Name: Een Functionele Motor-eenheid in de cultuur Dish: Co-cultuur van het ruggenmerg Explantaten-en spiercellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 6 s
Description: Leer hoe je een functionele motor-eenheid in vitro reproduceert door humane primaire spiercellen te co-kweken met rattenembryo-ruggenmergexplantaat. Deze methode biedt een betrouwbaar model voor het bestuderen van spierinnervatie en zenuw-spierinteracties.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ons werk wordt ondersteund door de Zwitserse National Science Foundation (SNF), het Zwitsers initiatief in Systems Biology (SystemsX.ch), de Vereniging voor Musculaire Dystrofie USA (MDA), de Association Française contre les Myopathie (AFM), de Verenigde mitochondriale ziekte Foundation (UMDF), de Gebert-Rüf Stichting Zeldzame Ziekten Programme (GRF), de Zwitserse Vereniging voor Onderzoek van de spierziekten (SSEM / FSRMM), de Swiss Life &quot;Jubiläumsstiftung für Volksgesundheit und Medizinische Forschung&quot;, de Roche Research Foundation en de Universiteit van Basel.

1. Voorbereiding van de primaire menselijke spiercel Cultuur <ol><li> Bepaal de menselijke spiercel culturen volgens de explantatie-re-explantatie techniek 4. Verwijder eerst niet-spierweefsel van de biopten. Vervolgens 1 mm 3 spier explantaten insluiten in een coagulum van plasma, waardoor fibroblasten om uit de explantaten. </li><li> De geïntegreerde explantaten overgebracht naar een plasma-gelatine beklede schaal en laten groeien in normale groei medium (MEM aangevuld met 25% Medium 199, 10% foetaal bovine serum [FBS] 1% penicilline / streptomycine, 10 ug / ml insuline 10 ng / ml menselijke epidermale groeifactor [EGF] 12.5 ng / ml humaan fibroblast groeifactor [FGF]) in een monolaag. De cellen die uit de explantaten ontstaan ​​onder die voorwaarden zijn spiercellen. Deze cellen blijven in een monolaag groeien na verwijdering van de explantaten. </li><li> Culture de cellen aneurally op 0,1% gelatine beklede platen in normale groeimedium. De cellen kunnenaneurally gekweekt en versterkt nodig. Beter is spiercellen gebruiken doorgang tussen 3 en 8 de co-culturen voeren. Het is cruciaal om jonge myotubes innerveren; na dit punt, de co-culturen hebben een grote kans op falen. Bovendien moet myotubes niet te groot en te dik. </li><li> Twee dagen voor de innervatie gepland, plaat de spiercellen op 35 mm weefselkweekschalen (of 6 wells platen) met een dichtheid van 500.000 cellen per schaaltje in normale groeimedium. Op dat dichtheid, de cellen op de juiste confluentie om de fusie te starten op de volgende dag, en de daaropvolgende innervatie de dag daarna. Met behulp van deze voorwaarden, de myotubes zijn op het juiste moment voor een optimale innervatie en dus de daaropvolgende vezels contractie. </li><li> Op de volgende dag vervangen normale groeimedium met fusiemedium uit MEM aangevuld met 25% Medium 199, 5% FBS, 10 ug / ml insuline en 1% penicilline / streptomycine. </li></ol> 2. Isolati<html> op een van de Rat Embryonale Spinal Cord Explantaten De procedure voor het ruggenmerg explantaten isoleren wordt uitgevoerd onder een binoculaire microscoop, in Balanced Salt Solution Hank&#39;s (HBSS, Gibco / Invitrogen ref 14170) met 