Name: In Ovo Elektroporatie in Embryonale Chick Retina (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 15 s
Description: Leer in ovo-elektroporatie in het embryonale kippenretina voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze methode maakt gerichte DNA/RNA-injectie in retinale voorlopercellen mogelijk voor visualisatie op enkelcellig niveau.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

We willen graag aan de heer Maaz Enver bedanken voor het gebruik van zijn HD-camera (Cannon VIXIA HFS100). Dit werk werd mede ondersteund door subsidies van NIH (EY018738), New Jersey Commissie op het ruggenmerg Onderzoek (08 tot 3074-SCR-E-0 en 10 tot 3.091-SCR-E-0), en Busch Biomedical Research Award.

Aangezien sommige delen van het protocol worden uitgevoerd zoals eerder beschreven in andere Jupiter video&#39;s 2 en papers 3 met minor modificatie we zullen niet bespreken die in detail hier. 1. Egg Handling en Naald Voorbereiding <ol><li> Eieren kunnen worden opgeslagen in een wijnkoeler bij ongeveer 13 ° C maximaal 1 week. Als de temperatuur te hoog is, zal embryo&#39;s abnormaal begint te ontwikkelen, terwijl lagere temperatuur veroorzaakt een hoge mortaliteit. Zodra u klaar bent om te broeden haal de eieren uit de wijnkoeler en verticaal zet de eieren met de grotere eindigen. Houd de eieren in de kamertemperatuur gedurende ten minste 2 uur voordat ze in de 37,5 ° C incubator. </li><li> Incubeer de eieren 96 tot 100 uur, die over de embryonale dag 4 te verkrijgen embryo&#39;s die aan de Hamburger en Hamilton het podium 22 4-5. </li><li> Bereid micropipet naalden van getrokken glas capillaire buizen en breek de punt onder een dissectie micromogelijkheden met een pincet om een ​​tip opening ongeveer 0,1 micrometer in doorsnede en een 20 mm conus te krijgen. Naalden met grotere tips moeite hebben met het doorprikken van de vitelline membraan terwijl de kleinere tips moeite hebben met het laden en het leveren van de DNA-oplossing. </li><li> Bevestig de naald aan een 0,1 ml Hamilton Gasdichte spuit gemonteerd op een micromanipulator. Gebruik een klein stukje van Masterplex siliconen buis voor het bevestigen van de naald op de spuit. Omdat de aansluitingen goed vast zitten geen behoefte aan minerale olie toe te voegen aan deze bijlage af te dichten. </li><li> Mix 2 pi reporter plasmide-DNA oplossing met een concentratie variërend 3-6 pg / pl en 0,2 ul van snelle groen (0,025%) op een stuk parafilm. Snel groene kleurstof zal helpen om de injectie te visualiseren. Langzaam, laadt u de naald met het mengsel. </li><li> Om de vitelline membraan te bevrijden van de binnenste membraan voorzichtig draai het ei ongeveer 180 ° en wacht enkele minuten en draai het vervolgens terug in de oorspronkelijke stand en stel het voor elektroporatie. </li><li> Veeg de Forceps en eischaal met 70% ethanol om infectie te voorkomen dat het embryo. </li><li> Maak een klein gaatje op het ei direct boven de lucht cel met een paar AA tang. Zorg ervoor dat u de eischaal te kraken. Verwijder de stukjes een voor een om een ​​klein venster te maken. Verwijder voorzichtig het binnenste membraan met behulp van de tang, zonder het aanraken van de vitelline membraan. </li></ol> 2. Injectie en Elektroporatie <ol><li> Om schade aan de hersenen of het hart, de positie van de naald contra lateraal van de belangrijkste bundel van de bloedvaten in het oog en wijst naar de snavel te voorkomen. </li><li> Prik door de vitelline membraan, sclera, netvlies en glasvocht door een plotselinge milde druk op de naald. Als de naald doorboort via het andere uiteinde van het oog moet goed komt tenzij beschadigt elke belangrijke bloed