Name: Transplantatie van pancreaseilandjes Into the Kidney Capsule van diabetische muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-31T23:37:26.000+00:00
Duration: 10 min 43 s
Description: Leer een eenvoudige methode voor het transplanteren van pancreaseilandjes onder de nierkapsel van diabetische muizen. Deze techniek minimaliseert stress voor zowel de cellen als de ontvangers en verbetert transplantatie-uitkomsten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

UCSF Diabetes Center. NIH UCSF DERC Islet Core. JDRF. LifeScan Inc Johnson &amp; Johnson Company.

Voorbereiding van de Eilandjes voor transplantatie (Tx) <ol><li> Onder een omgekeerde microscoop, met de hand plukken eilandjes met behulp van een P200 Pipetman en recht pipet tip van de gekweekte eilandjes in een 100mm plaat. </li><li> Count eilandjes 100 per keer en overdracht in elke microcentrifugebuis (~ 500 eilandjes / buis / muis). </li><li> Laat eilandjes om zich te vestigen op de bodem van de microcentrifugebuizen. </li><li> Teken een eilandje pellet in een P200 Pipetman (ingesteld op 130ul) met behulp van een rechte dunne wand pipet tip. </li><li> Plaats een siliconen tube aan over de spuit. Plaats een lengte van PE50 slang in de siliconen adapter. </li><li> Hang de Pipetman aan de zijkant van de kap en de tape van de PE50 slang aan op de kap muur hoger is dan de eilandjes in de punt. Hierdoor kan de eilandjes om zich te vestigen alleen in de punt van de pipet. </li><li> Breng de eilandjes in de PE50 slang door langzaam het kiezen van de Pipetman en het verplaatsen van de eilandjes in de PE50 leidingen, zorg dat u de eilandjes te verdrijven uit het einde. </li><li> Maak een knik in de schuine uiteinde van de buis PE50. Met behoud van de knik, koppel de adapter siliconen slang van de Pipetman en zet de knik met de siliconen adapter. </li><li> Plaats de eilandjes in de PE50 leidingen, knikken silicone adapter buis naar beneden, in een 15 ml conische met een cut 5 ml pipet en tape de PE50 buis over de rand van de 5 ml pipet om te voorkomen dat krullen van de PE50 buis tijdens het centrifugeren. </li><li> Centrifugeer de PE50/15mL conicals tot 1000 toeren per minuut en zet centrifuge. (Nooit meer dan 10 eilandjes van Langerhans voorbereidingen voor te bereiden in een keer). </li><li> Plaats buis op ijs. </li></ol> Voorbereiding van de Muis voor Transplant <ol><li> Verdoven van de muizen met isofluorane of met ketamine / Xylexene (zie voorbereiding protocol). </li><li> Na verdoving heeft invloed, scheren de linker flank van de muis. </li><li> Uitstrijkje huid van de muis, in het midden-out, met povidonjood wattenstaafje en veeg af met een EtOH wattenstaafje. </li><li> Zoek de linker nier (net rechts van de milt). Maak een kleine incisie in de huid, het blootstellen van het buikvlies. </li><li> Maak een kleine incisie in het buikvlies het blootstellen van de nier. Het houden van de incisie kleine zal helpen bij het houden van de nier en verhoogde blootgesteld. </li><li> Breng een lichte druk aan beide zijden van de incisie, verhogen of pop uit de nier van de muis. </li><li> Houd de nier vochtig door het toepassen van een fysiologische