Name: Een orthotope Muis Model van Anaplastisch Schildklier Carcinoom (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-04-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Leer een orthotopisch muismodel van anaplastisch schildkliercarcinoom opzetten via chirurgische plaatsing van humane kankercellen. Deze methode bootst ziekteprogressie nauwkeurig na en biedt een platform voor het testen van nieuwe therapeutische strategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs willen graag Drs bedanken. Wenjun Li en Daniel Kreisel (Washington University School of Medicine in St. Louis) voor hun hulp in de chirurgie training. RYL wordt ondersteund door de National Institutes of Health Grant R01 DK068057 en Fonds van Saint Louis University Research van de president.

1. Cell Preparation Opmerkingen: 1) volledige RPMI 1640 gebaseerde voedingsbodems recept (500 ml) bevat 435 ml RPMI 1640, 50 ml hitte geïnactiveerd FBS, 5 ml niet-essentiële aminozuren, 5 ml natriumpyruvaat, 5 ml antibiotica-antimycotische; 2) plaats matrigel bij 4 ° C op een dag voorafgaand aan de cel oogst. <ol><li> Menselijke ATC cellijn THJ-11T 8 worden gekweekt in 6 putjes en een keer 80-90% samenvloeiing geoogst. </li><li> Pellet cellen door centrifugatie bij 200 xg gedurende 4 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Aspireren media en resuspendeer cellen in RPMI 1640 media [2 ml / 6 wells plaat]. </li><li> Neem een ​​klein volume van de celsuspensie, toevoegen aan een volume van 0,4% trypan blauwe kleurstof en bepalen celdichtheid behulp TC10 geautomatiseerde cel Counter. </li><li> Bereken volume celsuspensie nodig 5 x 10 5 cellen / muis maal het aantal muizen te injecteren. </li></ol> Opmerking: Om ervoor te zorgen advertentie<html> gelijk cel suspensie voor injectie, bereiden cellen alsof je injecteren dubbele van het aantal muizen (bijvoorbeeld als het injecteren van 5 muizen, dan bereiden celsuspensie alsof u het injecteren van 10 muizen). <ol start="6"><li> Overdragen nodig volume van celsuspensie in een 15 ml conische buis. </li><li> Pellet cellen door centrifugatie bij 200 xg gedurende 4 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Aspireren media en resuspendeer cellen in volledige RPMI 1640 media. </li><li> Overdracht van cellen om een ​​ml tube 1.6, voeg 1 volume matrigel en meng voorzichtig door langzaam pipetteren in en uit. </li></ol> Opmerking: Elke muis wordt 10 ul van de celsuspensie / Matrigel cocktail ontvangen. Aangezien 5 x 10 5 cellen gesuspendeerd in een 10 pl volume injecteerbare succes zijn gebruikt in eerdere studies ATC orthotope 9-10, gebruikten we de parameters in dit rapport. <ol start="10"><li> Plaats celsuspensie op ijs tot gebruik. </li></ol>_title &quot;. Mouse&gt; 2 Bereiding <ol><li> Reinig de chirurgische zone, die het ontleden scope en omgeving, door af te vegen alle oppervlakken met 70% ethanol bevat. </li><li> Schakel warmtelampen / pads waar de dieren zullen worden herstellende van een operatie. </li><li> Dien 0,1 ml ketamine / xylazine (combinatietherapie bestaande uit ketamine 9 mg / ml en xylazine 1mg/ml) per 10 g lichaamsgewicht intraperitoneaal met een 1 ml, 27G ½ &quot;tuberculine spuit. </li><li> Prep muis voor een operatie: 1) scheren halsgebied van de muis (van kaaklijn naar de top van het borstbeen en uit om de armen), 2) scrub chirurgische gebied drie keer met chorhexadine doordrenkte gaas pleinen, 3) definitief scrub gedaan met betadine doordrenkte gaas, 4 ) voorzichtig oogzalf gelden voor de ogen niet uitdroogt. </li><li> Controleer pedaal reflex om ervoor te zorgen muis is voldoende verdoofd. </li><li> Plaats dier in de rug gelegd op een disposable steriele veld barrière onder het ontleden scope en zet het dier op zijn plaats met een doek tape. </li><li> Scrubs handen en voetingernails zet dan op steriele chirurgische handschoenen. </li><li> In een steriele manier, open chirurgie inpakken en regelen instrumenten. </li><li> Plaats steriel laken dan dierlijke, waardoor alleen operatiegebied blootgesteld. </li></ol> 3. Chirurgische toegang tot Schildklier en Cell Injection <ol><li> Met behulp van een steriele wegwerpspuit scalpel een 1 op 1,5 cm longitudinale incisie langs de middellijn van de keel. </li></ol> Opmerking: Afwijking van de middellijn bemoeilijkt dieper snijden om de luchtpijp. Vrij nauwkeurige middellijn incisie kunt u plagen en dwars door de membraneuze weefsel houden links en rechts speekselklieren samen en vermindert kans op knikken of versnijden grote slagaders. <ol start="2"><li> Maak een tweede incisie in de riem spieren rond de luchtpijp en trek de rechterkant van de ingesneden spier aan de zijkant om de juiste schildklier bloot. </li><li> Hemostats kan op dit moment worden gebruikt om de spierlaag bezit zijn van eendeel voor gemakkelijke toegang tot de schildklier (figuur 1). </li></ol> Opmerking: Als alternatief, als de procedure uitgevoerd door twee chirurgische personeel, de spierlaag kan eenvoudig worden tegengehouden met een tang, terwijl een kant en klaar injecteerbare injectiespuit wordt overhandigd aan de chirurg door het assisterend personeel. <ol start="4"><li> Injecteer langzaam 10 pi celsuspensie in de juiste schildklier met een 31G 5/16 &quot;insulinespuit dan naald verwijder voorzichtig. </li></ol> 4. Sluiting van Surgical Site en Muis Recovery <ol><li> Hechtdraad spierlaag met 6,0 hechtmateriaal volgens een continu of onderbroken hechten stijl. </li><li> Steek de huid op dezelfde manier. </li><li> Breng een laag drievoudige antibiotische zalf direct over incisieplaats. </li><li> Laat dier te herstellen in dorsale decubitus op warme verwarming pad. Zodra dier sternale decubitus kan bereiken zonder hulp, kan worden terug met andere muizen geplaatst. </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 5. Post-operatieve monitoring en Tissue Collection <ol><li> Controleer de incisie en de algehele gezondheid van het dier per dag gedurende een week na de operatie, controleer dan een keer per week. Als de hechtingen nog intact zijn na 14 dagen worden ze verwijderd. </li></ol> Opmerking: Dieren tekenen van afnemende gezondheid (bv. substantieel gewichtsverlies, smerig haar, moeizame ademhaling) moeten gedood worden en weefsels verzameld. <ol start="2"><li> Zodra muizen een vooraf bepaalde postoperatieve tijd-punt hebben bereikt, beheren ketamine / xylazine zoals hierboven beschreven te verdoven. </li><li> Perfuseren dier intracardiaal en oogst schildklier / luchtpijp en andere weefsels van belang (niet in detail beschreven). </li></ol>