ader. </li><li> Langzaam trek de naald terug aan de rand van de opening en plaats het bijna raken aan de buitenranden wand van de oogbol. </li><li> Insertiet de naald in de sub netvlies ruimte tussen de sclera en retina. </li><li> Injecteer het DNA tot je de &#39;groene oplossing&#39; het vullen van de kant van de oogbol en duwen het netvlies naar binnen door het creëren van een uitstulping te visualiseren. </li><li> Als uw naald plaatsen is niet juist dan zie je de DNA-oplossing zich verspreidt binnen het glasachtig lichaam het opvullen van de midden van de oogbol. Ook als u schade aan het netvlies te veel dan zie je de DNA-oplossing komt uit de oogbol. </li><li> Verwijder langzaam de naald en onmiddellijk de elektroden te plaatsen in parallel in het ei na weken in een PBS. Duw de elektroden onder te dompelen in het vruchtwater een manier zodat de geïnjecteerde oog ligt tussen de elektroden. Vermijd het aanraken van een groot bloedvat of het hart met de elektroden bij het plaatsen van hen. De negatieve elektrode moet op de injectieplaats kant, zodat DNA kan worden vervoerd van sub retinale ruimte in het netvlies naar positieve elektrode. Electroporate het netvlies met 5 pulsen van 15V voor 50 ms met 950 ms intervallen. </li><li> Verwijder voorzichtig de elektroden en verzegelen het raam van het ei met stukjes duidelijke plakband. </li><li> Label en de datum waarop de geïnjecteerde eicel voordat het terug naar de incubator. Normaal gesproken duurt het ongeveer 3 tot 5 minuten dat u de gehele elektroporatie proces. </li><li> GFP expressie kan worden gezien als Reeds 8 uur na elektroporatie. U kunt echter wachten tot het embryo op de gewenste stadium voor de oogst. </li></ol> 3. Representatieve resultaten In ons onderzoek maken we gebruik van diverse plasmide constructies om de regulatie van genexpressie dat de betrokken retinale cel ontwikkeling te bestuderen. In deze video pCAG-GFP (transfectie controle) werd gebruikt om een ​​succesvolle injectie en elektroporatie volgen. Niettemin mogen plasmide construct met reportergen (GFP, RFP etc.) worden gebruikt. Hoewel GFP expressie kan worden gezien als Reeds 8 uur na electroporation, we meestal beginnen met het oogsten het ei op dag 6 (E6) en daarna. Geëlektroporeerd netvlies werden ontleed uit van het embryo en geanalyseerd onder tl-dissectie microscoop voor het inbedden en snijden. Doorgaans kunnen reporter genexpressie worden gezien ten minste in een kwart van de retina na een succesvolle elektroporatie (Fig 1). De getransfecteerde netvlies weefsels werden verder geanalyseerd door middel van snijden voor een duidelijke weergave van de cel morfologie. Immunohistochemie met celtype specifieke markers (Brn3a, PAX6 etc.) toegestaan ​​karakterisering van cel-specifieke GFP expressie (Figuur 2). <img src="/files/ftp_upload/3792/3792fig1.jpg" align="Figure 1" /> Figuur 1. Succesvolle elektroporatie van reporterplasmide resultaten positief GFP expressie. Chicken embryonale netvlies werden geïnjecteerd en geëlektroporeerd op embryonale dag 4 en geoogst op embryonale dag 6. Tenminste 25% van de retina werd succesvol getransfecteerde (A = Bovenaanzicht, B= Onderaanzicht). Schaal Bar = 1 mm. <img src="/files/ftp_upload/3792/3792fig2.jpg" align="Figure 2" /> Figuur 2. Karakterisering van GFP expressie retinale cellen met behulp van immunohistochemie. GFP uiten retinale weefsel in E7 stadium waren vaste en coupes. Deze secties werden vervolgens gekleurd met verschillende cel specifieke merkers. Brn3a werd gebruikt om ganglioncellen (A) te bepalen, terwijl PAX6 werd gebruikt om horizontale, amacrine en ganglioncellen (B) te bepalen. Schaal bar = 50 urn.