zoutoplossing met een katoenen wattenstaafje getipt. </li><li> Behulp van een injectiespuit 23 of 25 gauge naald, een kleine kras op de rechterflank van de nier, het creëren van een inkeping in de nier capsule, niet te diep of te groot. </li></ol> Transplantatie van eilandjes Opmerking: Als de muis wordt voorbereid voor Tx, de tweede persoon moet de Hamilton schroef-drive eilandje transplantatie spuit voor te bereiden. <ol><li> Verwijder langzaam de siliconen adapter slang van de PE50 buis terwijl de knik in de slang. </li><li> Plaats het andere uiteinde van de slang in PE50 de siliconen adapter slang en plaats de adapter siliconen slangen op de pipettip aan de &quot;schroef-drive&quot; glazen Hamilton spuit. Langzaam los van de knik in de PE50 leidingen en zorg ervoor dat de eilanden niet uitlekken. </li><li> Langzaam vooruit de eilandjes aan het uiteinde van de slang PE50 behulp van de &quot;schroef&quot;-mechanisme, maar houd een kleine luchtbel in de voorkant van de eilandjes in de PE50 slang. </li><li> In de nick in de nier, schuif de PE50 leidingen onder de capsule, het maken van een kleine pocket. Wees heel voorzichtig dat u de nieren of aanprikken door de capsule guts. </li><li> Het helpt om het gebied en capsule vochtig te houden met een fysiologische zoutoplossing-Gentamycine gedrenkte katoenen getipt wattenstaafje, een droge capsule zullen gemakkelijk scheuren. </li><li> Beweeg de slang in alle richtingen, het creëren van een &quot;pocket&quot; voor de getransplanteerde eilandjes om te rusten. Vergeet niet om bijkomende fysiologische zoutoplossing opnieuw te houden op het gebied vochtig. </li><li> Onder leiding van de persoon die heeft geopend met de muis en die plaatste de PE50 leidingen onder de nier capsule, de tweede persoon, die bereid zijn de muis en Hamilton transplantatie spuit, zal langzaam vooruit eilandjes onder de capsule, in de &quot;pocket&quot;, achter een kleine luchtbel afgeleverd door de PE50 leidingen, worden totdat alle eilandjes getransplanteerd. </li><li> Verwijder langzaam de PE50 slangen, droog het gebied met een droog wattenstaafje en zorgvuldig de nick cauterize met een laag vuur. </li><li> Met behulp van een droge katoenen wattenstaafje tip, zorg ervoor dat alle bloeden is gestopt. Zodra bloeden is gestopt, opnieuw bevochtigen van de nier met een steriele zoutoplossing, en voorzichtig de nier voorafgaande vervangen in het buikvlies aan het sluiten van de muis met hechting en de huid nietjes. </li></ol> Sluiting / Revival van de muis <ol><li> Sluit het buikvlies met een rijgsteek met 5-0 zijde hechtingen w / een C-6 19mm naald. </li><li> Met behulp van een tang samen te trekken beide zijden van de huid incisie. </li><li> Nieten van de huid, samen met 2 of 3 nietjes. </li><li> Reinig de huid van de muis van een bloed, met behulp van een katoenen getipte wattenstaafje en Saline. </li><li> Onmiddellijk te behandelen van de muis met een subcutane injectie van Flunixine en buprenorfine. </li><li> Plaats de muis in een kooi, dat wordt geplaatst op een verwarmingselement of onder een warmtelamp, totdat de muis is volledig actief. </li><li> Verwijder de huid nietjes in 2 weken. </li></ol>