<ol><li>Bibby, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+of+cancer+for+preclinical+drug+evaluation%3A+advantages+and+disadvantages%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models of cancer for preclinical drug evaluation: advantages and disadvantages.</a> Eur. J. Cancer. 40, 852-857 (2004).</li>
<li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation%3A+a+bridge+to+the+clinic%5BTitle%5D)+AND+%22Invest.+New+Drugs%22%5BJournal%5D)">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Invest. New Drugs. 17, 343-359 (1999).</li>
<li>Killion, J. J., Radinsky, R., Fidler, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+models+are+necessary+to+predict+therapy+of+transplantable+tumors+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Metastasis+Rev%22%5BJournal%5D)">Orthotopic models are necessary to predict therapy of transplantable tumors in mice.</a> Cancer Metastasis Rev. 17, 279-284 (1998).</li>
<li>Kim, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+orthotopic+model+of+anaplastic+thyroid+carcinoma+in+athymic+nude+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">An orthotopic model of anaplastic thyroid carcinoma in athymic nude mice.</a> Clin. Cancer Res. 11, 1713-1721 (2005).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Thyroid%22%5BJournal%5D)">A novel orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid carcinoma.</a> Thyroid. 19, 1077-1084 (2009).</li>
<li>Todaro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumorigenic+and+metastatic+activity+of+human+thyroid+cancer+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Tumorigenic and metastatic activity of human thyroid cancer stem cells.</a> Cancer Res. 70, 8874-8885 (2010).</li>
<li>Tran Cao, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+tumor+progression+in+a+fluorescent+orthotopic+mouse+model+of+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Res%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of tumor progression in a fluorescent orthotopic mouse model of thyroid cancer.</a> Anticancer Res. 30, 4415-4422 (2010).</li>
<li>Marlow, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detailed+molecular+fingerprinting+of+four+new+anaplastic+thyroid+carcinoma+cell+lines+and+their+use+for+verification+of+RhoB+as+a+molecular+therapeutic+target%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Endocrinol.+Metab%22%5BJournal%5D)">Detailed molecular fingerprinting of four new anaplastic thyroid carcinoma cell lines and their use for verification of RhoB as a molecular therapeutic target.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 95, 5338-5347 (2010).</li>
<li>Nehs, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Late+Intervention+with+anti-BRAF+%28V600E%29+therapy+induces+tumor+regression+in+an+orthotopic+mouse+model+of+human+anaplastic+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Late Intervention with anti-BRAF (V600E) therapy induces tumor regression in an orthotopic mouse model of human anaplastic thyroid cancer.</a> Endocrinology. 153, 985-994 (2012).</li>
<li>Nucera, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+BRAFV600E+with+PLX4720+displays+potent+antimigratory+and+anti-invasive+activity+in+preclinical+models+of+human+thyroid+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncologist%22%5BJournal%5D)">Targeting BRAFV600E with PLX4720 displays potent antimigratory and anti-invasive activity in preclinical models of human thyroid cancer.</a> Oncologist. 16, 296-309 (2011).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