<ol><li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22BMC.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li>
<li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li>
<li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li>
<li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn.%22%5BJournal%5D)">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li>
<li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+stage+series+of+the+chick+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li>
</ol>

Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en faciliteiten Comite aan de Rutgers University.

Gerichte retinale injectie en in-ovo elektroporatie in embryonale netvlies aan E4 stadium kan specifiek zijn gericht op het netvlies stamcellen resulteert in de mogelijkheid om alle zes grote netvlies celtypen te visualiseren op het cel-niveau. In ovo elektroporatie op HH10 (~ E1.5) gericht op de optic vesicle kan cellen die ontwikkelen om het oog vormen transfecteren. Echter deze cellen hebben een zeer hoge omzet bij deze tijd en deze methode is niet specifiek voor retinale cellen. Het kan zijn dat de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Bevruchte pathogeenvrije (SPF) witte Leghorn kip eieren </td><td> Sunrise Boerderijen (Catskill, NY) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kip ei incubator </td><td> GQF productie, Savannah, GA </td><td> Model-1550 </td><td> Ingesteld op 60% luchtvochtigheid en 37,5 ° C. </td></tr><tr><td> Glas capillairen </td><td> Wereld precisie-instrument Inc </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0,1 ml spuit </td><td> Hamilton Co Reno, Nevada </td><td> Gasdicht 1710 </td><td> Alternatief 1ml injectiespuit kan worden gebruikt als ook </td></tr><tr><td> Masterflex Silicone (peroxide) Tubing </td><td> Cole-Parmer </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> Knip een klein stukje (1 cm) voor de bevestiging van de glazen naald op de spuit </td></tr><tr><td> Pincet </td><td> Dumont </td><td> AA </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> Wereld precisie-instrument Inc </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> Plasmide DNA </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP werd geleend van Dr Connie Cepko </td></tr><tr><td> Fast Green FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> Verdun het tot 0,025% met PBS </td></tr><tr><td> Pulse generator </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> Blokgolf generator </td></tr><tr><td> Elektroden </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX-model 514 </td><td> Onze elektroden werden 3-5 mm afstand van elkaar </td></tr><tr><td> Monochroom Digitale Camera </td><td> Zeiss, Duitsland </td><td> Eenxiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> TL-Dissection Microscoop </td><td> Leica Microsystems, Duitsland </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Upright fluorescentiemicroscoop </td><td> Zeiss, Duitsland </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo elektroporatie in embryonale chick retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

Kip embryonale netvlies is een uitstekend hulpmiddel om retinale ontwikkeling te bestuderen in hogere gewervelde dieren. Vanwege de grote omvang en externe ontwikkeling, is het relatief zeer makkelijk te manipuleren het kuiken embryonale netvlies met behulp van recombinant-DNA / RNA-technologie. Elektroporatie van DNA / RNA-constructen in het embryonale netvlies hebben een groot voordeel voor genregulatie in het netvlies stam / voorlopercellen tijdens het netvlies ontwikkeling te bestuderen. Verschillende soorten van testen, zoals reporter-gen-test, gen over-expressie, gene knock down (shRNA) enz. kan worden uitgevoerd met behulp van de elektroporatie techniek. Deze video demonstreert gericht retinale injectie en in-ovo elektroporatie in het embryonale kuiken netvlies aan de Hamburger en Hamilton stadium 22-23, dat is ongeveer embryonale dag 4 (E4). Hier laten we een snelle en handig in ovo electroporatie techniek waarbij een plasmide DNA dat green fluorescent protein (GFP) expressie brengt als een marker wordt rechtstreeks geleverd in dechick embryonale subretinale ruimte en gevolgd door elektrische pulsen aan DNA-opname te vergemakkelijken door het netvlies stam / voorlopercellen. De nieuwe methode van retinale injectie en elektroporatie op E4 laat de visualisatie van alle retinale typen cellen, inclusief de late-geboren neuronen 1, die moeilijk is geweest met de conventionele methode van injectie en elektroporatie op E1.5 2.

