Name: Met behulp van een Craniale venster om de midden cerebrale slagader Visualiseer Tijdens Endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 43 s
Description: Leer een craniaal venster maken via temporale craniotomie om de arteria cerebri media te visualiseren tijdens endotheline-1-geïnduceerde occlusie. Deze methode kwantificeert vaatdiameterveranderingen in vivo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de American Heart Association Greater Zuidoost Affiliate (09GRNT2060421), de American Medical Association, en van de Universiteit van Florida klinisch en translationeel Science Institute. Adam Mekka is een NIH / NINDS, NRSA predoctorale collega (F30 NS-060335). Robert Regenhardt ontvangen predoctorale beurs steun van de Universiteit van Florida Multidisciplinaire Training Program in Hypertensie (T32 HL-083810).

Dit protocol werd goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC) aan de Universiteit van Florida en is in overeenstemming met de &quot;Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren&quot; (achtste editie, National Academy of Sciences, 2011). Materieel <ol><li> Dieren: Acht weken oude, mannelijke Sprague Dawley ratten (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) met een gewicht van 250-300 g op het tijdstip van de operatie. </li><li> Anesthesie <ol class="lalpha"><li> Inhalatie-anesthesie systeem (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA) </li><li> Isofluraan anesthesie (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA) </li></ol></li><li> Stereotaxische systeem (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Klein dier stereotaxische systeem </li><li> Niet-breuk oor bars voor ratten </li><li> Gas anesthesie hoofd houder voor ratten </li></ol></li><li> Temperatuurregeling <ol class="lalpha"><li> BAT-12 microprobe thermometer (WorldPrecision Instruments, Inc, Sarasota, FL, USA) </li><li> T / PUMP, TP600 Thermische deken (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, NY, USA) </li></ol></li><li> Chirurgische instrumenten <ol class="lalpha"><li> Metzenbaum schaar, pincet iris, bulldog klem oprolmechanismen, 10 pl spuit met 26 gauge afgeschuinde naald, Bovie cauterisatie kit (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, USA) </li><li> Micromotor boor (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) </li><li> 0,8 mm ronde boor boor (Roboz Chirurgisch Instrument Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li><li> STORZ Bonn Hechten tang (Bausch en Lomb, Inc, Rochester, NY, USA) </li></ol></li><li> Chirurgische Supplies <ol class="lalpha"><li> 3,0 nylon hechtdraad (Oasis, Mettawa, IL, USA) </li><li> Wattenstaafjes, Puralube oogzalf (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA) </li><li> Chirurgische punten en strips (Medtronic Xomed, Inc, Jacksonville, FL, USA) </li><li> Elektrische tondeuses (Oster, Providence, RI, USA) </li></ol></li&gt; <li> Chemicaliën <ol class="lalpha"><li> Endotheline-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Chloorhexidine 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA) </li></ol></li><li> Visualisatie Equipment <ol class="lalpha"><li> Chirurgische microscoop (Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA) </li><li> Sony Handycam HDR-SR12 (Sony, Minato, Tokyo, Japan) </li><li> Fiber Optic verlichting (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Meting van vaatdiameter <ol class="lalpha"><li> VLC media player (Parijs, Frankrijk) </li><li> Afbeelding J-software (ImageJ 1.42q software, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. Pre-operatieve stappen <ol><li> Voor de ingreep worden de ratten gehuisvest onder een 12:12 licht / donker-cyclus met vrije toegang tot water en knaagdieren chow. </li><li> Anesthesie wordt geïnduceerd met 4% isofluraan in 100% O2 gasmengsel in een inductiekamer. </li><li> De kraai<html> n van het hoofd wordt geschoren met elektrische tondeuses. </li><li> De rat wordt geplaatst in een liggende positie op een absorberend kussen die op een temperatuurgeregelde contactvlak (thermische deken) en de kop wordt in de stereotactische inrichting beginnen met het plaatsen van het gas verdoving gezichtsmasker. </li><li> Vervolgens worden de balken oor geplaatst en vastgezet. </li><li> Tijdens de procedure anesthesie wordt gehandhaafd met 2% isofluraan in 100% O2 gasmengsel. </li><li> Oftalmische smeermiddel zalf in beide ogen en de oogleden gesloten oog uitdroging te voorkomen tijdens de chirurgische procedure. </li><li> Een rectale temperatuur sonde wordt een constante dier kerntemperatuur van 37 ± 0,5 ° C. handhaven </li><li> Met het hoofd van de verdoofde rat stevig in de stereotaxische inrichting het operatiegebied gereinigd met afwisselend chloorhexidine en zout driemaal. </li></ol> 2. Pre-craniale venster Voorbereiding NHOUD &quot;&gt; Voor de aanmaak van een craniaal venster moet de rat worden bereid voor experimenten door implantatie van andere benodigde hardware en dienen elke vereiste chirurgische procedures. In dit protocol hebben we eerder geïmplanteerd een geleidingscanule voor endotheline-1 (ET- 1) geïnduceerde mCaO, zoals aangegeven in een metgezel publicatie getiteld &quot;Endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie Model voor ischemische beroerte met Laser Doppler flowmetrie Begeleiding in Rat.