In ons model dieren aangetoond schildklier tumormetastase en ziekten verwant cachexia en respiratoire distress bij 4 weken na injectie. Zoals de meeste orthotope trekken met behulp injecteerbare afgifte van een celsuspensie, injectie in omringende weefsels en lek na de injectie die zich verspreidt over het doel mogelijk. Met dat gezegd zijnde, een herkenbare potentiële onbekend geproduceerd door deze procedure is het effect van de palen blootstelling aan niet-ziekte gerelateerde metastasen of complicaties. Dit is een algemene zorg met meeste xenografisch transplantaties, ongeacht de ziekte die wordt onderzocht. Toch kunnen onbedoelde gevolgen van metastase aanzienlijk worden geminimaliseerd door te zorgen voor de volledige afschuining van de naald is het membraan doorgedrongen stevig overlappen de schildklier en langzaam verdrijven van de celsuspensie. Wanneer lekkage wordt waargenomen tijdens of na de injectie, kunnen deze dieren worden weggelaten uit de studie. <p cdeerntje = &quot;jove_content&quot;&gt; Het is essentieel dat de dieren voor het oogsten worden geperfuseerd de schildklier / trachea en andere weefsels. De voordelen zijn tweeledig, 1) rode bloedcellen worden gespoeld en zal geen rommel histologische monsters en 2) weefselmorfologie en integriteit worden bewaard. Bovendien verwijderde schildklier / luchtpijp die ofwel een tumor massa bevestigd hebben of zijn begraven in het moet worden gesneden op een manier die anatomische oriëntatiepunten kunnen worden geïdentificeerd voordat ze ingesloten voor histologisch preparaat. Dit zal drastisch verminderen specimen voorbereidingstijd. In dit rapport beschrijven we de plaatselijke groei en invasie van geavanceerde schildklier tumor na orthotopic injectie van ATC cellen. ATC metastase kan onderzocht worden door middel van histologische preparaten andere weefsels met behulp van standaard histologische kleuringen, zoals hematoxyline en eosine of met behulp van immunohistochemie cel of pathologie relevante markers. Dit systeem kan verder worden ontwikkeld door genetically modificeren schildklierkanker cellen met fluorescentie reporters zodat levende beeldvorming kan worden gebruikt voor het bewaken metastase en de efficiëntie van therapeutische behandelingen.

