Name: Parallelle plaat flow kamer en Continuous Flow Circuit te endotheliale progenitorcellen Evalueer onder laminaire stroom Afschuifspanning (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-01-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Leer een methode om endotheliale progenitorcellen bloot te stellen aan laminaire stroom en afschuifspanning met een doorzichtige parallelle plaatkamer. Deze techniek maakt real-time visualisatie en analyse van celgedrag onder mechanische belasting mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs willen graag Joe Owen te bedanken in de Biomedische Instrument en Machine Shop voor zijn onvermoeibare inspanningen in bewerking en de montage van de doorstroming kamer delen en Matt Maudsley van Leica Microsystems voor de ondersteuning in technieken om de afbeelding cellen doorstroming kamers. We zijn dank verschuldigd aan Kevin Collins van Duke Perfusie Services en Dr Steve Wallace bij de afdeling Biomedical Engineering voor nuttige suggesties over stroom circuit design. Wij zouden ook graag de National Science Foundation Graduate Research Fellowship Program bedanken voor de ondersteuning van Alexandra Jantzen en de NIH voor hun steun door middel van Grant &quot;Autologe EPC-voering aan biocompatibiliteit van de bloedsomloop te verbeteren apparaten assist&quot; RC1HL099863-01.

<ol><li>Bhat, V. D., Truskey, G. A., Reichert, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibronectin+and+avidin-biotin+as+a+heterogeneous+ligand+system+for+enhanced+endothelial+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Mater.+Res%22%5BJournal%5D)">Fibronectin and avidin-biotin as a heterogeneous ligand system for enhanced endothelial cell adhesion.</a> J. Biomed. Mater. Res. 41, 377-385 (1998).</li>
<li>Broxmeyer, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cord+blood+stem+and+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Cord blood stem and progenitor cells.</a> Methods Enzymol. 419, 439-473 (2006).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aAchneck%2C+HE+%22American+Heart+Association+Scientific+Sessions%2C+Abstract+Oral+Sessions%2C+Medical+Aspects+End+Stage+Heart+Failure%3A+Transplantation+and+Device+Therapies%22">American Heart Association Scientific Sessions, Abstract Oral Sessions, Medical Aspects End Stage Heart Failure: Transplantation and Device Therapies</a>. , (2010).</li>
<li>Brown, M. A., Wallace, C. S., Angelos, M., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+umbilical+cord+blood-derived+late+outgrowth+endothelial+progenitor+cells+exposed+to+laminar+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Tissue.+Eng.+Part.+A%22%5BJournal%5D)">Characterization of umbilical cord blood-derived late outgrowth endothelial progenitor cells exposed to laminar shear stress.</a> Tissue. Eng. Part. A. 15, 3575-3587 (2009).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerating+titanium+ventricular+assist+device+surfaces+after+gold%2Fpalladium+coating+for+scanning+electron+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microsc.+Res.+Tech%22%5BJournal%5D)">Regenerating titanium ventricular assist device surfaces after gold/palladium coating for scanning electron microscopy.</a> Microsc. Res. Tech. 73, 71-76 (2010).</li>
<li>Achneck, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biocompatibility+of+titanium+cardiovascular+devices+seeded+with+autologous+blood-derived+endothelial+progenitor+cells%3A+EPC-seeded+antithrombotic+Ti+Implants%5BTitle%5D)+AND+%22Biomaterials%22%5BJournal%5D)">The biocompatibility of titanium cardiovascular devices seeded with autologous blood-derived endothelial progenitor cells: EPC-seeded antithrombotic Ti Implants.</a> Biomaterials. 32, 10-18 (2011).</li>
<li>Rinker, K. D., Prabhakar, V., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+contact+time+and+force+on+monocyte+adhesion+to+vascular+endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Effect of contact time and force on monocyte adhesion to vascular endothelium.</a> Biophys. J. 80, 1722-1732 (2001).</li>
<li>Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F. Ch. 2. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTruskey%2C+GA+%22Transport+Phenomena+in+Biological+Systems%22">Transport Phenomena in Biological Systems</a>. Horton, M. J. , Pearson Education. (2004).</li>
<li>Truskey, G. A., Yuan, F., Katz, D. F. Ch. 2. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTruskey%2C+GA+%22Transport+Phenomena+in+Biological+Systems%22">Transport Phenomena in Biological Systems</a>. Horton, M. J. , Pearson Education. (2009).</li>
<li>Allen, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasma+nitrite+response+and+arterial+reactivity+differentiate+vascular+health+and+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Nitric+Oxide%22%5BJournal%5D)">Plasma nitrite response and arterial reactivity differentiate vascular health and performance.</a> Nitric Oxide. 20, 231-237 (2009).</li>
<li>Xiao, Y., Truskey, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+receptor-ligand+affinity+on+the+strength+of+endothelial+cell+adhesion%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Effect of receptor-ligand affinity on the strength of endothelial cell adhesion.</a> Biophys. J. 71, 2869-2884 (1996).</li>
<li>Conant, C. G., Schwartz, M. A., Nevill, T., Ionescu-Zanetti, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet+Adhesion+and+Aggregation+Under+Flow+using+Microfluidic+Flow+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Platelet Adhesion and Aggregation Under Flow using Microfluidic Flow Cells.</a> J. Vis. Exp. (32), e1644-e1644 (2009).</li>
<li>Conant, C. G., Schwartz, M. A., Ionescu-Zanetti, C. W. ell <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((plate-coupled+microfluidic+devices+designed+for+facile+image-based+cell+adhesion+and+transmigration+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomol.+Screen%22%5BJournal%5D)">plate-coupled microfluidic devices designed for facile image-based cell adhesion and transmigration assays.</a> J. Biomol. Screen. 15, 102-106 (2010).</li>
<li>Conant, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+well-plate+microfluidic+devices+to+conduct+shear-based+thrombosis+assays%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lab.+Autom%22%5BJournal%5D)">Using well-plate microfluidic devices to conduct shear-based thrombosis assays.</a> J. Lab. Autom. 16, 148-152 (2011).</li>
<li>Metaxa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide-dependent+stimulation+of+endothelial+cell+proliferation+by+sustained+high+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart.+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide-dependent stimulation of endothelial cell proliferation by sustained high flow.</a> Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 295, H736-H742 (2008).</li>
<li>Radel, C., Carlile-Klusacek, M., Rizzo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Participation+of+caveolae+in+beta1+integrin-mediated+mechanotransduction%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+Biophys.+Res.+Commun%22%5BJournal%5D)">Participation of caveolae in beta1 integrin-mediated mechanotransduction.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 358, 626-631 (2007).</li>
<li>Wang, X. L., Fu, A., Spiro, C., Lee, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Proteomic+Analysis+of+Vascular+Endothelial+Cells-Effects+of+Laminar+Shear+Stress+and+High+Glucose%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Proteomics.+Bioinform%22%5BJournal%5D)">Proteomic Analysis of Vascular Endothelial Cells-Effects of Laminar Shear Stress and High Glucose.</a> J. Proteomics. Bioinform. 2, 445-445 (2009).</li>
<li>Elfervig, M. K., Minchew, J. T., Francke, E., Tsuzaki, M., Banes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-1beta+sensitizes+intervertebral+disc+annulus+cells+to+fluid-induced+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Biochem%22%5BJournal%5D)">IL-1beta sensitizes intervertebral disc annulus cells to fluid-induced shear stress.</a> J. Cell. Biochem. 82, 290-298 (2001).</li>
<li>Archambault, J. M., Elfervig-Wall, M. K., Tsuzaki, M., Herzog, W., Banes, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rabbit+tendon+cells+produce+MMP-3+in+response+to+fluid+flow+without+significant+calcium+transients%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomech%22%5BJournal%5D)">Rabbit tendon cells produce MMP-3 in response to fluid flow without significant calcium transients.</a> J. Biomech. 35, 303-309 (2002).</li>
<li>Patton, J. T., Menter, D. G., Benson, D. M., Nicolson, G. L., McIntire, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+analysis+of+tumor+cells+flowing+in+a+parallel+plate+chamber+to+determine+their+adhesion+stabilization+lag+time%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Motil.+Cytoskeleton%22%5BJournal%5D)">Computerized analysis of tumor cells flowing in a parallel plate chamber to determine their adhesion stabilization lag time.</a> Cell. Motil. Cytoskeleton. 26, 88-98 (1993).</li>
<li>Wiese, G., Barthel, S. R., Dimitroff, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+Physiologic+E-Selectin-Mediated+Leukocyte+Rolling+on+Microvascular+Endothelium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Analysis of Physiologic E-Selectin-Mediated Leukocyte Rolling on Microvascular Endothelium.</a> J. Vis. Exp. (24), e1009-e1009 (2009).</li>
<li>Kaper, H. J., Busscher, H. J., Norde, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+poly%28ethylene+oxide%29+brushes+on+glass+surfaces+and+adhesion+of+Staphylococcus+epidermidis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Characterization of poly(ethylene oxide) brushes on glass surfaces and adhesion of Staphylococcus epidermidis.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 14, 313-324 (2003).</li>
<li>Bakker, D. P., Plaats, A. vander, Verkerke, G. J., Busscher, H. J., van der Mei, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+velocity+profiles+for+different+flow+chamber+designs+used+in+studies+of+microbial+adhesion+to+surfaces%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Comparison of velocity profiles for different flow chamber designs used in studies of microbial adhesion to surfaces.</a> Appl. Environ. Microbiol. 69, 6280-6287 (2003).</li>
<li>Angelos, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+adhesion+of+umbilical+cord+blood+endothelial+progenitor+cells+under+laminar+shear+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys.+J%22%5BJournal%5D)">Dynamic adhesion of umbilical cord blood endothelial progenitor cells under laminar shear stress.</a> Biophys. J. 99, 3545-3554 (2010).</li>
<li>Baker, G. R., Sullam, P. M., Levin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+fluorescent+method+to+internally+label+platelets+suitable+for+physiological+measurements%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Hematol%22%5BJournal%5D)">A simple, fluorescent method to internally label platelets suitable for physiological measurements.</a> Am. J. Hematol. 56, 17-25 (1997).</li>
</ol>

