Name: Functionele Evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in Knaagdieren: Analyses in een gestandaardiseerd model van Intestinal Manipulatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-11T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Leer een gestandaardiseerd model voor darmmanipulatie in knaagdieren om darmmotiliteit en ontsteking in de muscularis externa te evalueren. Dit protocol helpt bij het bestuderen van postoperatieve ileus.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Deutsche Forschungsgemeinschaft (KA1270/3-1/2) en BONFOR (O-112.0040).

1. Dieren Mannelijke C57Bl6 / J muizen met een gemiddeld gewicht van 25 g werden verkregen van Harlan Winkelmann (Borchen, Duitsland). Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de federale wetgeving betreffende de bescherming van dieren. De principes van proefdier zorg werden gevolgd. Dieren werden op een 12-uur licht / donker-cyclus en voorzien van in de handel verkrijgbare knaagdiervoer en kraanwater ad libitum. De dieren moeten worden gehuisvest ten minste 7 dagen na aankomst in uw dier faciliteit voor experimenten. Merk op dat alle experimenten kunnen gemakkelijk worden aangepast aan ratten en andere soorten en met kleine wijzigingen in grote diermodellen. 2. Operatieve Procedure <ol><li> Anesthesie wordt geïnduceerd en gehandhaafd met isofluraan (Abbott, Wiesbaden, Duitsland) in zuurstof. Na het begin van de anesthesie plaats dieren in rugligging en fix extremiteiten met plakband (Leukosilk, Beiersdorf, Hamburg, Duitsland). </li&gt; <li> Na scheren en chirurgische desinfectie van de buikwand een mediane laparotomie wordt uitgevoerd op een lengte van 2 cm. Voer de buikholte via een incisie langs de linea alba. Plaats twee steriele retractors te houden van de buik open. Voorzichtig eventerate de dunne darm naar links en plaats het op een natte katoenen gaas. </li><li> Evacueer de gehele dunne darm luminale inhoud met twee vochtige en steriele katoen applicators (verminkten, Neunkirchen, Duitsland) door tegelijkertijd het rollen van de applicator van de pylorus naar de blindedarm. LET OP: Voorkom bloedingen van de dunne darm wand of letsels van de darm schepen. Plaats de darm terug in de peritoneale holte zonder draaien ischemie of mechanische verstopping voorkomen en de abdominale incisie met een tweelagige continue 5/0 polyamide niet-resorbeerbare hechtingen (Ethicon, Norderstedt, Duitsland) sluiten. </li></ol> 3. Postoperatieve zorg <ol><li> Na de ingreep plaatst het dier onder een warmtelamp, observing tot hij hersteld van anesthesie. Plaats de muis in zijn kooi en laat de toegang tot water en voedsel. Als gevolg van de eigenschap van opioïden om de peristaltiek van invloed zijn, voeren we perioperatieve analgesie met NSAID&#39;s (bijvoorbeeld metamizol) in het drinkwater. </li></ol> 4. Functionele studies 24 uur na IM <ol class="lalpha"><li> Gastro-intestinale Transit (GIT) <ol><li> Licht verdoven muizen met isofluraan in zuurstof 22,5 uur na IM. Voorzichtig hyperextend het hoofd van de muis en trek de tong met een stompe pincet. Vul een 1 ml spuit met ten minste 100 ul fluoresceïne gelabelde dextran (FITC-dextran, 70.000 MW, Sigma Aldrich, Taufkirchen, Duitsland), te verbinden met een arteriële catheter (Vygon, Ecouen, Frankrijk) zorgvuldig de katheter als maagsonde in de maag. </li><li> Kort Injecteer 100 ul FITC-dextran en trek de katheter. Wakker laat het dier en wacht gedurende 90 minuten. Gedurende deze tijd muizen hebben toegang tot voedsel of water. &lt;/ Li&gt; <li> Bereid vijftien 2 ml spinnen buizen en achtereenvolgens benoem ze. </li><li> Euthanaseren muizen 90 minuten na maagsonde en verwijder de gehele maag-darmkanaal van de maag tot rectum. Plaats de darm op een polystyreen kussen en vermijd stretching. CAVE: Het is cruciaal om de darm voorzichtig te verwijderen om te voorkomen dat het verschuiven van vloeibare FITC-dextran in de nabijgelegen segment. Voor het begin kan het nuttig clips gebruikt aan het begin en aan het einde