&quot; 3. Oprichting van de craniale venster Na plaatsing van een geleidingscanule of materiaal voor experimenten, is een craniaal venster dat direct proximale delen van de middelste cerebrale slagader visualiseren tijdens een slag procedure. <ol><li> Eerst worden schaar gebruikt om de huid die de temporalis spier vanaf mediaal en lateraal werkende insnijden. </li><li> De temporalis spier doorsneden met elektrocauterisatie en teruggetrokken met 3,0 nylon hechtdraad tot visua<html> Lize de squameuze deel van het slaapbeen. </li><li> Een ongeveer 3-4 mm vierkant getekend op squameuze gedeelte van het slaapbeen caudaal van de baan en boven de basis van de zygomatic proces als het weerkaatsen van het slaapbeen. </li><li> Een boor wordt gebruikt om geleidelijk snijd de geschetste stukje bot vrij van het slaapbeen. Men dient ervoor te voorkomen dat er teveel druk op de boor, aangezien het mogelijk is om de dura of cerebrale cortex beschadigen. </li><li> Frequent spoelingen met steriele zoutoplossing uitgevoerd om visualisatie van het chirurgische gebied te verbeteren en oververhitting van de schedel voorkomen. </li><li> Vanaf een losse hoek, wordt het stuk temoporal bot voorzichtig verwijderd met behulp van fijne rat-getande tang terwijl ervoor te zorgen dat er geen schepen in verband met de dura scheuren. </li><li> De dura is intact gelaten en vuil wordt weggespoeld met steriele zoutoplossing. </li></ol> 4. Opname van Cerebral Artery Vernauwing tent &quot;&gt; Om te laten zien hoe u beelden in real-time, een rat die ondergaat ET-1-geïnduceerde mCaO vast te leggen wordt gebruikt voor dit protocol. <ol><li> Voor het aanbrengen van vasoactieve stoffen dient een uitgangswaarde video opgenomen gedurende tenminste 1 min. Voor ET-1 geïnduceerde mCaO, wordt de basislijn opname nadat de naald is neergelaten in het hersenparenchym maar vóór de ET-1 injectie. </li><li> De spuitpomp gestart voor injectie en opgenomen gedurende 1 uur of totdat het gewenste eindpunt. De naald blijft op zijn plaats tijdens de video-opname om verstoringen van het brandvlak te voorkomen. </li><li> De rat moet diep verdoofd en euthanized worden volgens een goedgekeurde protocol volgen van deze procedure. </li></ol> 5. Beeldanalyse Vaatdiameter kan worden bepaald voor een deel van de gevisualiseerde MCA. Als voorbeeld zullen we een tak van de MCA te vaatdiameter meten op tijdstippen vóór en na ET-1 injectie. Still frames uit de video worden vastgelegd met 1 min intervallen met behulp van VLC media player (VideoLAN). <ol><li> VLC player is geïnstalleerd en geopend. </li><li> Door het selecteren van gereedschappen en dan voorkeuren, wordt de instelling gewijzigd in &quot;All&quot; onder &quot;Toon-instellingen.&quot; </li><li> Het &quot;Video&quot; wordt uitgebreid in de linker zijbalk en &quot;output modules&quot; wordt dan uitgebreid. &quot;Scene filters&quot; wordt geselecteerd om het tafereel videofilter menu. </li><li> &quot;Scene&quot; wordt getypt in het veld voor de bestandsnaam voorvoegsel. </li><li> Een directory pad voorvoegsel is gedefinieerd. Dit is waar nog steeds frames worden opgeslagen. </li><li> Een opname verhouding geselecteerd gebaseerd op de gewenste snelheid van nog vast te leggen. Als een video werd gevangen op 29 frames per seconde, dan &quot;1749&quot; (29 beelden / sec x 60 sec / min) moet worden opgenomen in de doos te redden men nog steeds om de 1 min het frame. Alle wijzigingen worden dan opgeslagen. </li><li> De gewenste video wordt dan geopend in VLC player om automatisch nog redden frames eens in de 1 min. </li><li> Vaatdiameter wordt gemeten met behulp van dezebeelden. Eerst wordt ImageJ software (NIH) geopend. </li><li> Dan is de stilstaande beelden die u gaat meten worden geopend in ImageJ. </li><li> Door het selecteren van de &quot;analyse&quot; menu, &quot;set metingen&quot; wordt dan geopend en alle dozen zijn uitgeschakeld. </li><li> Vervolgens wordt de rechte lijn gereedschap geselecteerd. </li><li> De sneltoets &quot;Ctrl +&quot; wordt gebruikt om in te zoomen als dat nodig is en een lijn loodrecht op het schip pad naar vat diameter te meten. </li><li> Tot slot wordt de scheepslengte verkregen door het selecteren van de &quot;analyse&quot; menu en vervolgens &quot;maatregel&quot; (Ctrl + M) om de scheepslengte te verkrijgen. </li><li> Dit proces wordt herhaald ten minste driemaal en gemiddeld voor elke gemeten vaartuig gemeten in elk stilstaand beeld. </li><li> Vaatdiameter op elk tijdstip wordt genormaliseerd naar de basislijn vaatdiameter zodat er vergelijkingen kunnen worden gemaakt met meerdere ratten. Om dit te doen, gebruikt u de formule huidige diameter / baseline diameter x 100% van de% basislijn diameter van elk vaartuig te berekenen. </li></ol>