De productie en de vrije toegang van deze video-artikel wordt gesponsord door Cole-Parmer Instrument Co

Onze stroom circuit en flow kamer kunnen we hechtende cellen, zoals EPC's, om bepaalde vloeistof schuifspanningen onderwerp. Omdat de kamer boven-en onderkant zijn transparant, celadhesie en morfologie kan worden geëvalueerd in real-time, door de kamer zelf, of na een stroom experiment en demontage van de stroming kamer. Op dat punt kan cellen worden geoogst onder steriele omstandigheden en een re-plated, of gebruikt om hun DNA of RNA, enz., te verzamelen voor verdere analyse. Om dit te bereiken laminaire stroming, moet het ontwerp van de kamer zodanig zijn dat een aantal voorwaarden wordt voldaan. Ten eerste moet de stroom worden laminair, die kunnen worden geverifieerd door het berekenen van het getal van Reynolds (Re), dat is de verhouding van inertie krachten om viskeuze krachten. (Als overheersen visceuze krachten, Re is klein en de stroming is laminair of 'volledig ontwikkeld' - meestal voor Re &lt;2300.Als overheersen traagheidskrachten, de stroming wordt meer en meer willekeurige totdat het is turbulent, zoals het geval is voor Re&gt; 4000.) We kunnen berekenen Re volgens vergelijking 3 8, <img alt="Vergelijking 3" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Vergelijking 3"> Waar ρ is de vloeistof dichtheid, Q is het debiet, μ is de viscositeit, w en h zijn de breedte en hoogte van de kamer, respectievelijk, en D h is de hydraulische diameter, gedefinieerd volgens vergelijking 4 8, <img alt="Vergelijking 4" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Vergelijking 4"> Het getal van Reynolds van onze drie stromen kamers, met een hoogte variërend 166 tot 267 micrometer, bereik 13,9 tot 34,6 bij een flow calculated om een schuifspanning van 15 dyne / cm 2 te verkrijgen. Bij een flow berekend voor een schuifspanning van 100 dyne / cm 2, het getal van Reynolds van de kamers varieerde 90,4 tot 234. Al deze Reynolds getallen zijn veel lager dan 2300 en voldoen aan het criterium voor laminaire stroming. Ten tweede, voor de snelheid veld en shear stress onafhankelijk van de afstand langs de stroom kanaal (dat wil zeggen volledig ontwikkeld), de afstand van de vloeistof inlaat te glijden moet langer zijn dan de ingang van de lengte, L e. Dit kan worden voldaan door het berekenen van de ingang lengte, volgens vergelijking 5 9. <img alt="Vergelijking 5" src="/files/ftp_upload/3349/3349eq5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Vergelijking 5"> Voor de hierboven genoemde waarden, de ingang lengte varieert 0,01 tot 0,25 cm. Ten derde, om ervoor te zorgen dat de snelheid en de schuifspanning in de laterale richting niet variërensterk af van de waarde voor een-dimensionale kanaal flow (Δ Ph / 2L), moet de verhouding h / w zijn veel minder dan 1. Voor de gemiddelde wandschuifspanning onder twee-dimensionale stroming tot 95% van de wandschuifspanning onder een-dimensionale flow, moet h / w gelijk zijn aan 0,10, en voor de wandschuifspanning onder twee-dimensionale stroming voorwaarden die moeten worden 97,5% van de muur shear stress onder een-dimensionale flow, moet h / w gelijk zijn aan 0,05. Met de afmetingen van onze gewenste debiet kamer 1,7 cm in de breedte en 166 tot 267 micrometer in de hoogte, zijn deze criteria voldoen. De druk zal alleen variëren in de richting van de stroom als er geen zijdelingse drukgradiënten bij de ingang. Dit kan worden beoordeeld met behulp van kleurstoffen of deeltjes in de stroom weg. Verder, voor de gestage stroom experimenten, is een pulsdemper opgenomen in de stroom circuit. De pulsdemper neemt het grootste deel van de pulsatility veroorzaakt door de roller pomp in het circuit, en het stelt ons in staat een benadering van de aanname van steady flow. Van de nota, moet de gebruikte pulsdemper verenigbaar zijn met de pomp en slangen die zich in het circuit, zodat het kan effectief elimineren pulsaties in de output stroom voor de specifieke frequenties van de rol pomp. In onze demonstratie het Masterflex L / S pulsdemper bereikt laminaire stroming bij gebruik op de persleiding met een Masterflex L / S-serie pomp (0 tot 600 RPM) en I / P-26 buizen. Voor de pulsatiele flow, kan een programmeerbare pomp worden gebruikt om verschillende golfvormen te genereren. Voor de pulsatiele flow, kan een programmeerbare pomp worden gebruikt om verschillende golfvormen te genereren. Bovendien is de schakeling is zodanig ontworpen dat monsters van perfusievloeistof kan gemakkelijk worden verzameld op verschillende tijdstippen zonder gevaar voor besmetting van de cellen of doorstroming medium. In ons voorbeeld, de concentratie van NO 2 - werd gemeten met chemiluminescentie meteen ionogene / Sievers Nitric Oxide Analyzer (NOA 280, Sievers Instruments, Boulder, CO) zoals eerder beschreven 10. De reductor wordt gebruikt voor nitriet analyse werd kaliumjodide in azijnzuur (14,5 M azijnzuur en 0,05 M KI), dat het reductiepotentieel tot nitriet om te zetten in NO heeft, maar is onvoldoende om een ​​hogere stikstofoxiden, zoals nitraat te verminderen en is dus relatief specifiek voor nitriet. De in totaal geproduceerde hoeveelheid nitriet werd berekend als het product van de geproduceerde concentratie en het totale volume van het circuit, terwijl correctie voor volume verloren, terwijl het nemen van monsters 6. De volgende stappen zijn van cruciaal belang voor het succesvol uitvoeren van flow experimenten: <ol class="lroman"><li> Het is wenselijk om belvorming te vermijden tijdens de flow set-up, omdat bubbels hebben de potentie om scheuren cellen van hun oppervlak. Dit kan vermeden worden door de zorg bij het plaatsen van het bovenste deel van de stroom kamer op het onderste deel, dat is bestbereikt door het houden van twee parallel aan elkaar en het verlagen van de top naar de bodem in een beweging zonder aanpassingen. Daarbij kleine luchtbelletjes die aanwezig kunnen zijn en / of drijvend in de stroom kanaal, zal worden omgeleid naar de zeepbel vallen aan beide uiteinde van de aluminium behuizing. </li><li> Het is belangrijk ervoor te zorgen dat de uitstroom slangen in het reservoir reikt tot aan de onderkant van het reservoir's. Anders kan de lucht worden gezogen in de slang die loopt van reservoir naar kamer als het perfusaat daalt iets onder de slang te beëindigen. </li><li> De onderzoeker moet vertrouwd zijn met de richting van de pomp stroom, zodat de pomp niet per ongeluk loopt in de tegenovergestelde richting bij aanvang van de stroming, die zou resulteren in de lucht wordt meegezogen in het circuit en de kamer. </li><li> Om te voorkomen dat de vorming van schuim (als gevolg van gedenatureerde eiwitten in serum), adviseren we het verlagen van de slang die van kamer naar reservoir leidt tot ongeveer een centimeter boven de perfusate niveau in het reservoir. Echter, waardoor het boven de doorstroming medium niveau stelt u in staat te stromen in het reservoir te controleren tijdens het experiment. </li><li> Wanneer