<table><tbody><tr><td>RPMI 1640 celkweekmedium</td><td>Mediatech</td><td>10-041-CV</td><td>Media en additieven die worden gebruikt, zijn afhankelijk van de cellijn</td></tr><tr><td>TC10 Geautomatiseerde Celteller</td><td>Bio-Rad</td><td>145-0001</td><td></td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Graefe-tang, getand; licht gebogen, 4"</td><td>Roboz</td><td>RS-5135</td><td></td></tr><tr><td>Wegwerpmesje, Nr. 15</td><td>Feather</td><td>2975#15</td><td></td></tr><tr><td>Olsen Hegar Naaldhouder - 4 &frac12;" delicaat gekarteld</td><td>gSource</td><td>gS 21.5400</td><td></td></tr><tr><td>6-0 nylon zwarte monofilamentnaald</td><td>Surgical Specialties Corporation</td><td>1279B</td><td></td></tr><tr><td>Verwarmingskussen, herbruikbaar, 8" x 12"</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Doektape, 1" X 10 yds</td><td>Medline</td><td>MIINON260101</td><td>Voor het vastbinden van een verdovde muis</td></tr><tr><td>Pindacclipper/-trimmer</td><td>Wahl</td><td>8655</td><td>Voor het verwijderen van haar van de operatieplaats</td></tr><tr><td>ChlorHex-Q SCRUB 2%</td><td>Penn Veterinary Supply</td><td>VED1222</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Henry Schein Company</td><td>6906727</td><td></td></tr><tr><td>Petrolatum oogzalf</td><td>Dechra Veterinary Products</td><td>17033-211-38</td><td></td></tr><tr><td>2 x 2 gaas, 12-laags</td><td>Butler Animal Health Supply</td><td>6936</td><td></td></tr><tr><td>Steriele werkplek, Barrière, 18" x 26"</td><td>Busse</td><td>696</td><td></td></tr><tr><td>Dekvlakken (CSR Wrap)</td><td>Cardinal Health</td><td>AT 21 412</td><td></td></tr><tr><td>27G &frac12;" naald</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>309623</td><td></td></tr><tr><td>31G 5/16" naald</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>328438</td><td></td></tr><tr><td>Ketamine (9 mg/ml) / xylazine (1 mg/ml) oplossing</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Drievoudige antibioticumzalf</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een orthotope muis model van anaplastisch schildklier carcinoom