Het algemene doel van deze video is te laten zien hoe je doelgericht retinale injectie uit te voeren en<em&gt; In ovo</em&gt; Elektroporatie van DNA / RNA-constructen in het kuiken embryonale netvlies aan de Hamburger en Hamilton stadium 22-23, dat is ongeveer embryonale dag 4 (E4). Deze techniek is zeer nuttig om genexpressie, genregulatie, en morfologische veranderingen in de ontwikkeling van Chick netvlies te bestuderen.

In Ovo Elektroporatie in Embryonale Chick Retina

Het embryonale netvlies van de kip is een uitstekend instrument om de ontwikkeling van het netvlies bij hogere gewervelden te bestuderen. Vanwege de grote omvang en de externe ontwikkeling is het ...

Hallo, ik ben Mohammed Islam. Ik ben een promovendus in het laboratorium van Dr. Lee van de afdeling Biomedical Engineering aan de Rutgers University. Vandaag ga ik u laten zien hoe u een gerichte retinale injectie en in vivo electroporatie uitvoert.In het kiemnembryo zullen we de embryonale retina van de kip bestuderen in het stadium van embryonale dag vier, wat ongeveer 96 uur na de bevruchting is. Deze techniek wordt beschouwd als een innovatieve methode voor het bestuderen van de retina-ontwikkeling. Deze methode richt zich specifiek op retinale progenitorcellen, waardoor het mogelijk is om alle typen retinale cellen op single-cell niveau te visualiseren.Het kan ook worden toegepast in studies naar gain- of loss-of-function, waarbij een gen van belang kan worden gericht op een studie naar de normale ontwikkeling of ziekten van het netvlies. X kan worden bewaard in een wijnkoeler bij ongeveer 13 °C gedurende maximaal één week. Als de temperatuur te hoog is, zullen embryo's abnormaal beginnen te ontwikkelen, terwijl een lagere temperatuur leidt tot een hoge mortaliteit.Zodra u klaar bent voor de incubatie, haalt u de eieren uit de wijnkoeler en plaatst u deze verticaal met de stompe zijde naar boven. Laat de eieren minstens twee uur op kamertemperatuur komen voordat u ze in de 37.5 Gcel Yes-incubator plaatst. Incubeer de eieren gedurende ongeveer 96 uur, wat overeenkomt met embryonale dag vier.Om embryo's in het hamburger- en Hamilton-stadium 22 te verkrijgen, worden micropipetnaalden getrokken uit glazen capillaire buisjes; breek de punt onder een dissectiemicroscoop met een pincet om een opening van ongeveer 0,1 micrometer diameter en een taps toelopende punt van twee millimeter te verkrijgen. Naalden met grotere punten hebben moeite om door het vitelline membraan te dringen. Terwijl kleinere punten problematisch zijn bij het laden en afleveren van de DNA-oplossing, wordt de naald bevestigd aan een Hamilton-maagspuit die is gemonteerd op een micromanipulator.Gebruik een klein stukje master plex siliconen slang om de naald aan de spuit te bevestigen. Aangezien de verbindingen zijn vastgebonden, is het niet nodig om minerale olie toe te voegen om deze verbinding af te dichten. Meng twee µL reporterplasmid-DNA-oplossing met een concentratie variërend van 3 tot 6 µg/µL en 0,2 µL fast green op een stukje perifere fast green kleurstof; dit helpt om de injectie te visualiseren. Vul de naald langzaam met het mengsel om het vitale membraan van het binnenmembraan te scheiden. Draai het ei voorzichtig ongeveer 180 graden en wacht enkele minuten.Draai het vervolgens terug naar de oorspronkelijke positie en bereid het voor op electroporatie. Veeg de pincet en de eierschaal af met 70% ethanol om