Name: Klinisch onderzoek en het ruggenmerg verwijderen in een muismodel voor Amyotrofische Lateraal Sclerose (ALS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: Leer klinisch onderzoek en gedragsanalyse bij een muismodel voor ALS. Deze methode toont motorische functietests en ruggenmergpreparatie voor immunohistologische analyse.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

LT heeft ontvangen subsidies van de Forschungsförderungsprogramm van de Universiteit Geneeskunde Göttingen. PL en MB werden gesteund door de DFG Research Centrum voor Moleculaire Fysiologie van de hersenen (CMPB), Göttingen. De auteurs danken dr. Lars Tatenhorst voor hulp bij het videografie en Birgit Liebau voor hulp bij het audio-en videobewerking.

Dieren werden gekocht bij Jackson Laboratory (# 002726) 1. Ze zijn klinisch gescoord en onderworpen aan een test van de motorische functie (rotarod test) en van de spierkracht (opknoping draad test). Al deze tests en de latere doden van de dieren om het ruggenmerg te bereiden zijn uitgevoerd in nauwe overeenstemming met de plaatselijke richtlijnen voor de juiste uitvoering van dierproeven. 1. Klinische score Alleen moet worden beoordeeld bij een lichaamsgewicht van muizen worden onderzocht op tekenen van de motor tekort met de volgende 4 punt scoresysteem 2: 4 punten: normaal (geen teken van motorische disfunctie) 3 punten: achterpoot tremoren zijn duidelijk toen geschorst door de staart 2 punten: manier van lopen afwijkingen aanwezig zijn 1 punt: het slepen van ten minste een achterpoot 0 punten: symmetrischeverlamming onvermogen naar rechts zelf of verlies van 20% van de maximale lichaamsgewicht, in dit geval de dieren gedood en onmiddellijk het experiment wordt beëindigd 2. Tests van de motorische functie en spierkracht Opknoping draad Deze test wordt gebruikt om de spierkracht 3, 4 te beoordelen. Alle dieren deze test ten minste een of twee dagen na de rotarod test. Elke muis wordt geplaatst op een op maat gemaakte draad deksel met intervallen van 0,8 cm en voorzichtig op zijn kop zette, 60 cm boven een stro waarvoor bodem. Na de training gedurende drie opeenvolgende perioden van ten minste 180 is de latency te vallen wordt gemeten. Elke muis wordt tot drie pogingen vasthouden van de omgekeerde deksel maximaal 180 sec en het langst is opgenomen. Rotarod Test 3, 4 te meten. Een goede prestatie vereist een hoge mate van sensomotorische coördinatie. De machine moet worden geplaatst in een rustige en niet-storende omgeving om afleidende stimuli voor de geteste dieren te voorkomen. Het bestaat uit een computer-gestuurde motor aangedreven roterende as en vijf banen van vijf muizen. Val van de muizen automatisch door druk op een kunststof plaat aan de onderzijde. Na opleiding drie keer ten minste 180 en met een constante snelheid van 15 rpm de tijd waarin een dier kunnen op de roterende staaf gemeten. Elk dier ondergaat drie proeven en het langst vertraging zonder te vallen wordt opgenomen. De tijd van 180 s wordt gekozen als cut-off tijd, omdat de meerderheid van de significante verschillen in motorische coördinatie worden gedetecteerd in deze periode. 3. Ruggenmerg Voorbereiding <ol class="lalpha"><li> Dieren gedood worden door CO 2 inblazen in overeenstemming met de lokale richtlijnen en onmiddellijk transcardially geperfuseerd met PBS oplossing gevolgd door een 4% paraformaldehyde oplossing. </li><li> Om de ruggengraat van de muis opgeofferd bereiden, wordt het dier gebracht op een operatietafel en de vier poten zijn bevestigd aan de zijde om de achterzijde van de muis bloot. </li><li> Een korte wassen met een 70% ethanol-oplossing reinigt de site van dissectie en vlakt de vacht. </li><li> Vervolgens wordt de huid wordt ingesneden met een scherp scalpel in de mediaanlijn. Ter