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Verschillende soorten dierlijke modellen van menselijke schildkliercarcinomen zijn vastgesteld, waaronder subcutane xenograft en orthotopische implantatie van kankercellen in immuun deficiënte muizen. Subcutane xenotransplantaatmodellen zijn waardevol geweest voor preklinische screening en evaluatie van nieuwe therapeutische behandelingen. Er zijn een aantal voordelen aan het gebruik van een subcutaan model: 1) snelle, 2) reproduceerbaar, en 3) tumor inrichting, groei en respons op therapeutische middelen kunnen worden gecontroleerd door visuele inspectie. Echter, is substantieel bewijs licht werpen op de tekortkomingen van het onderhuidse xenograftmodellen 1-3. Bijvoorbeeld, medicinale behandelingen demonstreren genezende eigenschappen in subcutane xenotransplantaatmodellen hebben vaak geen noemenswaardige impact op de menselijke ziekte. De micro-omgeving van de plaats van xenografisch transplantatie of injectie ligt in het hart van deze ongelijkheid. Orthotopic tumor xenotransplantaatmodellen zorgen voor een meer biologisch relevante context om de ziekte te bestuderen. De voordelen van implanteren zieke cellen of weefsels in hun anatomische oorsprong equivalente binnen een gastheerdier omvat een geschikte plaats voor tumor-gastheer interacties ontwikkeling van ziektegerelateerde metastasen en het vermogen om plaatsspecifieke invloed onderzoeken voor verantwoorde therapeutische middelen. Daarom orthotopische xenotransplantaatmodellen haven veel meer klinische waarde, omdat ze nauw ziekte bij de mens te reproduceren. Om deze redenen hebben een aantal groepen voordeel van een orthotopic schildklierkanker model genomen als onderzoeksinstrument 4-7. Hier beschrijven we een werkwijze met als orthotopic model voor de studie van anaplastisch schildkliercarcinoom (ATC), die sterk invasieve vaststelt, weerstaat behandeling en vrijwel fataal in alle gediagnosticeerde patiënten. Gekweekte cellen ATC bereid als gedissocieerde celsuspensie in een oplossing die een basaalmembraan matrix. Een klein volume langzaam injected in de juiste schildklier. Algehele uiterlijk en de gezondheid van de muizen worden gevolgd om te zorgen minimale postoperatieve complicaties en pathologische penetrantie van kanker meten. Muizen worden opgeofferd 4 weken, en weefsel verzameld voor histologische analyse. Dieren kunnen op latere tijdstippen worden voor een vooraf progressie van de ziekte te onderzoeken. Productie van dit orthotope muismodel wordt een platform dat twee doelstellingen verwezenlijkt: 1) verdere ons begrip van ATC pathologie, en 2) het scherm de huidige en toekomstige therapeutische middelen voor de werkzaamheid bij de bestrijding van ATC.

We gedetecteerd 19 invasieve schildkliertumoren van totaal 20 muizen geïnjecteerd met ATC cellen na 4 weken. In de in figuur 2A weergegeven voorbeeld, muizen die een orthotope injectie van 5x10 5 ATC cellen gekweekt onder voorwaarden verbonden, vertonen aanzienlijke infiltratie van kankercellen in de schildklier van 4 weken na injectie. De aard van de ATC binnenvallende cellen met een karakteristieke spindled cellen en middelgrote tot grote grote cellen met eosinofiel cytoplasma en grote kernen werd geverifieerd door hematoxyline en eosine (H &amp; E) kleuring. Ter vergelijking wordt de schildklier en luchtpijp van een niet-geïnjecteerde controledieren figuur 2B. Follikels van de geïnjecteerde dier vertonen een nauwe, nog los, vereniging en hebben in wezen een ronde morfologie. Vanwege de kleine omvang van de schildklier en het gebruik van injecteerbare afgifte, onbedoelde gevolgen ontstaan. Figuur 3A illustreert demeest waargenomen, dat ontwikkeling van een tumormassa buiten, maar niet omvat, de schildklier. Dit is meer dan waarschijnlijk te wijten aan naaldpenetratie door en voorbij de schildklier wanneer de cellen worden verdreven. Soms muizen presenteren zonder tumorgroei zowel grove en histologisch worden gedetecteerd zoals getoond in figuur 3B. Geen waarneembare tumorontwikkeling kan worden veroorzaakt door uitzetting van de celsuspensie uit de injectieplaats en verspreiding in naburige weefsels en holtes. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig1.jpg" alt="Figuur 1"/> Figuur 1. Blootstellen van de schildklier. Labels geven de rechter en linker schildklieren aan weerszijden van de luchtpijp. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig2.jpg" alt="Figuur 2"/> Figuur 2. Histologisch onderzoek van tumorgroei envasion na succesvolle schildklier injectie. Tissue exemplaren werden coupes langs het frontale vlak. A) foto genomen bij de 200X van muizen vertonen aanzienlijke groei van de tumor met karakteristieke spindled cellen en middelgrote tot grote-sized cellen met eosinofiel cytoplasma en grote kernen in hematoxyline en eosine ( H &amp; E) kleuring Tu geeft de primaire laesie waaruit tumorcellen binnenvallen de schildklier B) luchtpijp en de schildklier van controle dieren (die beeld bij 100x) Tu, Tumoren;... S, gladde spieren, Tr, luchtpijp, Thy, schildklier. <img src="/files/ftp_upload/50097/50097fig3.jpg" alt="Figuur 3"/> Figuur 3. Onbedoelde uitkomsten van orthotopic injectie. Tissue exemplaren werden coupes langs het frontale vlak. A) Perifere tumorgroei met geen groei zichtbaar in de thyroid (zwarte pijl, die beeld bij 100X). B) Gebrek aan tumoropsporing op bruto (niet getoond) of histologisch onderzoek (beeld dat bij 50X). Thy, schildklier.