van elk segment. </li><li> Meet volledige lengte van de dunne darm en colon volle lengte. Verdeel de dunne darm in 10 gelijke grootte segmenten door pinning het naar beneden om het polystyreen pad met canules. Verdeel de colon in 3 segmenten. U bereid 15 segmenten (maag # 1), tien gelijke grootte dunne darm segmenten (# 2-11), caecum (# 12) en drie 3 even grote dikke segmenten (# 13-15). </li><li> Transect de darm op de gemarkeerde plaatsen, pak deze met een pincet en een keer uitspoelen met 1,0 ml KHB in de eerder bereide KHB containing 2,0 ml buisjes en vortex krachtig gedurende 20 sec. De maag en blindedarm direct geplaatst en gesneden in de bereide buizen. Vul deze buizen met 1,0 ml KHB, waardoor spoelen sporen van luminale inhoud van de schaar in de buizen. </li><li> Centrifugeer de probes bij 12.000 RCF gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur in een tafelcentrifuge. Tijdens het centrifugeren te bereiden nog eens 15 doorlopend genummerd 1,5 ml buizen. </li><li> Breng de heldere bovenstaande vloeistoffen in de nieuwe 1,5 ml buis en op te slaan in het donker bij 4 ° C tot analyse (volgende stap). De probes kunnen worden opgeslagen voor meerdere dagen bij 4 ° C zonder significant verlies van FITC signaal. Voor langere opslag toe te voegen 0,09% Natrium-azide of op te slaan bij &lt;-18 ° C. </li><li> Pipetteer 100 ul duplets van de supernatanten op een zwarte 96-putjesplaat (Greiner Bio One, Frickenhausen, Duitsland). Pipetteer twee 100 ul monsters van KHB als blanco. </li><li> Lees de plaat in een fluorescentie-lezer (Safire, Tecan, Crailsheim, Duitsland) en kwantificeren van de fluorescence bij 494 nm (absorptie) / 521 nm (emissie) golflengte. Trek lege waarden van monsters. </li><li> Bereken het geometrische centrum (GC) van FITC-dextran verdeling, die eigenlijk het zwaartepunt voor de distributie van marker, door de volgende formule: GC = Σ (% van het totaal fluorescentiesignaal per segment * segmentnummer) / 100 </li></ol> Opmerking: Door vermenigvuldiging percentage van de fluorescentie van elk segment met segmentnummer een gewogen gemiddelde van de verdeling van marker in de darm wordt beoordeeld. Dit punt wordt beïnvloed door zowel de verdeling en afstand die marker, maar is niet specifiek onderliggende distributie. 7 De berekende waarde wordt GC vaak in combinatie met een grafiek tonen de verdeling van FITC dextran via het maagdarmkanaal (Figuur 1A). </li><li> Colonic Transit <ol><li> Muizen moeten zwak verdoofd met isoflurane 2% in zuurstof. LET OP: Zorg ervoor dat de dieren zullen ontwaken binnen 40 sec. </li><li> Zorgvuldig onderzoeken colon patency door toevoeging van een fistel probe (staafje 2 mm diameter) via de anus in de dikke darm. </li><li> Met behulp van de fistel sonde naar voren te duwen een 2 mm glazen bol 3 cm in de dikke darm en trek de sonde onmiddellijk. Plaats de muis op transparante kooi en meting van de tijd na de fistel probe werd getrokken uit de colon. Houd een oogje op de muis en stoppen direct de tijd na de glazen bol werd uitgescheiden. </li></ol></li></ol> 5. Histochemische analyse van geïsoleerde ME Specimens <ol><li> Midjejunal segmenten worden gesneden uit de darm en ondergedompeld in koud KHB in een Sylgard gevulde schotel. </li><li> Mesenterium is vastgemaakt aan de schotel met 0,2 mm insect naalden (Fine Science Tools, Heidelberg, Duitsland). </li><li> Snij het segment langs de mesenteriale grens en rekken tot ~ 120% van zijn lengte en breedte. Rond de fixatie met insectpinnen op andere zijde van het mesenterium. Zorgvuldig Spoel de Sylgard schotel met verse ijskoude KHB, waardoor het spoelen alle luminale inhoud. ME kan nu mechanisch gescheiden van de tunica mucosa vanaf het mesenterium. Tijdens de bereiding vervangen vers, gekoeld KHB meerdere malen. </li><li> Gescheiden tunica mucosa worden ingevroren in vloeibare stikstof shock voor verdere analyse of weggegooid. </li><li> Bevestig de geïsoleerde ME whole mount met 100% ethanol gedurende 10 min bij kamertemperatuur. Was