vastschroeven van de kamer delen, is het belangrijk om de behuizing stevig vastpakken met een hand, terwijl de bediening van de elektrische schroevendraaier met uw andere hand. Merk op dat de beweging van de elektrische schroevendraaier zal worden vertaald in het koppel dat de potentie heeft "de kamer smijten rond 'zodra de schroef is aangedraaid is. </li><li> Om te voorkomen dat de druk vorming van golven in het circuit en tillen cellen van hun oppervlak, ervoor zorgen dat alle kranen open zijn, voordat beginnen stromen. </li><li> Speciaal voor langere termijn flow studies (&gt; 48 uur) adviseren wij het gebruik van de harder en veerkrachtiger leidingen te worden ingevoegd in de kop van de pomp om te voorkomen dat het breken van de slang. </li><li> Het is mogelijk dat tubing 'migreert' in de kop van de pomp als gevolg van slecht aangepaste pompkop tanden. Daarom raden wij nauwlettend aandacht aan hoe de kuipING is bevestigd in de pomp kop en markering elk uiteinde van de buis met een markering pen, zodat u gemakkelijk kunt merken wanneer de slang is 'getrokken' of verdreven tijdens het experiment. </li><li> Altijd zorgvuldig voorafgaande controle elke aansluiting van het circuit en kamer naar het starten van de perfusie, om lekkage van perfusaat te voorkomen tijdens een experiment te wijten aan een gebrekkige aansluiting. Dit is vooral belangrijk voor de instroom en uitstroom aansluitingen van puls dempers! </li><li> Vergeet niet om blootstelling aan licht te beperken als je gebruik maakt fluorescente labels. </li></ol> Een mogelijke beperking van onze stroom kamer is dat de hoogte wordt bepaald door de hoogte van het kanaal bewerkte in het aluminium. Dit heeft echter het voordeel van het niet hebben om na te gaan en vóór de hoogte van het kanaal elk experiment en dus vereenvoudigt de schuifspanning berekeningen van alleen maar het aanpassen van de pomp stroom naar de gewenste waarde. Afhankelijk van uw onderzoek doelen, kan het wenselijk zijn omverhoging van de shear stress, zonder verhoging van snelheid van de pomp. In dit geval raden wij aan het verhogen van de perfusaat de viscositeit, bijvoorbeeld het toevoegen van dextran aan het medium 11. Een mogelijke beperking van de stroom circuit is het grote volume aan medium gebruikt, die kan problematisch zijn bij een poging om een ​​zeer kleine concentraties van de cel metabolieten te kwantificeren. Hoewel hier niet getoond, is het mogelijk om het circuit volume aanzienlijk te verminderen door middel van een kleinere reservoir en pulsdemper en slang lengte en diameter afnemen. Daarnaast zijn er diverse andere commercieel beschikbare systemen die gebruikt kunnen worden om de vloeistof shear stress van toepassing op cellen in cultuur. Microfluïdische-gebaseerde systemen, bijvoorbeeld het BioFlux systeem van Fluxion, zodat gelijktijdige analyse van cellen in verschillende microfluïdische stromingskanalen geladen met oplossing in zowel platen als input en output reservoirs voor deze kanalen 12,13,14. Echter, deze en andere micro-fluïde systemen zijn niet compatibel met standaard microscoop dia's en het niet mogelijk voor het herstel van een voldoende groot aantal cellen voor verdere experimenten, zoals RT-PCR of Western Blot. Verder zijn ze minder gebruiksvriendelijk, kosten een minimum van 40.000 dollar en kan een totaal van meer dan $ 100.000 te bereiken, afhankelijk van bijkomende apparatuur. Twee macrofluidic systemen die beschikbaar zijn vanaf het Flexcell International Corporation, de Flexcell Streamer en de FlexFlow systemen, zijn met succes gebruikt om endotheelcellen 15,16,17, menselijke annulus cellen 18 en 19 fibroblasten onder vloeistofstroom omstandigheden te bestuderen. Een derde systeem, beschikbaar via GlycoTech, is gebruikt om de tumor celadhesie 20 en leukocyten adhesie 21 tot en met endotheliale monolagen te bestuderen. De Streamer systeem maakt het mogelijk verschillende dia's worden uitgevoerd onder dezelfde schuifspanning omstandigheden in een keer, maar mist een kijkvenster en - in tegenstelling tot onzedesign - niet mogelijk is voor real-time visualisatie van cellen onder stroom. Het FlexFlow systeem heeft een kijkvenster, maar vereist een rechtop microscoop, die misschien niet de standaard microscoop gebruikt in de meeste laboratoria. Verder is de FlexFlow systeem vereist een cel-gecoate dekglas te worden omgekeerd wanneer geplaatst in de stroom kamer. Dit sluit visualisatie van fluorescerende cellen op een ondoorzichtig oppervlak, zoals titanium-gecoat glas, die we zien in ons onderzoek. Ten slotte is de gespecialiseerde dekglaasjes moeten specifiek worden gekocht voor het FlexFlow systeem, dat in de multi-duizend-dollar prijsklasse, vergelijkbaar met het Flexcell Streamer systeem. GlycoTech biedt ronde en rechthoekige parallelle plaat stroom kamers, die zijn aanzienlijk minder duur, maar vervaardigd uit gegoten acryl, die niet kunnen eenvoudig worden stamcellen geautoclaveerd als onze kamer. Van de nota, met andere stromen kamers die zijn beschreven worden autoclaveerbaarlijken niet praktisch, omdat ze speciale microscopische lenzen 22,23. Het GlycoTech systeem maakt gebruik van siliconen rubber pakkingen geplaatst tussen boven-en onderkant platen, die in dikte veranderen met herhaald gebruik en daardoor veranderen kamer hoogte boven de tijd (de fabrikant adviseert de aankoop van nieuwe na elke tien gebruikt). Onze aluminium kamer met ingebouwde O-ringen zorgt voor volledige oppositie van boven-en onderkant platen en zorgt voor een constante kamer hoogte tussen experimenten. Ten slotte vacuümpompen nodig zijn om een ​​lekvrije verbinding in veel stroom kamer ontwerpen, inclusief de GlycoTech kamers, die niet noodzakelijk zijn in ons ontwerp te realiseren. Overwegende dat het hier niet getoond, kan de stroom kamer worden gehouden onder een microscoop tijdens de hele stroom experiment voor real-time beeldvorming van celadhesie en / of gedrag. Als dit gewenst is, adviseren we met behulp van warmte lampen of een verwarmd kussentje onder de kamer naar de perfusaat temperatuur op 37 ° C. PelsDaar kan de rol pomp vervangen worden door een injectiepomp, als er geen 'recirculatie' van een van beide cellen of metabolieten of experimentele geneesmiddelen of agenten is gewenst 24. Het is ook mogelijk om anders gelabelde cellen stroom over hechtende cellen, bijv. TL-bloedplaatjes over een laag die confluente EPC's (met behulp van de bloedplaatjes assay beschreven door Achneck et al.. 6,25) tot cel-cel interactie te evalueren onder vloeistof shear stress. Onze flow kamer combineert de waardevolle eigenschappen van andere beschikbare stroom kamers, zoals een perfusaat sampling-poort en een kijkvenster en heeft het belangrijke voordeel van compatibiliteit met ofwel een omgekeerde of rechtop microscoop. Het is volledig autoclaveerbaar en zorgt voor herhaalde experimenten bij een constante kamer hoogte en zonder de noodzaak van vacuümpompen om een ​​lekvrije afdichting te bereiken.