10% foetaal runderserum (FBS). <ol><li> Het is van cruciaal belang dat de rat embryo&#39;s zijn tussen de ED 13 en 14 als een andere ontwikkelingsfase in gevaar zou brengen de hele procedure. Offer een zwangere vrouw met CO 2 en het verzamelen van de hele keten embryo in HBSS medium. Isoleer elk embryo en onthoofden ze voor euthanasie. </li><li> Ontleden het embryo ruggenmerg van de rest van het lichaam in een stuk en verwijder omliggende spier-en bindweefsel. Wees zeer voorzichtig aan de dorsale wortel klieren (DRG&#39;s) die aan het ruggenmerg om functionele innervatie zorgen te houden. </li><li> Dwars snijden elkaar ruggenmerg dat ieder explantaat ten minste twee DRG verbonden (explantaten van 1 mm 3). </li></ol><html> ove_title &quot;&gt; 3. Innervatie van de menselijke spier cellen met Embryonale Rat ruggenmerg Explantaten <ol><li> Verwijder de fusiemedium op de spieren celkweek, waarbij een dunne laag medium op de monolaag. </li><li> Plaats de explantaten op de spieren cellaag, vijf gelijkmatig verdeelde explantaten per 35 mm schaal. </li><li> Voeg heel langzaam, druppelsgewijs, fusion medium op elke explant. Het is noodzakelijk medium toe te voegen voor de spiercellen te overleven, maar niet te veel te laten explantaten eerst hechten en contact maken met de cellen. Als het medium niet goed is (te sterk of te veel medium) toegevoegd, zal de explantaten drijven en zullen voldoen aan de spiercellen innerveren. </li><li> Zodra de explantaten beginnen zich te houden, boven de fusie op middellange tot 2 ml per 35 mm schotel, en zet de gerechten heel voorzichtig terug in de incubator. </li></ol> 4. Onderhoud van het heterologe zenuw-spier Co-culturen <ol><li> Wijzig de fusie medium twee keer per week. </li></ol>_title &quot;&gt; 5. representatieve resultaten Zodra twee dagen na de innervatie is het mogelijk om het neurieten die uit elk explantaat en om contacten met de spiercellen, vertegenwoordigd door de knop structuren (Figuur 1). Al in 4-6 dagen na de innervatie, zal een aantal individuele vezels beginnen te contracteren. De weeën blijven voor vele maanden, onderhouden gewoon door het veranderen van het kweekmedium twee keer per week. Na ongeveer 2 weken, het ruggenmerg explant zelf ontaardt, maar de innervatie wordt geconserveerd. Dit is normaal. Een dunne laag van zenuw component blijft op het oppervlak van de spiercel laag. Dit zenuwstelsel netwerk is voldoende om de functionaliteit van de aandrijving te handhaven. Als de explantaten drijven in het medium de dag na innervatie, zullen ze nooit houden. Dit gebeurt wanneer de spiercel laag isonvoldoende confluent, of wanneer het medium te ruw toegevoegd. Soms zal de explant voldoet, maar geen neurieten ontstaan. Dit komt waarschijnlijk door het ontbreken van DRG is bevestigd. In dat geval ook, zal de bezenuwing niet worden vastgesteld. Manipuleer de gerechten heel voorzichtig de eerste week, omdat de explantaten nog gemakkelijk los te maken. Om de fusie media uit te wisselen, voeg de vloeistof druppelsgewijs met een minimale snelheid om cellen loslaten is uitgesloten. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3616/3616fig1.jpg" /> Figuur 1. Ruggenmerg explantaten-spiercel co-kweken van dag 1 tot dag 15.