de hele berg drie keer met behulp van gekoeld KHB. Opmerking: andere fixeermiddelen (4% formaldehyde, azijnzuur, aceton) kunnen ook gebruikt worden na het testen van de verenigbaarheid met de latere analyse. </li><li> De ME hele mounts zijn klaar voor verdere histochemische of immunhistochemical vlekken: </li></ol><ol class="lalpha"><li> Histochemie: myeloperoxidase (MPO) kleuring Geïnfiltreerde PMN&#39;s kunnen worden onderzocht door de volgende MPO kleuringsprotocol. <ol><li> Los 10 mg HYates anker reagens (Polyscience Europe, Eppelheim, Duitsland) in 10 ml KHB en voeg 100 ul van 3% H 2 O 2. Bereid de oplossing vers onmiddellijk voor gebruik en niet hergebruiken. </li><li> Whole mounts Incubeer gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Uitvoerig spoelen met koud specimens KHB en incubeer gedurende 10 minuten. </li><li> Monteren specimens in waterig fixeermiddel (Aquatek, Merck, Darmstadt, Germany) Na drogen gedurende 2 uur analyseren dia&#39;s onder een lichtmicroscoop. </li><li> Tel het aantal cellen in 5 willekeurig gekozen velden en berekenen als MPO positieve cellen / mm 2. </li></ol></li><li> Immunohistochemische Beitsen: Dienovereenkomstig de histochemische kleuring MPO kan immunohistochemische kleuringen van de whole mounts worden uitgevoerd. In principe kan een gevestigde protocols immunohistochemische kleuring van celkweek of weefselcoupes eenvoudig worden aangepast aan een whole mount kleuring. Echter, het optimaliseren van de procedure voor specifieke antilichamen is sterk aan te bevelen. <ol><li> Snijd specimens in 5 x 5 mm gesneden en uitvoeren kleuring in 2,0 ml met ronde bodem centrifugebuizen in ~ 150 ul - 200 ul antilichaam oplossing. </li><li> Bevestiging en blokkeringsprocedure (3% BSA in PBS gedurende 1 uur bij kamertemperatuur) worden uitgevoerd in de &quot;Sylgard schaal&quot;. </li><li> Wasstappen in PBS of andere buffers kunnen worden uitgevoerd in 12-well platen. </li><li> Zorgvuldig Breng de. Exemplaren met een scherp pincet tussen vlekken buizen en wassen platen. </li><li> Na de laatste wasprocedure mount exemplaren in anti-fading montage medium met dekglaasjes en analyseren met een fluorescentiemicroscoop. </li></ol></li></ol> 6. Orgel Cultuur van ME <ol><li> Het gehele dunne darm gereseceerd 24 uur na IM en in koude KHB met 200 U / ml penicilline G en 100 ug / ml streptomycine (KHB + P / S). </li><li> Snijd de darm in 3 cm lengte en speld elk segment tot een Sylgard met glass schotel. </li><li> Verwijder het mesenterium met fijne schaar en zet de darm van een breinaald. </li><li> Voorzichtig insnijden de ME met een scherpe tang en strip het af van de submucosa met een vochtige katoenen applicator. De tunica mucosa blijft de breinaald en kan snel bevroren voor verder onderzoek. De ME wordt verzameld in een koude KHB + P / S. </li><li> Snij de geïsoleerde ME strips in kleine stukjes van 2 - 4 mm lengte en incubeer in ijskoude KHB + P / S een half uur en spoel het monster meerdere malen. </li><li> Breng ongeveer 50-60 mg ME (ten minste half ME van een dunne darm) in een steriele 24 wells plaat met 500 pl Dulbecco&#39;s gemodificeerd Eagle medium (DMEM). </li><li> Incubeer bij 37 ° C en 5% CO2 gedurende 24 uur extra. </li><li> Controleer de celculturen voor bacteriële of schimmelbesmetting onder een microscoop. </li><li> Verzamel supernatant, verminderde snelheid gedurende 5 minuten bij 1000 RCF en snap bevriezen in vloeibare stikstof. Ondertussen vlek droog de muscle weefsel op een schoon weefsel voor 30 sec en gewicht. </li><li> Supernatanten kunnen worden gebruikt voor daaropvolgende analyse van model cytokines (IL-6) door ELISA of andere metabolieten (di nitriet) in het supernatant door de volgende instructies van de fabrikant. </li><li> Normaliseren gemeten concentraties per gewicht van ME weefsel. </li></ol> 7. Representatieve resultaten <ol><li> Functionele studies De belangrijkste parameter voor de ernst van POI beoordelen is het onderzoek van GIT in vivo. Figuur 1A toont een typische verdeling