Name: MAME Modellen voor 4D live-cell imaging van de tumor: micro-omgeving interacties die van invloed zijn Maligne Progression (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-17T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: Leer 3D co-cultuurmodellen bouwen voor live-cell imaging van borsttumorcellen en hun micro-omgeving. Deze methode maakt real-time analyse van celinteracties mogelijk voor preklinisch onderzoek.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund, voor een deel, door de National Institutes of Health R01 CA131990 (BFS en RRM). Live-cell imaging werd uitgevoerd in de Microscopie, Imaging en Cytometry ondersteund Resources Core, gedeeltelijk door NIH Center subsidie ​​P30 CA22453 aan de Karmanos Kanker Instituut, Wayne State University en door de Perinatologie Research afdeling van de National Institutes of Child Health and Development , Wayne State University.

1. Bereid DQ-substraten <ol><li> Laat gevriesdroogd DQ-substraten tot kamertemperatuur opwarmen voor het openen van flesjes, stock oplossing van 1 mg / ml DQ-substraat voor te bereiden in gedeïoniseerd water, verdeel het in 50 ul aliquots en bewaar bij 4 ° C. </li></ol> Het kan noodzakelijk DQ-substraat roeren in een ultrasoon waterbad ~ 5 min en verhit tot 50 ° C dispersie te vergemakkelijken. <ol start="2"><li> Ontdooien RBM op ijs gedurende de nacht bij 4 ° C; RBM worden behandeld op ijs allen tijde. </li><li> Om 10X fosfaat te gebufferde zoutoplossing (PBS), los 80 g NaCl (1,37 M), 2 g KCl (0,027 M), 14,4 g Na 2 HPO 4 (1 M) en 2,4 g KH PO 2 4 (0,02 M) 800 ml ultrapuur water. De pH van PBS buffer tot 7,4 met 1,0 M HCl. Breng het volume op 1 liter, steriliseer door filtratie. </li><li> Bereid collageen I oplossing op ijs gekoeld 8 delen collageen I 1 deel gekoeld 10X PBS. Pas de pHmengsel bij 7.2-7.6 met steriele 0,1 M NaOH. Controleer de pH met pH en corrigeer het eindvolume 10 delen met steriel water. </li><li> Bereid DQ-collageen I: I collageen matrix door verdunnen DQ-collageen I collageen I oplossing in een prechilled buis tot een eindconcentratie van 25 ng / ml en 2,4 mg / ml. </li><li> Bereid DQ-collageen IV bereide basaalmembraan (RBM) matrix door verdunnen DQ-collageen IV in RBM (Cultrex of Matrigel) in een prechilled buis tot een eindconcentratie van 25 ng / ml en 12-15 mg / ml. Meng op het ijs met zachte pipetteren om te voorkomen dat het creëren van bubbels. </li></ol> 2. Bereid MAME cocultures Zie Figuur 1 een schematisch diagram van cocultures. <ol><li> Plaats twee rechthoekige plastic dekglaasjes (gesteriliseerd in alcohol 70% gedurende 10 minuten en aan de lucht gedroogd) in een 35-mm cultuur schotel of gebruik een IbiTreat 35-mm μ-schotel. Routebeschrijving hier zijn voor zowel de dekglaasjes en μ-gerechten, die we gebruiken voor studentensterft rechtop microscoop. Voor studies over een omgekeerde microscoop, gebruiken we alleen μ-gerechten. </li><li> Meng het gewenste aantal fibroblasten met DQ-collageen I: I collageen matrix. Voor langdurige cocultures in figuren 2 en 3, we 500 fibroblasten in 10 ul medium plus 60 ul DQ-collageen I: I collageen matrix. </li><li> Een 100-il micropipettor zorgvuldig pipet verdeeld 70 pi fibroblast: DQ-collageen I: collageen I matrix over het gehele oppervlak van elk dekglaasje en bij 37 ° C in een bevochtigde incubator verlaten zonder CO 2 gedurende 30 minuten tot stollen. </li><li> Transfer 35-mm schaaltjes met dekglaasjes tot 37 ° C incubator met 5% CO2 gedurende 10 minuten in evenwicht. </li><li> Verwijderen uit incubator en laat de 35-mm schaaltjes onder de kap totdat ze op kamertemperatuur komen. </li><li> Voeg 60 pi DQ-collageen IV: RBM matrix bovenop de gestolde DQ-collageen I: collageen I matrix met ingebedde fibroblasten. Met pipetpunt, carefully verspreid DQ-collageen IV: RBM matrix gelijkmatig, het vermijden van krassen op de