vergemakkelijking van het snijden van de huid wordt uitgerekt op beide zijden. Als beenspieren wordt opgesteld, is hun huid ook te worden ingesneden. </li><li> Nadat de huidincisie is voltooid, wordt het opzij getrokken met een pincet de onderliggende oppervlakkige fascia van het lichaam bloot. </li><li> De spieren van de nek en de nekregio ligament moeten worden verwijderd en zijn carefully bereid. Zorg dat er geen incisie te diep en laesie van het ruggenmerg. De schouder spieren kan ook verwijderd worden om beter te kunnen ontmaskeren de wervelkolom. </li><li> Vervolgens rugspieren worden uit de gehele wervelkolom. </li><li> Voor het openen van de wervelkolom verschillende laminectomie worden uitgevoerd. Men moet uitgaan van de bovenste craniale deel op de plaats van het atlanto-occipitale gewricht. </li><li> Het eenvoudigste is om de fixatie van de twee bovenste ledematen te verwijderen en de nek uitrekken om beter in staat om de laminectomie van de eerste wervels uit te voeren. Deze worden weggetrokken zonder het aanraken van de blootgestelde cervicale ruggenmerg. </li><li> Meer wervels worden verwijderd door eerst de doorsnijden wervelbogen aan beide zijden schuin schaar en trekken aan de dorsale processen. Resterende zijdelen van de wervels worden verwijderd later volledige verwijdering van het ruggenmerg vergemakkelijken. </li><li> Een anatomische oriëntatiepunt van de lumbale spinal koord is intumescence dat ook in het ruggenmerg. </li><li> Het beëindigen van de laminectomie van het gehele ruggenmerg, zorg ervoor dat u ook alle ventrale wortels doorsnijden en laat het ruggenmerg van de dura mater van de hersenvliezen. </li><li> Dan is de cervicale ruggenmerg wordt craniaal gesneden en u begint met het ruggenmerg te verwijderen. </li><li> Tot slot het ruggenmerg is ook snijden in de distale cauda-equina om volledig vrijgegeven. </li><li> Uiteindelijk wordt het ruggenmerg geplaatst in een postfixating oplossing (bijvoorbeeld 4% paraformaldehyde) nacht en verder verwerkt kan worden. We meestal cryosection het ruggenmerg voor te bereiden voor immunohistologische analyse. </li></ol> 4. Representatieve resultaten De techniek van het ruggenmerg voorbereiding is de focus van deze video artikel. Het is een essentiële voorwaarde voor later weefsel snijden en uiteindelijk voor immunohistologische analyse van de spinal koord secties. Als voorbeeld van een eindresultaat, een immunohistochemische opwerking van het voorste deel van de hoorn muis lumbale ruggengraat van een wildtype (gew) en een SOD G93A transgen (tg) muis wordt aangetoond. Motor neuronen kunnen worden geïdentificeerd met een primaire anti-ChAT antilichaam en de daarop volgende fluorescerende labeling met een secundair Cy3 antilichaam. Bovendien is een nucleair contra-vlek met DAPI (4,6-diamidino-2-fenylindool) uitgevoerd (figuur 1). <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="Figuur 1" /> Figuur 1. TL microfoto het visualiseren van de immunodetectie van motoneuronen met anti-ChAT antilichaam (rood) en cellulaire kernen tegen de vlek door DAPI (blauw) in de muis lumbale ruggenmerg voorste hoorn van een wild-type (WT) (links) en van een SOD G93A transgene (tg) (rechts) muis op de leeftijd van 130 dagen. Schaal bar: 40 micrometer. Als immunohistochemische analysede SOD G93A muizen is niet de primaire toepassingsgebied van dit artikel vindt u op de oorspronkelijke publicatie waarin deze transgene muizen zijn gekarakteriseerd en meer recente, die therapeutische benaderingen te bestuderen voor verdere referentie 1, 5, 6. Als therapeutische effecten wordt gedifferentieerd op het niveau immunohistologische duidelijk omschreven kwantitatieve evaluatie algoritmen moeten toegepast worden ondersteund door een Stereologische software (bijvoorbeeld zie 7).