<ol><li>Levasseur, J. E., Wei, E. P., Raper, A. J., Kontos, A. A., Patterson, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+description+of+a+cranial+window+technique+for+acute+and+chronic+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Detailed description of a cranial window technique for acute and chronic experiments.</a> Stroke. 6, 308-317 (1975).</li>
<li>Baumbach, G. L., Dobrin, P. B., Hart, M. N., Heistad, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+of+cerebral+arterioles+in+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Mechanics of cerebral arterioles in hypertensive rats.</a> Circ. Res. 62, 56-64 (1988).</li>
<li>Regrigny, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+melatonin+on+rat+pial+arteriolar+diameter+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Effects of melatonin on rat pial arteriolar diameter in vivo.</a> Br. J. Pharmacol. 127, 1666-1670 (1999).</li>
<li>Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candesartan+pretreatment+is+cerebroprotective+in+a+rat+model+of+endothelin-1-induced+middle+cerebral+artery+occlusion%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion.</a> Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96, 1084-1096 (2011).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Kortom, dit craniale venster preparaat techniek is zeer veelzijdig en kan worden aangepast aan de behoeften van vele experimenten met kleine aanpassingen aan 4, 5. Zo hebben we met succes gevolgd cerebrale bloedstroom in specifieke branches MCA met laser doppler flowmetrie direct richten op een cerebrale slagader gevisualiseerd door een craniaal venster (Mecca AP 2009 en 2011). Bovendien kan een soortgelijke bereiding met de dura ingesneden worden met topische toediening van vasoactieve verbindingen maken <em...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> Inhalatie-anesthesie-systeem </td><td> VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA </td><td> 901806 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluraan verdoving </td><td> Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> Klein dier stereotaxische systeem </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> Niet-breuk oor bars, rat </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA </td><td> 957 </td><td></td></tr><tr><td> Rat gas narcose hoofd houder </td><td> David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA </td><td> 1929 </td><td></td></tr><tr><td> BAT-12 microprobe thermometer </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, Verenigde Staten </td><td> BAT-12 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> T / PUMP, Thermische deken </td><td> Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, NY, USA </td><td> T / PUMP, TP600 </td><td></td></tr><tr><td> Metzenbaum Schaar </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, Verenigde Staten </td><td> 501254 </td><td></td></tr><tr><td> Iris tang </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, Verenigde Staten </td><td> 15915 </td><td></td></tr><tr><td> Bulldog clamp oprolmechanismen </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, Verenigde Staten </td><td> 14119-G </td><td></td></tr><tr><td> 10 ul injectiespuit 26-gaugue </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, Verenigde Staten </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Bovie, hoge temperatuur cauterisatie kit </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc, Sarasota, FL, Verenigde Staten </td><td> 500392 </td><td></td></tr><tr><td> Rat tand pincet 0,12 </td><td> Stotz </td><td> E1811 </td><td></td></tr><tr><td> Micromotor boor </td><td> Stoelting,Wood Dale, IL, USA </td><td> 51449 </td><td></td></tr><tr><td> 0,8 mm ronde boor boor </td><td> Roboz Chirurgisch Instrument Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA </td><td> RS-6280C-1 </td><td></td></tr><tr><td> STORZ Bonn hechten pincet </td><td> Bausch en Lomb, Inc, Rochester, NY, USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Nylon Suture, grootte 3,0 </td><td> Oasis, Mettawa, IL, USA </td><td> MV-663 </td><td></td></tr><tr><td> Wattenstaafjes </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA </td><td> 22-029-488 </td><td></td></tr><tr><td> Puralube oogzalf </td><td> Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA </td><td> NC0138063 </td><td></td></tr><tr><td> Elektrische tondeuses </td><td> Oster, Providence, RI, USA </td><td> 78005-301 </td><td></td></tr><tr><td> ET-1 verdund tot 80 μ M concentratie in PBS </td><td> American Peptide, Sunnyvale, CA, USA </td><td> 88-1-10A </td><td></td></tr><tr><td> Chloorhexidine, 2% </td&gt; <td> Agrilabs, St. Joseph, MO, USA </td><td> 1040, Rev 6 tot 06, NAC nr.: 10580322 </td><td></td></tr><tr><td> Operatiemicroscoop </td><td> Seiler Instrument en Productie, St. Louis, MO, USA </td><td> Evolutie XR6 </td><td></td></tr><tr><td> Sony Handycam </td><td> Sony, Minato, Tokyo, Japan </td><td> HDR-SR12 </td><td></td></tr><tr><td> Glasvezel verlichting </td><td> TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA </td><td> FO1-150 </td><td></td></tr><tr><td> VLC Media Player </td><td> (Parijs, Frankrijk) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Afbeelding J-software </td><td> US National Institutes of Health, Bethesda, MA, Verenigde Staten </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

