Name: Heterotypische Driedimensionale In Vitro Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Leer heterotypische 3D-modellering van stroma-epitheliale interacties bij eierstokkanker. Deze methode gebruikt co-cultuur van fibroblasten en epitheelcellen om tumorontwikkeling te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd uitgevoerd bij de Keck School of Medicine, University of California, VS, en het University College London, Verenigd Koninkrijk. KL wordt gefinancierd door het National Institute of Health subsidie ​​5 U19 CA148112-02. BG werd gefinancierd door een projectsubsidie ​​van de Eve beroep gynaecologische oncologie liefdadigheid (UK). Een deel van deze werkzaamheden die op UCLH / UCL werd gedeeltelijk gefinancierd uit het ministerie van Volksgezondheid de NIHR Biomedical Research Centre subsidieregeling.

<ol><li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li>
<li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+registrations%3A+registrations+of+cancer+diagnosed+in+2008%22">Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008</a>. , England. (2011).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma%3A+insights+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases%3A+implications+for+biomarker+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232(2008).</li>
<li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer%3A+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li>
<li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length%2FDNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134(2011).</li>
<li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+%28TRAP%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li>
<li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li>
<li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li>
<li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li>
<li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li>
<li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+%28EOC%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li>
<li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases%3A+Biology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li>
<li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li>
<li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li>
<li>Kurman, R. J., Shih, I. eM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De biologie van een vroeg stadium ovariumcarcinoom (EOC) is slecht begrepen. Misschien is een van de voornaamste problemen op dit gebied vele jaren is het gebrek aan inzicht in de weefselspecifieke oorsprong van de ziekte, en het belang van de rol van de micro EOC in ontwikkeling. In de afgelopen jaren is wordt duidelijk geworden dat EOC is een heterogene ziekte met meerdere verschillende histophathological subtypes, waarschijnlijk met verschillende cellulaire oorsprong voor verschillende subtypes. Bijvoorbeeld, de huid...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Leverancier </td><td> Catalogus nummer </td></tr><tr><td> PolyHEMA, geschikt voor celkweek </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Moleculaire biologie klas ethanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Steriel water voor celcultuur </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicine </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amfotericine B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% trypsine-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Mobiele zeef (40 of 70 pm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-fibroblast oppervlakte-eiwit antilichaam, kloon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-cytokeratine antilichaam (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybreen (hexadimethrine bromide) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR-ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomeerlengte Assay </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Reagentia en apparatuur die in deze studie verwezen.

heterotypische driedimensionale<em&gt; in vitro</em&gt; modellering van stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epitheliale eierstokkanker (EOCs) zijn de belangrijkste oorzaak van overlijden door gynaecologische maligniteit in de westerse samenlevingen. Ondanks de vooruitgang in chirurgische behandelingen en verbeterde op platina gebaseerde chemotherapie, is er weinig verbetering in de EOC overlevingscijfers voor meer dan vier decennia 1,2. Terwijl stadium I tumoren hebben 5-jaarsoverleving&gt; 85%, overleving voor stadium III / IV ziekte zijn &lt;40%. Zo kan de hoge sterftecijfers voor EOC aanzienlijk worden verlaagd als tumoren werden aangetroffen bij eerder, meer behandelbaar, podia 3-5. Momenteel wordt de moleculaire genetische en biologische basis van beginnende ziekte ontwikkeling slecht begrepen. Meer in het bijzonder, is er weinig bekend over de rol van de micro-omgeving tijdens tumorinitiatie, maar bekende risicofactoren voor EOCs (zoals leeftijd en pariteit) suggereren dat de micro-omgeving een belangrijke rol speelt in de vroege ontstaan ​​van EOCs. Daarom ontwikkelde drie-dimensionale heterotypische modellenvan zowel de normale eierstok van beginnende eierstokkanker. Voor de normale ovarium, we co-gekweekte normale ovarium oppervlak epitheel (IOSE) en normale stromale fibroblasten (INOF) cellen geïmmortaliseerd door retrovrial transductie van de katalytische subeenheid van menselijk telomerase holoënzym (hTERT) om de levensduur van deze cellen in kweek te verlengen. De vroegste stadia van eierstokepitheliaalcellen celtransformatie, overexpressie van het oncogen in CMYC IOSE cellen opnieuw samen gekweekt met cellen INOF model. Deze heterotypische modellen werden gebruikt om de effecten van veroudering en veroudering onderzoeken op de transformatie en invasie van epitheelcellen. Hier beschrijven we de methodologische stappen in de ontwikkeling van deze driedimensionale model, deze methoden zijn niet specifiek voor de ontwikkeling van normale ovarium en eierstokkanker weefsels en kan worden gebruikt om andere weefseltypes waar bestuderen stromale en epitheelcellen interacties fundamenteel aspect van het weefsel onderhoud en diSease ontwikkeling.