van FITC dextran langs het maagdarmkanaal in onbehandelde controles en darmen gemanipuleerd muizen 24 uur na de operatie. &quot;Sham bediend&quot; dieren vertoonden een normale GIT met een berekende geometrische center (GC) in de blindedarm terwijl IM tot een aanzienlijke vertraging van GIT in het proximale jejunum (Figuur 1B) Motiliteit werd afzonderlijk gericht op door meting van de bal uitscheiding tijd ofa 2 mm glazen bol. Sham bediend muizen tonen een uitscheiding tijd van 48 - 200 sec, terwijl IM leidde tot een verlengde excretie tijd tussen 470 tot 775 sec (Figuur 1C). </li><li> Morfologische studies Om de ontstekingsreactie te beschrijven uit te breiden binnen de ME verschillende fenotypes van leukocyten kunnen worden geanalyseerd met behulp histochemie of immunohistochemie. In figuur 2A + B een lage aanwezigheid van PMN&#39;s in &quot;sham bediend&quot; dieren werd waargenomen (39 ± 7 cellen / mm 2). IM van de dunne darm tot een sterke PMN infiltratie (660 ± 86 cellen / mm 2) vergeleken met placebo geopereerde muizen </li><li> ME Orgel Cultuur Veel ontstekingsmediatoren bevrijd van cellen zijn moeilijk te detecteren in lysaten weefsel. Orgaankweek waarmee de aanwezigheid van vrijgekomen mediators in de cultuur supernatant. Een representatieve mediator in POI NEE is, luidt als belangrijkste remmende neurotransmitter in het maagdarmkanaal. 5 NO kon worden gedetecteerd in ME orgaan cultuur supernatanten van niet geopereerde controledieren (5 ± 6 uM / 24 uur / mg weefsel). In sham geopereerde (laparotomie) muizen basale NO niveaus van 53 ± 36 uM / 24 uur / mg weefsel waargenomen. ME culturen van intestinaal gemanipuleerd (geoogst 24 uur na de operatie) muizen produceren significant NO (2254 ± 853 uM / 24 uur / mg weefsel) gedurende 24 uur ME orgelcultuur (figuur 3). </li></ol><img alt="Figuur 1" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig1.jpg" /> Figuur 1. Effect van IM op GIT (A + B) en colon transit (C) GIT werd gemeten als het percentage van niet resorbeerbare fluoresceïne gelabelde dextran in 15 gastro-segmenten maag (Sto), dunne darm (SI 1-9 ), caecum (CEC), en dikke darm (Co) -90 min na orale inname. Colonic transit werd gemeten als de tijd vanaf het uittrekken van de fistel probe tot uitscheiding van een 2 mm glasparel. (A) Maag verdeling van fluoresceïne-isothiocyanaat-dextran na schijnoperatie of IM. In sham geopereerde dieren de meeste van de marker zich in de blindedarm of de proximale colon vergeleken met proximale jejunale locatie in gemanipuleerde dieren. Gestippelde lijnen geven berekend GC. (B) berekening van de GC toonde een langdurige maag-darmtransit verkorten na im. (C) Colonic transittijd vertoonden een significante vertraging in de IM muizen vergeleken met placebo geopereerde dieren. GC voor de 15 dunne darm worden weergegeven als gemiddelde (n = 5). Colonic transittijden werden getoond bedoel met alle individuele waarden (n = 6). *** = P &lt;0,001, Student&#39;s t-test. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig2.jpg" /> Figuur 2. Detectie van MPO positieve cellen in de dunne darm ME. (A) ME hele mounts werden gekleurd met hunkeren Yates reagens voor de detectie van MPO positieve PMN 24 uur na laparotomie (sham) of IM procedure. (B) Kwantificering van MPO positieve cel binnen 5 willekeurig gekozen velden per muis. n = 6 animals per groep. *** = P &lt;0,001, Student&#39;s t-test. <img alt="Figuur 3" src="/files/ftp_upload/4086/4086fig3.jpg" /> Figuur 3. NO productie in kweeksupernatanten van ME. Muscle specimens van niet geopereerde controles, sham bediend en IM muizen werden 24 uur gekweekt en postoperatief gedurende 24 uur. Onbehandelde muizen een zeer lage basale productie van NO. Na laparotomie geen bevrijding wordt verhoogd zonder het meten significante verschillen tussen de controle groep en sham geopereerde muizen. 24 uur na IM NO productie is sterk toegenomen in vergelijking met onbehandelde of sham-geopereerde muizen. n = 5 dieren per groep. *** = P &lt;0,001, 1 way ANOVA.