<table border="1"><tbody><tr><td> Producten / Reagentia </td><td> Vennootschap </td><td> Product # </td></tr><tr><td> 10 ml spuit </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 07940-12 </td></tr><tr><td> 1-Way Stopcoks </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 30600-00 </td></tr><tr><td> 30 ml spuit </td><td> BD Medical </td><td> 309650 </td></tr><tr><td> 4-Way Glazen kranen </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 30600-04 </td></tr><tr><td> Aluminium </td><td> N / A </td><td> 6061 </td></tr><tr><td> Cell-Cultuur Schotels (4-goed, rechthoekig) </td><td> Thermo Scientific; Nunc </td><td> 267061 </td></tr><tr><td> Cel Tracker Oranje </td><td> Invitrogen </td><td> C34551 </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Onderzoek Organics </td><td> 2162D </td></tr><tr><td> DPBS (-/-)</td><td> Invitrogen </td><td> 14190-144 </td></tr><tr><td> EGM-2 Singlequots </td><td> Lonza </td><td> CC-4176 </td></tr><tr><td> Vrouwelijke Luer-adapter </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> SI-45500-04 </td></tr><tr><td> Fibronectine </td><td> Sigma </td><td> F0895-2MG </td></tr><tr><td> Glazen fles (250ml) met Cap </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 34594-24 </td></tr><tr><td> Hard Tubing </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 06508-16 </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Sigma </td><td> H8264-500ML </td></tr><tr><td> Histopaque </td><td> Sigma </td><td> H8889-500ML </td></tr><tr><td> Hoechst Stain Solution </td><td> Sigma </td><td> H6024 </td></tr><tr><td> Hyclone FBS </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30071.01 </td></tr><tr><td> L-glutamine </td><td> Lonza </td><td> 17-605E </td></tr><tr><td> Male Luer-adapter </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> EW-45505-04 </td></tr><tr><td> MCDB-131, 1X Medium </td><td> Cellgro </td><td> 15-100-CV </td></tr><tr><td> Barbed Polypropyleen Fittings </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 06365-90 </td></tr><tr><td> O-ringen </td><td> N / A </td><td> AS568A </td></tr><tr><td> Pulse-demper </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 07596-20 </td></tr><tr><td> Pomp-Drive (Masterflex L / S met variabele snelheid economie drive) </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 7524-40 </td></tr><tr><td> Pump-Head (Masterflex Easy Load Pump Head) </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 07518-60 </td></tr><tr><td> Glijbaan </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 48500-00 </td></tr><tr><td> Zachte Tubing </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 96400-16 </td> &lt;/ Tr&gt; <tr><td> Spuitfilter </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td> 02915-12 </td></tr><tr><td> Sytox Oranje Nucleic Acid Stain </td><td> Invitrogen </td><td> S-11368 </td></tr><tr><td> Trypsine EDTA </td><td> Lonza </td><td> CC-5012 </td></tr><tr><td> Trypsine neutraliserende oplossing </td><td> Lonza </td><td> CC-5002 </td></tr></tbody></table>

