De Staart Suspension Test

De staartophangingstest is een veelgebruikte gedragstest om de antidepressieve werking van diverse experimentele manipulaties te voorspellen. Deze film demonstreert de procedures van deze test. De staartophangingstest is gevalideerd voor de muis en wordt niet aanbevolen voor grotere knaagdieren.

Bij de staartopschortingstest worden muizen aan hun staart opgehangen. De muis blijft zes minuten lang opgehangen. Gedurende deze tijd wordt het gedrag van het proefdier geregistreerd.

Aan het einde van de testperiode van zes minuten wordt de tape van de staart van het proefdier verwijderd. Nadat de test is voltooid, worden de visuele opnamen overgebracht naar een computer of videomonitor. Voor de analyse meet een waarnemer de tijd die een muis besteedt aan worstelen tijdens de volledige sessie van zes minuten.

Verbindingen met antidepressieve eigenschappen verhogen de tijd die muizen besteden aan strijdgedrag. Dit komt tot uiting in kortere perioden van immobiliteit. Wij hebben bijvoorbeeld gerapporteerd dat het stemmingstabiliserende medicijn lithium, dat klinisch nuttig is als aanvullende antidepressieve medicatie, de immobiliteitstijd in de tail suspension test verminderde.

Hallo, mijn naam is Sean van het laboratorium van Dr. Todd Gould van de afdeling Psychiatrie aan de University of Maryland School of Medicine in Baltimore. Hoi, ik ben Chantel van hetzelfde laboratorium. In deze video gaan we laten zien hoe u de tail suspension test uitvoert en scoort.

De Tail Suspension test wordt gebruikt om de potentiële effectiviteit van antidepressiva te evalueren. Laten we naar het laboratorium gaan om te laten zien hoe dit experiment wordt uitgevoerd. Hoewel dit niet vereist is, maken wij gebruik van een speciaal ontworpen tail suspension box.

Voor deze test is onze staartophangingsbox verdeeld in vier compartimenten, elk bestemd voor één enkele muis. De scheidingswanden voorkomen dat de muizen elkaar tijdens de test kunnen zien.

Het is echter mogelijk om een plank of een andere structuur te gebruiken om de muizen op te hangen. De afmettingen van de box voor de staartfusietest zijn zo gekozen dat de muizen de randen niet kunnen bereiken of vastpakken. Knip voorafgaand aan het experiment voldoende stukjes plakband af en markeer het segment dat voor de hechting aan de staart zal worden gebruikt.

In ons laboratorium maken we gebruik van tapefragmenten van 17 centimeter. Twee centimeter vanaf het uiteinde van dit tapefragment moet worden afgetekend en zal worden gebruikt om aan de staart te hechten. We plaatsen de staart in het midden van dit gedeelte van twee centimeter.

Plaats de box voor de staartophangingstest en de videocamera. Voordat de dieren worden geïntroduceerd, moet de box grondig worden gereinigd met een steriliserende oplossing om de geuren van de vorige proefdieren te neutraliseren. In ons laboratorium gebruiken we twee verschillende boxen voor staartophanging, die in elk opzicht identiek zijn behalve de kleur.

Voor albino muizen biedt een donkergrijze doos een goed contrast voor video-opnamen. Voor donkergekleurde muizenstammen is een witte doos geschikt. Start de machine voor witte ruis.

Het moet eventuele onderbroken geluiden maskeren. Breng de muizen naar de procedurekamer om te acclimatiseren. De omstandigheden in de kamer moeten constant worden gehouden en vrij zijn van geluiden, veranderingen in lichtintensiteit en andere mogelijke verstoringen.

Deze periode duurt over het algemeen ten minste één uur. Zodra de acclimatisatieperiode is beëindigd, kan de test worden voortgezet om te voorkomen dat bepaalde muizenstammen met hun staarten omhoog klimmen. Tijdens de tail suspension test gebruiken we plastic cilinders die we over de staarten plaatsen.

Deze cilinders rusten tijdens de test op de basis van hun staart. In ons laboratorium gebruiken we plastic cilinders van vier centimeter lang, één centimeter in diameter en met een gewicht van 1,5 gram. Indien er plastic cilinders worden gebruikt om klimmen te voorkomen, moeten deze op de staarten worden geplaatst voordat de tape wordt aangebracht.

Breng tape aan op het uiterste uiteinde van de staart, waarbij twee tot drie millimeter van de staart buiten de tape blijft steken. Plak de tape aan de staarten van de muizen in hun eigen kooi. Gebruik het gemarkeerde uiteinde van de tape en zorg ervoor dat de tape aan de staart en vervolgens aan zichzelf hecht.