<ol><li>Wehner, S., Behrendt, F. F., Lyutenski, B. N., Lysson, M., Bauer, A. J., Hirner, A., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+macrophage+function+prevents+intestinal+inflammation+and+postoperative+ileus+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Inhibition of macrophage function prevents intestinal inflammation and postoperative ileus in rodents.</a> Gut. 56, 176-185 (2007).</li>
<li>Kalff, J. C., Schwarz, N. T., Walgenbach, K. J., Schraut, W. H., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Leukocytes+of+the+intestinal+muscularis%3A+their+phenotype+and+isolation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Leukocytes of the intestinal muscularis: their phenotype and isolation.</a> J. Leukoc. Biol. 63, 683-691 (1998).</li>
<li>Kehlet, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postoperative+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Postoperative ileus.</a> Gut. 47, Suppl 4. iv85-iv86 (2000).</li>
<li>Wehner, S., Schwarz, N. T., Hundsdoerfer, R., Hierholzer, C., Tweardy, D. J., Billiar, T. R., Bauer, A. J., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+IL-6+within+the+rodent+intestinal+muscularis+after+intestinal+surgical+stress%5BTitle%5D)+AND+%22Surgery%22%5BJournal%5D)">Induction of IL-6 within the rodent intestinal muscularis after intestinal surgical stress.</a> Surgery. 137, 436-446 (2005).</li>
<li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Billiar, T. R., Simmons, R. L., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+inducible+nitric+oxide+synthase+in+postoperative+intestinal+smooth+muscle+dysfunction+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Role of inducible nitric oxide synthase in postoperative intestinal smooth muscle dysfunction in rodents.</a> Gastroenterology. 118, 316-327 (2000).</li>
<li>Iyer, S., Saunders, W. B., Stemkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Economic+burden+of+postoperative+ileus+associated+with+colectomy+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Manag.+Care+Pharm%22%5BJournal%5D)">Economic burden of postoperative ileus associated with colectomy in the United States.</a> J. Manag. Care Pharm. 15, 485-494 (2009).</li>
<li>Miller, M. S., Galligan, J. J., Burks, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+measurement+of+intestinal+transit+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Accurate measurement of intestinal transit in the rat.</a> J. Pharmacol. Methods. 6, 211-217 (1981).</li>
<li>Kalff, J. C., Schraut, W. H., Simmons, R. L., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+manipulation+of+the+gut+elicits+an+intestinal+muscularis+inflammatory+response+resulting+in+postsurgical+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Surg%22%5BJournal%5D)">Surgical manipulation of the gut elicits an intestinal muscularis inflammatory response resulting in postsurgical ileus.</a> Ann. Surg. 228, 652-663 (1998).</li>
<li>Wehner, S., Straesser, S., Vilz, T. O., Pantelis, D., Sielecki, T., de lC, V., Hirner, A., Kalff, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+p38+mitogen-activated+protein+kinase+pathway+as+prophylaxis+of+postoperative+ileus+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Inhibition of p38 mitogen-activated protein kinase pathway as prophylaxis of postoperative ileus in mice.</a> Gastroenterology. 136, 619-629 (2009).</li>
<li>Konigsrainer, I., Turck, M. H., Eisner, F., Meile, T., Hoffmann, J., Kuper, M., Zieker, D., Glatzle, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Gut+is+not+only+the+Target+but+a+Source+of+Inflammatory+Mediators+Inhibiting+Gastrointestinal+Motility+During+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Physiol.+Biochem%22%5BJournal%5D)">The Gut is not only the Target but a Source of Inflammatory Mediators Inhibiting Gastrointestinal Motility During Sepsis.</a> Cell Physiol. Biochem. 28, 753-760 (2011).</li>
<li>Schwarz, N. T., Kalff, J. C., Turler, A., Speidel, N., Grandis, J. R., Billiar, T. R., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+jejunal+manipulation+causes+postoperative+pan-enteric+inflammation+and+dysmotility%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Selective jejunal manipulation causes postoperative pan-enteric inflammation and dysmotility.</a> Gastroenterology. 26, 159-169 (2004).</li>
<li>Engel, D. R., Koscielny, A., Wehner, S., Maurer, J., Schiwon, M., Franken, L., Schumak, B., Limmer, A., Sparwasser, T., Hirner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((T+helper+type+1+memory+cells+disseminate+postoperative+ileus+over+the+entire+intestinal+tract%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">T helper type 1 memory cells disseminate postoperative ileus over the entire intestinal tract.</a> Nat. Med. , (2010).</li>
<li>Stoffels, B., Schmidt, J., Nakao, A., Nazir, A., Chanthaphavong, R. S., Bauer, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+interleukin+10+in+murine+postoperative+ileus%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Role of interleukin 10 in murine postoperative ileus.</a> Gut. 58, 648-660 (2009).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Een vergelijkende studie van de verschillende IM (dunne darm eventration gedurende 10 min zachtjes versus controle van de dunne darm met twee katoenen applicators versus IM met evacuatie van de dunne darm inhoud in de blindedarm) werd een correlatie tussen de mate van chirurgische manipulatie en POI. In vergelijking met de andere groepen IM het hoogste bedrag van leukocyten toonde in de ME (PNMs, macrofagen en mestcellen) resulteert in een verlengde en ernstige POI. 8. Bij het vas...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens / apparatuur </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Ethilon 5/0 </td><td> Ethicon </td><td> 1666H </td></tr><tr><td> Katoen applicators </td><td> Verminkt </td><td> 71010 </td></tr><tr><td> arteriële catheter </td><td> Vygon </td><td> 115 tot 798 </td></tr><tr><td> Plaat met 96 putjes (zwart) </td><td> Greiner Bio One </td><td> 655096 </td></tr><tr><td> glazen bol (2 mm diameter) </td><td> Worf </td><td> op aanvraag </td></tr><tr><td> Insect pinnen </td><td> Fine Science Tools </td><td> 26.000-25 </td></tr><tr><td> Hunkeren Yates Reagens </td><td> Polyscience </td><td> 560694 </td></tr><tr><td> Aquatek </td><td> Merck </td><td> HC109850 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Lonza </td><td> BE12-604 F </td></tr><tr><td> FITC-dextran (MW 70.000) </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 46945-500MG-F </td></tr></tbody></table>

