Name: Heterotypische Driedimensionale In Vitro Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Leer heterotypische 3D-modellering van stroma-epitheliale interacties bij eierstokkanker. Deze methode gebruikt co-cultuur van fibroblasten en epitheelcellen om tumorontwikkeling te bestuderen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit onderzoek werd uitgevoerd bij de Keck School of Medicine, University of California, VS, en het University College London, Verenigd Koninkrijk. KL wordt gefinancierd door het National Institute of Health subsidie ​​5 U19 CA148112-02. BG werd gefinancierd door een projectsubsidie ​​van de Eve beroep gynaecologische oncologie liefdadigheid (UK). Een deel van deze werkzaamheden die op UCLH / UCL werd gedeeltelijk gefinancierd uit het ministerie van Volksgezondheid de NIHR Biomedical Research Centre subsidieregeling.

<ol><li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li>
<li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+registrations%3A+registrations+of+cancer+diagnosed+in+2008%22">Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008</a>. , England. (2011).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma%3A+insights+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases%3A+implications+for+biomarker+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232(2008).</li>
<li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer%3A+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li>
<li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length%2FDNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134(2011).</li>
<li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+%28TRAP%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li>
<li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li>
<li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li>
<li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li>
<li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li>
<li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+%28EOC%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li>
<li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases%3A+Biology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li>
<li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li>
<li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li>
<li>Kurman, R. J., Shih, I. eM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De biologie van een vroeg stadium ovariumcarcinoom (EOC) is slecht begrepen. Misschien is een van de voornaamste problemen op dit gebied vele jaren is het gebrek aan inzicht in de weefselspecifieke oorsprong van de ziekte, en het belang van de rol van de micro EOC in ontwikkeling. In de afgelopen jaren is wordt duidelijk geworden dat EOC is een heterogene ziekte met meerdere verschillende histophathological subtypes, waarschijnlijk met verschillende cellulaire oorsprong voor verschillende subtypes. Bijvoorbeeld, de huid...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Leverancier </td><td> Catalogus nummer </td></tr><tr><td> PolyHEMA, geschikt voor celkweek </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Moleculaire biologie klas ethanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Steriel water voor celcultuur </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Medium 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Foetaal runderserum Hyclone </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; Gentamicine </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> Amfotericine B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% trypsine-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Mobiele zeef (40 of 70 pm) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-fibroblast oppervlakte-eiwit antilichaam, kloon 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-cytokeratine antilichaam (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybreen (hexadimethrine bromide) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Telomerase PCR-ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG telomeerlengte Assay </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Tabel 1. Reagentia en apparatuur die in deze studie verwezen.

heterotypische driedimensionale<em&gt; in vitro</em&gt; modellering van stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epitheliale eierstokkanker (EOCs) zijn de belangrijkste oorzaak van overlijden door gynaecologische maligniteit in de westerse samenlevingen. Ondanks de vooruitgang in chirurgische behandelingen en verbeterde op platina gebaseerde chemotherapie, is er weinig verbetering in de EOC overlevingscijfers voor meer dan vier decennia 1,2. Terwijl stadium I tumoren hebben 5-jaarsoverleving&gt; 85%, overleving voor stadium III / IV ziekte zijn &lt;40%. Zo kan de hoge sterftecijfers voor EOC aanzienlijk worden verlaagd als tumoren werden aangetroffen bij eerder, meer behandelbaar, podia 3-5. Momenteel wordt de moleculaire genetische en biologische basis van beginnende ziekte ontwikkeling slecht begrepen. Meer in het bijzonder, is er weinig bekend over de rol van de micro-omgeving tijdens tumorinitiatie, maar bekende risicofactoren voor EOCs (zoals leeftijd en pariteit) suggereren dat de micro-omgeving een belangrijke rol speelt in de vroege ontstaan ​​van EOCs. Daarom ontwikkelde drie-dimensionale heterotypische modellenvan zowel de normale eierstok van beginnende eierstokkanker. Voor de normale ovarium, we co-gekweekte normale ovarium oppervlak epitheel (IOSE) en normale stromale fibroblasten (INOF) cellen geïmmortaliseerd door retrovrial transductie van de katalytische subeenheid van menselijk telomerase holoënzym (hTERT) om de levensduur van deze cellen in kweek te verlengen. De vroegste stadia van eierstokepitheliaalcellen celtransformatie, overexpressie van het oncogen in CMYC IOSE cellen opnieuw samen gekweekt met cellen INOF model. Deze heterotypische modellen werden gebruikt om de effecten van veroudering en veroudering onderzoeken op de transformatie en invasie van epitheelcellen. Hier beschrijven we de methodologische stappen in de ontwikkeling van deze driedimensionale model, deze methoden zijn niet specifiek voor de ontwikkeling van normale ovarium en eierstokkanker weefsels en kan worden gebruikt om andere weefseltypes waar bestuderen stromale en epitheelcellen interacties fundamenteel aspect van het weefsel onderhoud en diSease ontwikkeling.