We beschrijven methoden voor het vaststellen<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotypische driedimensionale modellen die ovarian fibroblasten en normale ovarium oppervlak of eierstokkanker epitheelcellen. We bespreken het gebruik van deze modellen stroma-epitheliale interacties die plaatsvinden tijdens eierstokkanker ontwikkeling te bestuderen.

Heterotypische Driedimensionale<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie

Epitheliale ovariumcarcinomen (EOC's) zijn de belangrijkste doodsoorzaak door gynaecologicale maligniteiten in westerse samenlevingen. Ondanks vorderingen in de chirurgische...

Het algemene doel van het volgende experiment is om driedimensionale typische modellen van de vroege stadia van eierstokkankerontwikkeling te genereren. Eerst worden H turt geïmmortaliseerde cellijnen gegenereerd, afgeleid van primaire, normale ovariële epitheliale en fibroblastweefsels. Om vervolgens de in vivo architectuur en complexe cel-celinteracties in de eierstok na te bootsen, worden epitheliale en stromale cellijnen in driedimensionale S-sferoïde modellen gecultiveerd. Vervolgens worden de organoïde culturen gefixeerd en gekleurd om de expressie van specifieke markers te analyseren, teneinde de moleculaire kenmerken van stromale-epitheliale interacties te bestuderen.De verkregen resultaten laten zien hoe wijzigingen in het stromale celcompartiment van 3D-typische modellen het fenotype van gecocultureerde epitheliale cellen kunnen beïnvloeden. Driedimensionale typische modellen kunnen helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het onderzoek naar eierstokkanker, zoals het verkennen van de oorsprong van deze ziekte en het verduidelijken van de rol van de stromale micro-omgeving bij het ontstaan en de ontwikkeling van tumoren. De toepassingen van deze technieken reiken verder tot ziektebehandeling en diagnose in vergelijking met andere 3D-kweektmethoden.Deze techniek kan worden toegepast op een breder scala aan celcultuurvolumes en downstream-applicaties. Bijvoorbeeld kunnen 3D homo- en typische culturen worden gebruikt voor in vitro drugtesting. Deze benadering kan ook worden toegepast op andere modelsystemen, zoals bij de studie van andere typen solide tumoren of bij goedaardige ziekten.Transporteer het verse eierstokweefsel naar het celkweeklaboratorium in groeimedium voor geïmmortaliseerde normale eierstokfibroblasten, aangevuld met extra antibiotica en antifungici. Was het monster drie keer met vijf milliliter PBS om eventuele epitheelcellen die nog los aan het weefsel vastzitten te verwijderen. Breng vervolgens het monster samen met de PBS over naar een schone P 100 kweekschaal. Verplaats het weefsel met steriele instrumenten naar een tweede droge, schone P 100 kweekschaal.Snijd het weefsel in stukjes van 0,5 vierkante centimeter en breng elk stukje over naar een aparte P 100-schaal. Snijd het weefsel verder in stukjes kleiner dan één vierkante millimeter. Voeg vervolgens 20 milliliters INOF GM-medium toe en kweek het weefsel. Controleer de celgroei met fasencontrastmicroscopie.Bevestig dat de cellen binnen 24 uur aan de schaal hechten. Controleer de celgroei met fasiscontrastmicroscopie. Cellen hechten gewoonlijk binnen 24 uur aan de schaal. Verwijder na een week elk niet-adherent weefsel door aspiratie, vul het medium aan en voed de culturen daarna twee keer per week gedurende één tot drie weken, wanneer de celkolonies ongeveer 500 microns groot zijn.Isoleer de klonen met behulp van trips en gecoate kloneerschijfjes. Om te bevestigen dat het om 100% fibroblastische cellen gaat, plaatst u een monster van de cellijn op glazen dekglasjes en voert u een immunofluorescentiekleuring