<ol><li>Delaporte, C., Dautreaux, B., Fardeau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+myotube+differentiation+in+vitro+in+different+culture+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Human myotube differentiation in vitro in different culture conditions.</a> Biol. Cell. 57, 17-22 (1986).</li>
<li>Kobayashi, T., Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+muscle+cultured+in+monolayer+and+cocultured+with+fetal+rat+spinal+cord%3A+importance+of+dorsal+root+ganglia+for+achieving+successful+functional+innervation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Human muscle cultured in monolayer and cocultured with fetal rat spinal cord: importance of dorsal root ganglia for achieving successful functional innervation.</a> J. Neurosci. 7, 3131-3141 (1987).</li>
<li>Braun, S., Croizat, B., Lagrange, M. C., Warter, J. M., Poindron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+muscular+abnormalities+in+culture+in+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Constitutive muscular abnormalities in culture in spinal muscular atrophy.</a> Lancet. 345, 694-695 (1995).</li>
<li>Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+program+for+investigating+adult+human+skeletal+muscle+grown+aneurally+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Neurology%22%5BJournal%5D)">A new program for investigating adult human skeletal muscle grown aneurally in tissue culture.</a> Neurology. 25, 58-67 (1975).</li>
<li>Guettier-Sigrist, S., Coupin, G., Warter, J. M., Poindron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+types+required+to+efficiently+innervate+human+muscle+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Cell types required to efficiently innervate human muscle cells in vitro.</a> Exp. Cell Res. 259, 204-212 (2000).</li>
<li>Lefebvre, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+characterization+of+a+spinal+muscular+atrophy-determining+gene%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Identification and characterization of a spinal muscular atrophy-determining gene.</a> Cell. 80, 155-165 (1995).</li>
<li>Schrank, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inactivation+of+the+survival+motor+neuron+gene%2C+a+candidate+gene+for+human+spinal+muscular+atrophy%2C+leads+to+massive+cell+death+in+early+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Inactivation of the survival motor neuron gene, a candidate gene for human spinal muscular atrophy, leads to massive cell death in early mouse embryos.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 9920-9925 (1997).</li>
<li>Hsieh-Li, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+for+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">A mouse model for spinal muscular atrophy.</a> Nat. Genet. 24, 66-70 (2000).</li>
<li>Monani, U. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+human+centromeric+survival+motor+neuron+gene+%28SMN2%29+rescues+embryonic+lethality+in+Smn%28-%2F-%29+mice+and+results+in+a+mouse+with+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">The human centromeric survival motor neuron gene (SMN2) rescues embryonic lethality in Smn(-/-) mice and results in a mouse with spinal muscular atrophy.</a> Hum. Mol. Genet. 9, 333-339 (2000).</li>
<li>Sleigh, J. N., Gillingwater, T. H., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+contribution+of+mouse+models+to+understanding+the+pathogenesis+of+spinal+muscular+atrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Dis.+Model.+Mech%22%5BJournal%5D)">The contribution of mouse models to understanding the pathogenesis of spinal muscular atrophy.</a> Dis. Model. Mech. 4, 457-467 (2011).</li>
<li>Durbeej, M., Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscular+dystrophies+involving+the+dystrophin-glycoprotein+complex%3A+an+overview+of+current+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Muscular dystrophies involving the dystrophin-glycoprotein complex: an overview of current mouse models.</a> 12, 349-361 (2002).</li>
<li>Schnabel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroscience%3A+Standard+model%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Neuroscience: Standard model.</a> Nature. 454, 682-685 (2008).</li>
<li>Benatar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lost+in+translation%3A+treatment+trials+in+the+SOD1+mouse+and+in+human+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol.+Dis%22%5BJournal%5D)">Lost in translation: treatment trials in the SOD1 mouse and in human ALS.</a> Neurobiol. Dis. 26, 1-13 (2007).</li>
<li>Dorchies, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normal+innervation+and+differentiation+of+X-linked+myotubular+myopathy+muscle+cells+in+a+nerve-muscle+coculture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul.+Disord%22%5BJournal%5D)">Normal innervation and differentiation of X-linked myotubular myopathy muscle cells in a nerve-muscle coculture system.</a> Neuromuscul. Disord. 11, 736-746 (2001).</li>
<li>McFerrin, J., Engel, W. K., Askanas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+innervation+of+cultured+human+muscle+overexpressing+betaAPP+experimentally+and+genetically%3A+relevance+to+inclusion-body+myopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Impaired innervation of cultured human muscle overexpressing betaAPP experimentally and genetically: relevance to inclusion-body myopathies.</a> Neuroreport. 9, 3201-3205 (1998).</li>
</ol>