Generatie van een orthotope muismodel van anaplastisch schildkliercarcinoom wordt hier beschreven. Deze techniek maakt chirurgische plaatsing van menselijk anaplastisch schildklierkanker cellen in de schildklier van immunodeficiënte muizen, waardoor een meer klinisch relevante instelling van ziekteprogressie en screen vernieuwende therapeutische interventies bestuderen.

Een orthotope Muis Model van Anaplastisch Schildklier Carcinoom

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

Het algemene doel van deze procedure is om de chirurgische plaatsing van humane anaplastische, schildkliercarcinoom of TC-cellen in de schildklier aan te tonen om een orthotopisch xenograft-muismodel te vestigen. Dit wordt bereikt door eerst TC-cellen te kweken en te oogsten. Na het voorbereiden van de muis voor de operatie, leg de schildklier bloot door twee opeenvolgende longitudinale incisies in de nek en injecteer de A TC-cellen langzaam in de rechter schildklier.De laatste stap is om de incisies te sluiten met hechtingen en de muis te laten herstellen. Uiteindelijk worden histologische onderzoeken van specimens uit geresecteerde weefsels gebruikt om tumorgroei en invasie onder verschillende omstandigheden te tonen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek boven bestaande methoden zoals subcutaan xenografttransplantaat, is dat orthotopische transplantatie een TC-cel in hun biologische niche plaatst en de ziekteprogressie en pathologie nauwgezet repliceert zoals die zich voordoet bij mensen.Deze methode kan helpen om belangrijke vragen te beantwoorden, zoals het bepalen van de biologische mechanismen van de agressiviteit van schildklierkanker. Begin deze procedure door de humane A TC-cellijn TJ 11 T te kweken in zes Wel culture platen met behulp van complete RPMI 1640 gesupplementeerde media één dag voorafgaand aan celoogst wanneer de cellen 70 tot 80%confluent zijn ontdooid, 0,01 milliliters van major gel bij vier graden Celsius. Oogst de cellen met behulp van trypsine zodra ze 80 tot 90%confluent zijn eenmaal de cellen zijn gepelleteerd, aspireer het medium en resuspendeer de cellen in twee milliliters van gesupplementeerd RPMI 1640 Media voor elke zes welplaat die is geoogst.Bepaal vervolgens de celdichtheid door de celsuspensie één op één te mengen met 0,4% Triam blauwe kleurstof bepaal de celdichtheid met behulp van een TC 10 geautomatiseerde celteller. Bereken het volume van de celsuspensie dat nodig is om 500.000 cellen per muis te injecteren. Zorg ervoor dat er voldoende cellen beschikbaar zijn voor de implantatie door te berekenen voor twee keer het aantal geplande implantaten.Breng het vereiste volume celsuspensie over naar een 15 milliliter conische buis. Centrifugeer vervolgens gedurende vier minuten bij 200 Gs op kamertemperatuur. Aspireer vervolgens het medium en resuspendeer de cellen bij 100 miljoen cellen per milliliter in compleet RPMI 1640 gesupplementeerd media.Breng vervolgens de cellen over naar een 1,6 milliliter buis. Voeg een volume matri gel toe en meng voorzichtig door langzaam in en uit te pipetteren. Plaats de celsuspensie op ijs totdat deze nodig is.Steriliseer eerst de chirurgische zone, inclusief het dissectietoestel en de omringende ruimte door alle oppervlakken af te vegen met 70%ethanol. Bereid vervolgens het herstelgebied voor door verwarmingslampen aan te zetten en steriele pads neer te leggen. Anesthesieer de muis en bereid hem voor op de operatie door eerst het nekgebied van de muis te scheren van