<ol><li>Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro-expanded+antigen-specific+regulatory+T+cells+suppress+autoimmune+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes.</a> J Exp Med. 199, 1455-1465 (2004).</li>
<li>Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inability+to+induce+tolerance+through+direct+antigen+presentation%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transplant%22%5BJournal%5D)">Inability to induce tolerance through direct antigen presentation.</a> Am J Transplant. 2, 510-519 (2002).</li>
<li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+transplant+rejection+following+treatment+with+anti-B7-2+and+anti-B7-1+antibodies.+Transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation.</a> Transplantation. 60, 1171-1178 (1995).</li>
<li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+survival+of+xenogeneic+pancreatic+islet+grafts+induced+by+CTLA4lg%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg.</a> Science. 257, 789-792 (1992).</li>
</ol>

Dit protocol biedt een praktische en efficiënte optie voor zuiver en eenvoudig het leveren van eilandjes of cellen onder de nier capsule van diabetische of normale muizen. De techniek van het concentreren en pelleteren de eilandjes of cellen in de uiteindelijke levering buis (PE50) gebruikt om de cellen te transplanteren in de nier capsule biedt een eenvoudige en effectieve methode van het transplanteren van cellen terwijl het verminderen van onnodige spanning op de cellen of met de muis.

<table><tbody><tr><td>Chirurgische handschoenen</td><td>Fisher Scientific</td><td>11-394-95(sz)</td><td></td></tr><tr><td>Chirurgische scrubsponzen</td><td>Moore Medical</td><td>42940AK</td><td></td></tr><tr><td>Pincetten</td><td>Miltex Inc.</td><td>6-114 and 6-26</td><td>2 met tandjes, 2 recht</td></tr><tr><td>Dissectieschaaren n=2</td><td>Miltex Inc.</td><td>5-290</td><td></td></tr><tr><td>Oster-scheermes (mesje gr. 40)</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-305-10B</td><td></td></tr><tr><td>Steriele gaaskompressen 4x4</td><td>Moore Medical</td><td>08252AK</td><td></td></tr><tr><td>Povidonjodium-pads</td><td>Moore Medical</td><td>08486AK</td><td></td></tr><tr><td>Alcoholpads</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-819-2</td><td></td></tr><tr><td>Warmtepad</td><td>Moore Medical</td><td>42508AK</td><td></td></tr><tr><td>23G of 25G naalden</td><td></td><td></td><td>1&quot; lang</td></tr><tr><td>Cidex-oplossing</td><td>Moore Medical</td><td>07535AK</td><td>voor het reinigen/desinfecteren van instrumenten</td></tr><tr><td>PE50 polyethyleen buisjes</td><td>BD Biosciences</td><td>427411</td><td>PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D.</td></tr><tr><td>Cidex + 28 dagen opl.</td><td>Moore Medical</td><td>35625AK</td><td></td></tr><tr><td>Siliconen buisjes</td><td>Spectrum Chromat.</td><td>123732</td><td>5/32&amp;#8221;OD x 1/32&amp;#8221; ID</td></tr><tr><td>Sterilisatiebak voor instrumenten</td><td>Moore Medical</td><td>39074AK</td><td></td></tr><tr><td>Rechte pipetpunten</td><td>USA Scientific, Inc.</td><td>1111-0810</td><td>steriel</td></tr><tr><td>Glazen spuit met schroefaandrijving</td><td>Hamilton Co</td><td>1001</td><td></td></tr><tr><td>Cauterisatie-instrument</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS230</td><td></td></tr><tr><td>Naaldvoerder</td><td>Moore Medical</td><td>41-067</td><td></td></tr><tr><td>5-0 zijde</td><td>LOOK Surgical</td><td>754B</td><td>voor hechting (6-C)</td></tr><tr><td>Wattenstaafje</td><td>Moore Medical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>9mm autoclip-hechtautomaat</td><td>BD Biosciences</td><td>7630</td><td></td></tr><tr><td>9mm nietjes</td><td>BD Biosciences</td><td>7631</td><td></td></tr><tr><td>9mm nietjesverwijderaar</td><td>BD Biosciences</td><td>7637</td><td></td></tr></tbody></table>

transplantatie van pancreaseilandjes into the kidney capsule van diabetische muizen

