Name: Een vergelijkende analyse van recombinant eiwit expressie in verschillende biofactories: Bacteriën, Insect Cells and Plant Systems (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 11 s
Description: Ontdek een vergelijkende analyse van recombinant eiwitexpressie in bacteriën, insectencellen en plantensystemen. Deze methode helpt onderzoekers om de optimale productieplatformen te selecteren voor humane recombinante eiwitten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door de COST-actie ‘Moleculaire landbouw: Planten als productieplatform voor eiwitten van hoge waarde’ FA0804. De auteurs danken Dr. Anatoli Giritch en Prof. Yuri Gleba voor het beschikbaar stellen van de MagnICON-vectoren voor onderzoeksdoeleinden.

1. Bouw van Expression Vectoren <ol><li> Commerciële recombinatie kloneringssysteem: <ol><li> Versterken van de volledige lengte sequentie van het doelwitgen (hGAD65mut) met geschikte primers waarbij toevoeging van een CACC klem aan het 5&#39;-uiteinde van het gen zoals eerder beschreven 2. </li><li> Kloon de gel-gezuiverde amplificatieproduct volgens de gerichte klonering kit specificaties in de vermelding vector (topoisomerase gebonden) door het samenvoegen van de reactie in een totaal volume van 6 pl, met een 1,5: 1 molverhouding insert: vector en 1 pi zoutoplossing (0,2 M NaCl en 0,01 MgCl2). Incubeer gedurende 5 min bij kamertemperatuur (RT). </li><li> Transformeer de gehele reactie in chemisch competente E. coli cellen volgens gerichte klonering kit specificaties en scherm verkregen kolonies door kolonie PCR 3, met M13 forward en reverse primers in de gerichte klonering kit. Isoleer het plasmide uit een positief kolonie volgens plasmide-DNA voorbereidingskit specificaties Type de insertie met M13 forward en reverse primers voor de afwezigheid van mutaties 3 te garanderen. </li><li> Gebruik de verkregen toegang kloon aan de recombinatie reactie uit te voeren door de Lambda Recombinase Clonase II Enzyme (LR) met specifieke bestemming vectoren: voor recombinant eiwit expressie in bacteriële cellen met pDEST17 (opbrengst pDEST17.G65mut), in planten (voorbijgaande of stabiel) met pK7WG2 (opbrengst pK7WG2.G65mut), in met Baculovirus / insectencel-systeem met de gelineariseerde viraal DNA (hetgeen Baculo.G65mut) 4. Monteer de reactie volgens clonase kit specificaties, met 100 ng van vector binnenkomst, 150 ng bestemmingsvector en 2 pl enzymmengsel in een eindvolume van 10 pl. Incubeer het mengsel bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. </li><li> Transformeer de recombinatie product in chemisch competente E. coli cellen volgens clonase set specificaties. Scherm verkregen kolonies door PCR 3 </sup&gt; gebruikt voor de transformatie reactie afgeleide kolonies dezelfde omgekeerde GAD65mut-specifieke primer (5&#39;-CACACGCCGGCAGCAGGT-3 &#39;) en de volgende specifieke bestemming vectoren voorwaartse primers: voor pDEST17: 5&#39;-TAATACGACTCACTATAGGG-3&#39;; voor pK7WG2: 5&#39;-AAGATGCCTCTGCCGACAGT-3 &#39;; voor Baculo gelineariseerde vector: 5&#39;-AAATGATAACCATCTCGC-3 &#39;. </li><li> Isoleer plasmide-DNA met een commercieel minipreparation DNA kit en bevestigen de aanwezigheid van de targetsequentie door PCR 3, met dezelfde specifieke primer combinaties in de voorgaande stap beschreven. </li><li> Met de verkregen PCR-positieve plasmiden verschillende doelorganismen transformeren, afhankelijk van de gekozen recombinante eiwitexpressie zoals beschreven in de volgende stappen platform. </li></ol></li><li> MagnICON systeem 5-7: <ol><li> Kloon het doelgen in de 3&#39;-module pICH31070, zoals eerder in detail 7, waarbij pICH31070.G65mut. Gebruik devolgende specifieke reactie cyclus: 30 min incubatie bij 37 ° C, 5 min bij 50 ° C en daarna 5 minuten bij 80 ° C. </li></ol></li></ol> 2. Recombinante eiwitexpressie <ol><li> Bacteriële cel-systeem: <ol><li> Transformeren pDEST17.G65mut in E. coli BL21 (DE3) elektrocompetente cellen onder toepassing van standaardtechnieken en screenen de kolonies gegroeid op ampicilline-bevattende (100 ug / ml) LB-medium met kolonie-PCR met de volgende transgen-specifieke primers: 5&#39;-CTGGTGCCAAGTGGCTCAGA-3 &#39;en 5&#39; -CACACGCCGGCAGCAGGT-3 &#39;, met een hybridisatietemperatuur van 58 ° C en een rek van 20 sec. Voer de PCR-reactie in een totaal volume van 20 gl na oplossen bacteriële cellen met een plastic tip in de buis. </li><li> Inoculeer een enkele kolonie gedurende de nacht bij 37 ° C in 3 ml ampicilline bevatten (100 ug / ml) LB-medium. </li><li> Verdun de bacteriekweek 1: 100 in 100 ml vers LB-medium (inclusief ampicillin) en incubeer