de kaaklijn tot bovenaan het borstbeen en naar elke arm.Schroeven vervolgens het chirurgische gebied drie keer vast door chloorhexidine gedrenkte gaasjes en ethanol af te wisselen. Vervolgens nog één keer met Betadine gedrenkte gaasjes. Breng ook voorzichtig oogzalf aan om te voorkomen dat de ogen uitdrogen.Controleer op dit punt de peesreflex om ervoor te zorgen dat de muis voldoende verdoofd is. Plaats vervolgens de muis in dorsale rugligging op een wegwerpbaar sterieel veldbarrière. Onder de dissectiescope, zet de muis vast met linnen tape.Schrob vervolgens handen en vingernagels grondig en trek in steriele wijze steriele chirurgische handschoenen aan, open de chirurgische verpakking en schik de instrumenten. Plaats tenslotte een steriele drape over de muis, waarbij alleen de chirurgische plaats wordt blootgelegd. Begin met het maken van een longitudinale incisie van één tot 1,5 centimeter langs de middenlijn van de keel met behulp van een steriele wegwerp scalpel.Afwijk niet van de middenlijn, omdat dit de kans op het snijden of doorsnijden van grote slagaders zou vergroten. Maak een tweede incisie in de halsbandspieren rond de luchtpijp. Trek vervolgens de rechterkant van de ingesneden spier naar de zijkant, waardoor de rechter schildklier wordt blootgelegd.Laat een assistent de spuit overhandigen. Injecteer het langzaam in de rechter schildklier met behulp van een insulinesyringe van 31 gauge. Verwijder vervolgens voorzichtig de naald en naai de spierlaag samen met zes oh nylon monofilament hechtingsmateriaal met behulp van een onderbroken hechtingsstijl.Naai tenslotte de huid op dezelfde manier na de operatie. Breng een laag triple antibioticumzalf direct aan over de incisieplaats. Laat de muis herstellen in dorsale rugligging onder een lamp.Zodra de muis zonder hulp in borstligging kan liggen, kan hij terug bij de andere muizen in zijn kooi worden geplaatst. Controleer de incisieplaats en de algemene gezondheid van de muis dagelijks gedurende een week na de operatie. Controleer het daarna eenmaal per week.Als de muis op enig moment tekenen van afnemende gezondheid vertoont, moet deze worden geëuthanaseerd en zijn weefsels worden verzameld. Zodra muizen een vooraf bepaald postoperatief tijdstip hebben bereikt, worden ze verdoofd met ketamine en xylazine en wordt het dier traag geperfundeerd met buffer, gevolgd door fixeermiddel, en vervolgens worden de weefsels geoogst en voor histologie verwerkt. De schildklier en luchtpijp van een niet geïnjecteerd controledier worden hier getoond met hematine en eosine kleuring follikels die een nauwe maar losse associatie vertonen en wezenlijk ronde morfologie hebben.In tegenstelling daarmee, muizen die een orthotopische injectie van 500.000 A TC-cellen ontvangen, vertonen significante infiltratie van kankercellen in de schildklier vier weken na de injectie. De aard van de binnendringende cellen vertoont karakteristieke spindelvormige cellen en middelgrote tot gigantische cellen met eosinofiel cytoplasma en grote kernen. Van

an-orthotopic-mouse-model-of-anaplastic-thyroid-carcinoma

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Twee technieken kunnen worden gebruikt om dit model te stellen: injectie van een kankercel suspensie in de blindedarmkeutels muur of transplantatie van een stukje van subcutane tumor op de blindedarm. Dit model is handig voor het bestuderen van de natuurlijke progressie van colorectale kanker en testen van nieuwe therapeutische middelen tegen colorectale kanker.