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
<li>Scott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
<li>Knippenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+behavioural+tests+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).</li>
<li>Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+disease+models+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular disease models and analysis.</a> Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).</li>
<li>Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-symptomatic+detection+of+chronic+motor+deficits+and+genotype+prediction+in+congenic+B6.SOD1%28G93A%29+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model.</a> Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).</li>
<li>Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+preclinical+animal+research+in+ALS%2FMND%3A+A+consensus+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting.</a> Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).</li>
<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De SOD1 (G93A) genetische muis-model is een waardevolle diermodel voor de ziekte loop van de progressieve motoneuron verlies te vergelijken met de menselijke amyotrofische laterale sclerose 8 te bestuderen. Een verscheidenheid aan verschillende behandeling paradigma&#39;s zijn geëvalueerd in dit model en vormen een basis voor de latere testen in menselijke klinische studies 8-10. Om te kunnen grote verschillen in een experimentele behandeling onderzoek bij deze muizen te detecteren, is van groot be...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Fabrikant </td><td> Bestelinformatie </td></tr><tr><td> Behavioral testen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rota-Rod voor muizen </td><td> Ugo Basile, Comerio, Italië </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> Opknoping draad-apparaat </td><td> Custom-made </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> Ruggenmerg Voorbereiding </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Operatietafel Operatie lamp Beschermende handschoenen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> &quot;Iris&quot; Schaar, onder een hoek naar de andere kant </td><td> Fine Science Tools, Heidelberg, Duitsland </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> Cohan-Vannas Spring Schaar, recht </td><td> Fine Science Tools, Heidelberg, Duitsland </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> Micro tang </td><td> Hammacher, Solingen, Duitsland </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> Scalpel &quot;präzisa plus&quot; </td><td> Dahlhausen, Köln, Duitsland </td><td> 11.000.00.510, FIG 10 </td></tr></tbody></table>

klinisch onderzoek en het ruggenmerg verwijderen in een muismodel voor amyotrofische lateraal sclerose (als)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Amyotrofische lateraal sclerose (ALS) is een fatale neurodegeneratieve aandoening die leidt tot progressieve degeneratie van motoneuronen. Piek van aanvang is ongeveer 60 jaar voor de sporadische ziekte en rond de 50 jaar voor de familiale ziekte. Door zijn progressieve koers, 50% van de patiënten overlijdt binnen 30 maanden na de aanvang van de symptomen. Om nieuwe behandeling voor deze ziekte evalueren zijn genetische muismodellen van ALS is gegenereerd op basis van menselijke familiale mutaties in SOD gen, zoals SOD1 (G93A) mutatie. De belangrijkste aspecten die moeten worden geëvalueerd in het model zijn de totale overleving, klinisch beloop en motorische functies. Hier hebben we de klinische evaluatie aan te tonen, tonen de geleiding van twee gedrags-motortesten en zorgen voor kwantitatieve scoringssystemen voor alle parameters. Omdat een grondige analyse van de ALS-muismodel meestal vereist een immunohistochemische onderzoek van het ruggenmerg, tonen we aan de voorbereiding tot in detail de toepassing van het doenrsal laminectomie methode. Voorbeeldige histologische bevindingen worden aangetoond. De uitgebreide toepassing van de afgebeelde onderzoeksmethoden in studies naar het muismodel van ALS in staat zal stellen de onderzoeker om op betrouwbare wijze te testen toekomstige therapeutische opties die basis voor de latere klinische proeven op mensen kan bieden.

