Name: Orthotope Muis Model van colorectale kanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-04T04:21:00.000+00:00
Duration: 8 min 43 s
Description: Leer hoe u een orthotopisch muismodel van colorectale kanker opzet met injectie van tumorcellen of transplantatie van weefsel. Dit model bootst de natuurlijke ziekteprogressie na en maakt testen van nieuwe therapeutische middelen mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Afdeling Heelkunde, Universiteit van Californië, San Francisco Raymond Shaheen, MD

I. celpreparaat <ol><li> Colorectale kanker cellen worden gekweekt in cultuur en geoogst wanneer subconfluent. </li><li> Een enkele celsuspensie wordt bereid in een fosfaat gebufferde zoutoplossing en op ijs bewaard. </li></ol> II. Tumor Voorbereiding <ol><li> Een muis met een eerder vastgestelde onderhuidse colorectale tumor is gedood. </li><li> De subcutane tumor wordt verwijderd met behulp van steriele techniek en verdeeld in 2-3 mm stukken </li><li> De tumor stukken worden bewaard in fosfaat gebufferde zoutoplossing op ijs. </li></ol> III. Muis Voorbereiding Opmerking: In ons laboratorium hebben we gebruik van inhalatie isofluraan om de muis te verdoven, als alternatief, kan men gebruiken injecteerbare anesthetica om hetzelfde effect te bereiken <ol><li> De diepte van de anesthesie wordt beoordeeld op basis teen knijpen. Er mag geen te trekken reflex met teen knijpen. </li><li> Antibiotica kunnen gegeven worden op dit punt. </li><li> De verdoofde muis, die voorheen was geschoren, goed gepositioneerd. </li><li> De buik is voorbereid met een Betadine-oplossing. </li><li> De buik en chirurgische site zijn gedrapeerd in een steriele manier. </li></ol> IV. Laparotomie <ol><li> Een kleine inkeping gemaakt in de huid </li><li> De buikwand musculatuur is gegrepen en opgetild </li><li> De buikholte wordt ingevoerd en een blad van de schaar wordt gebruikt om weg te duwen van de intra-abdominale inhoud </li><li> De incisie wordt uitgebreid tot 2-3 cm </li></ol> V. Blootstelling van de blindedarm <ol><li> De blindedarm met zijn blinde einde zakje is geïdentificeerd en exteriorized </li><li> De blindedarm is geïsoleerd van de rest van de muis met behulp van een pre-cut, steriel gaasje </li><li> Warm zoutoplossing wordt gebruikt om de blindedarm vochtig te houden </li></ol> VI. Injectie van cellen in de blindedarmkeutels Muur <ol><li> A 27 G of fijnere naald wordt gebruikt om een ​​50 ul volume van de cellen te injecteren in de blindedarmkeutels muur </li><li> De naald wordt verwijderd </li><li> De plaats van injectie is geïnspecteerd om geen lekkage zorgen </li><li> De blindedarm is teruggekeerd naar de buikholte </li></ol> VII. Transplantatie van Tumor op de blindedarm Opmerking: In aanvulling op het injecteren van cellen in de blindedarmkeutels muur, een alternatieve benadering is van de tumor transplantatie op de blindedarm <ol><li> Een cijfer van 8 steek wordt geplaatst op de blindedarm met 6-0 of 7-0 middelgrote hechting </li><li> De cecal muur is licht beschadigd </li><li> Vervolgens wordt de tumor stuk geplaatst </li><li> De steek is vastgebonden </li><li> De blindedarm is teruggekeerd naar de buikholte </li></ol> VIII. Muis buikwand Sluiting en herstel <ol><li> De muis buikwand wordt gesloten met behulp van drie onderbroken steken met behulp van 3-0 of 4-0 middelgrote hechting </li><li> Als alternatief kan men gebruik maken van een eenvoudige rijgsteek </li><li> Post-operatieve pijnstillers en een vloeistof bolus kan worden gegeven op dit punt </li><li> De muis is toegestaan ​​om te herstellen van anesthesie. </li></ol> Opmerking: Bij inhalatie-anesthetica Dit duurt meestal 30 seconden IX. Resultaten - Primaire Tumor en levermetastasen <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_8/A.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_9/B.png" alt="" /><img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_10/C.png" alt="" /> Primaire Tumor - getoond in situ (A) en met tekenen van neovascularisatie (B), op H &amp; E kleuring, tumoren zijn lokaal invasief (C) <img src="/files/ftp_upload/old/484_2008_2_11_11/D.png" alt="" /> Levermetastasen - getoond ex vivo (D)