bij 37 ° C gedurende 1-6 uur totdat een uiteindelijke OD600 van 0,8. </li><li> Laten recombinant eiwit expressie door toevoeging van isopropil-β-D-1-tiogalattopiranoside (IPTG) tot een eindconcentratie van 1 mM en incubeer cultuur onder krachtig schudden gedurende 3 uur bij 37 ° C. </li><li> Verzamel cellen door centrifugeren bij 4000 xg gedurende 20 minuten en gebruik bacteriële pellet voor eiwitextractie (stap 3.1.1.1). </li></ol></li><li> Baculovirus / insectencelsysteem: <ol><li> Zaad Spodoptera frugiperda (Sf9) cellen in 6-well platen (8 x 10 5 cellen per putje) en tweemaal wassen met 2 ml van niet-aangevuld Grace&#39;s Insect Medium. </li><li> Verwijder en vervang het medium druppelsgewijs met transfectie mengsel (5 ul LR recombinant reactie, 6 pl Celfectin oplossing en 200 ul niet-aangevuld Grace&#39;s Insect Medium). </li><li> Incubeer de platen bij 27 ° C gedurende 5 uur. </li><li> Verwijder en vervang transfectie mengsel met 2 ml verse Sf-900 medium, aangevuld met 10% foetaal runderserum, 10 ug / ml gentamycine en 100 uM ganciclovir recombinant Baculovirus klonen selecteren. </li><li> Na incubatie gedurende 96 uur bij 27 ° C, verzamel medium (V1 virale stock), centrifugeer bij 4000 xg cellen en grof vuil en slaan verwijderen in het donker bij 4 ° C. </li><li> Zaad 1 x 10 6 Sf9 cellen per putje in 2,5 ml Sf-900 medium bevattende 10% foetaal runderserum, 10 ug / ml gentamycine en 100 uM ganciclovir infecteren met 100 ui V1 voorraad in elke put. </li><li> Incubeer cellen gedurende 3 dagen bij 27 ° C. </li><li> Verzamelen en centrifuge medium bij 4000 x g. </li><li> Bewaar het supernatant (V2 high-titer stock) bij 4 ° C. </li><li> Zaad 1 x 10 6 Sf9 cellen per putje in 2,5 ml Sf-900 medium bevattende 10% foetaal runderserum, 10 ug / ml gentamycine en 100 uM ganciclovir infecteren met 25 gl V2 voorraad in elke put. </li><li> Incubeer cellen gedurende 3 dagen bij 27 ° C. </li><li> Verzamel cellen door centrifugeren bij 4000 xg en insectenwerend celpellet eiwitextractie (stap 3.1.2. 1). </li></ol></li><li> Nicotiana benthamiana voorbijgaande expressie systemen: <ol><li> Groeien N. benthamiana planten in een kas, onder natuurlijk licht binnen het temperatuurbereik 18-23 ° C. Voor agro-infectie gebruiken 4-5 weken oude planten. </li><li> Houd agroinfected planten in een klimaatkamer bij 22 ° C met een 13 uur dag / 11 uur nacht fotoperiode. </li><li> Commerciële recombinatie kloneringssysteem: <ol><li> Breng pK7WG2.G65mut in Agrobacterium tumefaciens-stam EHA105 elektrocompetente cellen zoals eerder beschreven 8 en screenen de kolonies na 2 gekweekt op LB medium dat rifampicine (50 ug / ml), streptomycine (300 ug / ml) en spectinomycine (100 ug / ml) dagen incubatie bij 28 ° C, door kolonie-PCR 8 met de volgende transgen-specifieke primers: 5&#39;-CATGGTGGAGCACGACACGCT-3 &amp; #8217; en 5&#39;-CACACGCCGGCAGCAGGT-3 &#39;, met een hybridisatietemperatuur van 58 ° C en een verlengingstijd van 50 sec. Voer de PCR-reactie in een totaal volume van 20 pl. </li><li> Inoculeer bacteriën in 30 ml LB medium met rifampicine (50 ug / ml), streptomycine (300 ug / ml) en spectinomycine (100 ug / ml) gedurende twee dagen bij 28 ° C. </li><li> Verzamel bacteriën door centrifugeren bij 4000 xg gedurende 20 min en resuspendeer pellet in 10 ml infiltratie buffer (10 mM MES, 10 mM MgCl2, 100 pM acetosyringoon, pH 5,6). Meet de OD600 waarde en vervolgens aanpassen tot 0,9 door verdunning in dezelfde buffer. OPMERKING: het totale volume nodig is voor het infiltreren van drie N. benthamiana planten is 30 ml. </li><li> Gebruik een 2,5 ml naaldloze injectiespuit aan de Agrobacterium suspensie in N. infiltreren benthamiana bladeren. Voorzichtig en langzaam te injecteren blad panelen met de vering van de spuit. Infiltreren drie uitgebreid ldakranden per plant en het gebruik van drie planten als drievoud. OPMERKING: voor de gezondheid en veiligheid redenen oogbescherming tijdens infiltratie proces. </li><li> Verzamel agroinfiltrated bladeren 2 dagen na infectie (dpi) en vries in vloeibare stikstof. Bewaren plantenweefsel bij -80 ° C. </li></ol></li><li> MagnICON systeem: <ol><li> Breng de MagnICON vectoren - de 5 &#39;module (pICH20111), de 3&#39;module (pICH31070.G65mut) en het integrase module (pICH14011) - in A. tumefaciens GV3101 stam met standaardtechnieken. Zeef de kolonies gegroeid op LB medium dat 50 ug / ml rifampicine en geschikte vector-antibioticum (50 ug / ml carbenicilline voor pICH20111 en pICH14011, 50 ug / ml kanamycine voor pICH31070) door kolonie-PCR met behulp van specifieke primers voor elke vector. </li><li> Te