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

Ons protocol is ontwikkeld om zuiver en eenvoudig eilandjes of cellen te leveren onder de nier capsule van diabetische of normale muizen. We vonden dat het gemakkelijker was om de eilandjes of cellen te concentreren in pellets in de laatste aflevering buis (PE50) gebruikt om de cellen onder de nier capsule transplantatie. Deze techniek biedt zowel snelheid en het gemak terwijl het verminderen van onnodige spanning op de cellen of met de muis. Laden: afgewikkeld, met de hand geplukt, eilandjes of gepelletiseerd cellen worden zorgvuldig opgezogen uit de bodem van een 1,5 ml microcentrifugebuis met behulp van een P200 pipetteman en een rechte, dunne wand pipetpunt. Een lengte van PE50 slang is verbonden met de pipetpunt met een kleine adapter siliconen slang. Cellen zijn toegestaan, vestigen in de top, en vervolgens worden overgebracht naar de PE50 slang door langzaam het kiezen van het pipetteman. Nadat de cellen zijn in de buurt aan het einde van de PE50 slang, is een knik gemaakt en de siliconen adapter slang geplaatst over de knik. De PE50 slangen zijn overgebracht naar een 15 ml conische met een cut 5 ml pipet, en de PE50 slang geplakt over de rand van de 5 ml pipet om te voorkomen dat krullen tijdens het centrifugeren. Cellen zijn toegestaan ​​om 1.000 tpm te bereiken en gestopt. Transplantatie: Ontvanger muizen zijn verdoofd, geschoren en gereinigd. Een kleine incisie wordt gemaakt op de linkerflank van de muis en de nieren wordt blootgesteld. De nier, vet en weefsel worden vochtig gehouden met een fysiologische zoutoplossing wattenstaafje. Het distale uiteinde van de PE50 is bevestigd aan een Hamilton schroefaandrijving spuit met een pipet tip, met behulp van de siliconen-adapter slang. Een kleine nick wordt gemaakt op de rechterflank kant van de nier, niet te groot of te diep. De schuine uiteinde van de buis PE50, het dichtst bij de cellen, zorgvuldig onder de capsule, is de slang verplaatst voorzichtig om ruimte te maken, terwijl zwabberen fysiologische zoutoplossing, een droge capsule kan gemakkelijk scheuren. Een kleine luchtbel is geleverd onder de capsule door langzaam het kiezen van de spuit schroefaandrijving. Eilandjes worden dan langzaam geleverd achter de luchtbel. Zodra de eilandjes zijn geleverd nier homeostase wordt gehandhaafd en de knick is dichtgeschroeid met een laag vuur. De nier is terug geplaatst in de holte en het buikvlies en de huid worden gehecht en geniet. Muizen worden onmiddellijk behandeld met Flunixine en Buprenorfine ² en geplaatst in een kooi op een verwarmingselement.

Ons protocol is ontwikkeld om zuiver en eenvoudig eilandjes of cellen te leveren onder de nier capsule van muizen. Cellen zijn geconcentreerd in pellets in de finale slangen worden gebruikt voor het transplanteren van de cellen onder de nier capsule. Het gemak van deze techniek vermindert de belasting van de cellen en de muis.

Transplantatie van pancreaseilandjes Into the Kidney Capsule van diabetische muizen

Ons protocol is ontwikkeld om eilandjes of cellen op een schone en eenvoudige manier onder het nierkapsel van diabetische of normale muizen te brengen. We stelden vast dat het eenvoudiger was ...

Hallo, mijn naam is Greg Zod. Ik ben verbonden aan het UCSF Diabetes Center in het Bluestone Laboratory, en vandaag ga ik u laten zien hoe u eilandjes van mirrored eyelets transplanteert onder het nierkapsel van diabetische muizen. Bij deze procedure worden eilandjes gebruikt die zijn gezuiverd uit een syngene of allogene muizenstam; deze eilandjes worden vervolgens gezuiverd en onder het nierkapsel van diabetische muizen getransplanteerd.Muizen die van nature diabetisch kunnen zijn, zoals de NOD-muis, of muizen die kunstmatig diabetisch worden gemaakt door injectie van streptozotocine. Nu zijn we klaar om de eilandjes te selecteren. Ik ga de eilandjes selecteren en tellen terwijl ik ze opzuig met een pipet.Ik laat alle weefsel restanten achter, en je kunt aan de manier waarop het licht in het weefsel wordt gebroken zien wat een oogje is en wat geen oogje is. Vervolgens tel ik de oogjes. Ik plaats ze in een microcentrifugebuisje en we verzamelen ze voor transplantatie.De oogleden hebben een dichtere, bijna roodachtige aanblik, en de ace in R is lichter en pluiziger. Het heeft ook een witachtige uitstraling. Je zult dus wat ace in R-weefsel meekrijgen terwijl je de oogleden verwijde

transplantation-pancreatic-islets-into-kidney-capsule-diabetic

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Transplantatie van geïsoleerde eilandjes is voorgesteld om een ​​potentiële behandeling voor diabetes type 1 zijn. Hier beschrijven we een methode om de eilandjes van de muis pancreata isoleren en transplantatie ze aan de subcapsulaire ruimte van de nier.

Een methode voor Murine Islet Isolatie en subcapsulaire Niertransplantatie

This video describes the protocol for grafting human pancreatic islets into the anterior chamber of the mouse’s eye to monitor revascularization of human islet grafts in vivo. It also helps to understand the contribution of recipient versus donor cells in promoting the encapsulation and vascularization of the graft.

