte methoden
- Kits worden geassembleerd met alle benodigde componenten.
- Componenten worden op geschikte temperaturen bewaard.
- Protocollen zijn inbegrepen om experimentele procedures te begeleiden.
- Verzendmethoden zijn geoptimaliseerd voor de stabiliteit van componenten.
Belangrijkste resultaten
- Kits zijn verkrijgbaar in groepen van 10 of 20.
- Componenten kunnen op kamertemperatuur blijven behalve specifieke items.
- Koeling is vereist voor bepaalde componenten om hun integriteit te behouden.
- Duidelijke protocollen verhogen de bruikbaarheid van de kits.
Conclusies
- Juiste verpakking en opslag zijn essentieel voor experimenteel succes.
- Onderzoekers profiteren van goed voorbereide kits die het proces stroomlijnen.
- Begrip van kitcomponenten helpt bij effectief experimenteel ontwerp.
Veelgestelde vragen
Executive Industry Relevance
Microfluidic cell capture enables precise isolation of specific cell populations from complex biological samples like whole blood, supporting target validation and biomarker discovery in early drug development. By providing a reproducible, closed-system platform for isolating viable cells, the technology reduces pre-analytical variability and enhances data quality for downstream genomic and proteomic analyses. This capability is particularly valuable for immunology and immuno-oncology programs where rare cell subsets, such as neutrophils or CD4+ lymphocytes, serve as critical pharmacodynamic or predictive biomarkers.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Scientific Value: Enables isolation of target cell populations (e.g., neutrophils, CD4+ cells) from whole blood for functional validation and mechanistic de-risking of therapeutic hypotheses.
- Operational Value: Provides a standardized, kit-based workflow that minimizes user variability and ensures consistent cell recovery across experiments.
Screening & Assay Development
- Scientific Value: Generates purified cell lysates suitable for downstream applications such as RNA extraction, protein analysis, or immunofluorescence staining, enabling robust assay development.
- Operational Value: Integrates capture, washing, and lysis/staining steps in a closed microfluidic system, reducing hands-on time and contamination risk.
Translational & Preclinical Research
- Scientific Value: Supports biomarker-aligned workflows by enabling isolation of clinically relevant cell subsets (e.g., CD4+ cells) for correlative studies and patient stratification.
- Operational Value: Compatible with fixation and storage protocols (e.g., PFA, cryopreservation), allowing batch processing and delayed analysis for large-scale preclinical or clinical sample sets.
Pipeline & Workflow Integration
The microfluidic cell capture platform fits within the early discovery continuum, supporting progression from hypothesis-driven target validation to assay-ready sample preparation and biomarker-aligned preclinical evaluation.
- Discovery Biology: Enables isolation of specific immune cell populations to interrogate disease mechanisms and validate target engagement in functional assays.
- Screening: Produces consistent, high-purity cell inputs for omics-based screening or compound effect profiling in purified populations.
- Analytics: Delivers quantifiable outputs such as cell count, viability, and molecular yield (RNA, protein) that inform go/no-go decisions in target validation.
- Translational Research: Facilitates continuity from discovery to preclinical by enabling biomarker-aligned cell isolation (e.g., CD4+ counts) that can be tracked across disease models.
- Enterprise Reuse: Kit-based design with standardized components and barcoded devices supports scalability and reuse across multiple projects and sites.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Enhances target validation confidence by reducing biological noise through precise cell subset isolation.
- Operational Value: Ensures reproducibility via standardized protocols, labeled components, and closed-system fluid handling.
- Strategic Value: Improves decision-making efficiency by enabling rapid, reliable generation of mechanistically relevant sample types.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization of targets by providing cleaner, more predictive biological readouts early in the discovery pipeline.
Implementation Considerations
- Requires training in aseptic technique and microfluidic device handling to prevent contamination and air bubble introduction.
- Dependent on syringe pump infrastructure and temperature-controlled storage for kit components (reagents and devices).
- Necessitates standardization of flow rates, volumes, and washing protocols across users to ensure data comparability.
- Must be adapted to different cell types and downstream applications (e.g., RNA extraction vs. immunofluorescence) with corresponding buffer and reagent optimization.
- Limited by device dead volume (~50 µL), requiring careful reagent plugging strategies (e.g., air-RELT plug) to ensure complete sample recovery.