enten afzonderlijk de drie A. tumefaciens stammen in 5 ml LB medium dat 50 ug / ml rifampicine en geschikte vector-specifieke antibioticumen schud gedurende de nacht bij 28 ° C. </li><li> Pellet overnacht bacteriële kweken door centrifugatie bij 4000 xg gedurende 20 min en resuspendeer ze in twee delen van de oorspronkelijke bacteriekweek van 10 mM MES (pH 5,5) en 10 mM MgSO4. </li><li> Meng gelijke volumes van bacteriële suspensies die de drie vectoren en gebruik maken van de schorsing mix voor spuit infiltratie van N. benthamiana bladeren. Infiltreren drie uitgebreid bladeren per plant. </li><li> Verzamel agroinfiltrated bladeren op 4 dpi en vries in vloeibare stikstof. </li><li> Bewaren plantenweefsel bij -80 ° C. </li></ol></li></ol></li><li> Nicotiana tabacum stabiele expressie systeem: <ol><li> Groei en in vitro plantjes N. handhaven tabacum (var Sr1.) op vaste planten kweekmedium (4,4 g / l Murashige en Skoog - MS - medium waaronder vitaminen, 30 g / l sucrose, pH 5,8, 7 g / l fabriek agar) onder gecontroleerde omstandigheden in de klimaatkamer bij 25 ° C met 16 uur / 8 uur dag / night regime. </li><li> Start een pre-cultuur van A. tumefaciens EHA105 de expressievector pK7WG2.G65mut in 5 ml vloeibaar YEB-medium met geschikte antibiotica (rifampicine 50 ug / ml, streptomycine 300 ug / ml spectinomycine 100 ug / ml) en overnacht groeien bij 28 ° C in een orbitale schudder set bij 200 rpm. </li><li> Gebruik 1 ml van de voorkweek in een 50 ml Agrobacterium kweek in YEB medium met antibiotica inoculeren (rifampicine 50 ug / ml, streptomycine 300 ug / ml spectinomycine 100 ug / ml) en kweken gedurende 24 uur, totdat de bacteriële cultuur verzadigde (OD 600 waarde van 0,5-1,0). </li><li> Verzamel bacteriën door centrifugeren bij 4000 xg gedurende 20 min en resuspendeer pellet in 50 ml vloeibaar planten kweekmedium. Herhaal deze stap twee keer tegen antibiotica volledig te verwijderen. </li><li> Neem de eerste gezonde volledig ontwikkelde bladeren van in vitro tabaksplanten en snijd ze in ongeveer 1 cm pleinen. </li><li> Transfer bladstukkendiepe platen met bacteriële suspensie en laat in het donker gedurende 20 min. </li><li> Verwijder blad stukken uit schorsing en dep droog op steriele filter papier. </li><li> Plaats blad stukken met adaxiale zijde (bovenste bladoppervlak) op vaste planten kweekmedium met 1,0 ug / ml 6-benzylaminopurine (BAP) en 0,1 ug / ml naftaleen azijnzuur (NAA) en incubeer platen voor twee dagen in een klimaatkamer bij een gecontroleerde omstandigheden (25 ° C, 16 uur dag / nacht 8 uur). </li><li> Transfer bladstukken op vast kweekmedium (inclusief 1,0 ug / ml BAP, 0,1 ug / ml NAA, 500 mg / ml cefotaxime, 100 ug / ml kanamycine) met abaxiale oppervlak (onderste oppervlak van het blad) in contact met medium. </li><li> Incubeer de platen gedurende 2-3 weken in de klimaatruimte bij 25 ° C met 16 uur / 8 uur dag / nacht regime scheutvorming induceren. Subcultuur om de 2 weken door de overdracht van bladexplantaten frisse stevige planten kweekmedium met 1,0 ug / ml BAP, 0,1 ug / ml NAA, 500gg / ml cefotaxime en 100 ug / ml kanamycine. </li><li> Wanneer scheuten overbrengen naar Magenta dozen met vast kweekmedium met 500 ug / ml cefotaxime en 100 ug / ml kanamycine voor wortelvorming induceren. Incubeer plantjes met 16 uur dag / nacht 8 uur fotoperiode bij 25 ° C gedurende 1-2 weken. </li><li> Wanneer wortels vormen, dragen de planten in de grond in de kas. </li><li> Verzamel een blad stuk voor elke plant en te isoleren genomisch DNA met een commerciële kit. </li><li> Detecteren van de aanwezigheid van het transgen door specifieke PCR. Met 30 ng genomisch DNA als matrijs voor PCR-amplificatie met de volgende transgen-specifieke primers: 5&#39;-CTGGTGCCAAGTGGCTCAGA-3 &#39;en 5&#39;-CACACGCCGGCAGCAGGT-3&#39;, met een hybridisatietemperatuur van 58 ° C en een rek van 20 sec . Voer de PCR-reactie in een totaalvolume van 50 ul. </li><li> Analyseer het 220 bp product door elektroforese op 1% agarosegel in Tris-acetaat-EDTA (TAE) buffer (40 mM Tris, 20 mM azijnzuur en 1 mM EDTA). </li><li> Selecteer transgene planten die het doelgen. </li><li> Verzamel een blad stukje uit elk van de geselecteerde transgene plant en vries in vloeibare stikstof direct. </li><li> Bereid totaal proteïne-extracten van plantaardige blad weefsel (stap 3.1.3) en test elke monster door western blot analyse zoals eerder beschreven 2 om de beste recombinant eiwit fabriek uiten van tabak te selecteren. </li><li> Zak bloemen van de geselecteerde best presterende planten voor de bloei om kruisbestuiving te voorkomen. </li><li> Na