Een muismodel voor amyotrofische lateraal sclerose (ALS) is klinisch en gedragsmatig onderzocht. Als voorwaarde voor een begeleidende immunohistologische analyse de voorbereiding van het ruggenmerg wordt afgebeeld in detail.

Klinisch onderzoek en het ruggenmerg verwijderen in een muismodel voor Amyotrofische Lateraal Sclerose (ALS)

Amyotrofische laterale sclerose (ALS) is een fatale neurodegeneratieve aandoening die leidt tot progressieve degeneratie van motorneuronen. De piek van het ontstaan ligt rond de 60 ...

Hallo, mijn naam is Lar Turner. Ik ben postdoc bij de afdeling Neurologie aan de Universiteit van Ingham, Duitsland. Hoi, mijn naam is Lin Gunda.Ik ben een medicus in opleiding en schrijf mijn scriptie in dit laboratorium. Vandaag laten we u de klinische tests zien bij de SODG 93, een muismodel voor amyotrofische laterale sclerose. Verder demonstreren we de motorische functietest met een zogenaamde rotortest en daarnaast een andere motorische functietest met de hanging wire grip, om vervolgens een immunologische analyse uit te voeren.Na functionele tests van de a s-muizen bestaat een noodzakelijke procedure uit het verwijderen van het ruggenmerg, de STIC-zenuw en de gastroc-spier. We willen deze chirurgische procedure in detail laten zien en aan het einde enkele voorbeeldmatige immunologische resultaten presenteren. Laten we nu eerst beginnen met de klinische tests.Dit is een vrij bewegende wild-type MOE die geen klinische symptomen vertoont, zoals spiertremoren of parese, volgens ons klinische classificatiesysteem. Dat zou score vier zijn. Dit is een transgene ALS MOE.In een vroeg stadium van de ziekte vertoont het dier een ernige tremor van de rechterachterpoot, wat wordt geclassificeerd als SCORE drie E. De ernstige gangafwijkingen classificeren dit dier als score twee. Het slepen van ten minste één achterpoot wordt geclassificeerd als klinische score één. Bij de Hanging wire test wordt de grove spierkracht van de ribben geëvalueerd. Elke muis wordt op een op maat gemaakte draad geplaatst en voorzichtig ondersteboven gedraaid boven de met stro bedekte bodem.Na drie opeenvolgende trainingen van minimaal 180 seconden werd de latentietijd tot het vallen gemeten. Elke muis krijgt maximaal drie pogingen om zich maximaal 180 seconden aan het omgekeerde deksel vast te houden, waarbij de langste periode wordt genoteerd. In vergelijking met de wild-type muis aan de rechterkant is de plaque-transgene muis aan de linkerkant zeer zwak en valt deze van het deksel voordat het maximum wordt bereikt.Het Rotor rod-apparaat wordt gebruikt om motorische coördinatie, balans en het vermogen tot motorisch leren te meten. Een goede prestatie vereist een hoge mate van sensomotorische coördinatie. Het bestaat uit een computergestuurde, motorisch aangedreven roterende spindel en vijf banen voor vijf m.Fouten van de muizen worden automatisch gedetecteerd door druk op de onderste plastic plaat. Na drie opeenvolgende trainingssessies van ten minste 180 seconden bij een constante snelheid van 15 ronden per minuut, wordt de tijd gemeten gedurende welke een dier op de draaiende rotarod kan blijven. Elk dier ondergaat drie pogingen en de langste latentietijd zonder te vallen wordt geregistreerd.De gezonde wildtype muis aan de linkerzijde rent zonder problemen op de rotarod. In tegenstelling hiermee heeft de transgene a s mo aan de rechterzijde ernstige problemen om überhaupt op de rotarod te blijven en glijdt na een tijdje eraf, zoals vanachter waargenomen kan worden. U ziet de ernstige loopmoeilijkheden van de linker retre muis.In vergelijking met de gezonde wire tap-muis is deze niet in staat om de snelheid van de rotor rod bij te houden en kan deze zich niet met de HIN-ledematen omhoog duwen. Om een immunochemische analyse van het ruggenmerg uit te voeren, moeten de dieren worden opgeofferd. Het is zeer belangrijk om altijd strikt de lokale richtlijnen voor het correct uitvoeren van dierproeven te volgen.In dit zeer vereenvoudigde overzicht van de wervelkolom en het omliggende weefsel worden de belangrijkste anatomische structuren afgebeeld. We plaatsen het dier op de ventrale zijde en beginnen met het prepareren van de spieren vanuit de dorsale zak. Nadat het spierweefsel is verwijderd, krijgen we toegang tot de wervelkolom die het ruggenmerg omsluit.Nadat het dier is geofferd en is geperfuseerd met een paraformaldehyde-oplossing, kan het ruggenmerg worden verwijderd. Het