<ol><li>Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Dig+Surg%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Dig Surg. 22, 16-25 (2005).</li>
<li>Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review+of+colorectal+cancer+and+its+metastases+in+rodent+models%3A+comparative+aspects+with+those+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans.</a> Comp Med. 50, 16-26 (2000).</li>
<li>Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+and+ectopic+organ+environments+differentially+influence+the+sensitivity+of+murine+colon+carcinoma+cells+to+doxorubicin+and+5-fluorouracil%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil.</a> Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).</li>
<li>Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intra-rectal+injection+of+tumor+cells%3A+a+novel+animal+model+of+rectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Surg+Oncol%22%5BJournal%5D)">Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer.</a> Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).</li>
</ol>

Hoewel de muis onderhuidse tumor modellen zijn eenvoudig vast te stellen en te controleren, is het duidelijk dat dit model niet kan repliceren de oorspronkelijke anatomische site van colorectale kanker. Door het verschil in micro-omgeving, hebben colorectale kankercellen groeien onder de huid is aangetoond dat hun fenotype te veranderen en bijna altijd geen vooruitgang en metastaseren 1,2. In feite kan de tumor respons op de behandeling sterk variëren, afhankelijk van de vraag of kankercellen worden geïmplanteerd in een ectopisch...

<table><tbody><tr><td>Celkweekmedia en componenten</td><td></td><td></td><td>zal variëren afhankelijk van de gebruikte cellijn</td></tr><tr><td>Fosfaatgebufferde zoutoplossing</td><td>BioWhittaker</td><td>17-512F</td><td>ook verkrijgbaar bij diverse andere leveranciers</td></tr><tr><td>15 mL centrifugebuizen, polypropyleen</td><td>Corning</td><td>430790</td><td></td></tr><tr><td>6-wells platen met deksel</td><td>BD Biosciences</td><td>353046</td><td></td></tr><tr><td>Iris-pincet, recht, gekartelde punten</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>15914</td><td>het is raadzaam om een paar van deze instrumenten te hebben</td></tr><tr><td>Iris-dissectieschaar, recht, scherp</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>Naaldvoerder (standaard)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14109</td><td></td></tr><tr><td>Naaldvoerder (Castroviejo)</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>14137</td><td></td></tr><tr><td>Cidex Plus</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>7364</td><td>instrumenten moeten periodiek worden geautoclaveerd, maar kunnen ook worden gesteriliseerd door ze te weken in Cidex</td></tr><tr><td>6-0 of 7-0 hechtdraad</td><td></td><td></td><td>voor het cecum; courtesy of Department of Surgery, UCSF</td></tr><tr><td>3-0 of 4-0 hechtdraad</td><td></td><td></td><td>voor de buikwand; courtesy of Department of Surgery, UCSF</td></tr><tr><td>Anesthesieapparaat / Isofluraan</td><td>J.A. Baulch and Associates</td><td>3206</td><td>ook verkrijgbaar bij diverse andere leveranciers</td></tr><tr><td>Warmtemat, wegwerp, 6&quot; x 6&quot;</td><td>Prism Technologies</td><td>20419</td><td></td></tr><tr><td>Tape, oranje, 13 mm x 13 m</td><td>Fisher Scientific</td><td>15901F</td><td>voor het fixeren van de geanestheseerde muis</td></tr><tr><td>Pro-Cord/Cordless Trimmer</td><td>Oster Professional Products</td><td>78997-010</td><td>voor het scheren van de muizenvacht</td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>kan ook worden gekocht bij elke medische speciaalzaak</td></tr><tr><td>2 x 2 gaas, 3-laags</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>7635</td><td>kan ook worden gekocht bij elke medische speciaalzaak</td></tr><tr><td>Steriel veld, barrière, 16&quot; x 29&quot;</td><td>Johnson &amp;amp; Johnson</td><td>0905</td><td>kan ook worden gekocht bij elke medische speciaalzaak</td></tr><tr><td>Wattenstaafjes, 6&quot;</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-960-3Q</td><td>kan ook worden gekocht bij elke medische speciaalzaak</td></tr><tr><td>Spuit, 10 cc, Luer-lock tip</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>Spuit, 1 cc, tuberculine, slip tip</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>27 1/2 G naald</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>30 G naald</td><td>BD Biosciences</td><td>305106</td><td></td></tr></tbody></table>