parallelle plaat flow kamer en continuous flow circuit te endotheliale progenitorcellen evalueer onder laminaire stroom afschuifspanning

Parallel-plate Flow Chamber and Continuous Flow Circuit to Evaluate Endothelial Progenitor Cells under Laminar Flow Shear Stress

Het algemene doel van deze methode is te beschrijven een techniek om hechtende cellen onder laminaire flow omstandigheden en evalueren van hun reactie op de goed kwantificeerbare vloeistof schuifspanningen 1. Onze flow kamer-ontwerp en de stroom circuit (afb. 1) bevat een transparante weergavegebied dat het testen van celadhesie en beeldvorming van celmorfologie maakt vlak voor stroom (Fig. 11A, B), op verschillende momenten tijdens de flow (fig. 11C) , en na de flow (Fig. 11D). Deze experimenten worden geïllustreerd met menselijk navelstrengbloed afgeleide endotheliale progenitor cellen (EPC&#39;s) en varkens EPC 2,3. Deze methode is ook toepasbaar op andere hechtende celtypes, zoals gladde spiercellen (SMC) of fibroblasten. De kamer en alle delen van het circuit zijn gemakkelijk gesteriliseerd met stoom autoclaaf. In tegenstelling tot anderekamers, kan bijvoorbeeld microfluïdische kamers, grote aantallen cellen (&gt; 1 miljoen, afhankelijk van celgrootte) worden hersteld nadat de stroom experiment onder steriele omstandigheden voor celkweek of andere experimenten, bijvoorbeeld DNA of RNA-extractie, of immunohistochemie (Afb. 11E), of scanning elektronenmicroscopie 5. De schuifspanning kan worden aangepast door het variëren van het debiet van het perfusaat, de viscositeit, of het kanaal hoogte en breedte. Dit laatste kan verminderen vloeistof volume of mobiele behoeften, terwijl ervoor te zorgen dat een-dimensionale stroming wordt gehandhaafd. Het is niet nodig om kamer hoogte tussen experimenten te meten, omdat de kamer hoogte is niet afhankelijk van het gebruik van pakkingen, die sterk vergroot het gemak van meerdere experimenten. Bovendien is de schakeling ontwerp maakt gemakkelijk het verzamelen van perfusaat monsters voor analyse en / of kwantificering van metabolieten uitgescheiden door cellen onder vloeistof schuifspanning blootstelling, zoals stikstofmonoxide (Fig. 12) 6 </sup&gt;.

We beschrijven een methode om onder hechtende cellen aan laminaire stroming shear stress in een steriele continue stroom circuit. De cellen &#39;hechting, kan morfologie worden bestudeerd door de transparante kamer, monsters verkregen van het circuit voor de metaboliet-analyse en-cellen geoogst na afschuiving blootstelling voor toekomstige experimenten of cultuur.

Parallelle plaat flow kamer en Continuous Flow Circuit te endotheliale progenitorcellen Evalueer onder laminaire stroom Afschuifspanning

Het algemene doel van deze methode is om een techniek te beschrijven om adherente cellen bloot te stellen aan laminaire stroomcondities en hun respons op een goede ...