functionele evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in knaagdieren: analyses in een gestandaardiseerd model van intestinal manipulatie

Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation

Ontsteking van het maagdarmkanaal is een veelvuldige oorzaak van een verscheidenheid van menselijke ziekten. Animal onderzoeksmodellen zijn cruciaal bij het onderzoek naar de complexe cellulaire en moleculaire van intestinale pathologie. Hoewel de tunica mucosa is vaak het orgaan van belang in veel inflammatoire ziekten, toonden recente werken die de muscularis externa (ME) is ook een zeer immunocompetente orgaan dat herbergt een dicht netwerk van ingezeten immunocyten. 1,2 Deze werken werden uitgevoerd binnen de gestandaardiseerde model van intestinale manipulatie (IM) dat leidt tot ontsteking van de darmwand, hoofdzakelijk beperkt tot de ME. Klinisch deze ontsteking leidt tot langdurige intestinale dysmotiliteit, bekend als postoperatieve ileus (POI), een frequent en onvermijdelijke complicatie na abdominale chirurgie. 3 De ontsteking wordt gekenmerkt door het ontlasten van proinflammatoire mediatoren zoals IL-6 4 of IL-1β of neurotransmitters zoals Nitric oxide (NO). 5 Vervolgens, enorme aantallen immunocyten extravasaat in de ME, gedomineerd door polymorfonucleaire neutrofielen (PMN) en monocyten en tenslotte onderhouden POI. 2 voor de duur van dagen, deze intestinale verlamming leidt tot een verhoogd risico op aspiratie, bacteriële translocatie en infectieuze complicaties tot sepsis en multi orgaanfalen en zorgt voor een hoge economische last. 6 In dit manuscript demonstreren we het gestandaardiseerde model van IM en in vivo evaluatie van de gastro-intestinale transit (GIT) en colon doorvoer. Verder tonen we een werkwijze voor het scheiden van de ME van de tunica mucosa gevolgd door immunologische analyse, die belang onderscheid te maken tussen de inflammatoire responsen in deze beide zeer immuunactieve darmwand compartimenten. Alle analyses zijn gemakkelijk overdraagbaar aan een andere onderzoeksmodellen, die de maag-functie.