met behulp van een craniale venster om de midden cerebrale slagader visualiseer tijdens endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creëren van een craniale venster is een methode die directe visualisatie van structuren kan op de corticale oppervlakte van de hersenen 1-3. Deze techniek kan worden uitgevoerd op vele plaatsen bovenop de rat hersenen, maar wordt het gemakkelijk uitgevoerd door een craniectomie de gemakkelijk toegankelijke frontale of pariëtale botten. Meestal hebben we deze techniek in combinatie met het endotheline-1 midden cerebrale slagader occlusie model van herseninfarcten de veranderingen in midden cerebrale slagader vaatdiameter dat met injectie van endotheline-1 optreden in het hersenparenchym naast de proximale MCA kwantificeren 4, 5. Om het proximale deel van de MCA in endotheline geïnduceerde -1 mCaO visualiseren gebruiken we een techniek om een craniaal venster creëren door het slaapbeen het laterale aspect van de rat schedel (figuur 1). Cerebrale slagaders kan worden gevisualiseerd, hetzij met de dura intact of met de dura ingesneden en RETRActed. Meestal laten we de dura intact tijdens visualisatie sinds endotheline-1 geïnduceerde mCaO omvat de levering van de vaatvernauwende peptide in de hersenen parenchym. Dit omzeilt de noodzaak om direct insnijden de dura over de gevisualiseerde schepen voor drug delivery. Dit protocol wordt beschreven hoe u een craniale venster om cerebrale slagaders te visualiseren in een stapsgewijze manier, en hoe veel van de mogelijke valkuilen met betrekking tot deze methode te vermijden creëren.

Stilstaande beelden uit de vastgelegde video blijkt dat de verandering in diameter cerebrale slagader na ET-1 injectie kan gemakkelijk worden begrepen met deze craniale venstertechniek (Figuur 2). Binnen enkele minuten van ET-1 injectie zal het schip gaan vernauwen. Uiteindelijk zal de schepen zal moeilijk zijn om te visualiseren en het hersenweefsel zal worden bleek. Na ongeveer 20 min de effecten van ET-1 zal afnemen en de vaten begint te verwijden, geleidelijk weer basislijn diameter na ongeveer 45 m...