uit voor een fibroblastische marker, een epitheliale marker en een endotheelcelmarker.Eén dag vóór de retrovirale transductie van H Turt passage worden de normale ovariale fibroblasten-celisolaten van één P 100 kweekschaal overgebracht naar drie P 100 kweekschalen. Vooraf geprepareerd viraal supernatant kan worden gekocht of in-house worden geproduceerd met behulp van standaardprotocollen voor cotransfectie van HEC 2 9 3 T-cellen. Om de polyhema-oplossing te bereiden, weegt u 1,5 gram polyhema af en plaatst u dit in een steriele fles.Voeg 95 milliliters absoluut ethanol van moleculaire biologie-kwaliteit en vijf milliliters gedestilleerd water van celkweek-kwaliteit toe. Plaats de poly Hema-oplossing in een waterbad bij 65 °C totdat deze volledig is opgelost. Coat de weefkweekschalen met de vers gemaakte poly Hema-oplossing.Laat de celkweekschaaltjes aan de lucht drogen in de laminaire flowkast. Licht schudden op een schudplatform kan worden gebruikt om een gelijkmatige coating van grotere schaaltjes of kolfjes te waarborgen. Als de polyus-oplossing te snel droogt, zal het oppervlak niet glad zijn.Indien gewenst, kunnen de fibroblasten voorafgaand aan de 3D-cultuur worden voorbehandeld; voor de inductie van senescentie kunnen de cellen bijvoorbeeld worden voorbehandeld met subletale doses waterstofperoxide. Herstel en breid de INOF- en epitheelcelculturen in vitro uit om voldoende cellen te verkrijgen voor het opzetten van 3D heterotope organoïden. Voeg na een vijf minuten durende wasbeurt met PBS 15 milliliters medium toe aan de poly-HEMA-plaat.Voeg ondertussen trypsine toe aan de geïmortaliseerde normale ovariale fibroblastcellen om ze los te maken van de kweekschaal. Neutraliseer na drie tot vijf minuten de trypsine met een gelijk volume kweekmedium en oogst de cellen door middel van centrifugatie. Resuspendeer de celpellet in vijf milliliter medium en meng dit goed door het monster herhaaldelijk met een pipetteer-beweging op en neer te bewegen of voorzichtig te vortexen.Gebruik vervolgens een monster van 10 µL om de levensvatbare cellen te tellen met behulp van trypanblauw. Voeg nu 4 miljoen INOF-cellen toe aan het medium dat reeds in de poly-HEMA-gecoate plaat is gedispergeerd. Vul het volume van het kweekmedium aan tot 20 mL en incubeer bij 37 °C, 5% CO2.Volg de cellulaire aggregatie tot multicellular steroiden via fascontrastmicroscopie om de S-sferoïdculturen elke twee tot drie dagen opnieuw te voeden. Plaats de platen schuin tegen een pipet aan. Laat de sferoïden bezinken en verwijder voorzichtig ongeveer 16 milliliters van het gebruikte medium met een vijf milliliter pipet.Voeg 16 milliliters vers medium toe aan de cultuur en plaats deze op dag zeven terug in de incubator. Creëer heterotypische culturen door epitheelcellen toe te voegen aan de fibroblasten phe. Bereid eerst suspensies van ovariumepitheelcellen voor met trypsine zoals eerder beschreven, nadat de cellen zijn geteld.Was één keer in INOF GM-medium om te voorkomen dat er groeifactoren uit de epitheliale groeimedia worden meegenomen. Voeg, na het aanvullen van het medium van de fibroblast-OID-culturen, de epitheliale cellen toe in een verhouding van vier fibroblasten op één epitheliale celcultuur. De heterotope OID's in INOF GM worden typisch elke twee tot drie dagen ververst gedurende nog eens 14 dagen.Fixeer voor immunohistochemie het PHE met neutraal gebufferde formaline, pelletHet PHE en vervang de formaline door 70% ethanol. Ga verder met het inbedden in paraffine volgens standaardprotocollen voor menselijke weefsels. In paraffine ingebedde steroïden kunnen worden gesneden en gekleurd met H&amp;E of specifieke moleculaire