Postoperatieve ileus (POI) is een complicatie van abdominale chirurgie leidt tot verhoogde morbiditeit en een langdurig verblijf in het ziekenhuis. Omdat profylactische of therapeutische strategieën ontbreken geïntensiveerd onderzoek is noodzakelijk. Daarom hebben we een gestandaardiseerde en haalbaar muismodel naar de pathofysiologie van POI te onderzoeken en mogelijke therapeutische opties te bestuderen.

Functionele Evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in Knaagdieren: Analyses in een gestandaardiseerd model van Intestinal Manipulatie

Ontsteking van het maagdarmkanaal is een veelvoorkomende oorzaak van diverse menselijke ziekten. Dieronderzoeksmodellen zijn van cruciaal belang bij het onderzoeken van de ...

Het algemene doel van de volgende experimenten is om een intestinale manipulatie uit te voeren om de ontwikkeling en het opheffen van de postoperatieve ileus in een knaagdiermodel te bestuderen; dit wordt bereikt door gestandaardiseerde manipulatie van de dunne darm tussen twee vochtige wattenstaafjes. Vervolgens worden de gastro-intestinale en colone transit geanalyseerd om de postoperatieve motiliteit te meten. Daarna worden histochemische analyse en organcultuur van de muscularis externa van de dunne darm uitgevoerd om de ontstekingswaarden te onderzoeken.Er zijn resultaten verkregen die een sterke infiltratie van neutrofiele granulocyten in het slijmvlies en een overmatige productie van stikstofmonoxide in slijmvliesculturen laten zien, wat resulteert in vertragingen van de gastro-intestinale en colontransittijden. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen over het ontstaan en de oplossing van postoperatieve ileus, en bij het onderzoeken van potentiële profylaxe of therapie. De procedure zal worden gedemonstreerd door Mario Lewison, een technicus uit ons laboratorium. Dien 0,8 tot 1% isofluraan in zuurstof toe aan een mannelijke muis. Plaats het dier in ruglig

functional-assessment-intestinal-motility-gut-wall-inflammation

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Evaluatie van de motiliteit in de cavia distale colon met de gastro-intestinale motiliteit Monitor (GIMM) is een eenvoudig en simpel om te leren benadering van de voortstuwende motiliteit kwantitatief te evalueren in het maagdarmkanaal.

Gastro-intestinale motiliteit Monitor (GIMM)

In de afgelopen jaren zijn nieuwe generatie endoscopen ontpopt als belangrijk diagnostisch onderzoek hulpmiddelen voor het evalueren van muizen colitis en colorectale tumoren. We presenteren hier een gedetailleerd protocol voor endoscopische beoordeling van ontsteking en colorectale tumoren in muizen, evenals een nieuw scoresysteem dat decimale identifiers gebruikt om de endoscopische ernst van colitis en colorectale tumoren documenteren.

Flexibele colonoscopie in Muizen aan de ernst van colitis en Colorectale Tumoren Evalueer behulp van een gevalideerde Endoscopische Scoring System

We beschrijven methoden voor longitudinaal bewaken van de werkzaamheid van therapieën voor de behandeling van colonische pathologieën bij muizen met behulp van een star endoscoop. Dit protocol kan gemakkelijk worden gebruikt voor de karakterisering van de therapeutische respons van een individuele tumor in levende muizen en ook voor het monitoren van mogelijke ziekterecidieven.

Niet-invasieve evaluatie van de werkzaamheid van nieuwe therapieën voor Intestinale Pathologieën gebruik van een serieel Endoscopische Imaging van levende muizen

Dit protocol beschrijft het gebruik van uitgesneden darmweefselpreparaten of 'darmzakken' als een ex vivo model van de darmwandfunctie. Dit model kan worden gebruikt om de integriteit van zowel de epitheliale barrière als de slijmvlieglaag op specifieke darmlocaties in diermodellen van spijsverteringsziekten te beoordelen.