orthotope muis model van colorectale kanker

Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Het traditionele subcutane tumor model is minder dan ideaal voor het bestuderen van colorectale kanker. Orthotope muismodellen van colorectale kanker, die kankercellen groeien in hun natuurlijke plaats kenmerk, repliceren de menselijke ziekte met high-fidelity. Twee technieken kunnen worden gebruikt om dit model vast te stellen. Beide technieken zijn vergelijkbaar en vereisen muis verdoving en laparotomie voor blootstelling van de blindedarm. Een techniek betreft injectie van een colorectale kanker celsuspensie in de blindedarmkeutels muur. Kankercellen worden eerst gekweekt in cultuur, geoogst wanneer subconfluent en voorbereid als een enkele celsuspensie. Een klein volume van de cellen wordt langzaam geïnjecteerd om lekkage te voorkomen. De andere techniek bestaat transplantatie van een stukje onderhuidse tumor op de blindedarm. Een muis met een eerder vastgestelde onderhuidse colorectale tumor is gedood en de tumor wordt verwijderd met behulp van steriele techniek. De tumor stuk is verdeeld in kleine stukjes voor transplantatie naar een andere muis. Voorafgaand aan de transplantatie, is de blindedarmkeutels muur lichtjes beschadigd tumorcellen infiltratie mogelijk te maken. De tijd om het ontwikkelen van primaire tumoren en levermetastasen zal variëren afhankelijk van de techniek, cellijn, en gebruikt muizensoorten. Dit orthotope muis model is handig voor het bestuderen van de natuurlijke progressie van colorectale kanker en testen van nieuwe therapeutische middelen tegen colorectale kanker.

Twee technieken kunnen worden gebruikt om dit model te stellen: injectie van een kankercel suspensie in de blindedarmkeutels muur of transplantatie van een stukje van subcutane tumor op de blindedarm. Dit model is handig voor het bestuderen van de natuurlijke progressie van colorectale kanker en testen van nieuwe therapeutische middelen tegen colorectale kanker.

Orthotope Muis Model van colorectale kanker

Het traditionele subcutane tumormodel is minder dan ideaal voor het bestuderen van colorectale kanker. Orthotope muismodellen van colorectale kanker, die worden gekenmerkt door ...

Hallo, mijn naam is William Sang. Ik kom uit het laboratorium van Dr. Edgar Engelman van de afdeling Pathologie aan de Stanford University. Daarnaast ben ik assistent-chirurg aan de University of California San Francisco.Vandaag laat ik u zien hoe u een orthotoop muismodel voor colorectale kanker kunt opzetten. Dit model is nuttig voor het bestuderen van de natuurlijke progressie van colorectale kanker en voor het testen van nieuwe therapeutische middelen tegen colorectale kanker. Dit staat in contrast met het traditionele subcutane tumormodel.Het subcutane tumormodel is minder dan ideaal, aangezien tumorcellen die onder de huid groeien een veranderd fenotype vertonen en vaak niet progresseren of metastaseren. In feite kan de respons van de tumor op therapie sterk variëren, afhankelijk van het feit of de tumorcellen op een subcutane of een orthotope locatie worden geïmplanteerd. Er kunnen twee technieken worden gebruikt om een orthotopisch muismodel van colorectale kanker tot stand te brengen.Eén techniek omvat de injectie van een colorectale kankercelsuspensie in de wand van het SQL. De andere techniek omvat de transplantatie van een stuk subcutane tumor op het caecum. Beide techn

orthotopic-mouse-model-of-colorectal-cancer

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

This video describes the protocol for generating a patient-derived orthotopic xenograft colorectal cancer mouse model to study the progression of colorectal cancer cells in non-obese diabetic/severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice. This murine model helps in understanding primary tumor growth and metastases pattern.

Generating PDOX Mouse Model of Colorectal Cancer: Studying Progression of Colorectal Cancer in a Murine Model

This video describes the technique of generating CRC organoids transduced by GFP lentiviral particles for enabling fluorescent imaging. These GFP labeled organoids, when placed in animal models, help to study tumor invasion and metastasis.