dier wordt op een operatietafel geplaatst en de ledematen worden aan de zijkanten gefixeerd om de rugzijde van de muis bloot te leggen. Het dier wordt natgemaakt om de vacht plat te leggen en de daaropvolgende huidincisie te vergemakkelijken.Hiervoor wordt een scherp scalpel gebruikt. Let erop dat de huid naar beide zijden wordt uitgerekt. Om het snijden te vergemakkelijken, dient de pootspier te worden geprepareerd.Hun huid moet ook worden ingesneden. Nadat de huidincisie is voltooid, wordt deze voorzichtig opzij geschoven. Nadat de beenspieren en de nervus ischiadicus met een pincet zijn verwijderd, gaan we verder naar het ruggenmerg en plaatsen we het dier op een nieuwe operatietafel.Nu kunnen de schedel, de nek, de spieren en de wervelkolom eenvoudig worden geïdentificeerd. Nadat al deze structuren zijn geïdentificeerd, kan er gemakkelijk worden doorgegaan naar de volgende stap. De spieren van de nek en het nu-ligament moeten worden verwijderd.Zorg ervoor dat u niet te diep incideert en de wervelkolom niet beschadigt. In de volgende stap worden de paravertebrale spieren volledig verwijderd om de wervelkolom bloot te leggen. Om toegang te krijgen tot de wervelkolom moeten er verschillende ectomieën worden uitgevoerd.We beginnen bij het cervicale deel van de wervelkolom, inclusief het atlanto-occipitale gewricht. Om de laminectomie uit te voeren, moeten we de wervelboog doorsnijden om alle werveluitsteeksels van het wervellichaam te kunnen verwijderen. Zoals eerder uitgelegd, begint de laminectomie met het doorsnijden van de wervelbogen.Vervolgens kan de lamina worden weggetrokken. Let opnieuw op dat het ruggenmerg niet wordt beschadigd, aangezien er nog veel meer lamina's verwijderd moeten worden. Het is zeer nuttig om een gebogen schaar te gebruiken en meerdere wervelbogen aan beide zijden tegelijk door te knippen.Trek vervolgens aan de dorsale uitsteeksels om de vertebrale laminae volledig te verwijderen (zie close-up). U ziet dat de schaar voorzichtig aan de meest laterale zijde van het spinale kanaal moet worden ingebracht. De overgebleven laterale delen van de wervelkolom moeten worden verwijderd om de latere volledige verwijdering van het ruggenmerg te vergemakkelijken.Anatomische referentiepunten van het ruggenmerg zijn de zogenaamde cervicale en lumbale verdikkingen. Nadat de ectomieën van het gehele ruggenmerg zijn voltooid, dient u ervoor te zorgen dat u ook alle ventrale wortels van het ruggenmerg doorsnijdt en het ruggenmerg losmaakt van de dura mater van de meninges. Vervolgens wordt het cervicale ruggenmerg doorgesneden.Craniaal wordt de verwijdering opnieuw gestart. Raak het ruggenmerg zeer voorzichtig aan om beschadiging van dit weefsel te voorkomen, aangezien dit ernstige beperkingen kan opleveren voor latere immunochemische analyses. De verwijdering van het ruggenmerg wordt verder voortgezet op thoracicaal niveau en doorgezet tot het lumbale gedeelte.Het wordt nu definitief doorgesneden aan de zijkant van de cauda equina. Nu kunnen we het volledig vrijmaken. Hier ziet u het ruggenmerg geplaatst direct naast de oorspronkelijke locatie in de RAL-kolom.Uiteindelijk wordt het geplaatst in een Paraform Hyde post-fixatieoplossing. Als klassiek voorbeeld voor immunohistochemische analyse van het ruggenmerg kunt u een antilichaam gebruiken dat choline-acetyltransferase herkent om motorneuronen in het voorhoorngebied van het ruggenmerg te identificeren. Hier ziet u een groot aantal motorneuronen in een gezond wild-type dier.In tegenstelling hiertoe vertoont een transgeen ALS-dier in het eindstadium een veel kleiner aantal motorneuronen in het voorhoorn. Door dit video-artikel te bekijken, heeft u het basis klinisch onderzoek van het SODG 93-muismodel voor amyotrofische laterale sclerose geleerd.Twee motorische gedragstesten zijn gedemonstreerd: de rotortest en de ophangdraadtest. Deze bieden een goede mogelijkheid om de basis motorische functie te evalueren. Ze zijn eenvoudig uit te voeren, gevoelig voor het detecteren van motorische tekorten en tijdsefficiënt.Het hoofddeel van deze video bestaat uit een demonstratie van de preparatietechniek van het ruggenmerg. Deze kan uiteraard worden toegepast op elk ander muisziektemodel en is een essentiële stap voor de latere immunochemische analyse van de ziektepathologie in het ruggenmerg. Bedankt voor het kijken.We hopen dat dit videoartikel nuttig zal zijn voor uw toekomstige experimenten.