fibroblast: DQ-collageen I: I collageen matrix. </li><li> Transfer 35-mm schaaltjes met dekglaasjes tot 37 ° C incubator met 5% CO2 gedurende 10 min te stollen. Terwijl de DQ-collageen IV: RBM matrix wordt hard maken, trypsinize en tel epitheelcellen. </li><li> Plaats 50 ul van een epitheliale / tumorcel schorsing op dekglaasjes bedekt met DQ-collageen IV: RBM matrix. Plaats 35-mm schaaltjes met de dekglaasjes in een 37 ° C incubator. Laat 40 tot 60 min voor de cellen te hechten aan DQ-collageen IV: RBM matrix. Voor langdurige cocultures in figuren 2 en 3, we 2500 epitheelcellen of tumorcellen. </li><li> Voeg 2 ml kweekmedium dat 2% RBM voor elke 35-mm schotel. Als op een behandelingen met geneesmiddelen, moeten deze worden toegevoegd op dit moment. </li><li> Incubeer gedurende gewenste periode van tijd is voordat beeldvorming. Voor de lange termijn culturen, dient de pers worden veranderd om de 3-4 dagen. De cellen kunnen worden gehandhaafdin hun normale kweekmedium. Voor MAME cocultures van borst-cellijnen gebruiken we Epitheliale basismedium (MEBM-PRF), aangevuld met MEGM SingleQuots. </li></ol> 3. Voer 4D (3D + tijd) beeldvorming van levende MAME cocultures door confocale microscopie <ol><li> Voor de geïllustreerde proof-of-principle studie, werden MAME cocultures gelabeld met een fluorescerende cel tracking kleurstof volgens onze gepubliceerde procedure 1. Na wassen met PBS, werden cocultures geïncubeerd met 5 pM CellTracker Orange MEGM medium gedurende 45 minuten in een 37 ° C incubator, opnieuw gewassen met PBS en geïncubeerd met voorverwarmde MEGMmedium gedurende 30 minuten bij 37 ° C met 5% CO2 incubator voor beeldvorming . </li><li> Afbeelding MAME cocultures leven in een lage vergroting (10x, water dompelen lens) op een Zeiss LSM-510 META confocale microscoop. </li><li> Optische delen vastgelegd met tussenpozen gedurende de gehele diepte van de structuren. Voor onze studies hebben we vast te leggen optische secties op 10urn intervallen. </li><li> Gebruik optische secties om beelden te reconstrueren in 3D. We maken gebruik van Volocity software om 3D-reconstructies te genereren. </li><li> Maak films van de 3D-reconstructies, zodat structuren, cel: cel interacties en interacties met de omgeving matrices kunnen worden gevisualiseerd. We hebben films met QuikTime Player 7. </li></ol> 4. Representatieve resultaten De MAME cocultures dat we ontwikkeld zijn van een soepel experimenteel model voor live-cell imaging in real-time van de interacties tussen de verschillende cellulaire bestanddelen die een borsttumor en de micro-omgeving omvatten. Hier laten we zien het vermogen van MAME modellen naar cel recapituleren: cel interacties tijdens borstkanker progressie en van live-cell imaging aan die interacties in de tijd te volgen. We illustreren de mogelijkheid om beeld interactie tussen een preinvasive MCF10.DCIS menselijke borst cellijn en een menselijke borstkanker-geassocieerde fibroblasten lijn, WS-12Ti, meer daneen periode van meer dan drie weken in de cultuur. De cocultures werden afgebeeld op 3, 16 en 23 dagen. Optische delen door het totale volume van de cocultures werden gereconstrueerd 3D en representatieve voorbeelden gegeven van elk van de drie tijdstippen in figuur 2. De rode fluorescentie in Figuur 2 de MCF10.DCIS en WS-12Ti cellen. Onderscheid te maken tussen de twee celtypen en voor de lange termijn cocultures, kan men transfecteren of individuele cel-typen hadden transduceren met fluorescerende eiwitten om tot oprichting van de culturen. Een MAME coculture van MCF10.DCIS en WS-12Ti cellen die differentieel voorzien fluorescente eiwitten voor identificatie wordt in figuur 3. Door het opnemen van substraten, in dit geval DQ-collageen, in de MAME cocultures kunnen we beoordelen en veranderingen kwantificeren tijd in Proteolyse verbonden overgang naar een invasieve