de bloei, rijping van fruit en zaad drogen, het verzamelen van zakken. </li><li> Aparte zaden van het kaf en bewaar ze in een droge ruimte bij een gecontroleerde temperatuur (20-24 ° C). </li><li> Zaai de gedroogde zaden tot de tweede generatie transgene planten produceren en vervolgens selecteert u de best presterende plant om zelf-bestoven zijn. </li><li> Herhaal dezelfde stappen in 2.4.19-2.4.21 beschreven voor de volgende generaties procedure. </li></ol&gt; </li></ol> 3. recombinant eiwit expressie Analyses <ol><li> Totaal eiwitextractie: <ol><li> Bacteriële cellen: <ol><li> Resuspendeer de bacteriële celpellet, verzameld zoals beschreven in stap 2.1.5, de helft van de kweek volume Tris-gebufferde zoutoplossing (TBS - 2 mM Tris / HCl, 500 mM NaCl), pH 7,4 aangevuld met 1 mM phenylmethanesulfonylfluoride (PMSF). </li><li> Sonicaat geresuspendeerd cel pellet drie keer voor 40 sec op halve kracht, terwijl het monster op het ijs. </li><li> Geef lysaat door centrifugatie bij 14.000 xg gedurende 20 min bij 4 ° C. </li><li> Overdracht supernatant naar een schone buis en beide supernatant en pellet afzonderlijk bij -80 ° C. </li><li> Oplosbaar De insluitlichaampjes in de pellet verzameld doormidden cellulaire lysaat volume TBS pH 8,0 aangevuld met 6 M ureum door krachtig schudden gedurende de nacht bij kamertemperatuur. </li><li> Centrifugeer bij 10.000 xg gedurende 25 min bij kamertemperatuur en laat supernatant in een schonebuis. </li><li> WINKEL zowel supernatant en pellet bij -80 ° C. </li></ol></li><li> Insectencellen: <ol><li> Was geïnfecteerde insectencel pellet verzameld zoals beschreven in stap 2.2.12 met 1 ml fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS - 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na 2 HPO 4, 1,8 mM KH 2PO 4) pH 7,4. </li><li> Resuspendeer cellen in 200 ul lysisbuffer (20 mM Tris / HCl pH 8,0, 0,5 M NaCl, 3 mM β-mercaptoethanol en 1% Tween-20) en incubeer op ijs gedurende 30 min. </li><li> Centrifugeer cellen gesolubiliseerd bij 14.000 xg gedurende 20 min bij 4 ° C. </li><li> Verzamel oplosbare fracties en bewaar bij -80 ° C en de pellet weggegooid. </li></ol></li><li> Plant bladweefsel: <ol><li> Grind N. benthamiana en N. tabacum weefsel tot fijn poeder in vloeibare stikstof met behulp van een mortier en een stamper. </li><li> Homogeniseren 100 mg van de grond weefsel in 300 ul van extractie buffer (40 mM Hepes pH 7,9, 5 mM DTT, 1,5% CHAPS), supplemented met 3 ul van proteaseremmer cocktail en ontdooien op ijs. OPMERKING: de gekozen verhouding tussen plantenweefsel gewicht (g) naar buffer volume (ml) is 1: 3. </li><li> Centrifugeer extract bij 30.000 xg gedurende 30 min bij 4 ° C. </li><li> Verzamel supernatant in een schone buis en bewaar bij -80 ° C. </li></ol></li></ol></li><li> Coomassie kleuring gel: <ol><li> Bereid een geschikte verdunning van de totale eiwitextracten (bijvoorbeeld 2 ui plantenextract, 5 gl bacteriën en insecten extracten) tot een eindvolume van 10 pl extractiebuffer en voeg 5 ul 3x monsterbuffer (1,5 M Tris / HCl pH 6,8, 3% SDS, 15% glycerol, 4% β-mercaptoethanol) tot een uiteindelijke concentratie van 1x. </li><li> Kook monsters gedurende 10 min. </li><li> Afzonderlijke eiwitten door 10% SDS-PAGE. </li><li> Na elektroforese warmte gel in aanwezigheid van Coomassie-oplossing A (0,05% Brilliant Blue R-250, 25% isopropanol, 10% azijnzuur) in een magnetron gedurende ongeveer twee minutens tot aan het kookpunt. </li><li> Afkoelen gel tot kamertemperatuur onder zacht schudden. </li><li> Discard Coomassiekleuring oplossing A. </li><li> Destain gel door verwarmen in aanwezigheid van Coomassie oplossing B (0,05% Brilliant Blue R-250, 25% isopropanol), C (0.002% Brilliant Blue R-250, 10% azijnzuur) en D (10% azijnzuur) telkens volgens hetzelfde protocol voor kleuring. </li><li> Na de laatste verhittingstrap met oplossing D, laat gel ontkleuren tot achtergrond is duidelijk 9. </li></ol></li><li> Western blot-analyse: <ol><li> Na elektroforese overdracht gescheiden eiwitten op een nitrocellulosemembraan met behulp van standaard technieken en blok met 4% melk in PBS pH 7,4 bij kamertemperatuur gedurende 1 uur. </li><li> Incubeer de blot overnacht bij 4 ° C of 4 uur bij kamertemperatuur in de blokkerende oplossing bevattende konijnen primair antilichaam opgewekt tegen het doeleiwit bij 1: 10.000 en aangevuld met 0,1% Tween-20. </li><li> Na het primaire antilichaam labeling, was het membraan 3 maal gedurende 5 minuten elk met blokkerende oplossing bevattende 0,1% Tween-20. </li><li> Incubeer met mierikswortel peroxidase (HRP) -conjugate