Het algemene doel van dit video-artikel is om een techniek te beschrijven om adherente cellen bloot te stellen aan laminaire stromingscondities en de respons op goed kwantificeerbare vloeistofschuifspanningen te evalueren. Dit wordt bereikt door eerst het stromingscircuit te assembleren zonder de stroomkamer. Het circuit omvat het reservoir, de pulsdemper, harde buizen, zachte buizen, vierwegkraantjes en aangesloten Luer-adapters, evenals een luchtfilter.De volgende stap is het vullen van het circuit met de gewenste perfusievloeistof, zoals celmedium onder steriele omstandigheden, waarna de pomp wordt gestart om de pulsdemper te vullen en de lucht uit de slang te verwijderen. Vervolgens wordt de slide met cellen in de bodemplaat van de flowkamer geplaatst. De laatste stap van de procedure is de volledige assemblage van het flowcircuit met de flowkamer in lijn.Uiteindelijk kunnen resultaten worden verkregen die de uitlijning van fluorescentielabelled endotheliale progenitorcellen onder blootstelling aan vloeistofschuifspanning in de transparante kamer tonen met behulp van een fluorescentiemicroscoop. Om het functionele gedrag van cellen te bestuderen, is het vaak noodzakelijk om de in vivo fysiologie na te bootsen door de cellen bloot te stellen aan vloeistofschuifspanning. Wij hebben een parallelle plaatstroomkamer en een circuit voor continue stroming ontworpen, waarmee we de cellen onder stroomcondities kunnen bestuderen en via de transparante kamer kunnen observeren.Deze techniek kan dienen als een waardevol onderzoeksinstrument voor de gebieden van de geneeskunde en techniek. Onze flowkamer maakt intermitterende of real-time visualisatie van cellen onder stroming mogelijk met behulp van een rechtopstaande of omgekeerde microscoop. Bovendien stelt het ontwerp van Dr. Ach Nick onderzoekers in staat om cellen op zowel transparante als radiopake oppervlakken te beelden met behulp van standaard microscooplenzen.Bovendien kan het dienen als een belangrijk instrument in farmacologisch onderzoek om het effect van geneesmiddelen op cellen onder stroomcondities te bestuderen. Visualisatie van de opstelling is cruciaal, omdat verschillende stappen moeilijk te beheersen zijn door enkel een protocol te lezen. Ik zal stap-voor-stap instructies geven over hoe de stroomkamer en het stroomcircuit, die gebruikelijk zijn in het laboratorium van Dr.Ock Next, moeten worden opgezet om het stroomcircuit te assembleren.Begin met het bevestigen van een segment harde slang van 36 inch aan het ene uiteinde van een pulsdemper en aan het andere uiteinde. Bevestig een segment zachte slang van 18 inch. Plaats een male lure-adapter van een achtste inch aan het uiteinde van het 18 inch lange gedeelte zachte slang.Verbind de mannelijke koppeling met een vrouwelijke adapterkoppeling van een achtste inch. Bevestig de vrouwelijke koppeling aan een nieuw segment zachte slang van 18 inch. Boor drie gaten in een dop van een glazen bekerglas van 250 milliliter.Om de slang te passen, plaatst u een segment van 1,5 inch zachte slang in één gat als ontluchting. Steek de vrije uiteinden van de harde en zachte slang via de andere twee gaten in de dop in de glazen fles van 250 milliliter, die als reservoir dient.Zorg ervoor dat de harde buis de bodem van het reservoir bereikt. Het handhaven van steriliteit tijdens de installatie van het circuit is cruciaal voor het succes van deze procedure. Daarom moeten alle onderdelen gesteriliseerd zijn en moet u gedurende het hele proces steriele handschoenen dragen.Naast de geassembleerde onderdelen moeten deze onderdelen worden gesteriliseerd. Eén volledige flowkamer, segmenten zachte slang van drie bij twee inch, één mannelijke en één vrouwelijke luer-adapter van een achtste inch, vier platkopsschroeven van een halve inch, 6 5 16 inch, acht platkopsschroeven van 30 seconds inch tracks per inch, één pincet, één glazen objectglas en twee handdoeken, gesteriliseerd met stoom.Autoclaveren bij 121 °C gedurende 60 minuten. Plaats de flowkamer van het flowcircuit, vier vierweg-stopkranen, één eenweg-stopkraan en alle gesteriliseerde onderdelen op dit steriele veld. Sluit, terwijl u steriele handschoenen draagt, de twee vierweg-stopkranen aan elkaar.Plaats doppen op de open monsterpoorten. Verwijder de mannelijke en vrouwelijke lure-adapters die de twee zachte slangsegmenten van het stroomcircuit verbinden en plaats de aangesloten stopkranen. Bevestig de zachte slang die in het reservoir is ingevoerd aan een spuit van 30 milliliter en verwijder de zuiger van de spuit.Vul het flesje met 125 milliliters EPC-medium. Sluit de zachte slang opnieuw aan op de stopkraan. Plaats een steriel spuitfilter in de ontluchting.Plaats nu het stroomcircuit in een bevochtigde incubator bij 37 °C en 5% koolstofdioxide. Klem de harde slang in de masterflex-rolpompkop die is aangegeven voor gebruik met dit type coal Palmer-slang. Zorg ervoor dat de slang niet overlapt met de montagegeleiders van de rolpomp.Markeer de slang aan weerszijden waar deze de pompkop verlaat met een markeerstift. Nadat is vastgesteld dat alle stopkranen naar de monsterpoorten toe gesloten zijn en langs het stroomcircuit openstaan, start u de pomp. Controleer de stroomrichting.De PERFUSE eight moet vanuit het glazen reservoir via de harde slang naar de pulsdemper bewegen. Gebruik voor de montage van de stroomkamer steriele handschoenen om een zacht slangsegment van twee inch te verbinden met een vrouwelijke luer-adapter van een achtste inch. Verbind een ander zacht slangsegment van twee inch met een mannelijke luer-adapter van een achtste inch.Bevestig de twee inch zachte slang met vrouwelijke luer-adapter aan de instroompoort en de twee inch zachte slang met mannelijke luer-adapter aan de uitstroompoort. Bevestig vierweg-stopkraantjes aan beide luer-adapters. Verbind het resterende stuk twee inch zachte slang met de zijpoortconnector van de belvanger en bevestig een eenweg-stopkraantje