clinical-testing-spinal-cord-removal-mouse-model-for-amyotrophic

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Neurale voorloper transplantatie is een veelbelovende strategie voor de bescherming en / of vervangen van verloren / disfunctionele cervicale diafragma motorische neuronen in het ruggenmerg letsel (SCI) en de motor neuron ziekte, amyotrofe laterale sclerose (ALS). Wij bieden een protocol voor de cel levering aan cervicale ruggenmerg ventrale hoorn in knaagdiermodellen van ALS en SCI.

Intraspinale Cel Transplantatie voor Targeting Cervicale ventrale hoorn van Amyotrofische Lateraal Sclerose en traumatisch ruggenmergletsel

Source:Pourshafie, N., et al. Systemic Delivery of MicroRNA Using Recombinant Adeno-associated Virus Serotype 9 to Treat Neuromuscular Diseases in Rodents. J. Vis. Exp. (2018).In this video, a spinal and bulbar muscular atrophy or SBMA-affected mouse undergoes tail vein injection of recombinant AAV (Adeno-associated vectors) vectors carrying a plasmid encoding therapeutic microRNA. The vector produces microRNA that binds to mutant AR (Androgen receptor)-mRNA (messenger ribonucleic acid),...

Injecting Recombinant Adeno-Associated Vectors in a Spinal and Bulbar Muscular Atrophy Mouse Model

Dit videoprotocol beschrijft een gevoelige, betrouwbare en snelle methode voor het evalueren van de neuromusculaire tekorten in een transgene muismodel van amyotrofische laterale sclerose.

Een Quick Fenotypische Neurologische Scoring System voor het evalueren van ziekteprogressie bij de SOD1-G93A muismodel van ALS

Dit artikel beschrijft een methode voor het genereren van een reproduceerbare spinale cord compressie letsel (SCI) in de neonatale muis. Het model biedt een voordelige platform voor het bestuderen van mechanismen van adaptieve plasticiteit die ten grondslag liggen aan spontane functionele herstel.