We beschrijven methoden voor het vaststellen<em&gt; In vitro</em&gt; Heterotypische driedimensionale modellen die ovarian fibroblasten en normale ovarium oppervlak of eierstokkanker epitheelcellen. We bespreken het gebruik van deze modellen stroma-epitheliale interacties die plaatsvinden tijdens eierstokkanker ontwikkeling te bestuderen.

Heterotypische Driedimensionale<em&gt; In Vitro</em&gt; Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie

Epitheliale ovariumcarcinomen (EOC's) zijn de belangrijkste doodsoorzaak door gynaecologicale maligniteiten in westerse samenlevingen. Ondanks vorderingen in de chirurgische...

Het algemene doel van het volgende experiment is om driedimensionale typische modellen van de vroege stadia van eierstokkankerontwikkeling te genereren. Eerst worden H turt geïmmortaliseerde cellijnen gegenereerd, afgeleid van primaire, normale ovariële epitheliale en fibroblastweefsels. Om vervolgens de in vivo architectuur en complexe cel-celinteracties in de eierstok na te bootsen, worden epitheliale en stromale cellijnen in driedimensionale S-sferoïde modellen gecultiveerd. Vervolgens worden de organoïde culturen gefixeerd en gekleurd om de expressie van specifieke markers te analyseren, teneinde de moleculaire kenmerken van stromale-epitheliale interacties te bestuderen.De verkregen resultaten laten zien hoe wijzigingen in het stromale celcompartiment van 3D-typische modellen het fenotype van gecocultureerde epitheliale cellen kunnen beïnvloeden. Driedimensionale typische modellen kunnen helpen bij het beantwoorden van kernvragen binnen het onderzoek naar eierstokkanker, zoals het verkennen van de oorsprong van deze ziekte en het verduidelijken van de rol van de stromale micro-omgeving bij het ontstaan en de ontwikkeling van tumoren. De toepassingen van deze technieken reiken

heterotypic-three-dimensional-vitro-modeling-stromal-epithelial

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De mesotheelcellen klaring test hier beschreven maakt gebruik van fluorescent gelabelde cellen en time-lapse video-microscopie kwantitatief te visualiseren en meten van de interacties van eierstokkanker meercellige sferoïden en mesotheelcellen cel monolagen. Deze test modelleert de eerste stappen van eierstokkanker metastase.

In vitro Mesothelial Ontruiming Assay dat de modellen van de vroege stappen van eierstokkanker Metastase

In this video, we demonstrate the development of  an in vitro  three-dimensional model of the lining of the peritoneal cavity. This organotypic culture can help to investigate ovarian cancer cell adhesion, invasion, and proliferation.

Modeling Ovarian Cancer Metastasis in Peritoneal Cavity Lining: A Method To Establish an In Vitro 3D Model of the Peritoneal Lining

Hier presenteren we een protocol voor co-cultuur in drie dimensies, wat nuttig is voor het onderzoeken van interacties tussen meerdere cellen en het beïnvloeden van het gedrag van kankercellen door de extracellulaire matrix. In dit experimentele model worden kankercellen gekweekt op collageengels ingebed met humane kanker-geassocieerde fibroblasten.