met steriele pincetten.Verwijder de met cellen gezaaide slide uit het kweekvat en plaats deze in de uitsparing van de bodemplaat van de flowkamer. Zorg ervoor dat de slide wordt geplaatst met de zijde met cellen naar boven gericht. Gebruik een spuit of pipet om 10 milliliters warm EPC-medium over de gezaaide slide te plaatsen. Laat het medium de slide in de flowkamer bedekken, maar zorg dat het medium niet over de O-ring op de bodemplaat stroomt.Plaats de bovenplaat van de stroomkamer op de onderplaat, waarbij de schroefgaten worden uitgelijnd. Houd de twee platen parallel om te voorkomen dat er luchtbellen in de kamer komen. Schroef de platen samen. Ontlucht de bellenvanger van de instroom door de eenrichtingsstopkraan te openen die is verbonden met de poort van de bellenvanger aan de instroomzijde, met behulp van een automatische batterijgevoede schroevendraaier.Gebruik een spuit van 10 milliliter om de toevoerleiding voorzichtig door te spoelen met EPC-medium en sluit vervolgens deze stopkraan en zet er een dop op. Ontlucht nu het kanaal van de kamer door de vierwegstopkraan van de uitlaatpoort te openen en voorzichtig EPC-medium door de stroomkamer te spoelen. Gebruik opnieuw een spuit van 10 milliliter om alle aansluitingen van de vierwegstopkranen af te doppen en af te sluiten.Plaats de stroomkamer samen met het geassembleerde stroomcircuit in de bevochtigde incubator. Pauzeer de pomp van het stroomcircuit en sluit de stopkranen in de stroomrichting af om lekkage te voorkomen.Sluit de stroomkamer aan op het stroomcircuit. Nadat de stroomkamer aan het stroomcircuit is gekoppeld, opent u de stopkranen in de stroomrichting. Start de stroompomp opnieuw en controleer of de PERFUSE eight in de juiste richting stroomt. Stel de stroomsnelheid in op de gewenste schuifspanning.Tijdens het stroomexperiment kan de stroomkamer uit het circuit worden verwijderd om de cellen via licht- of fluorescentiemicroscopie te visualiseren. Koppel hiervoor de stroomkamer los van het stroomcircuit bij de stopkraan-stopkraanverbindingen. Neem perfusie-monsters af voor analyse.Pauzeer eerst de pomp en sluit de stopkraan die zich het dichtst bij de pulsdemper bevindt. Verwijder de beschermkap en plaats deze ondersteboven om contaminatie te voorkomen. Voer een kleine spuit in de monsterpoort in.Sluit de stopkraan af in de richting van de stroomkamer, terwijl de monsterpoort en het circuit in de richting van de pulsdemper open blijven. Trek de gewenste hoeveelheid monster uit het circuit en sluit de stopkraan naar de monsterpoort af voordat u de spuit verwijdert. Bewaar het monster in een gelabeld flacon en vries dit in bij minus 80 °C.Sluit de monsterpoort af en zorg ervoor dat alle stopkranen openstaan voordat de stroming wordt gestart. Met deze methode kunnen uit menselijk bloed afgeleide endotheliale progenitorcellen binnen 15 minuten op titanium glaasjes worden gezaaid en hechten zij onder fysiologische schuifkrachten. Zoals in deze figuur te zien is, spreiden EPC's zich onder invloed van de stroming uit van ongeveer 210 vierkante micron direct na het zaaien naar ongeveer 657 vierkante micron na drie uur en ongeveer 1.152 vierkante micron na 48 uur van vloeistofschuifspanning van 15 dines per vierkante centimeter.Deze lichtmicroscoopafbeelding illustreert de willekeurige oriëntatie van menselijke EPC's. Na een statische rustperiode van zes uur na drie uur stroming bij 100 dines per vierkante centimeter, zijn de cellen uitgespreid maar behouden ze een willekeurige oriëntatie. Na 48 uur vloeistofschuifspanning bij 100 dines per vierkante centimeter zijn de EPC's uitgelijnd en georiënteerd in de richting van de stroming.Hier werden EPC's gelabeld met CTO en celkernen gekleurd met herx om na de flow te sterven. Ter vergelijking toont deze afbeelding porcine EPC's op titanium glaasjes, uitgelijnd met de stroomrichting. Na 48 uur flow en blootstelling aan een schuifspanning van 15 dines per vierkante centimeter werden de celranden gekleurd met anti-pcam-kleuring en de kernen met cytoxine-nucleïnezuurkleuring.Deze methode maakt het daarnaast mogelijk om op vooraf vastgestelde tijdstippen monsters van de PERFUSE eight te verkrijgen voor de analyse en/of kwantificering van uitgescheiden celmetabolieten. Hier wordt een voorbeeld getoond van de productie van nitriet tijdens een flow-experiment van 48 uur met porcine EPC's. Het is bij het uitvoeren van deze procedure belangrijk om gedurende het gehele proces de steriliteit te bewaken.Daarnaast is het belangrijk om de nodige stappen te ondernemen om het aantal luchtbellen in de flowkamer te verminderen vóór de start van de continue flow, aangezien deze de cellen kunnen losscheuren. We raden ook aan om elke afzonderlijke verbinding in de flowkamer en het circuit vóór perfusie te controleren om lekkage van PERFUSE eight tijdens een experiment te voorkomen. Deze kamer is ontworpen met ingebouwde O-ringen die een volledige aansluiting van de boven- en onderplaat mogelijk maken en een lekvrije afdichting bieden zonder dat vacuümpompen vereist zijn.Deze functie garandeert bovendien een constante kamerhoogte tussen experimenten en maakt rubberen pakkingen of aanpassingen overbodig. Onze flowkamer maakt gebruik van gestandaardiseerde microscopische objectglazen. Hierdoor is een groot aantal cellen beschikbaar voor verdere experimenten.Bijvoorbeeld, RNA en DNA uit cellen na stroming kunnen worden geëvalueerd op eiwitsynthese of genexpressie. Ons circuitontwerp maakt het mogelijk om acht geperfuseerde monsters te verzamelen voor analyse en kwantificering van celmetabolieten zoals nitriet, een primaire oxidatieve metaboliet van stikstofmonoxide, die door cellen wordt uitgescheiden onder vloeistofschuifspanning. Na het bekijken van deze video zou u een goed begrip moeten hebben van hoe u onze stroomkamer en het steriele stroomcircuit assembleert om adherente cellen bloot te stellen aan vloeistofschuifspanning.