infectie van het embryo te voorkomen. Maak met een pincet direct boven de luchtkamer een klein gaatje in het ei.Zorg ervoor dat de eierschaal niet barst. Verwijder stukje bij beetje kleine fragmenten om een klein venster te maken. Verwijder voorzichtig het binnenmembraan met de pincet zonder het vitale membraan aan te raken, om beschadiging aan de hersenen of het hart te voorkomen.Positioneer de naald contralateraal aan het hoofdbundel van bloedvaten die het oog binnenkomen, zoals aangegeven door de pijl en gericht naar de snavel. Prik door het vitale membraan, de sclera, het retina en het glasvocht. Door een plotselinge duw van de naald, indien de naal door het andere uiteinde van het oog prikt, zou dit geen probleem moeten zijn, tenzij er een belangrijke bloedader wordt beschadigd.Trek de naald langzaam terug bij de rand van de opening en plaats deze bijna tangentieel aan de buitenwand van de oogbol. Steek de naald in de subretinale ruimte tussen de sclera en het netvlies. Injecteer het DNA totdat de groene oplossing zichtbaar wordt, waarbij de zijkant van de oogbol wordt gevuld en het netvlies naar binnen wordt geduwd door het creëren van een uitstulping.Hier is een ander goed voorbeeld van een succesvolle injectie waarbij een welving is ontstaan, zoals geïllustreerd in dit diagram. Als de naaldplaatsing niet correct was, zult u zien dat de DNA-oplossing zich verspreidt in het glasvocht en het midden van de oogbol vult. Bovendien, als u het netvlies te veel beschadigt, zult u zien dat de DNA-oplossing uit de oogbol stroomt.Verwijder de naald langzaam en plaats onmiddellijk de elektroden parallel in het ei. Duw na het weken in PBS de elektroden naar beneden zodat ze in het vruchtwater worden ondergedompeld, op een zodanige manier dat het geïnjecteerde oog zich tussen de elektroden bevindt. Vermijd het raken van belangrijke bloedvaten of het hart met de elektroden tijdens het plaatsen.Negatieve elektroden moeten zich op de injectieplaats bevinden, zodat DNA vanuit de subretinale ruimte in de retina in de richting van de positieve elektrode kan worden getransporteerd. Elektroporeer de retina met vijf pulsen van 15 volt gedurende 50 milliseconden met intervallen van 950 milliseconden. Verwijder voorzichtig de elektroden en sluit het venster van het ei af met stukjes transparante plakband; label en dateer het geïnjecteerde ei voordat u het terugplaatst in de incubator.Normaal gesproken duurt het volledige proces van de electroporatie ongeveer drie tot vijf minuten. GFP-expressie kan al vanaf acht uur na de electroporatie worden waargenomen. U kunt echter wachten tot het embryo de gewenste fase heeft bereikt voordat u het ei oogst.Ik hoop dat deze video nuttig was voor het uitvoeren van uw eigen experiment. Bedankt voor het kijken.

in-ovo-electroporation-in-embryonic-chick-retina

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Kuiken in ovo electroporatie is een techniek die genetische manipulatie van de aviaire embryo mogelijk maakt. Voorkomende toepassingen van deze techniek zijn functionele analyse van genen en vermeende enhancer elementen. Deze video toont neurale buis elektroporatie in HH 10 kippenembryo's. Injectietechniek en de juiste eierbehandeling worden besproken.

In Ovo Electroporations van HH Stage 10 kippenembryo&#39;s

Hier presenteren wij twee technieken voor het manipuleren van genexpressie in muriene retinale ganglioncellen (RGC)...