markers middels immunohistochemie.Als alternatief kunnen de steroiden worden gewassen in PBS en gefixeerd in 4% paraformaldehyde. Bedden de monsters vervolgens in OCT-medium en vries ze snel in voor cryostat-sectie en immunofluorescentiekleuring voor analyse via flowcytometrie. Was de steroiden in PBS enstelt ze door trypsinering of digestie met Accutane bij 37 °C.Volledige dissociatie van steroïden tot een enkelcellige suspensie kan worden bevorderd door de oplossing met een pipetteertip van één milliliter op en neer te pipetteren. Let erop dat de cellen niet te veel worden belast. Neutraliseer de reactie met een gelijk volume kweekmedium en verwijder celaggregaten door de suspensie door een cellzeef van 40 tot 70 micron te leiden. Pellet vervolgens de cellen, was deze met PBS en tel ze. Resuspendeer het gewenste aantal cellen in facts-buffer en kleur deze volgens de instructies van de fabrikant. In ons laboratorium hebben we gedeeltelijk getransformeerde epitheliale eierstokcellen gebruikt en deze gecultiveerd samen met normale en senescente eierstokfibroblasten om de vroege stadia van de ontwikkeling van eierstokkanker na te bootsen.Bij een premenopauzaal eierstokreservoir laat immunofluorescentiekleuring van h hert geïmmortaliseerde normale ovariale fibroblasten zien dat zowel primaire normale ovariale fibroblasten als geïmmortaliseerde normale ovariale fibroblasten fibroblast-specifiek eiwit tot expressie brengen, maar ze brengen geen cytokeratine zeven tot expressie en brengen menton tot expressie. Normale ovariale fibroblastcellen die alleen in 3D-vorm PHE zijn gekweekt, vertonen een spoelvormige morfologie en een overvloedige extracellulaire matrix. Hier werden normale ovariale fibroblasten gedurende zeven dagen blootgesteld aan waterstofperoxide om senescentie op te wekken, waarna ze gedurende 14 dagen samen met gedeeltelijk getransformeerde ovariale epitheelcellen werden gekweekt.Om de twee celtypen te onderscheiden, werden de resulterende sferoïden immunologisch gekleurd voor mim one als proliferatiemarker en pan-cytokeratine als epitheliale marker. Kwantificering van de gegevens suggereert dat de verouderende micro-omgeving neoplastische kenmerken van gedeeltelijk getransformeerde epitheliale cellen bevordert, terwijl een normale micro-omgeving neoplastische progressie remt; histologische kenmerken van normale en maligne cellen, die niet detecteerbaar zijn wanneer de cellen als monolagen worden gekweekt, worden hersteld. Wanneer de cellen worden overgezet naar een sferoïde-cultuur, kunnen bijvoorbeeld histologische kenmerken van heldercellige eierstokkanker worden gedetecteerd in 3D-culturen van heldercellige eierstokkanker-cellijnen, maar niet in monolayer-culturen van dezelfde cellen.Na het bekijken van deze video moet u een goed begrip hebben van het opzetten van driedimensionale typische culturen om de interacties tussen epitheelcellen en stromale cellen tijdens de vroege tumorigenese te bestuderen. Bij het opzetten van een 3D-cultuur is het belangrijk om de celaantallen aan te passen aan de daaropvolgende applicatie, rekening houdend met enig verlies van materiaal tijdens de verwerking.Zodra de methode onder de knie is, kunnen 3D-culturen volgens deze procedure in één uur worden opgezet. Andere methoden, zoals flowcytometrie in combinatie met gene expression microarray-profilering, kunnen worden uitgevoerd om de globale veranderingen in genexpressie te analyseren die optreden in typische 3D-culturen, maar niet worden gedetecteerd onder monolayer-kweekcondities. Dit maakt het mogelijk om de bidirectionele signaleringspaden te ontleden die specifiek optreden binnen een 3D-kerncultuurmicro-omgeving.