Ex Vivo Intestinale Sacs mucosale permeabiliteit beoordelen Modellen van gastro-intestinale aandoeningen

Dit artikel beschrijft een video-imagingtechniek en hoogwaardige ruimte-tijdelijke mapping om veranderingen in de neurale regulatie van colonische motiliteit bij volwassen muizen te identificeren. Subtiele effecten op gastro-intestinale (GI) functie kunnen worden gedetecteerd met behulp van deze aanpak in geïsoleerde weefselpreparaten om ons begrip van GI-ziekte te bevorderen.

Video Imaging en Maps Spatiotemporal om gastro-intestinale motiliteit analyseren in Muizen

Huidige behandelingen van inflammatoire darmziekten (IBD) zijn gericht op het verlichten van de ziektesymptomen, maar kan ernstige bijwerkingen veroorzaken. Zo worden alternatieve strategieën onderzocht in dierlijke modellen colitis. Hier leggen we uit hoe de gunstige effecten van voedingssupplementen op de klinische IBD borden worden geanalyseerd in een dergelijk colitis model.

Het analyseren van gunstige effecten van voedingssupplementen op darmepitheel Barrier Functies tijdens de Experimental Colitis

Hier presenteren we een protocol voor het vaststellen van belangrijke eindpunten en proliferatieve markers van kleine intestinale letsel en compenserende hyperproliferatie met behulp van een model van chemotherapie-geïnduceerde mucositis. We demonstreren de detectie van prolifererende cellen met behulp van een celcyclus specifieke marker en met behulp van kleine intestinale gewicht, crypte diepte, en villus hoogte als eindpunten.

Belangrijke eindpunten en proliferatieve markers om kleine darm letsel en aanpassing te beoordelen met behulp van een muis model van chemotherapie-geïnduceerde Mucositis

Hier geven we een gedetailleerde beschrijving van de procedure om colonoscopisch geleide knijpbiopten bij muizen te induceren en wondsluiting in realtime te volgen. Daarnaast zijn er methoden voor de bereiding van weefsels voor histologische, immunohistochemische en moleculaire analyses van het wondbed.

Colonoscopische geleide pinch-biopsieën bij muizen uitvoeren en daaropvolgende weefselveranderingen evalueren

Ontregelde intestinale epitheliale barrièrefunctie en immuunresponsen zijn kenmerken van inflammatoire darmziekten die slecht worden onderzocht vanwege een gebrek aan fysiologische modellen. Hier beschrijven we een muis intestinale lus model dat een goed gevasculariseerd en exteriorized darmsegment gebruikt om mucosale permeabiliteit en leukocyten rekrutering in vivo te bestuderen.

Functionele beoordeling van intestinale permeabiliteit en neutrofiele transepitheliale migratie bij muizen met behulp van een gestandaardiseerd intestinale lusmodel

Systematische scoring van darmontsteking met behulp van een gratis computerondersteund systeem is een krachtig hulpmiddel om histopathologische veranderingen in colitismodellen kwantitatief te vergelijken, gekenmerkt door de aanwezigheid van zweren en ontstekingsveranderingen. Histologische colitis score evaluatie versterkt klinische observaties en vergemakkelijkt de interpretatie van gegevens.

Systematische scoringsanalyse voor darmontsteking in een muriene dextran natriumsulfaat-geïnduceerde colitismodel

Dit protocol beschrijft een kwantitatieve ontlastingstest bij jonge RAC1/CED-10 mutante Caenorhabditis elegans, waarmee een eenvoudig model wordt geboden om prodromale stadia van de ziekte van Parkinson te bestuderen. Het overwint beperkingen van andere diermodellen en faciliteert het testen van therapeutische strategieën gericht op vroege Parkinsoniaanse pathologie.

Beoordeling van gastro-intestinale motiliteit bij Caenorhabditis elegans RAC1/CED-10 mutanten als hulpmiddel om vroege Parkinson te bestuderen

Leer een gestandaardiseerd model voor darmmanipulatie in knaagdieren om darmmotiliteit en ontsteking in de muscularis externa te evalueren. Dit protocol helpt bij het bestuderen van postoperatieve ileus.

Functionele Evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in Knaagdieren: Analyses in een gestandaardiseerd model van Intestinal Manipulatie (Video) | JoVE Journal

Functionele Evaluatie van darmmotiliteit en de darmwand ontsteking in Knaagdieren: Analyses in een gestandaardiseerd model van Intestinal Manipulatie

Meer video's verkennen