Dit artikel beschrijft een werkwijze voor het visualiseren van rat cerebrale slagaders door een craniaal venster met tijdelijke craniectomie om proximale delen van de middelste cerebrale slagader weergeven (<strong&gt; Figuur 1</strong&gt;). Deze veelzijdige methode kan worden gecombineerd met diverse technieken van geneesmiddelafgifte te cerebralis reactiviteit meten<em&gt; In vivo</em&gt;.

Met behulp van een Craniale venster om de midden cerebrale slagader Visualiseer Tijdens Endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

In dit videoprotocol demonstreren we het gebruik van een craniële window om de arteria cerebri media te visualiseren tijdens een door endotheline-1 geïnduceerde occlusie van de arteria cerebri media. Voor deze craniële window-preparatie wordt een temporale craniectomie uitgevoerd om de proximale delen van de arteria cerebri media in beeld te brengen. Het creëren van een craniële window is een methode die directe visualisatie van structuren op het corticale oppervlak van de hersenen mogelijk maakt.Deze techniek kan op veel plaatsen boven het cerebrum van de rat worden uitgevoerd, maar is het eenvoudigst uit te voeren door een C-craniectomie te maken boven de gemakkelijk toegankelijke frontale of pariëtale beenderen. Meestal hebben we deze techniek gebruikt in combinatie met het door endotheliale endotheline-1 geïnduceerde model van occlusie van de middelste cerebrale arterie (MCAO) van ischemische beroerte. Een procedure voor een craniële window wordt uitgevoerd om de veranderingen in vaatdiameter te kwantificeren die optreden na injectie van ET-1 in het hersenparenchym grenzend aan de proximale middelste cerebrale arterie of MCA.Specifiek maken we gebruik van een techniek om een craniële window te creëren door het slaapbeen aan de laterale zijde van de ratschedel. De cerebrale arteriën kunnen vervolgens worden gevisualiseerd met de dura intact of met de dura geïnciseerd en teruggetrokken. Meestal laten we de dura intact tijdens de visualisatie.Aangezien ET-1-geïnduceerde MCAO het toedienen van een vasoconstrictorisch peptide in het hersenparenchym behelst, is het niet nodig om de dura direct boven de gevisualiseerde vaten in te snijden voor de toediening van het geneesmiddel. In deze video laten we stap voor stap zien hoe u een craniële window maakt om cerebrale arteriën te visualiseren, en hoe u veelvoorkomende potentiële valkuilen bij deze methode kunt vermijden. Na het plaatsen van de gildecanule, zoals vermeld, kan er een craniële window worden gemaakt om proximale delen van de arteria cerebri media direct te visualiseren tijdens een beroerteprocedure. Maak eerst, zoals getoond, een incisie in de hoofdhuid met een schaar en trek de huid terug om de musculus temporalis bloot te leggen.Hals de musculus temporalis door met elektrocauterisatie en trek deze vervolgens terug om het squamous deel van het os temporale zichtbaar te maken. Het verkrijgen van een adequate blootstelling van het os temporale is cruciaal voor deze procedure. Wees voorzichtig om de orbitale holte te vermijden tijdens het cauteriseren.Om de visualisatie te verbeteren, wordt een hechtdraad gebruikt om de doorgesneden musculus temporalis te retraheren. Teken een vierkant van drie tot vier millimeter op het squame deel van het os temporale, naast de orbit en superieur aan de basis van de processus zygomatica waar deze van het os temporale afbuigt. Gebruik een boorkop om dit deel van het bot uit te snijden.Zorg ervoor dat u niet te veel druk uitoefent, aangezien het mogelijk is om in de hersenen te boren. Spoel regelmatig met steriele zoutoplossing om de visualisatie van het operatieveld te verbeteren en oververhitting