anti-konijn antilichaam bij 1: 10.000 1,5 uur. </li><li> Was membraan 5 keer gedurende 5 minuten elk met PBS-T (PBS aangevuld met 0,1% Tween-20). </li><li> Proces western blot met de chemiluminescente peroxidase substraat. </li></ol></li><li> Radioimmuno assay (RIA): <ol><li> Laat reagentia (antiserum, tracer en proteïne A Sepharose) tot kamertemperatuur en pipet 20 pl proteïne extract monsters en standaarden in verschillende concentraties (van 300-2,400 ng / ml commercieel recombinant hGAD65) in 12 x 75 mm polystyreen buizen bereiken. </li><li> Voeg 20 ul van antiserum, bereide verdunning 1:30 het serum van plasmaferese van een T1D patiënt. </li><li> Voeg 50 ul van tracer (125-I-GAD65) en incubeer gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geroerd. Stel een buis met tracer slechts een schatting van de totale activiteit. </li><li> Voeg 50 ulproteïne A Sepharose en incubeer gedurende 1 uur bij kamertemperatuur geroerd. </li><li> Breng 1 ml koude PBS buffer in elke buis en centrifugeer bij 1500 xg bij 4 ° C gedurende 30 min. </li><li> Schenk de buizen om supernatant te verwijderen en te absorberen resterende vloeistof op vloeipapier door zachtjes te tikken buis. </li><li> Meet immunologisch radioactiviteit in alle buizen door het tellen gedurende 1 min in een gammateller. </li><li> Perceel in log-schaal de bindende tarieven (B / T%) van calibratoren met betrekking tot de totale activiteit, de standaard curve vast te stellen, en te lezen GAD concentratie van monsters uit de ijkcurve 10. LET OP: Beperkt gebieden moeten worden ontworpen voor de opslag, verwerking en berging van radioactief materiaal. </li></ol></li></ol>

<ol><li>Hampe, C. S., Hammerle, L. P., Falorni, A., Robertson, J., Lernmark, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Site-directed+mutagenesis+of+K396R+of+the+65+kDa+glutamic+acid+decarboxylase+active+site+obliterates+enzyme+activity+but+not+antibody+binding%5BTitle%5D)+AND+%22FEBS+Lett%22%5BJournal%5D)">Site-directed mutagenesis of K396R of the 65 kDa glutamic acid decarboxylase active site obliterates enzyme activity but not antibody binding.</a> FEBS Lett. 488 (3), 185-189 (2001).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recombinant+human+GAD65+accumulates+to+high+levels+in+transgenic+tobacco+plants+when+expressed+as+an+enzymatically+inactive+mutant%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Biotechnol.+J%22%5BJournal%5D)">Recombinant human GAD65 accumulates to high levels in transgenic tobacco plants when expressed as an enzymatically inactive mutant.</a> Plant Biotechnol. J. 9 (8), 862-872 (2010).</li>
<li>Sambrook, J., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning%3A+A+laboratory+manual.+Second+Edition%22">Molecular Cloning: A laboratory manual. Second Edition</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press. New York. (1989).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+analysis+of+different+biofactories+for+the+production+of+a+major+diabetes+autoantigen%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Comparative analysis of different biofactories for the production of a major diabetes autoantigen.</a> Transgenic Res. 23, 281-291 (2014).</li>
<li>Marillonnet, S., Giritch, A., Gils, M., Kandzia, R., Klimyuk, V., Gleba, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+planta+engineering+of+viral+RNA+replicons%3A+efficient+assembly+by+recombination+of+DNA+modules+delivered+by+Agrobacterium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+%28USA%29%22%5BJournal%5D)">In planta engineering of viral RNA replicons: efficient assembly by recombination of DNA modules delivered by Agrobacterium.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. (USA). 101 (18), 6852-6857 (2004).</li>
<li>Gleba, Y., Klimyuk, V., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viral+vectors+for+the+expression+of+proteins+in+plants%29%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Viral vectors for the expression of proteins in plants).</a> Curr. Opin. Biotechnol. 18, 134-141 (2007).</li>
<li>Engler, C., Kandzia, R., Marillonnet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+one+pot%2C+one+step%2C+precision+cloning+method+with+high+throughput+capability%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A one pot, one step, precision cloning method with high throughput capability.</a> PLoS One. 3 (11), (2008).</li>