Zodra de tape is aangebracht, bevestigt u elke muis aan de wanden van de kooi om te voorkomen dat de tape van verschillende dieren in elkaar raakt. Voer dit proces snel uit. Anders worden de muizen blootgesteld aan onnodige stress.

De opname moet worden gestart voordat de dieren worden opgehangen. Hang de dieren op door het vrije uiteinde van de tape op de ophangstang te plaatsen in een volgorde die is gebalanceerd tussen de behandelgroepen en op een manier die het zicht van de camera niet belemmert. Omdat de muizen één voor één worden opgehangen, heeft elk dier een enigszins verschillende starttijd voor de test.

Zorg ervoor dat u met de score van elke muis precies aan het begin van de suspensieperiode begint. Het is belangrijk dat het zicht van de camera niet wordt belemmerd. Aangezien de gehele tailsuspessie wordt gescoord, zou een belemmering van het cameragezicht kunnen leiden tot ontbrekende gegevens.

Zorg ervoor dat alle uiteinden van de tape loodrecht op de ophangstang staan met dezelfde hoeveelheid speling. Start voor elk subject de timer. De staartophangtest duurt zes minuten.

Zodra de testperiode van zes minuten is verstreken, verwijdert u de tape aan het uiteinde van elke staart en plaatst u de muizen terug in hun thuiskooi. Aan het einde van de test moeten de subjectgegevens via video worden opgenomen. Nadat de muizen zijn teruggebracht naar de koloniekamer, moet de testbox grondig worden gereinigd en afgeveegd met een sterilisatiedoekje.

Nu we klaar zijn met de testen, bespreken we de score van de gedragingen. De enige variabele die doorgaans wordt beoordeeld bij het scoren van de staartophangtest is de tijd dat de dieren immobiel zijn. Om de immobiliteitstijd te bepalen, meten we de tijd dat de muizen mobiel zijn en trekken we dit af van de totale testduur van zes minuten. We zullen de volledige zes minuten van de test scoren.

We dekken eerst de muizen af die niet worden beoordeeld, zodat de waarnemer zich per tijdseenheid op slechts één dier kan concentreren. Mobiliteit wordt gemeten met een stopwatch op het scherm, bediend via een gamepad. Hier, zoals u kunt zien, zijn er twee afzonderlijke stopwatches op het scherm die gelijktijdig worden bediend.

De eerste stopwatch telt af vanaf 360 seconden en geeft de testduur aan de waarnemer door. De tweede stopwatch meet de tijd dat de proefpersonen mobiel blijven. Zoals u zult merken, wordt de tweede stopwatch bedekt door de eerste stopwatch en zijn alleen de milliseconde-decimalen zichtbaar voor de waarnemer.

Op deze manier kan de waarnemer zien of de stopwatch loopt, maar is de totale mobiliteitstijd pas zichtbaar nadat de scoring is voltooid. We doen dit om te voorkomen dat waarnemerbias de resultaten beïnvloedt. Muizen vertonen, vooral aan het begin van de sessie, ontsnappingsgerelateerd gedrag.

Deze gedragingen omvatten pogingen om de wanden van het apparaat en de ophangstang te bereiken, sterke schuddingen van het lichaam en bewegingen van de ledematen die lijken op rennen. Deze bewegingen vormen duidelijk mobiliteit. Naarmate de test echter vordert, worden de bewegingen subtieler.

In ons laboratorium beschouwen we kleine bewegingen die beperkt blijven tot de voorpoten, zonder enige beweging van de achterpoten, niet als mobiliteit. Daarnaast worden pendelachtige zwaaien, die het gevolg zijn van de opgebouwde impuls tijdens eerdere mobiliteitsperiodes, niet als mobiliteit aangemerkt. Laten we nu kijken naar de scoring van een daadwerkelijke staartophangingsproef.

Over het algemeen wordt de immobiliteitstijd gerapporteerd, niet de mobiliteitstijd. De immobiliteitstijd kan worden berekend door de totale mobiliteitstijd af te trekken van de testduur van 360 seconden.Score. De staartophangingstest vereist training en oefening.

Het is belangrijk om een interne laboratoriumstandaard vast te stellen en nieuwe waarnemers te trainen totdat zij een hoog niveau van betrouwbaarheid bereiken. In dit artikel leggen we uit hoe de tail suspension test moet worden uitgevoerd en gescoord. Veel succes met uw toekomstige experimenten.