Wij hebben niets te onthullen.

Een fysiologische in vitro middel om spier-cel functie te bestuderen in normale en pathologische context is van de hoogste belang is voor de myologists, omdat spiercel culturen meestal niet herhalen het belang van meerdere cellen en cel-achtige verbindingen. De toevoeging van gezuiverde motorneuronen spier cellen niet genoeg om een functionele motorunit bereiken, aangezien de aanwezigheid van Schwann cellen vereist voor de innervatie om efficiënt 5 en het is niet topologisch (3D + speciale verdeling)...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> MEM </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 31095 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Gibco / Invitrogen </td><td> 31153 </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum </td><td> Foetale Clone Perbio </td><td> SH30066.03 </td></tr><tr><td> Insuline </td><td> Sigma </td><td> I9278 </td></tr><tr><td> Human EFG </td><td> Sigma </td><td> E9644 </td></tr><tr><td> Human FGF </td><td> SiGMA </td><td> F0291 </td></tr><tr><td> Penicilline / streptomycine oplossing </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr></tbody></table>

een functionele motor-eenheid in de cultuur dish: co-cultuur van het ruggenmerg explantaten-en spiercellen

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

Menselijke primaire spiercellen aneurally gekweekt in monolaag zelden contract spontaan, omdat, bij het ​​ontbreken van een zenuw component, celdifferentiatie is beperkt en motor neuron stimulatie ontbreekt 1. Deze beperkingen belemmeren in vitro onderzoek van vele neuromusculaire aandoeningen gekweekte spiercellen. Belangrijk is dat de experimentele beperkingen van monolayered, gekweekte spiercellen worden ondervangen door functionele innervatie van myofibers met ruggenmerg explantaten in co-culturen. Hier wordt tonen verschillende stappen nodig zijn om een efficiënte goede innervatie van humane primaire spiercellen bereiken, waardoor differentiatie en vezels contractie af volgens de methode van Askanas 2. Om dit te doen, zijn spiercellen samen gekweekt met het ruggenmerg explantaten van de rat embryo&#39;s bij ED 13.5, met de achterwortelganglia nog aan het ruggenmerg plakjes. Na een paar dagen, de spier fileden beginnen te contracteren en uiteindelijk cross-dwarsgestreepte worden door innervatie door functionele neurieten dat uitsteekt uit het ruggenmerg explantaten dat de verbinding met de spiercellen. Deze structuur kan worden gehandhaafd gedurende maanden eenvoudig door geregelde uitwisseling van het kweekmedium. De toepassingen van deze instrument van onschatbare waarde zijn talrijk, omdat dit een functioneel model voor multidisciplinaire analyses van de menselijke spierontwikkeling en innervatie. In feite een volledige de novo neuromusculaire installatie optreedt in een kweekschaal, waardoor een gemakkelijke meting van vele parameters bij elke stap in een fundamentele en fysiologische omgeving. Gewoon om een ​​paar voorbeelden, genomische en / of proteomische onderzoeken citeren kan direct worden uitgevoerd op de co-culturen. Bovendien kunnen pre-en post-synaptische effecten specifiek en afzonderlijk worden beoordeeld op de neuromusculaire verbinding, omdat beide componenten afkomstig zijn van verschillende soorten,rat en mens, respectievelijk. De zenuw-spier co-cultuur kan ook worden uitgevoerd met menselijke spiercellen geïsoleerd van patiënten die lijden aan spier-of neuromusculaire ziekten 3, en kan dus worden gebruikt als screening instrument voor kandidaat-medicijnen. Tenslotte is geen speciale apparatuur, maar regelmatige BSL2 inrichting nodig om functionele motorunit een kweekschaal reproduceren. Deze methode is dus waardevol voor de spier en de neuromusculaire onderzoekgemeenschappen fysiologische en mechanistische studies neuromusculaire functie, in normale en ziekte context.

Gekweekte spiercellen een inadequate model om geïnnerveerde spier recapituleren<em&gt; In vivo</em&gt;. Een functionele aandrijving kan worden gereproduceerd<em&gt; In vitro</em&gt; Door innervatie van gedifferentieerde menselijke primaire spiercellen met behulp van ratten embryo ruggenmerg explantaten. Dit artikel beschrijft hoe co-culturen van het ruggenmerg explantaten en spiercellen zijn gevestigd.

Een Functionele Motor-eenheid in de cultuur Dish: Co-cultuur van het ruggenmerg Explantaten-en spiercellen

Menselijke primaire spiercellen die aneuraal in een monolaag zijn gekweekt, trekken zelden spontaan samen omdat, bij afwezigheid van een nerveus component, de cel ...