Driedimensionale Co-cultuur Model voor Tumor-stromale Interactie

Hier presenteren we een protocol om een driedimensionaal in vitro model te construeren van de bekleding van de peritoneale holte, samengesteld uit primaire humane mesotheliële cellen en fibroblasten, bedekt met extracellulaire matrix, als een hulpmiddel om de adhesie, invasie en proliferatie van ovariële kankercellen te onderzoeken.

Modelleren van de eerste stappen van eierstokkanker Verspreiding in een Organotypische Cultuur van de menselijke buikholte

We demonstreren een methode om 3D-surrogaten voor borstkanker te genereren, die kunnen worden gekweekt met behulp van een perfusiebioreactorsysteem om zuurstof en voedingsstoffen af te geven. Na de groei worden surrogaten gefixeerd en verwerkt tot paraffine voor evaluatie van parameters van belang. De evaluatie van één van deze parameters, celdichtheid, wordt uitgelegd.

Voorbereiding en analyse van<em&gt; In Vitro</em&gt; Three Dimensional mammacarcinoom Surrogates

Ovariële tumorprogressie te bestuderen in een fysiologisch relevante model multicellulaire sferoïden werden gekweekt in een micro-inrichting onder gesimuleerde fluïdumstroming. Deze dynamische 3D-model emuleert de intraperitoneale omgeving met de cellulaire en mechanische componenten, waar eierstokkanker metastase optreedt.

Modelleren van eierstokkanker Meercellige Sferoïde Gedrag in een dynamische 3D peritoneale microdevice

Eierstokkankerstamcellen (OCSC) zijn verantwoordelijk voor kankerinitiatie, recidief, therapeutische resistentie en metastase. De OCSC vasculaire niche wordt beschouwd als het bevorderen van zelfvernieuwing van OCSC's, wat leidt tot chemoresistance. Dit protocol vormt de basis voor het opzetten van een reproduceerbaar OCSC vasculair nichemodel in vitro.

Evaluatie van de angiogenetische eigenschappen van eierstokkankerstamachtige cellen met behulp van het driedimensionale cocultuursysteem, NICO-1

Dit protocol beschrijft de opstelling van een driedimensionaal (3D) ex vivo model van de interactie tussen kankercellen en omtentum. Het model biedt een platform voor het ophelderen van pro-tumormechanismen binnen de vetniche en voor het testen van nieuwe therapieën.

Een ex vivo-model van peritoneale metastase van eierstokkanker met behulp van humaan omentum

Er is een kritieke behoefte aan 3D-kankermodellen die heterocellulaire overspraak vastleggen om kankermetastasen te bestuderen. Onze studie presenteert de generatie van heteromulticellulair stromaal-epitheel in een steiger- en steigervrije omgeving die kan worden gebruikt om invasie en cellulaire ruimtelijke verdelingen te bestuderen.

Heteromulticellulaire stromale cellen in steigervrije 3D-culturen van epitheelkankercellen om invasie te stimuleren

Dit protocol beschrijft de ontwikkeling van hooggradig sereus ovariumcarcinoom (HGSOC) muismodellen in vitro en in vivo. Van de afleiding van muizen eileiderorganoïden, hun genetische modificatie om menselijke HGSOC-genetica samen te vatten, en hun introductie in de eierstokslijmbeurs van syngene muizen voor in vivo ontwikkeling van tumoren.

Ontwikkeling van van muizen afgeleide organoïdelijnen van eileiderepitheelcellen voor modellering van hooggradig sereus ovariumcarcinoom

Leer heterotypische 3D-modellering van stroma-epitheliale interacties bij eierstokkanker. Deze methode gebruikt co-cultuur van fibroblasten en epitheelcellen om tumorontwikkeling te bestuderen.

Heterotypische Driedimensionale In Vitro Modellering van Stroma-epitheliale interacties tijdens eierstokkanker initiatie en progressie (Video) | JoVE Journal

Heterotypische Driedimensionale

Meer video's verkennen