<li>Xu, R., Li, Q. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol%3A+streamline+cloning+of+genes+into+binary+vectors+in+Agrobacterium+via+the+Gateway+TOPO+vector+system%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Methods%22%5BJournal%5D)">Protocol: streamline cloning of genes into binary vectors in Agrobacterium via the Gateway TOPO vector system.</a> Plant Methods. 4 (4), 1-7 (2008).</li>
<li>Fairbanks, G., Steck, T. L., Wallach, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophoretic+analysis+of+the+major+polypeptides+of+the+human+erythrocyte+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Electrophoretic analysis of the major polypeptides of the human erythrocyte membrane.</a> Biochemistry. 10 (13), 2606-2617 (1971).</li>
<li>Falorni, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radioimmunoassay+detects+the+frequent+occurrence+of+autoantibodies+to+the+Mr+65%2C000+isoform+of+glutamic+acid+decarboxylase+in+Japanese+insulin-dependent+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Radioimmunoassay detects the frequent occurrence of autoantibodies to the Mr 65,000 isoform of glutamic acid decarboxylase in Japanese insulin-dependent diabetes.</a> Autoimmunity. 19, 113-125 (1994).</li>
<li>Hunt, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+gene+to+protein%3A+a+review+of+new+and+enabling+technologies+for+multi-parallel+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Protein+Expr.+Purif%22%5BJournal%5D)">From gene to protein: a review of new and enabling technologies for multi-parallel protein expression.</a> Protein Expr. Purif. 40 (1), 1-22 (2005).</li>
<li>Arzola, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+co-expression+of+post-transcriptional+silencing+suppressor+for+increased+in+planta+expression+of+a+recombinant+anthrax+receptor+fusion+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Mol.+Sci%22%5BJournal%5D)">Transient co-expression of post-transcriptional silencing suppressor for increased in planta expression of a recombinant anthrax receptor fusion protein.</a> Int. J. Mol. Sci. 12 (8), 4975-4990 (2011).</li>
<li>Merlin, M., Gecchele, E., Capaldi, S., Pezzotti, M., Avesani, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+evaluation+of+recombinant+protein+production+in+different+biofactories%3A+the+green+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Res.+Int%22%5BJournal%5D)">Comparative evaluation of recombinant protein production in different biofactories: the green perspective.</a> Biomed. Res. Int. 2014, 136419(2014).</li>
<li>Avesani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+in+planta+expression+of+the+human+islet+autoantigen+glutamic+acid+decarboxylase+%28GAD65%29%5BTitle%5D)+AND+%22Transgenic+Res%22%5BJournal%5D)">Improved in planta expression of the human islet autoantigen glutamic acid decarboxylase (GAD65).</a> Transgenic Res. 12 (2), 203-212 (2003).</li>
<li>Leuzinger, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+agroinfiltration+of+Plants+for+high-level+transient+expression+of+recombinant+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Efficient agroinfiltration of Plants for high-level transient expression of recombinant proteins.</a> J Vis Exp. (77), (2013).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat er geen belangenconflict is met betrekking tot de publicatie van dit artikel.

In deze studie werden drie verschillende platforms vergeleken voor de expressie van een recombinant humaan eiwit: bacteriële cellen, met baculovirus / insectencellen en planten. De plantaardige platform werd verder onderzocht door de exploitatie van drie veel gebruikte technologieën expressie (dat wil zeggen, van voorbijgaande aard - MagnICON en pK7WG2 basis - en stabiel). Het doeleiwit voor dit experiment gekozen, hGAD65mut, eerder uitgedrukt in verschillende systemen 13, en de productie en function...

Recombinante eiwitten worden commercieel in grote hoeveelheden geproduceerd in heterologe expressiesystemen met behulp van opkomende biotechnologietools. Belangrijke factoren die in overweging moeten worden genomen bij het kiezen van het heterologe expressiesysteem zijn: eiwitkwaliteit, functionaliteit, processnelheid, opbrengst en kosten.
In het recombinante eiwitveld is de markt voor geneesmiddelen snel aan het uitbreiden en daarom worden de meeste biopharmaceuticals die vandaag worden geproduceerd recombinant. Eiwitten kunnen worden geëxpresseerd in celculturen van bacteriën, gisten, schimmels, zoogdieren, planten en insecten, evenals in plantensystemen (ofwel via stabiele- of transiënte-transformatie) en transgene dieren; elk expressiesysteem heeft zijn inherente voordelen en beperkingen en voor elk doelwit recombinant eiwit moet het optimale productiesysteem zorgvuldig worden geëvalueerd.