CRC Organoid Cell Labeling: A Method to Generate GFP Lentivirus-transduced Colorectal Cancer Organoid Cells

This video describes the protocol to establish a spontaneous metastasis mouse model of colorectal cancer patient-derived xenografts or PDXs. These xenograft models partially mimic the features of human carcinomas and understand the critical aspects of human malignancies, including invasion and metastasis.

Spontaneous Metastasis Mouse Models: A Platform to Study the Metastatic Potential of Orthotopically Injected Colorectal Cancer Cells

The video describes the technique for intracecal injection of cancerous cells to develop an orthotopic mouse model with highly uniform tumors. Therefore, the orthotopic mouse model allows realistic simulation of metastasis, providing a valuable tool to study the phenotype changes during tumor growth and dissemination.

Intracecal Tumor Cell Injection: A Technique to Deliver Cancer Cells for Establishing Orthotopic Colorectal Cancer Mouse Model

Het doel van dit protocol is om dynamisch contrastversterkte magnetische resonantie beeldvorming (DCE-MRI) toe te passen voor ortotopische pancreatische tumor xenografts bij muizen. DCE-MRI is een niet-invasieve methode om de microvaten in een doelweefsel te analyseren en is nuttig om de vasculaire respons in een tumor na een nieuwe therapie te beoordelen.

Dynamisch contrast versterkte MRI van een orthotope pancreaskanker Muis Model

Het vermogen van metastaserende klonen om verre locaties te koloniseren, hangt af van hun proliferatievermogen en/of hun vermogen om te overleven in de micro-omgeving van de gastheer zonder significante proliferatie. Hier presenteren we een diermodel dat kwantitatieve visualisatie van beide typen leverkolonisatie door metastaserende klonen mogelijk maakt.

Geavanceerde diermodel van colorectale metastase in de lever: Imaging technieken en eigenschappen van gemetastaseerde Clones

We beschrijven de oprichting van orthotopische colorectale tumoren via injectie van tumorcellen of organoïden in de cecum van muizen en de daaropvolgende isolatie van circulerende tumorcellen (CTC's) uit dit model.

Isolatie van circulerende tumorcellen in een orthotopische muismodel van colorectale kanker

Een protocol voor de oprichting van een genetisch gemanipuleerde muismodel van colorectale kanker door middel van segmentale adeno-cre infectie en zijn bewaking via hoge resolutie colonoscopie wordt gepresenteerd.

Een genetisch ontwikkeld muis model van sporadische colorectale kanker

Dit protocol beschrijft de generatie van door patiënten afgeleide orthotopic xenotransplantaatmodellen is-modellen door intra-vesisch bijbrengen van hoogwaardige urotheelcelcarcinoom cellen of intra-rectale injectie van colorectale kankercellen in niet-zwaarlijvige diabetische/ernstige gecombineerde immunodeficiëntie (NOD/SCID) muizen voor primaire tumorgroei en spontane metastasen onder invloed van lymfeklier stromale cellen, die de progressie van humane gemetastaseerde ziekten nabootst.

Patiënt-afgeleide Orthotopic xenograft modellen voor humaan Urotheelcelcarcinoom en colorectale kanker tumor groei en spontane metastasen

Dit protocol beschrijft de orthotope implantatie van kankercellen van patiënten in de blindedarmwand van immunodeficiënte muizen. Het model recapituleert gevorderde uitgezaaide ziekte van colorectale kanker en maakt de evaluatie van nieuwe therapeutische geneesmiddelen mogelijk in een klinisch relevant scenario van long- en levermetastasen.

Orthotope implantatie van patiënt-afgeleide kankercellen bij muizen recapituleert gevorderde colorectale kanker

Deze studie richt zich op de in vivo subcutane inductie van luminescente colorectale kankercellen in een muizenmodel en de daaropvolgende luminescentiemeting met behulp van een beeldvormingssysteem. De procedure heeft tot doel een reproduceerbaar tumorgroeimodel op te zetten voor real-time monitoring en therapeutische evaluatie.

Subcutane injectie van menselijke colorectale kankercellen bij athymische naakte muizen om de werkzaamheid van antitumoren te evalueren

Leer hoe u een orthotopisch muismodel van colorectale kanker opzet met injectie van tumorcellen of transplantatie van weefsel. Dit model bootst de natuurlijke ziekteprogressie na en maakt testen van nieuwe therapeutische middelen mogelijk.

Orthotope Muis Model van colorectale kanker

Meer video's verkennen