fenotype. We hebben werkwijzen voor het kwantificeren van de fluorescerende splitsingsprodukten die resulterenvan DQ-collageenafbraak 2,3. We normaliseren afbraakproducten in de hele 3D-volume van de MAME cocultures op een per cel basis van het energieverbruik en het tellen van celkernen. Bovendien kunnen we lokaliseren van de degradatie van extracellulaire en intracellulaire compartimenten en kwantificeren van het totaal, intracellulaire en extracellulaire afbraakproducten zoals we al eerder 2 beschreven. De groene fluorescentie in de figuren 2 en 3 is klievingsproducten van de twee DQ-collageen substraten. Op dit moment verschillend gelabeld collageen is niet zou kunnen we onderscheiden afbraak van type IV collageen en afbraak van type I collageen. De interacties in de MAME cocultures zijn dynamisch en de tijd kunnen veranderen. Om temporele en dynamische informatie te verkrijgen, kunnen dezelfde beeldveld worden afgebeeld en optische onderdelen die door de gehele monster van het volume continu gedurende een periode van minuten tot wekendus het verzamelen van gegevens in 4-D. In figuur 2 illustreren we nogal dramatische veranderingen die zich voordoen meer dan 23 dagen: veranderingen in het aantal cellen, celmigratie en cel interacties, structuur volumes, structuur vormen, afwijkingen van de structuren van de bolvorm, invasieve uitwassen en proteolyse. Verder hebben we ook aantonen een totale verandering in volume als gevolg van de MAME cocultures vernederende hun omgeving extracellulaire matrix in deze periode. Op drie dagen in figuur 2A, het volume 110000 um 3. In tegenstelling, het volume van de MAME cocultures bij 16 en 23 dagen slechts 46.250 pm 3, zoals weergegeven in figuren 2B en C. <img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/3661/3661fig1.jpg" /> Figuur 1. Schematische weergave van MAME cocultures. Plastic dekglaasje is bekleed met collageen I, met DQ-collageen I en fibroblasten (magenta). Een 2e laag van gereconstitueerde basaal membraan (RBM) met DQ-collagen IV wordt toegevoegd. Tumorcellen (rood) worden uitgeplaat aan de bovenkant en 2% RBM in cultuur media is bedekt (witte stippen) met elke verandering van de media. Groen vertegenwoordigt de fluorescerende splitsingsproducten van DQ-collageen I en IV. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3661/3661fig2.jpg" /> Figuur 2. MAME cocultures van MCF10.DCIS menselijke borst cellen en WS-12Ti mensen in de moedermelk fibroblasten. De fibroblasten zijn ingebed in collageen I / DQ-collageen I en bedekt met RBM met DQ-collageen IV. De DCIS cellen werden vervolgens uitgezaaid op de RBM-en bedekt met media die 2% RBM. In de 23 dagen in coculture hier weergegeven er celproliferatie, afbraak van DQ-collageen IV en I (groen) en collageen matrices als aangegeven door de beperking van de omvang van de cocultures. De cellen werden gelokaliseerd door middel van etikettering met CellTracker Oranje in situ voor de beeldvorming (rood). Dezelfde live-cocultures werden gemeten over de 23 dagen met beelden die door confocal microscopie op 3, 16 en 23 dagen van coculture. De resulterende optische schijfjes werden gereconstrueerd 3D met Volocity software. Vergroting, 10X. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/3661/3661fig3.jpg" /> Figuur 3. MAME 16 dagen cocultures van MCF10.DCIS menselijke borst cellen en WS-12Ti de moedermelk fibroblasten die express RFP (rood) en YFP (wit), respectievelijk. Cocultures opgericht en geanalyseerd als in figuur 2. De beide celtypen hier was echter is verschillend zodat aangegeven dat zij kunnen worden onderscheiden van elkaar. De hogere vergroting beelden in deze figuur in vergelijking met die in figuur 2 illustreren Proteolyse van DQ-collageen IV aan het oppervlak van de DCIS cellen en diffuse Proteolyse van DQ-collageen I in gebieden bij de fibroblasten. Vergroting, 20X.