Grafting Pancreatic Islets: A Method to Implant Pancreatic Islets into the Anterior Chamber of the Mouse Eye for In Vivo Imaging

Dit protocol demonstreert het isoleren van muizen eiland en zaait op een decellularized steiger. Steigergesteunde eilandjes werden getransplanteerd in het epididymale vetpaneel van streptozotocine (STZ) geïnduceerde diabetische muizen. Islets overleefden op de transplantatieplaats en reverseerde de hyperglycemische conditie.

Steiger-gesteunde transplantatie van eilanden in het epididymale vetpaneel van diabetische muizen

Onder buik solide orgaantransplantatie zijn alvleesklier transplantaties gevoelig voor het ontwikkelen van ernstige ischemie reperfusie letsel-geassocieerde transplantaat schade, leidt uiteindelijk tot vroege prothese verlies. Dit protocol beschrijft een model van lymfkliertest pancreas transplantatie met behulp van een niet-hechtdraad manchet techniek, bij uitstek geschikt voor het analyseren van deze vroege, schadelijke schadevergoeding.

Muismodel voor Pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde manchet techniek

Een methode voor de omental transplantatie van de eilandjes in een muis is ingevoerd. De geïsoleerde eilandjes met hydrogel zijn gemengd en het mengsel wordt geplaatst in de omental etui van een diabetische muis. Vervolgens de bloedglucose wordt gecontroleerd en immuno-histochemische analyse wordt uitgevoerd.

Een methode voor Islet transplantatie aan de majus in muis

Alvleesklier islet transplantatie is een manier om normoglycemia bij type 1 diabetes. Dit artikel richt zich op de transplantatie-techniek via de intraportal route om normale glucoseniveaus in diabetesmuizen te handhaven.

Intraportal transplantatie van de alvleesklier eilandjes in Mouse Model

In dit protocol wordt een methode van murineeilandisolatie en transplantatie in het inguinal onderhuids wit vetweefsel beschreven. Geïsoleerde synogenische murine eilandjes worden getransplanteerd in een murine ontvanger met behulp van een kelder membraan hydrogel. De bloedsuikerspiegel van de ontvangers wordt gecontroleerd en de histologieanalyse van de levensperie-transplantaties wordt uitgevoerd.

Inguinal Subcutane white Adipose Tissue (ISWAT) Transplantatie Model van Murine Eilandjes

Het doel van dit protocol is om continu de dynamiek van het menselijke alvleesklier eilandje engraftment proces en de bijdragende gastheer versus donorcellen te controleren. Dit wordt bereikt door het transplanteren van menselijke eilandjes in de voorste kamer van het oog (ACE) van een NOD. (Cg)-Gt(ROSA)26Sortm4-Rag2-/-muisontvanger gevolgd door herhaalde 2-foton beeldvorming.

Longitudinale In Vivo Beeldvorming en kwantificering van menselijke alvleesklier eilandjes en bijdragende gastheercellen in de oogkamer van het voorste oog

Hier presenteren we verfijnde chirurgische procedures voor het succesvol uitvoeren van intraportale eilandjestransplantatie, een klinisch relevante maar technisch uitdagende chirurgische procedure, bij muizen.

Minimalisering van post-infusie portale aderbloedingen tijdens intrahepatische eilandtransplantatie bij muizen

Wij bieden een minimaal invasief protocol voor de intramusculaire transplantatie van pancreasstamceleilandjes afkomstig van menselijke stamklieren in immunodeficiënte muizen voor in vivo implantatie en downstream analyse.

Intramusculaire transplantatie van menselijke pluripotente stamcel-afgeleide alvleesklierendocriene cellen bij muizen

Leer een eenvoudige methode voor het transplanteren van pancreaseilandjes onder de nierkapsel van diabetische muizen. Deze techniek minimaliseert stress voor zowel de cellen als de ontvangers en verbetert transplantatie-uitkomsten.

Transplantatie van pancreaseilandjes Into the Kidney Capsule van diabetische muizen

Meer video's verkennen