Het algemene doel van deze procedure is om een functionele motorische eenheid in vitro te reproduceren. Dit wordt bereikt door menselijke primaire spiercellen te kweken in combinatie met geïsoleerde ruggenmerg-explantaten van rattenembryo's. De ruggenmergimplantaten krijgen vervolgens de gelegenheid om de menselijke spiercellen te innerveren terwijl het explantaat nog is bevestigd.De cultuur wordt voorzichtig gevoed met medium tot de spiercellen volledig zijn gedifferentieerd. Het moleculaire en/of cellulaire fenotype van de gedifferentieerde spiercellen kan vervolgens worden beoordeeld met behulp van een selectie van moleculaire instrumenten. De visuele demonstratie van deze methode is essentieel omdat het in eerste instantie moeilijk is om te leren hoe het ruggenmerg moet worden geïsoleerd.En bovenal moet u zeer voorzichtig te werk gaan bij het toevoegen van het kweekmedium aan de innovatieve spiercellen. Euthanaseer een drachtige rat met embryo's tussen de stadia ED 12.5 en ED 13.5.Wees nauwkeurig, aangezien het stadium cruciaal is voor de gehele procedure. Disseceer de uterus en verzamel de volledige embryoketen in HBSS-medium met 10% FBS onder een stereoscoop; isoleer elk embryo en decapiteer deze. Isoleer het ruggenmerg in één stuk en verwijder het omringende spier- en bindweefsel.Om dit te doen, moeten de embryo's eerst worden gefixeerd met microscharen. Maak aan weerszijden van het ruggenmerg een insnijding en pel de huid voorzichtig af. Leg het embryo vervolgens op zijn zij en isoleer zorgvuldig het ruggenmerg, waarbij het dorsale wortelganglion (DRG) nog bevestigd blijft.Functionele innervatie zal niet plaatsvinden als de DRG's niet verbonden blijven met het ruggenmerg. Het ruggenmerg is witter dan het omringende roze bindweefsel en spierweefsel. Verwijder voorzichtig de omringende weefsels zonder de DRG's te verstoren.Zodra ze zijn geïsoleerd, gebruik dan de naald van een microspuit om elk ruggenmerg transversaal in kubusjes te snijden met minstens twee DRG's eraan bevestigd. Deze 'eggplants' zullen ongeveer een kubieke millimeter groot zijn en zijn nu klaar om te worden gecocultiveerd met een standaard menselijke spiercelcultuur. Dit protocol vereist dat menselijke spiercellen worden gekweekt uit weefselbiopten.Raadpleeg het geschreven protocol voor details over deze procedure. Begin met het verwijderen van het fusiemedium van de spiercelcultuur, waarbij een dunne laag medium op de monolaag achterblijft. Plaats vervolgens voorzichtig de x explan op de spiercel.Plaats vijf gelijkmatig verdeelde X-explantaten op elke schaal van 35 millimeter. Voeg langzaam, druppelsgewijs, fusiemedium toe aan elk x-explantaat. Voeg het fusiemedium niet te snel of in een te groot volume toe.Anders zullen de x explantaten gaan drijven en de spiercellen niet innerveren. Plaats de schaaltjes vervolgens zeer voorzichtig terug in de incubator. Ga door met het langzaam toevoegen van medium.Bij zorgvuldige behandeling zullen de x explantaten na ongeveer een uur stoppen met drijven in het medium en hechten aan de cellen. Zodra ze zijn gehecht, wordt het volume van het fusiemedium verhoogd naar twee milliliters per 35 millimeter schaaltje. Als de X explantaten na een nacht wachten nog steeds in het medium drijven, was ofwel de spiercellaag niet voldoende confluent of is het medium toegevoegd.Ongeveer twee. Deze X explan zullen nooit twee keer per week hechten. Vervang alle fusiemedia zeer langzaam druppelsgewijs om loslating van cellen te voorkomen.De X explanen zijn vrij fragiel tijdens de eerste week en kunnen gemakkelijk loslaten. Dit is een zeer mooie techniek omdat u na de inoculatie, simpelweg door het cultuurmedium te meten of op te vangen, het om van de co-culturen kunt bepalen. En als u de moleculaire instrumenten zorgvuldig kiest, kunt u differentiëren wat afkomstig is van de spier en wat afkomstig is van de zenuw.Twee dagen na de innervatie kwamen de neurieten uit elk explantaat tevoorschijn en maakten ze contact met de spiercellen, wat zichtbaar was als knopachtige structuren. Wanneer er geen neurieten verschijnen, zal de innervatie waarschijnlijk mislukken als gevolg van een gebrek aan aanhechting van het DRG. Reeds vier tot zes dagen na de innervatie begonnen enkele individuele vezels samen te trekken.De contracties hielden vele maanden aan, simpelweg door het kweekmedium twee keer per week te verversen. Na ongeveer twee weken degenerateerden, zoals verwacht, de ruggenmergexplantaten zelf, maar de innervaties bleven behouden. Een fijne laag zenuwcomponenten bleef aan het oppervlak van de spiercellaag aanwezig, en dit neurale netwerk was voldoende om de functionaliteit van de motorische eenheid in stand te houden.Een van de grote voordelen van deze techniek is de mogelijkheid om monsters van patiënten af te nemen en het fenotype van de coculturen tussen de controle en het patiërmonster te meten of te vergelijken. Door deze procedure te volgen, kunt u zeer gangbare klassieke technieken gebruiken zoals real-time PCR, Western blot en immunohistochemie, waarmee u het fenotype van de spier- of zenuwderivaten van de coculturen kunt bestuderen.

a-functional-motor-unit-culture-dish-co-culture-spinal-cord-explants

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowetenschap

De micro-ontleed explantaten techniek is een robuuste en betrouwbare methode voor het isoleren van proliferatieve skeletspieren cellen van jonge, volwassen of embryonale spieren als bron van skeletspieren stamcellen. Uniek, zijn deze cellen zijn klonaal ontleend aan de skeletspieren stamcellijnen gebruikt voor in vivo transplantatie te produceren.