<ol><li>Sameni, M., Dosescu, J., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+imaging+of+proteolysis%3A+stromal+and+inflammatory+cells+increase+tumor+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Functional imaging of proteolysis: stromal and inflammatory cells increase tumor proteolysis.</a> Mol. Imaging. 2, 159-175 (2003).</li>
<li>Jedeszko, C., Sameni, M., Olive, M. B., Moin, K., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualizing+protease+activity+in+living+cells%3A+from+two+dimensions+to+four+dimensions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Visualizing protease activity in living cells: from two dimensions to four dimensions.</a> Curr. Protoc. Cell Biol. 39, (2008).</li>
<li>Jedeszko, C., Victor, B. C., Podgorski, I., Sloane, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibroblast+hepatocyte+growth+factor+promotes+invasion+of+human+mammary+ductal+carcinoma+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Fibroblast hepatocyte growth factor promotes invasion of human mammary ductal carcinoma in situ.</a> Cancer Res. 69, 9148-9155 (2009).</li>
<li>Sameni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+live-cell+imaging+demonstrates+that+beta1-integrin+promotes+type+IV+collagen+degradation+by+breast+and+prostate+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging%22%5BJournal%5D)">Functional live-cell imaging demonstrates that beta1-integrin promotes type IV collagen degradation by breast and prostate cancer cells.</a> Mol. Imaging. 7, 199-213 (2008).</li>
<li>Li, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((p21-activated+kinase+1+coordinates+aberrant+cell+survival+and+pericellular+proteolysis+in+a+three-dimensional+culture+model+for+premalignant+progression+of+human+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">p21-activated kinase 1 coordinates aberrant cell survival and pericellular proteolysis in a three-dimensional culture model for premalignant progression of human breast cancer.</a> Neoplasia. 10, 314-328 (2008).</li>
<li>Sameni, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+and+quantifying+the+dynamics+of+tumor+associated+proteolysis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Imaging and quantifying the dynamics of tumor associated proteolysis.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 299-309 (2009).</li>
<li>Cavallo-Medved, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+imaging+demonstrates+that+proteases+in+caveolae+of+endothelial+cells+degrade+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Cell.+Res%22%5BJournal%5D)">Live-cell imaging demonstrates that proteases in caveolae of endothelial cells degrade extracellular matrix.</a> Exp. Cell. Res. 315, 1234-1246 (2009).</li>
<li>Fukumura, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+microvasculature+and+microenvironment%3A+novel+insights+through+intravital+imaging+in+pre-clinical+models%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Tumor microvasculature and microenvironment: novel insights through intravital imaging in pre-clinical models.</a> Microcirculation. 17, 206-225 (2010).</li>
</ol>