van de schedel te voorkomen. Begin bij een losse hoek en verwijder voorzichtig het stuk slaapbeen met fijne rattenstangtang, waarbij u erop let dat er geen vaten die geassocieerd zijn met de dura worden gescheurd.Hier kunt u een tak van de middelste hersenslagader visualiseren bij de baseline, voorafgaand aan de injectie van endothelial.One. Binnen enkele minuten na de injectie van endothelial.One zal de middelste hersenslagader beginnen te vernauwen. Uiteindelijk worden de takken moeilijk te visualiseren en zal het hersenweefsel bleek worden.Na ongeveer 20 minuten zullen de effecten van endotheline afnemen en zullen de vaten geleidelijk beginnen te verwijden. Na ongeveer 45 minuten keert de diameter terug naar de basislijn. Om de vaatdiameter op verschillende tijdstippen voor en na de injectie van endotheline te meten, worden er met intervallen van één minuut stilstaande beelden uit de video vastgelegd. Ga in VLC media player naar tools, voorkeuren, en wijzig vervolgens de instelling naar 'alle' onder het tonen van instellingen.Klap het videomenu in de linkerzijbalk uit en klap de outputmodules uit. Selecteer scene filter type scene voor het voorvoegsel van de bestandsnaam. Voeg vervolgens een mappad toe.Stel vervolgens de opnameverhouding voor het vastleggen van stilbeelden in op basis van de framerate van uw video, zoals uitgelegd in het geschreven protocol. Klik tenslotte op save open. De gewenste video en de VLC-speler zullen automatisch elke minuut een stilbeeld opslaan om de diameter van het vat te meten.Open eerst de ImageJ-software met deze afbeeldingen en open vervolgens de stilstaande beelden die u gaat meten. Ga naar analyse, stel de metingen in en deselecteer alle vakjes. Selecteer het instrument voor rechte lijnen en zoom indien nodig in.Plaats een lijn loodrecht op het vaatpad om de diameter van het vat te meten. Ga naar 'analyze' en klik vervolgens op 'measure' om de vatdiameter te bepalen. Herhaal dit voor alle gewenste afbeeldingen.De diameter van het vat op elk tijdstip moet worden genormaliseerd ten opzichte van de diameter van het vat bij de baseline, zodat vergelijkingen kunnen worden gemaakt met meerdere ratten. Gebruik hiervoor de hier getoonde formule. Samenvattend is deze techniek voor het prepareren van het craniële venster zeer veelzijdig, aangezien deze met kleine aanpassingen kan worden aangepast aan de behoeften van veel verschillende experimenten.Zo hebben we bijvoorbeeld succesvol de cerebrale bloedstroom in specifieke MCA-takken gemonitord met laserdoppler-flowbeeldvorming, om ons direct te concentreren op een cerebrale arterie die via een craniaal venster werd gevisualiseerd. Daarnaast kan een soortgelijke preparatie, waarbij de dura mater is verwijderd, worden gebruikt in combinatie met topische toediening van vasoactieve verbindingen om een in vivo vasculair reactiviteitsbad te creëren. Bij het maken van een craniaal venster moeten verschillende factoren in overweging worden genomen om het faalpercentage van deze techniek te verlagen.Veel van deze factoren hebben betrekking op het verkrijgen van een goede visualisatie van de cerebrale arteriën. Zo moet bij het uitvoeren van de C-craniectomie zorgvuldig worden gewerkt, zodat de dura mater of de daarop gelegen bloedvaten niet worden beschadigd door de boorbedding. Dit kan het beste worden bereikt door regelmatig te spoelen met steriele zoutoplossing om debris te verwijderen en de schedel te koelen.We hopen dat deze video u zal helpen bij het ontwerpen van experimenten waarbij gebruik wordt gemaakt van een craniale window en u zal ondersteunen bij het vermijden van veelvoorkomende valkuilen die tijdens deze procedure kunnen optreden.

