Parallelle plaat flow kamer en Continuous Flow Circuit te endotheliale progenitorcellen Evalueer onder laminaire stroom Afschuifspanning

Het algemene doel van dit videoartikel is om een techniek te beschrijven om adherende cellen te onderwerpen aan laminaire stromingsomstandigheden en de reactie te evalueren op goed meetbare vloeistofschuifspanningen. Dit wordt bereikt door eerst de stromingscircuit zonder de stromingskamer te assembleren. Het circuit omvat de reservoirpuls, demper, harde slang, zachte slang, vierweg stopcocks en aangesloten lure-adapters, evenals een luchtfilter.

De volgende stap is om het circuit te vullen met de gewenste profuse acht, zoals celmedium onder steriele omstandigheden, en vervolgens de pomp te starten om de pulsdemper te vullen en de slang van lucht te ontdoen. Dit wordt gevolgd door het inbrengen van de cel gezeten glijbaan in de bodemplaat van de stromingskamer. De laatste stap van de procedure is de volledige assemblage van het stromingscircuit met de stromingskamer in de lijn.

Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de uitlijning van fluorescent gelabelde endotheliale progenitorchellen onder blootstelling aan vloeistofschuifspanning laten zien via de transparante kamer met behulp van een fluorescerend microscoop Om het functionele gedrag van cellen te bestuderen. Het is vaak noodzakelijk om de in vivo-fysiologie te imiteren door de cellen aan vloeistofschuifspanning te onderwerpen. We hebben een parallelle plaat stromingskamer en een continu stromingscircuit ontworpen, die ons in staat stellen om de cellen onder stromingsomstandigheden te bestuderen en ze door de transparante kamer te observeren.

Deze techniek kan dienen als een waardevol onderzoeksinstrument voor de gebieden van geneeskunde en techniek. Onze stromingskamer maakt intermittente of real-time visualisatie van cellen onder stroming mogelijk met behulp van een rechtopstaande of omgekeerde microscoop. Bovendien stelt het ontwerp van Dr. Ach Nick onderzoekers in staat om cellen op transparante of radiopaque oppervlakken te beeldvormen met behulp van standaard microscooplenzen.

Bovendien kan het als een belangrijk hulpmiddel in de farmacologische onderzoek dienen om het effect van geneesmiddelen op cellen onder stromingsomstandigheden te bestuderen. Visualisatie van de opstelling is van cruciaal belang omdat een aantal van de stappen moeilijk te beheersen zijn door alleen een protocol te lezen. Ik zal stapsgewijze instructies geven over hoe u de stromingskamer en stromingscircuit kunt instellen die gewoonlijk wordt gebruikt in het laboratorium van Dr. Ock Next Om het stromingscircuit te assembleren.

Begin met het bevestigen van een segment van 36 inch harde slang aan het ene uiteinde van een pulsdemper aan het andere uiteinde. Bevestig een segment van 18 inch zachte slang. Plaats een mannelijke lure-adapter van een achtste inch aan het einde van de 18 inch zachte slangsectie.

Verbind de mannelijke lure met een vrouwelijke lure-adapter van een achtste inch. Bevestig de vrouwelijke lure aan een nieuw segment van 18 inch zachte slang. Boor drie gaten in een glasbekerdop van 250 milliliter.

Om de slang te passen, steekt u een segment van 1,5 inch zachte slang in één gat. Als luchtventilatie. Steek de vrije uiteinden van de harde en zachte slang door de andere twee gaten in de dop in de glazen fles van 250 milliliter, die als reservoir zal fungeren.

Zorg ervoor dat de harde slang de bodem van het reservoir bereikt. Het behoud van steriliteit gedurende de installatie van het circuit is cruciaal voor het succes van deze procedure. Daarom moeten alle onderdelen worden gesteriliseerd en moet u gedurende de hele procedure steriele handschoenen dragen.

Naast de geassembleerde onderdelen, moeten deze onderdelen worden gesteriliseerd. Eén volledige stromingskamer, drie bij twee inch segmenten van zachte slang, een mannelijke en een vrouwelijke, een achtste inch lure-adapter, vier halve inch platkopschroeven, 6 5 16 inch, acht 30 seconden. Inch tracks per inch, platkopschroeven, een paar pincetten, één glazen glijbaan en twee handdoeken gesteriliseerd door stoom.

Steriliseren bij 121 graden Celsius gedurende 60 minuten. Plaats de stromingskamer van het stromingscircuit, de vier op vier weg stopcocks een op een weg, stopcock en alle gesteriliseerde onderdelen op dit steriele veld. Terwijl u steriele handschoenen draagt, verbindt u de twee vierweg stopcocks.

Plaats doppen op de open monsterpoorten. Haal de mannelijke en vrouwelijke lure-adapters los die de twee zachte slangsegmenten van het stromingscircuit verbinden en de verbonden stopcocks invoegen. Bevestig de zachte slang die in het reservoir is ingebracht in een spuit van 30 milliliter en verwijder de spuitpomp.

Vul de fles met 125 milliliter EPC-medium. Verbind de zachte slang opnieuw met de stopcock. Plaats een steriele spuitfilter in de luchtopening.

Breng nu het stromingscircuit over naar een bevochtigde incubator bij 37 graden Celsius, 5% kooldioxide. Klem de harde slang in de master flex rollerpompkop die is geïndiceerd voor gebruik met dit type coal Palmer-slang. Zorg ervoor dat de slang niet overlapt met de montagesporen van de rolpomp.

Markeer de slang waar deze de pompkop verlaat aan beide zijden met een markeerstift. Nadat u ervoor hebt gezorgd dat alle stopcocks dicht zijn naar de monsterpoorten en open zijn langs het stromingscircuit, start u de pomp. Controleer de stromingsrichting.

De PERFUSE acht moet vanuit het glazen reservoir door de harde slang in de demper gaan. Gebruik voor de assemblage van de stromingskamer steriele handschoenen om één segment van twee inch zachte slang te verbinden met een vrouwelijke lure-adapter van een achtste inch. Verbind een ander segment van twee inch zachte slang met een mannelijke lure-adapter van een achtste inch.

Bevestig de twee inch zachte slang met vrouwelijke lure-adapter aan de instroompoort en de twee inch zachte slang met mannelijke lure-adapter aan de uitstroompoort. Bevestig vierweg stopcocks aan beide van deze lure-adapters. Verbind het resterende twee inch zachte slangstuk aan de zijpoortconnector die uit de bubbelval komt en bevestig een eenweg stopcock met behulp van steriele pincetten.

Verwijder de cel gezaaide glijbaan uit de celcultuurvat en plaats deze in de uitsparing op de bodemplaat van de stromingskamer. Zorg ervoor dat de glijbaan wordt geplaatst met de zijde van de gezeten cel naar b