De Staart Suspension Test

De staartophangingstest is een veelgebruikte gedragstest om de antidepressieve effectiviteit van diverse experimentele manipulaties te voorspellen. Deze video demonstreert de procedures van deze test. De staartophangingstest is gevalideerd voor de muis en wordt niet aanbevolen voor grotere knaagdieren.

Bij de staartophangingstest worden muizen aan hun staart opgehangen. De muis blijft zes minuten lang opgehangen. Het gedrag van het subject wordt gedurende deze tijd geregistreerd.

Aan het einde van de zes minuten durende testperiode wordt de tape van de staart van het proefdier verwijderd. Nadat de test is voltooid, worden de visuele opnames overgebracht naar een computer of videomonitor. Voor de analyse meet een waarnemer de tijd die een muis besteedt aan worstelen tijdens de volledige sessie van zes minuten.

Verbindingen met antidepressieve eigenschappen verhogen de tijd die muizen besteden aan strijdbewegingen. Dit vertaalt zich in kortere perioden van immobiliteit. Zo hebben wij gerapporteerd dat het stemmingsstabiliserende medicijn lithium, dat klinisch nuttig is als aanvullende antidepressieve medicatie, de immobiliteitstijd in de tail suspension test verminderde.

Hallo, mijn naam is Sean van het laboratorium van Dr. Todd Gould van de afdeling Psychiatrie aan de University of Maryland School of Medicine in Baltimore. Hoi, ik ben Chantel van hetzelfde lab. In deze video gaan we laten zien hoe u de tail suspension test uitvoert en scoort.

De staartophangingsproef wordt gebruikt om de potentiële werkzaamheid van antidepressiva te evalueren. Laten we naar het laboratorium gaan om te laten zien hoe het experiment wordt uitgevoerd. Hoewel niet verplicht, maken wij gebruik van een speciaal ontworpen staartophangingsbox.

Voor deze test is onze staartophangingsbox verdeeld in vier compartimenten, elk gereserveerd voor één enkele muis. De scheidingswanden voorkomen dat de muizen elkaar tijdens de test kunnen zien.

Het is echter mogelijk om een plank of een andere structuur te gebruiken om de muizen op te hangen. De afmetingen van de box voor de staartophangtest zijn zodanig gekozen dat voorkomen wordt dat de muizen de randen kunnen bereiken en vastpakken. Knip vóór aanvang van het experiment voldoende stukjes tape af en markeer het segment dat gebruikt zal worden voor de hechting aan de staart.

In ons laboratorium gebruiken we tapefragmenten van 17 centimeter. Twee centimeter vanaf het uiteinde van dit tapefragment moet worden afgemerkt en zal worden gebruikt om de staart te bevestigen. We plaatsen de staart in het midden van dit gedeelte van twee centimeter.

Plaats de box voor de staartopschortingstest en de videocamera. Voordat de dieren worden geplaatst, moet de box grondig worden gereinigd met een steriliserende oplossing om de geuren van vorige proefdieren te neutraliseren. In ons laboratorium gebruiken we twee verschillende boxen voor staartopschorting, die in elk opzicht identiek zijn, behalve de kleur.

Voor albino muizen biedt een donkergrijze doos een goed contrast voor videoprestaties. Voor donkerder gekleurde muizenstammen is een witte doos geschikt. Zet de machine voor witte ruis aan.

Het moet eventuele onderbrekende geluiden maskeren. Breng de muizen naar de procedurekamer om te acclimatiseren. De omstandigheden in de kamer moeten constant worden gehouden en vrij zijn van geluiden, veranderingen in lichtintensiteit en andere mogelijke verstoringen.

Deze periode duurt over het algemeen ten minste één uur. Zodra de acclimatisatieperiode is beëindigd, kan de test worden voortgezet om te voorkomen dat bepaalde muizenstammen op hun staart klimmen. Tijdens de tail suspension test gebruiken we plastic cilinders die we over de staarten plaatsen.

Deze cilinders rusten tijdens de test op de basis van hun staart. In ons laboratorium gebruiken we plastic cilinders van vier centimeter lang, één centimeter in diameter en met een gewicht van 1.5 gram. Indien plastic cilinders worden gebruikt om klimmen te voorkomen, moeten deze op de staarten worden geplaatst voordat de tape wordt aangebracht.

We brengen tape aan op het uiteinde van de staart, waarbij twee tot drie millimeter van de staart buiten de tape blijft steken. Plak de tape op de staarten van de muizen in hun thuiskooi. Gebruik het gemarkeerde uiteinde van de tape en zorg ervoor dat de tape aan de staart en vervolgens aan zichzelf hecht.