parallel-plate-flow-chamber-continuous-flow-circuit-to-evaluate

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Microfluïdische stromingskamers geëtst door fotolithografie en vervaardigd uit PDMS worden toegepast op functionele resultaten in verband met EG-dysfunctie en ontsteking te onderzoeken. In een representatief experiment het vermogen van differentiële schuifspanning moduleren monocyte celhechting aan cytokine geactiveerd EC monolagen wordt aangetoond.

On-Chip Endotheliale Inflammatoire Fenotypering

This video demonstrates a laminar flow-based assay to characterize the interaction of leukocytes and cellular partners such as endothelial cells. This method provides dynamic insights into adhesion, deadhesion, and transmigration of leukocytes when perfused over an intact and confluent layer of vascular cells.

A Laminar Flow-Based Assay to Study the Interactions Between Leukocytes and Endothelial Cells

Deze studie gebruikte een multi-well plaat microfluïdische systeem aanzienlijk verhogen doorvoer cel rollen studies onder fysiologisch relevante schuifkracht. Gezien het belang van cel rollen in het multi-step cel homing cascade en het belang van cel homing na systemische toediening van exogene populaties van cellen bij patiënten, biedt dit systeem potentieel als een screening platform om celtherapie verbeteren.

Systematische analyse van In Vitro Cel Rolling Met behulp van een multi-well plaat Microfluidic System

De driedimensionale stroom kamer inrichting een...

A Novel Driedimensionale Flow Kamer Device aan chemokine-gerichte extravasatie van Cellen doorgeven Studie onder Fysiologische stroomtoestanden

Trombocyttransfusie en hemostase werden gemodelleerd met behulp van bloedreconstitutie en microfluïdische stroomkamers om de functie van bloedbanktrombocyt te onderzoeken. De gegevens tonen de gevolgen van trombocyt-opslageffect op hemostase, in vitro aan.

Microfluïdische Flow Chambers behulp Gereconstitueerde Blood voor Model hemostase en bloedplaatjestransfusie<em&gt; In Vitro</em

Verschillende niveaus en patronen van vloeistofschuifspanning zijn bekend om hun modulatie van endothèle genexpressie, fenotype en gevoeligheid voor ziekten. We bespreken de samenstelling en het gebruik van'schuifringen': een model dat unidirectionele, periodieke schuurspanningspatronen produceert. Schuifringen zijn eenvoudig te assembleren, economisch en kunnen hoge celopbrengsten produceren.

De Algemene Vergadering en de toepassing van &#39;Shear Rings&#39;: A Novel endotheliale Model voor Orbital, Unidirectionele en Periodieke Fluid Flow en Shear Stress

Dit artikel beschrijft een experimenteel model van hemostase die gelijktijdig meet bloedplaatjesfunctie en coagulatie. Bloedplaatjes en fibrine fluorescentie wordt gemeten in real-time en bloedplaatjesadhesie rate, coagulatie snelheid, en het begin van coagulatie bepaald. Het model wordt gebruikt voor bloedplaatjes stollingsbevorderende eigenschappen bepalen onder stroom concentraten voor transfusie.

Een microfluïdische Flow Kamer Model voor trombocytentransfusie en hemostase Maatregelen afzetting van trombocyten en fibrine Formation in real-time

Dit werk beschrijft een fluorescentiemicroscopie-gebaseerde methode voor het bestuderen van bloedplaathechting, verspreiding en afscheiding onder stroming. Dit veelzijdige platform maakt het mogelijk om bloedplaatjesfunctie te onderzoeken voor mechanistisch onderzoek naar trombose en hemostase.

Live-cel beeldvorming van bloedplaatjes Degranulatie en afscheiding onder stroming

Leukocyten interactie gretig met vasculaire cellen en trombocyten na vaartuig muur letsel of tijdens ontsteking. Hier beschrijven we een eenvoudig laminaire flow gebaseerde assay karakteriseren de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de interacties tussen leukocyten en hun cellulaire partners.

Laminaire stroming gebaseerde testen te onderzoeken Leukocyte aanwerving op gekweekte vasculaire cellen en aanhangend bloedplaatjes

Hier, wordt een workflow voor de cultuur en gen expressie analyse van endotheliale cellen onder vloeistof schuifspanning gepresenteerd. Inbegrepen is een fysieke schikking voor gelijktijdig huisvesting en bewaking van meerdere stroom kamers in een gecontroleerde omgeving en het gebruik van een exogene referentie RNA voor kwantitatieve PCR.

Gen expressie analyse van endotheliale cellen blootgesteld als u wilt schuintrekken Stress met behulp van meerdere parallelle-plaat Flow Chambers

We hebben een afstembaar substraat op basis van gelatine gesynthetiseerd en gekarakteriseerd voor het kweken van vasculaire endotheelcellen (EC's) onder relevante vasculaire stromingsomstandigheden. Dit biomimetische oppervlak repliceert zowel fysiologische als pathologische omstandigheden, waardoor de studie van mechanische krachten op het EC-gedrag mogelijk wordt en ons begrip van vasculaire gezondheid en ziektemechanismen wordt bevorderd.

In vitro model dat substraatstijfheid en stroming integreert om endotheelcelreacties te bestuderen

Leer een methode om endotheliale progenitorcellen bloot te stellen aan laminaire stroom en afschuifspanning met een doorzichtige parallelle plaatkamer. Deze techniek maakt real-time visualisatie en analyse van celgedrag onder mechanische belasting mogelijk.

Parallelle plaat flow kamer en Continuous Flow Circuit te endotheliale progenitorcellen Evalueer onder laminaire stroom Afschuifspanning (Video) | JoVE Journal

Parallelle plaat flow kamer en Continuous Flow Circuit te endotheliale progenitorcellen Evalueer onder laminaire stroom Afschuifspanning

Meer video's verkennen