utilizing-cranial-window-to-visualize-middle-cerebral-artery-during

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Chirurgische inductie van ischemische hersenschade in de rat is een veel gebruikt model voor een beroerte onderzoek. Hier laten we zien de inductie van focale cerebrale ischemie door occlusie van de midden cerebrale slagader. Visualisatie van de resulterende infarct door histologische kleuring en magnetische resonantie beeldvorming wordt ook getoond.

Focus cerebrale ischemie Model door Endovasculaire Suture Occlusie van de midden cerebrale slagader in de Rat

We zien in de video een methode voor het produceren van een midden cerebrale slagader occlusie bij volwassen muizen met behulp van een intraluminale monofilament. We laten ook zien hoe de omvang van herseninfarct beoordelen door 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) kleuring.

Muis model van de midden cerebrale slagader Occlusion

This video demonstrates the procedure of performing permanent distal middle cerebral artery occlusion, or MCAO, with the common carotid artery, or CCA ligation, in aged rats to model ischemic stroke. This blocks blood flow to the brain, leading to neuronal death and generating a model to study stroke mechanisms and potential treatments.

Inducing Ischemia via Middle Cerebral and Common Carotid Artery Occlusion in a Rat Model

Verschillende diermodellen van cerebrale ischemie zijn ontwikkeld om de menselijke toestand van beroerte simuleren. Dit protocol beschrijft de endotheline-1 (ET-1) geïnduceerde middelste cerebrale slagader occlusie (mCaO) model voor ischemische beroerte in ratten. Daarnaast zijn belangrijke overwegingen, voordelen en nadelen van dit model besproken.

Endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie Model voor ischemische beroerte met Laser Doppler flowmetrie Begeleiding in Rat

Cerebrale perfusie controle is aangetoond dat de nauwkeurigheid van ischemische beroerte modellen te verbeteren. Technische moeilijkheden beperken vaak het gebruik van dit essentieel instrument voor cerebrovasculaire onderzoek. In deze video wordt een geoptimaliseerd systeem getoond op een of meerdere locaties hemodynamische bewaking verkrijgen tijdens intraluminale middelste cerebrale slagader occlusie in ratten.

Geoptimaliseerde Systeem voor cerebrale perfusie Monitoring in het Rat Stroke Model van intraluminale midden cerebrale slagader occlusie

We beschrijven een zeer reproduceerbare werkwijze voor de permanente occlusie van een knaagdier grote cerebrale bloedvat. Deze techniek kan worden bereikt met zeer weinig perifere schade minimaal bloedverlies, een hoog percentage overleving op lange termijn en consistente infarct volume evenredig met de klinische populatie.

Permanente Cerebrale vatocclusie<em&gt; Via</em&gt; Dubbele Ligatuur en doorsnijding

Om de pathofysiologie van beroerte te begrijpen, is het belangrijk betrouwbare modellen. Dit document zal een van de meest gebruikte takt modellen beschrijven in muizen, genaamd de middelste cerebrale slagader occlusie (MCAo) model (ook aangeduid als de intraluminale filament of hechtdraad model) met reperfusie.

Chirurgische Aanpak voor midden cerebrale slagader occlusie en reperfusie Induced Stroke in Muizen

Chirurgische occlusie van een distale middelste cerebrale slagader tak (MCAo) is een veel gebruikte model in de experimentele beroerte onderzoek. Dit manuscript beschrijft de basistechniek vaste MCAo, gecombineerd met het inbrengen van een laterale craniale venster, dat de mogelijkheid voor longitudinaal intravitale microscopie bij muizen heeft.

Laterale Chronische Cranial Window Voorbereiding Maakt In Vivo Observatie Na distale midden cerebrale slagader Occlusie in Muizen

Dit protocol demonstreert een uniek muizenslagmodel met een middelgroot infarct en een uitstekende overlevingskans. Dit model stelt preklinische beroerte-onderzoekers in staat om de duur van de ischemie te verlengen, verouderde muizen te gebruiken en functionele resultaten op lange termijn te beoordelen.

Een aangepast transcraniaal occlusiemodel voor de middelste cerebrale slagader om de uitkomsten van een beroerte bij oudere muizen te bestuderen

Dit protocol beschrijft het model van voorbijgaande focale cerebrale ischemie bij muizen door intraluminale occlusie van de middelste hersenslagader. Daarnaast worden voorbeelden van uitkomstbeoordeling getoond met behulp van magnetische resonantiebeeldvorming en gedragstests.

Voorbijgaand occlusiemodel van de middelste cerebrale slagader van een beroerte

Het doel van deze studie was het vaststellen van een reproduceerbare methode voor het uitvoeren van een craniectomie, gevolgd door permanente, selectieve midden-cerebrale arterie-occlusie bij ratten voor toepassing in experimentele studies naar motorische en ruimtelijke geheugentekorten.

Selectieve en permanente occlusie van de middenarterie cerebrale arterie bij ratten: een experimentele benadering voor het bestuderen van motorische en ruimtelijke geheugentekorten

Leer een craniaal venster maken via temporale craniotomie om de arteria cerebri media te visualiseren tijdens endotheline-1-geïnduceerde occlusie. Deze methode kwantificeert vaatdiameterveranderingen in vivo.

Met behulp van een Craniale venster om de midden cerebrale slagader Visualiseer Tijdens Endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie (Video) | JoVE Journal

Met behulp van een Craniale venster om de midden cerebrale slagader Visualiseer Tijdens Endotheline-1 geïnduceerde midden cerebrale slagader occlusie

Meer video's verkennen