Zodra de tape is aangebracht, wordt elke muis aan de wanden van de kooi bevestigd om te voorkomen dat de tape van verschillende dieren in elkaar raakt. Voer dit proces snel uit. Anders worden de muizen blootgesteld aan onnodige stress.

De opname moet worden gestart voordat de dieren worden opgehangen. Hang de dieren op door het vrije uiteinde van de tape op de ophangstang te plaatsen in een volgorde die is gebalanceerd tussen de behandelgroepen en op een manier die het zicht van de camera niet belemmert. Omdat de muizen één voor één worden opgehangen, heeft elk dier een iets andere starttijd voor de test.

Zorg ervoor dat u de score voor elke muis precies aan het begin van de suspensieperiode start. Het is belangrijk dat het zicht van de camera niet wordt belemmerd. Aangezien de gehele staartsuspensiesessie wordt gescoord, kan een belemmering van het camerabeeld leiden tot ontbrekende gegevens.

Zorg ervoor dat alle uiteinden van de tape loodrecht op de ophangstang staan met een gelijke hoeveelheid speling. Start voor elk proefdier de timer. De staartophangtest duurt zes minuten.

Zodra de testperiode van zes minuten is verstreken, verwijdert u de tape van het uiteinde van elke staart en plaatst u de muizen terug in hun thuiskooi. Aan het einde van de test moeten de subjectgegevens via video worden geregistreerd. Nadat de muizen zijn teruggeplaatst in de koloniekamer, moet de testbox grondig worden gereinigd en afgeveegd met een sterilisatieoplossing.

Nu we klaar zijn met het testen, bespreken we de score van de gedragingen. De enige variabele die doorgaans wordt beoordeeld bij de score van de tail suspension test is de tijd dat de dieren immobiel zijn. Om de immobiliteitstijd te bepalen, meten we de tijd dat de muizen mobiel zijn en trekken we dit af van de totale testduur van zes minuten. We scoren de volledige zes minuten van de test.

We dekken eerst de muizen af die niet worden beoordeeld, zodat de waarnemer zich per muis alleen op één dier kan concentreren tijdens de gemeten tijd. Mobiliteit wordt gemeten met een stopwatch op het scherm die wordt bediend via een gamepad. Zoals hier te zien is, zijn er twee afzonderlijke stopwatches op het scherm die gelijktijdig worden bediend.

De eerste stopwatch telt af vanaf 360 seconden en geeft de testduur aan de waarnemer aan. De tweede stopwatch meet de tijd dat de proefpersonen mobiel blijven. Zoals u zult merken, wordt de tweede stopwatch gedekt door de eerste stopwatch, waardoor alleen de milliseconden zichtbaar zijn voor de waarnemer.

Op deze manier kan de waarnemer zien of de stopwatch loopt, maar is de totale mobiliteitstijd pas zichtbaar nadat de scoring is voltooid. We doen dit om te voorkomen dat de subjectiviteit van de waarnemer de resultaten beïnvloedt. Muizen vertonen, vooral aan het begin van de sessie, ontsnappingsgerelateerd gedrag.

Deze gedragingen omvatten pogingen om de wanden van het apparaat en de ophangstang te bereiken, hevige schuddingen van het lichaam en bewegingen van de ledematen die lijken op rennen. Deze bewegingen vormen duidelijk mobiliteit. Naarmate de test echter vordert, worden de bewegingen subtieler.

In ons laboratorium tellen we kleine bewegingen die beperkt blijven tot de voorpoten, zonder enige beweging van de achterpoten, niet als mobiliteit. Daarnaast worden pendule-achtige zwaaibewegingen, die voortkomen uit het momentum dat tijdens eerdere mobiliteitsperioden is opgebouwd, niet beschouwd als mobiliteit. Laten we nu kijken naar de score van een daadwerkelijke staartophangingssessie.

Over het algemeen wordt de immobiliteitstijd gerapporteerd, niet de mobiliteitstijd. De immobiliteitstijd kan worden berekend door de totale mobiliteitstijd af te trekken van de testtijd van 360 seconden. Scorebepaling. De staartopschortingstest vereist training en oefening.

Het is belangrijk om een interne laboratoriumstandaard vast te stellen en nieuwe waarnemers te trainen totdat zij een hoog niveau van betrouwbaarheid bereiken. In dit artikel leggen we uit hoe de staartopsuspensietest moet worden uitgevoerd en gescoord. Veel succes met uw toekomstige experimenten.