Een Neonatale Mouse Spinal Cord Injury Compressie Model

Hier beschreven is een gestage, gedrags screening aanpak die kan worden gebruikt om te screenen voor verbindingen die in vivo werkzaamheid vertonen op cognitief en functioneel motorisch gedrag bij transgene muismodellen van β-amyloïdose en tauopathie. Deze methoden zijn geoptimaliseerd om verbindingen te screenen voor activiteit in kort- en werkgeheugen taken.

Evaluatie van spontane alternatie, herkenning van nieuwe objecten en limb clasping in transgene muismodellen van Amyloid-B en Tau Neuropathology

De meting van de geleiding van de zenuwen is een nuttig instrument om te beoordelen Muismodellen van neurodegeneratie maar wel vaak alleen toegepast ter stimulering van de nervus ischiadicus in hindlimbs. Hier beschrijven we een techniek voor het meten van samengestelde spier actiepotentiaal (CMAP) in vivo in de muis voorpoot spieren geïnnerveerd door de plexus brachialis.

In Vivo Elektrofysiologische meting van samengestelde spier actiepotentiaal van de voorpoten in muismodellen van Motor Neuron degeneratie

Dit protocol beschrijft hoe u een nauwkeurige laminectomie voor inductie van stabiele transsectie-type dwarslaesie in het muismodel, met minimale bijkomende schade voor het onderzoek van de dwarslaesie te creëren.

Inductie van volledige transsectie-type ruggenmergletsel bij muizen

Hier wordt een nieuw geautomatiseerd apparaat voor kneuzing van ruggenmergletsel voor muizen gepresenteerd, dat nauwkeurig modellen voor dwarslaesie met verschillende gradaties kan produceren.

Geautomatiseerde impactor voor kneuzingsmodel voor dwarslaesie bij muizen

Het huidige protocol beschrijft de ontwikkeling van een reproduceerbaar muizenmodel van ruggenmergglioom door tumorcellen in de tussenwervelruimte te injecteren, wat een effectievere en minder invasieve benadering biedt voor onderzoek en therapeutische ontwikkeling.

Chirurgische transplantatie van tumorcellen in het ruggenmerg van muizen

Polyglutamine spinocerebellaire ataxieën worden veroorzaakt door CAG-expansies die aggregatiegevoelige eiwitten produceren. Dit protocol beschrijft vectorproductie, stereotaxische toediening en analyse van inclusies en verlies van neuronale markers, en biedt een gecontroleerd platform om mechanismen te onderzoeken en gerichte therapieën voor neurodegeneratieve ziekten te evalueren.

Lentiviraal-geïnduceerde striatale pathologie als preklinisch model van polyglutamine spinocerebellaire ataxie

Dit artikel beschrijft intrathecale toedieningsmethoden voor op het CNS gerichte therapieën bij volwassen muizen, met de nadruk op protocolprecisie en het mogelijk maken van herhaalde injectie. Het bevat bevindingen uit een validatiestudie waarbij antisense-oligonucleotiden de expressie van mutant SOD1 verminderden in SOD1-ALS-modelmuizen, wat het nut van deze aanpak ondersteunt in preklinisch onderzoek naar neurodegeneratieve ziekten.

Lumbale intrathecale injectie van SOD1-ASO's voor precieze CNS-targeting en voorspellende effectiviteit bij menselijke SOD1-G93A ALS-muizen

Leer klinisch onderzoek en gedragsanalyse bij een muismodel voor ALS. Deze methode toont motorische functietests en ruggenmergpreparatie voor immunohistologische analyse.

Klinisch onderzoek en het ruggenmerg verwijderen in een muismodel voor Amyotrofische Lateraal Sclerose (ALS)

Meer video's verkennen