Orthotope Muis Model van colorectale kanker

Een orthotope Model van sereuze eierstokkanker in immunocompetente muizen voor In vivo Tumor Imaging en Bewaking van de Tumor Immuunrespons

De video toont de orthotopische inentingstechniek voor borstkanker in een muismodel. Deze techniek produceert een hoge tumorigenesesnelheid met minder variabiliteit in tumorgrootte en vorm in vergelijking met subcutane of niet-chirurgische injectie.

Orthotopische injectie: weefselspecifieke kankercellen implanteren in een volwassen muis

This video describes the procedure for orthotopic inoculation of thyroid cancer cells into the thyroid gland of mouse models, which may then serve as a valuable platform to assess carcinogenesis and discover potential treatment strategies.

Orthotopic Inoculation of Thyroid Cancer Cells into Murine Thyroid: A Procedure to Establish Orthotopic Thyroid Cancer Mouse Model

Een orthotope borstkanker primaire tumor model en chirurgische verwijdering van de primaire tumor de muis het leven uit te breiden tot spontane metastase genereren beschreven. De tumorgroei en progressie worden gecontroleerd en gekwantificeerd luciferase fluorescentiebeeldvorming.

Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker

Prostaatkanker is de op een na meest voorkomende oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen in de Verenigde Staten. Een orthotopisch kankermodel biedt een nuttige benadering om de biologie van prostaatkanker te begrijpen en de werkzaamheid van therapeutische regimes te evalueren. Dit protocol beschrijft gedetailleerde stappen die nodig zijn om een orthotopisch muismodel voor prostaatkanker te vestigen.

Pre-klinische Orthotope muizenmodel van Human prostaatkanker

In de klinische context zullen patiënten met gelokaliseerde alvleesklierkanker pancreatectomie ondergaan, gevolgd door adjuvante behandeling. Dit hier gerapporteerde protocol is bedoeld om een veilige en effectieve methode vast te stellen om dit klinische scenario bij naakte muizen te modelleren, door orthotopische implantatie van alvleesklierkanker gevolgd door distale pancreatectomie en splenectomie.

Een orthotopisch resectiemuismodel van alvleesklierkanker

Hier presenteren we een standaard pijplijn om murine ATC-tumoren te verkrijgen door spontane genetisch gemanipuleerde muismodellen. Verder presenteren we tumordynamiek en pathologische informatie over de primaire en uitgezaaide laesies. Dit model zal onderzoekers helpen om tumorigenese te begrijpen en medicijnontdekkingen te vergemakkelijken.

Spontaan muizenmodel van anaplastische schildklierkanker

Verschillende soorten diermodellen van Hashimoto's thyroiditis zijn vastgesteld, net als spontane auto-immune thyroiditis bij de NOD-muis. H-2h4-muizen zijn een eenvoudig en betrouwbaar model voor HT-inductie. Dit artikel beschrijft deze aanpak en evalueert het pathologische proces voor een beter begrip van het SAT-muizenmodel.

Generatie van een muis Spontane auto-immuun thyroiditis model

Het huidige protocol beschrijft hoogfrequente echografie voor het visualiseren van de gehele schildklier van de muis en het monitoren van de groei van anaplastisch schildkliercarcinoom.

Hoge-resolutie echografie voor de analyse van orthotopische ATC-tumoren in een genetisch gemanipuleerd muismodel

Het huidige protocol stelt een patiënt-afgeleid xenograft (PDX) model van anaplastisch schildkliercarcinoom (ATC) en hoofd en nek plaveiselcelcarcinoom (HNSCC) vast en karakteriseert het, aangezien PDX-modellen snel de standaard worden op het gebied van translationele oncologie.

Vaststelling en karakterisering van patiënt-afgeleide xenograftmodellen van anaplastisch schildkliercarcinoom en hoofd-hals plaveiselcelcarcinoom

Leer een orthotopisch muismodel van anaplastisch schildkliercarcinoom opzetten via chirurgische plaatsing van humane kankercellen. Deze methode bootst ziekteprogressie nauwkeurig na en biedt een platform voor het testen van nieuwe therapeutische strategieën.

Een orthotope Muis Model van Anaplastisch Schildklier Carcinoom

Meer video's verkennen