Wij hebben niets te onthullen.

Zoals blijkt kan de MAME cocultures worden gebruikt voor levende cellen beeldvorming in real-time van wisselwerking tussen de celbestanddelen een borsttumor en micro omvatten. In lopende studies in ons laboratorium gebruikten we MAME cocultures om proteolytische verbonden overgang van DCIS tot invasieve carcinoom, en de wisselwerking tussen proteolytische en andere routes die betrokken bij de overgang zoals chemokine / cytokine / groeifactor trajecten identificeren . We laten verder zien dat MAME-modellen kunnen worden ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens / Equipment </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Gereconstitueerde basaal membraan (Cultrex) </td><td> Trevigen </td><td> 3445-005-01 </td><td> Vergelijkbaar met Matrigel (BD Biosciences) </td></tr><tr><td> Collageen I </td><td> Cohesie Laboratories </td><td> 5005-B </td><td></td></tr><tr><td> DQ-substraten (Collageen I, IV) </td><td> Invitrogen </td><td> DQ-col I-D12060 DQ-col IV D12052 </td><td></td></tr><tr><td> 22 mm plastic dekglaasjes </td><td> Fisher Scientific Co </td><td> 12-547 </td><td> In tweeën gesneden, laat in 70% ethanol gedurende 10 min en de lucht drogen voor gebruik. </td></tr><tr><td> Celkweekmedium </td><td> Lonza </td><td> MEBM-PRF CC-3153 MEGM CC-4136 </td><td> Fenolrood vrij </td></tr><tr><td> ibiTreat μ-Dish </td><td> Ibidi </td><td> 80136 </td><td></td></tr><tr><td> Volocity software </td><td> Perkin-Elmer </td><td> Versie 5.5 </td><td> Andere merken van imaging software kan worden gebruikt om 3D-reconstructies en films te genereren. </td></tr></tbody></table>

mame modellen voor 4d live-cell imaging van de tumor: micro-omgeving interacties die van invloed zijn maligne progression

MAME Models for 4D Live-cell Imaging of Tumor: Microenvironment Interactions that Impact Malignant Progression

We hebben 3D coculture modellen, die we term MAME (m ammary een rchitectuur en m icroenvironment e ngineering), en ze gebruikt voor live-cell imaging in real-time van de cel: cel interacties. Onze algemene doel was om modellen die de architectuur van preinvasive laesies van borst om hun progressie te bestuderen om een ​​invasieve fenotype recapituleren te ontwikkelen. In het bijzonder hebben we modellen ontwikkeld om de interacties tussen de pre-maligne borst epitheelcellen varianten en andere celtypes van de tumor micro-omgeving die zijn betrokken bij het verbeteren of het verminderen van de progressie van preinvasive borst epitheelcellen van invasieve ductale carcinomen te analyseren. Andere celtypen onderzocht tot nu toe zijn myo-cellen, fibroblasten, macrofagen en bloed-en lymfestelsel microvasculaire endotheelcellen. Naast de MAME modellen, die zijn bedoeld om de cellulaire interacties in de borst vatten tijdensde voortgang van kanker, hebben we vergelijkbare modellen voor de progressie van prostaatkanker. Hier illustreren we de procedures voor het vaststellen van de 3D-cocultures samen met het gebruik van live-cell imaging en een functionele proteolyse test om de overgang van cocultures van de borst ductaal carcinoma in situ (DCIS) cellen en fibroblasten tot een invasieve fenotype loop van de tijd volgen, in dit geval over drieëntwintig dagen in kweek. De MAME cocultures bestaan ​​uit meerdere lagen. Fibroblasten zijn ingebed in de onderste laag van type I collageen. Op die bevindt zich een laag van gereconstitueerde basaal membraan (RBM), waarop DCIS cellen worden gezaaid. Een laatste toplaag van 2% RBM is opgenomen en aangevuld met elke verandering van de media. Om het beeld proteolyse geassocieerd met een toename van een invasieve fenotype we kleurstof-gehard (DQ) fluorescerende matrixeiwitten (DQ-collageen I gemengd met de laag van collageen I en DQ-collageen IV gemengd met de middelste laag van rBM) en observeer levende culturen met behulp van confocale microscopie. Optische onderdelen worden vastgelegd, verwerkt en gereconstrueerd in 3D met Volocity visualisatie-software. In de loop van 23 dagen in MAME cocultures, de DCIS-cellen prolifereren en samenvloeien tot grote invasieve structuren. Fibroblasten migreren en opgenomen worden in deze invasieve structuren. Fluorescente proteolytische fragmenten van collageen zijn die samen met het oppervlak van DCIS structuren intracellulair, en gedispergeerd door de omgevende matrix. Geneesmiddelen die op proteolytische, chemokine / cytokine en kinase-routes of wijzigingen in de cellulaire samenstelling van de cocultures kan het invasieve verminderen, wat suggereert dat MAME modellen worden gebruikt preklinische schermen voor nieuwe therapeutische methoden.