Plantgebaseerde platformen ontstaan als een belangrijke alternatief voor traditionele fermentor-gebaseerde systemen voor veilige en kosteneffectieve recombinante eiwitproductie. Hoewel de kosten van downstreamverwerking vergelijkbaar zijn met die van microbiële en zoogdiercellen, zijn de lagere initiële investering vereist voor commerciële productie in planten en de potentiële schaalvoordelen, geboden door cultivatie over grote gebieden, belangrijke voordelen.
We hebben planten geëvalueerd als bioreactoren voor de expressie van de 65 kDa isovorm van humaan glutamaatdecarboxylase (hGAD65), een van de belangrijkste autoantigenen bij Type 1 auto-immuun diabetes (T1D). hGAD65 wordt grotendeels aangenomen als een marker, zowel voor het classificeren en monitoren van de progressie van de ziekte en de rol ervan in T1D preventie is momenteel onderwerp van klinische onderzoeken. Als deze onderzoeken succesvol zijn, zal de wereldwijde vraag naar recombinant hGAD65 dramatisch toenemen.
Hier richten we ons op de expressie van de enzymatisch inactieve tegenhanger van hGAD65, hGAD65mut, een mutant gegenereerd door het lysineresidu dat de cofactor PLP (pyridoxaal-5'-fosfaat) bindt te vervangen door een arginineresidu (K396R)1.
hGAD65mut behoudt zijn immunogeniciteit en accumuleert in plant- en insectencellen tot wel tien keer hoger dan hGAD65, zijn wildtype-tegenhanger. Er werd gehypothetiseerd dat de enzymatische activiteit van hGAD65 interfereert met het plantencelmetabolisme tot een zodanig punt dat het zijn eigen synthese onderdrukt, terwijl hGAD65mut, de enzymatisch inactieve vorm, in plantencellen tot hogere niveaus kan worden geaccumuleerd.
Voor de expressie van hGAD65mut werd hier het gebruik van verschillende technologieën, die veel worden gebruikt in de plantenbiotechnologie, verkend en vergeleken met traditionele expressieplatforms (Escherichia coli en Baculovirus/insectencel-gebaseerd).
In dit werk werden de recombinante platformen die zijn ontwikkeld voor de expressie van hGAD65mut, bestaande uit traditionele en plantgebaseerde systemen, beoordeeld en vergeleken op basis van processnelheid en opbrengst, en op basis van de kwaliteit en functionaliteit van het eindproduct.

<table><tbody><tr><td>Gistextract</td><td>Sigma</td><td>Y1333</td><td></td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Formedium</td><td>TRP03</td><td></td></tr><tr><td>Agar Bacteriologisch graad</td><td>Applichem</td><td>A0949</td><td></td></tr><tr><td>Sf-900 II SFM medium</td><td>Gibco</td><td>10902-088</td><td></td></tr><tr><td>Grace&rsquo;s Insect Medium, onaangedaan</td><td>Gibco</td><td>11595-030</td><td></td></tr><tr><td>Cellfectin II Reagens</td><td>Invitrogen</td><td>10362-100</td><td></td></tr><tr><td>MS medium inclusief vitaminen</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>M0222</td><td></td></tr><tr><td>Suiker</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0809</td><td></td></tr><tr><td>Plantagar</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>P1001</td><td></td></tr><tr><td>Ampicillin natrium</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>A0104</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Gentamicine sulfaat</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>G0124</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Ganciclovir</td><td>Invitrogen</td><td>I2562-023</td><td></td></tr><tr><td>Carbenicillin di-natrium</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C0109</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Kanamycin sulfaat</td><td>Sigma</td><td>K4000</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Rifamycin</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>R0146</td><td>Toxisch &ndash; 25 mg/ml stock in DMSO</td></tr><tr><td>Streptomycin sulfaat</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0148</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Spectinomycine dihydrochloride</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>S0188</td><td></td></tr><tr><td>IPTG (isopropiel-&beta;-D-1-thiogalactopyranosid)</td><td>Sigma</td><td>I5502</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>MES-hydraat</td><td>Sigma</td><td>M8250</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Biochemical</td><td>436994U</td><td></td></tr><tr><td>Acetosyringone</td><td>Sigma</td><td>D134406</td><td>Toxisch &ndash; 0.1 M stock in DMSO</td></tr><tr><td>Spuit (1 ml)</td><td>Terumo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Fluka</td><td>63136</td><td></td></tr><tr><td>BAP (6-Benzylaminopurine)</td><td>Sigma</td><td>B3408</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>NAA (Naftaleen azijnzuur)</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>N0903</td><td>Irritante</td></tr><tr><td>Cefotaxime</td><td>Mylan Generics</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trizma base</td><td>Sigma</td><td>T1503</td><td>Pas pH aan met 1 N HCl om Tris-HCl buffer te