In utero en ex vivo Elektroporatie voor Gene Expression Mouse in retinale ganglioncellen

Een methode voor de integratie van plasmide DNA in het netvlies van muizen cellen voor het verrichten van een winst-of verlies van functie...

In vivo Elektroporatie van de ontwikkelingslanden Mouse Retina

Een methode om een ​​doelwit eiwit expressie voorwaardelijk knockdown in de volwassen zebravissen netvlies wordt beschreven, wat inhoudt intravitreally injecteren van antisense morpholinos en electroporating ze in het netvlies. De daaruit resulterende eiwitten neergeslagen voor meerdere dagen, waardoor het testen van de eiwit rol in de regenereren of intact netvlies.

In vivo Elektroporatie van Morpholinos in de Adult zebravis Retina

Om de functie en de regulatie van genen tijdens de ontwikkeling van middenhersenen dopaminerge neuronen te beoordelen, beschrijven we een methode die inhoudt...

In ovo Elektroporatie in Chick middenhersenen voor het bestuderen van gen-functie in dopaminerge Neuron Ontwikkeling

Embryonale kuiken netvlies celculturen vormen waardevolle hulpmiddelen voor de studie van fotoreceptor biologie. We hebben een efficiënte genoverdracht techniek gebaseerd op ex ovo plasmide elektroporatie van de netvliezen voorafgaand aan cultuur ontwikkeld. Deze techniek aanzienlijk vergroot transfectie-efficiënties op dit moment beschikbare protocollen, waardoor genetische manipulatie mogelijk voor dit systeem.

Efficiënte Gene Transfer in Chick netvliezen voor primaire cel Cultuurwetenschappen: An Ex-ovo Elektroporatie Aanpak

Dit protocol beschrijft een methode te ontleden, experimenteel manipuleren en cultuur hele netvlies explantaten uit kippenembryo's. De explantkweken zijn bruikbaar wanneer hoge succespercentage, werkzaamheid en reproduceerbaarheid nodig om de effecten van elektroporatie van plasmiden en / of reagens stoffen, dat wil zeggen enzymatische inhibitoren testen.

Hele netvlies Explantaten van kippenembryo&#39;s voor Elektroporatie en chemische reagens Behandelingen

We beschrijven de methoden voor het labelen van fluorescerende tangentieel migreren cellen door electroporation, en voor time-lapse beeldvorming van de beweging van de gelabelde cel in een flat-mount cultuur om te visualiseren migreren cel gedrag in de ontwikkelingslanden chick optic tectum .

Visualisatie van tangentiële cel migratie in de ontwikkelingslanden Chick Optic Tectum

We hebben een nieuwe benadering van functieverlies ontwikkeld die de introductie en genomische integratie van kunstmatige micro-RNA-sequenties in kuikenembryo's omvat door gebruik te maken van ovo-elektroporatie en het Tol2-transposonsysteem. Deze techniek biedt een robuuste en stabiele gen knockdown methodologie voor studies van de genfunctie tijdens de ontwikkeling.

Verlies-van-functie benadering in het embryonale kuiken netvlies door gebruik te maken van Tol2 transposon-gemedieerde transgene expressie van kunstmatige microRNA's

Het kuiken is een kosteneffectief, toegankelijk en algemeen beschikbaar modelorganisme voor verschillende onderzoeken. Hier wordt een reeks protocollen beschreven om de moleculaire mechanismen te begrijpen die ten grondslag liggen aan de ontwikkeling en regeneratie van het aviaire binnenoor.

In Ovo en Ex Ovo methoden om aviaire binnenoorontwikkeling te bestuderen

Leer in ovo-elektroporatie in het embryonale kippenretina voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze methode maakt gerichte DNA/RNA-injectie in retinale voorlopercellen mogelijk voor visualisatie op enkelcellig niveau.

In Ovo Elektroporatie in Embryonale Chick Retina

Meer video's verkennen