We hebben 3D coculture modellen voor live-cell imaging in real-time van de interacties tussen borsttumor cellen en andere cellen in hun micro-omgeving die van invloed zijn progressie naar een invasieve fenotype. Deze modellen kunnen dienen als preklinisch schermen voor drugs te paracriene-geïnduceerde proteolytische, chemokine / cytokine en kinase pathways die betrokken zijn bij invasiviteit richten.

MAME Modellen voor 4D live-cell imaging van de tumor: micro-omgeving interacties die van invloed zijn Maligne Progression

Wij hebben 3D-cocultuurmodellen ontwikkeld, die wij MAME (mammary architecture and microenvironment engineering) noemen, en deze gebruikt voor live-cell imaging in ...

Het algemene doel van deze procedure is het bouwen van 3D co-cultuurmodellen, aangeduid als mammary architecture and microenvironment engineering, of MAM, voor gebruik bij live-cell imaging van cel-celinteracties in realtime. Dit wordt bereikt door eerst dekglasplaatjes te coaten met een fibroblast D quenched, of DQ collagen one, collageen one-matrix.Vervolgens werd DQ-gequenched collageen I gebruikt. In de vierde stap wordt een gereconstitueerde basaalmembraanmatrix bovenop het gestolde DQ-collageen I geplaatst, de collageen I-matrix met ingebedde fibroblasten. In de derde stap wordt een suspensie van epitheel- of tumorcellen bovenop de dekglasjes aangebracht, zodat de cellen kunnen hechten aan het DQ-collageen I en de gereconstitueerde basaalmembraanmatrix, waarna medium wordt toegevoegd.Ten slotte wordt confocale microscopie gebruikt om 4D-beeldvorming uit te voeren, waarbij een beeld in drie ruimtelijke dimensies plus de tijd van de levende mam-coculturen wordt geanalyseerd. Uiteindelijk maakt 4D-beeldvorming de visualisatie en analyse mogelijk van de dynamische interactie tussen borsttumorgestellen en andere cellen van de tumoromgeving die van invloed kunnen zijn op de progres

mame-models-for-4d-live-cell-imaging-tumor-microenvironment

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

We beschrijven een werkwijze voor beeldvorming respons op...

Leef Imaging van de Drug antwoorden in de tumor micro-omgeving in muismodellen van Kanker van de Borst

Dit artikel geeft gedetailleerde methodologieën voor het gebruik van driedimensionale (3D) assays om borstkanker cel invasie kwantificeren. Concreet bespreken we het nodig om dergelijke assays procedures, kwantificering en gegevensanalyse, alsook werkwijzen voor het verlies van membraan integriteit die ontstaat wanneer cellen binnendringen onderzoeken.

Kwantificering van de Breast Cancer Cell Invasiviteit met een drie-dimensionale (3D) Model

Moleculaire profilering van laser gemicrodissecteerde cellen en stroma van synthetische, weefselengineering darmkanker modellen vertegenwoordigt een nieuwe benadering en manipuleerbaar te karakteriseren en ontleden de kenmerkende biologie op het grensvlak tussen tumorcellen aan de voorzijde en invasieve kanker geassocieerd stromacellen.

Molecular Profiling van de invasieve tumor micro in een 3-dimensionaal model van colorectale kanker cellen en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Fibroblasts

Door het gebruik van transgene reportermuizen en injecteerbare fluorescerende labels, maakt langdurige intravitale spinning disk confocale microscopie directe visualisatie mogelijk van het gedrag van myeloïde cellen in darmadnomen in het ApcMin/+ colorectaal kankermodel.