Volwassen en embryonale skeletspier Microexplant Cultuur en isolatie van de skeletspieren Stem Cells

Een alternatieve manier van isoleren van muis embryonale motorneuronen van het ruggenmerg wordt beschreven. De methode houdt rekening met het feit dat de lectine kan binden aan de lage affiniteit zenuw groeifactor receptor p75NTR. Deze lectine-based preplating kan een zuivering vergelijkbaar met die met een specifiek antilichaam tegen de p75NTR.

Lectine-based Isolatie en cultuur van de muis embryonale motoneuronen

Laten we zien hoe te ontleden en cultuur chick E4 statoacoustic ganglion en E6 ruggenmerg explantaten. Explantaten worden gekweekt onder serum-vrije omstandigheden in 3D collageen gels voor 24 uur. Neurieten responsiviteit is getest met de groei factor-aangevuld medium en met eiwit-gecoate kralen.

Dissectie en Cultuur van Chick Statoacoustic Ganglion en Spinal Cord Explantaten in Collageen Gels voor neurietuitgroei Assays

Engineered spierweefsel heeft een groot potentieel in de regeneratieve geneeskunde, als de ziekte model en ook als een alternatieve bron voor vlees. Hier beschrijven we de constructie van een spier construct, in dit geval van muis myoblast progenitor cellen en stimulering van elektrische pulsen.

Techniek skeletspier weefsel van muizen myoblast progenitorcellen en toepassing van elektrische stimulatie

Slice culturen vergemakkelijken de manipulatie van embryo-ontwikkeling van gen-en farmacologische verstoringen. Wel moet kweekomstandigheden ervoor te zorgen dat de normale ontwikkeling kan gaan binnen de verminderde omgeving van de plak. We tonen een protocol dat normale ontwikkeling ruggenmerg vergemakkelijkt men gedurende ten minste 24 uur.

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Cultuur Protocol

Hier presenteren we een protocol dat is gebaseerd op gekweekt ruggemerg segmenten op multi-elektrode arrays functionele regeneratie van propriospinal verbindingen in vitro bestuderen.

Onderzoek van functionele Regeneratie in Organotypische Spinal Cord Co-culturen Grown on Multi-elektrode arrays

Axonale transport is een cruciaal mechanisme voor de gezondheid van motorneuronen. In dit protocol bieden we een gedetailleerde methode voor het bijhouden van het axonale transport van zure compartimenten en mitochondriën in motorneuron axonen met behulp van microfluïdische kamers.

Axonal Transport van Organellen in Motor Neuron Culturen met behulp van Microfluidic Chambers System

In dit protocol wordt een in vitro kweek- en functionele analysemethode voor spierstamcellen beschreven, die de meeste van hun interacties met hun endogene niche behoudt.

Single Myofiber Culture Assay voor de beoordeling van volwassen spierstamcelfunctionaliteit Ex Vivo

Dit manuscript beschrijft een gedetailleerd protocol om arrays van 3D menselijke skeletspierenmicrotissues en minimaal invasieve downstream in situ assays van functie te produceren, inclusief contractiele kracht en calciumbehandelingsanalyses.

Beoordeling van functionele statistieken van de gezondheid van skeletspieren in microtissues van menselijke skeletspieren

We beschrijven een methode om menselijke motorische eenheden te genereren in commercieel verkrijgbare microfluïdische apparaten door door de mens geïnduceerde pluripotente stamcel-afgeleide motorneuronen te co-cultiveren met menselijke primaire mesoangioblast-afgeleide myotubes, wat resulteert in de vorming van functioneel actieve neuromusculaire juncties.

Generatie van menselijke motorische eenheden met functionele neuromusculaire juncties in microfluïdische apparaten

Leer hoe je een functionele motor-eenheid in vitro reproduceert door humane primaire spiercellen te co-kweken met rattenembryo-ruggenmergexplantaat. Deze methode biedt een betrouwbaar model voor het bestuderen van spierinnervatie en zenuw-spierinteracties.

Een Functionele Motor-eenheid in de cultuur Dish: Co-cultuur van het ruggenmerg Explantaten-en spiercellen

Meer video's verkennen