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De mesotheelcellen klaring test hier beschreven maakt gebruik van fluorescent gelabelde cellen en time-lapse video-microscopie kwantitatief te visualiseren en meten van de interacties van eierstokkanker meercellige sferoïden en mesotheelcellen cel monolagen. Deze test modelleert de eerste stappen van eierstokkanker metastase.

In vitro Mesothelial Ontruiming Assay dat de modellen van de vroege stappen van eierstokkanker Metastase

In this video, we demonstrate the development of  an in vitro  three-dimensional model of the lining of the peritoneal cavity. This organotypic culture can help to investigate ovarian cancer cell adhesion, invasion, and proliferation.

Modeling Ovarian Cancer Metastasis in Peritoneal Cavity Lining: A Method To Establish an In Vitro 3D Model of the Peritoneal Lining

Hier presenteren we een protocol voor co-cultuur in drie dimensies, wat nuttig is voor het onderzoeken van interacties tussen meerdere cellen en het beïnvloeden van het gedrag van kankercellen door de extracellulaire matrix. In dit experimentele model worden kankercellen gekweekt op collageengels ingebed met humane kanker-geassocieerde fibroblasten.

Driedimensionale Co-cultuur Model voor Tumor-stromale Interactie

Hier presenteren we een protocol om een driedimensionaal in vitro model te construeren van de bekleding van de peritoneale holte, samengesteld uit primaire humane mesotheliële cellen en fibroblasten, bedekt met extracellulaire matrix, als een hulpmiddel om de adhesie, invasie en proliferatie van ovariële kankercellen te onderzoeken.

Modelleren van de eerste stappen van eierstokkanker Verspreiding in een Organotypische Cultuur van de menselijke buikholte

We demonstreren een methode om 3D-surrogaten voor borstkanker te genereren, die kunnen worden gekweekt met behulp van een perfusiebioreactorsysteem om zuurstof en voedingsstoffen af te geven. Na de groei worden surrogaten gefixeerd en verwerkt tot paraffine voor evaluatie van parameters van belang. De evaluatie van één van deze parameters, celdichtheid, wordt uitgelegd.

Voorbereiding en analyse van<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional mammacarcinoom Surrogates

Ovariële tumorprogressie te bestuderen in een fysiologisch relevante model multicellulaire sferoïden werden gekweekt in een micro-inrichting onder gesimuleerde fluïdumstroming. Deze dynamische 3D-model emuleert de intraperitoneale omgeving met de cellulaire en mechanische componenten, waar eierstokkanker metastase optreedt.

Modelleren van eierstokkanker Meercellige Sferoïde Gedrag in een dynamische 3D peritoneale microdevice

Eierstokkankerstamcellen (OCSC) zijn verantwoordelijk voor kankerinitiatie, recidief, therapeutische resistentie en metastase. De OCSC vasculaire niche wordt beschouwd als het bevorderen van zelfvernieuwing van OCSC's, wat leidt tot chemoresistance. Dit protocol vormt de basis voor het opzetten van een reproduceerbaar OCSC vasculair nichemodel in vitro.

Evaluatie van de angiogenetische eigenschappen van eierstokkankerstamachtige cellen met behulp van het driedimensionale cocultuursysteem, NICO-1

Dit protocol beschrijft de opstelling van een driedimensionaal (3D) ex vivo model van de interactie tussen kankercellen en omtentum. Het model biedt een platform voor het ophelderen van pro-tumormechanismen binnen de vetniche en voor het testen van nieuwe therapieën.

Een ex vivo-model van peritoneale metastase van eierstokkanker met behulp van humaan omentum

Er is een kritieke behoefte aan 3D-kankermodellen die heterocellulaire overspraak vastleggen om kankermetastasen te bestuderen. Onze studie presenteert de generatie van heteromulticellulair stromaal-epitheel in een steiger- en steigervrije omgeving die kan worden gebruikt om invasie en cellulaire ruimtelijke verdelingen te bestuderen.

Heteromulticellulaire stromale cellen in steigervrije 3D-culturen van epitheelkankercellen om invasie te stimuleren

Dit protocol beschrijft de ontwikkeling van hooggradig sereus ovariumcarcinoom (HGSOC) muismodellen in vitro en in vivo. Van de afleiding van muizen eileiderorganoïden, hun genetische modificatie om menselijke HGSOC-genetica samen te vatten, en hun introductie in de eierstokslijmbeurs van syngene muizen voor in vivo ontwikkeling van tumoren.

Ontwikkeling van van muizen afgeleide organoïdelijnen van eileiderepitheelcellen voor modellering van hooggradig sereus ovariumcarcinoom

Leer heterotypische 3D-modellering van stroma-epitheliale interacties bij eierstokkanker. Deze methode gebruikt co-cultuur van fibroblasten en epitheelcellen om tumorontwikkeling te bestuderen.

Heterotypische Driedimensionale In Vitro Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie (Video) | JoVE Journal

Heterotypische Driedimensionale

Meer video's verkennen