Real-time beeldvorming van myeloïde cellen Dynamiek in Apc Min / + Intestinale Tumoren door draaiende schijf confocale microscopie

Dit protocol beschrijft het gebruik van multiphoton microscopie tot uitgebreide time-lapse beeldvorming van meercellige interacties uit te voeren in real time, in vivo bij enkele resolutie cel.

Extended Time-lapse intravitale Imaging van Real-time Meercellige Dynamiek in de tumor micro

Hier beschrijven we een driedimensionale cultuur-methode voor het analyseren van de morfologie van primaire borstkankercellen, alsmede over de studie van hun directe/indirecte interacties met monocyten en de resultaten zoals de aantasting van het collageen, immuun cel aanwerving, cel invasie, en bevordering van kanker-gerelateerde ontsteking.

Analyseren van de communicatie tussen monocyten en primaire borstkankercellen in een extracellulaire Matrix extraheren (ECME)-gebaseerde driedimensionaal systeem

We beschrijven twee methoden voor het beoordelen van voorbijgaande vasculaire permeabiliteit geassocieerd met tumor micro omgeving van metastasen (tmem) deuropening functie en kankercel intravasatie met behulp van intraveneuze injectie van hoog-moleculair gewicht (155 kDa) dextran bij muizen. De methoden omvatten intravital beeldvorming in levende dieren en vaste weefsel analyse met behulp van immunofluorescentie.

Beoordeling van tumor Microenvironment van metastasen doorway-gemedieerde vasculaire permeabiliteit geassocieerd met kanker cel verspreiding met behulp van Intravital beeldvorming en vaste weefsel analyse

Hier presenteren we een protocol voor het voorbereiden en kweken van een bloed-hersenbarrière gemetastaseerde tumor micro-omgeving en vervolgens kwantificeren van de toestand met behulp van confocale beeldvorming en kunstmatige intelligentie (machine learning).

Kwantificeren van de Brain Gemetastatische Tumor Micro-Environment met behulp van een Organ-On-A Chip 3D Model, Machine Learning en Confocal Tomography

In het tijdperk van immunotherapie en eencellige genomische profilering vereist kankerbiologie nieuwe in vitro en computationele hulpmiddelen voor het onderzoeken van de tumor-immuuninterface in een juiste spatiotemporale context. We beschrijven protocollen om tumor-immuun microfluïdische co-culturen te exploiteren in 2D- en 3D-instellingen, compatibel met dynamische, multiparametrische monitoring van cellulaire functies.

Microfluïdische co-cultuurmodellen voor het ontleden van de immuunrespons in in vitro tumormicro-omgevingen

Deze studie presenteert een protocol van live-3D-cel immunocytochemie toegepast op een pediatrische diffuse midline glioom cellijnlijn, nuttig om in real-time de expressie van eiwitten op het plasmamembraan te bestuderen tijdens dynamische processen zoals 3D-celinvasie en migratie.

Live-3D-cel immunocytochemie Assays van pediatrische diffuse middellijn glioom

De hier beschreven intravitale beeldvormingsmethode maakt gebruik van collageen tweede harmonische generatie en endogene fluorescentie van de metabole co-factor NAD (P) H om een niet-invasieve tumormicro-omgeving te segmenteren in tumor-, stromale en vasculaire compartimenten voor diepgaande analyse van 4D intravitale beelden.

Een labelvrije segmentatiebenadering voor intravitale beeldvorming van de micro-omgeving van borsttumoren

Leer 3D co-cultuurmodellen bouwen voor live-cell imaging van borsttumorcellen en hun micro-omgeving. Deze methode maakt real-time analyse van celinteracties mogelijk voor preklinisch onderzoek.

MAME Modellen voor 4D live-cell imaging van de tumor: micro-omgeving interacties die van invloed zijn Maligne Progression

Meer video's verkennen