maken</td></tr><tr><td>HCl</td><td>Sigma</td><td>H1758</td><td>Corrosief</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S3014</td><td>1 M stock</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma</td><td>P9541</td><td></td></tr><tr><td>Na2HPO4</td><td>Sigma</td><td>S7907</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma</td><td>P9791</td><td></td></tr><tr><td>PMSF (Fenilmethanesulfonylfluoride)</td><td>Sigma</td><td>P7626</td><td>Corrosief, toxisch</td></tr><tr><td>Urea</td><td>Sigma</td><td>U5378</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoethanol</td><td>Sigma</td><td>M3148</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma</td><td>P5927</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>DTT (Dithiothreitol)</td><td>Sigma</td><td>D0632</td><td>Toxisch &ndash; 1 M stock, bewaar bij -20 &deg;C</td></tr><tr><td>CHAPS</td><td>Duchefa Biochemie</td><td>C1374</td><td>Toxisch</td></tr><tr><td>Plant protease inhibitor cocktail</td><td>Sigma</td><td>P9599</td><td>Vries/ontdooi niet te vaak</td></tr><tr><td>SDS (Natriumdodecylsulfaat)</td><td>Sigma</td><td>L3771</td><td>Ontvlambaar, toxisch, corrosief &ndash; 10% stock</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma</td><td>G5516</td><td></td></tr><tr><td>Brilliant Blue R-250</td><td>Sigma</td><td>B7920</td><td></td></tr><tr><td>Isopropanol</td><td>Sigma</td><td>24137</td><td>Ontvlambaar</td></tr><tr><td>Azijnzuur</td><td>Sigma</td><td>27221</td><td>Corrosief</td></tr><tr><td>Anti-glutamaatzuur decarboxylase 65/67</td><td>Sigma</td><td>G5163</td><td>Vries/ontdooi niet te vaak</td></tr><tr><td>Horseradish peroxidase (HRP)-conjugaat anti-konijnenantilichaam</td><td>Sigma</td><td>A6154</td><td>Vries/ontdooi niet te vaak</td></tr><tr><td>Sf9 Cellen</td><td>Life Technologies</td><td>11496</td><td></td></tr><tr><td>BL21 Competent E. coli</td><td>New England Biolabs</td><td>C2530H</td><td></td></tr><tr><td>Protein A Sepharose</td><td>Sigma</td><td>P2545</td><td></td></tr><tr><td>Cellcultuur platen</td><td>Sigma</td><td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>Radio Immuno Assay kit</td><td>Techno Genetics</td><td>12650805</td><td>Radioactief materiaal</td></tr></tbody></table>

een vergelijkende analyse van recombinant eiwit expressie in verschillende biofactories: bacteriën, insect cells and plant systems

A Comparative Analysis of Recombinant Protein Expression in Different Biofactories: Bacteria, Insect Cells and Plant Systems

Plantaardige systemen worden beschouwd als een waardevol platform voor de productie van recombinante eiwitten ten gevolge van hun goed gedocumenteerde potentieel voor de flexibele, goedkope productie van hoogwaardige biologisch actieve producten. In deze studie hebben we de expressie van een doelwit menselijk recombinant eiwit in traditionele fermentatie gebaseerde celkweken (bacteriën en insecten) met plantaardige expressiesystemen, zowel transiënte en stabiele. Voor elk platform, beschrijven we de opzet optimalisatie en lengte van het productieproces kan de uiteindelijke kwaliteit van het product en de opbrengst en we voorlopig productiekosten, specifiek voor het gekozen doelwit recombinante eiwit geëvalueerd. Kortom, onze resultaten aan dat bacteriën niet voor de bereiding van het doeleiwit door de ophoping ervan in onoplosbare inclusielichamen. Anderzijds, plantaardige systemen zijn veelzijdig platforms thoed kan de productie van het geselecteerde eiwit tegen lagere kosten dan baculovirus / insectencel-systeem. Vooral stabiele transgene lijnen toonde de hoogste opbrengst van het eindproduct en voorbijgaande expressie planten de snelste procesontwikkeling. Kunnen echter niet alle recombinante eiwitten profiteren van plantaardige systemen, maar de beste productie platform moet empirisch worden bepaald met een case-by-case benadering, zoals hier beschreven.

Een experimenteel ontwerp voor de heterologe expressie van een doel recombinant proteïne in verschillende productiesystemen wordt beschreven. De eerste focus lag de set-up van de verschillende platformen door de oprichting van de optimale omstandigheden voor de expressie van het doelwit eiwit in elk systeem. De expressie van het doeleiwit, hGAD65mut, geïnduceerd in drievoud E. coli kweken. Na 3 uur van expressie bij 37 ° C werden de bacteriële cellen verzameld door centrifugeren en ...

In deze studie werd de expressie van een doelgerichte humane recombinante eiwit in verschillende productieplatforms vergeleken. We concentreerden ons op traditionele fermentor-gebaseerde culturen en op planten, waarbij we de instelling van elk systeem beschreven en, op basis van de gerapporteerde resultaten, de inherente grenzen en voordelen voor elk platform benadrukten.

Een vergelijkende analyse van recombinant eiwit expressie in verschillende biofactories: Bacteriën, Insect Cells and Plant Systems

Plant-based systems are considered a valuable platform for the production of recombinant proteins as a result of their well-documented potential for the ...

a-comparative-analysis-recombinant-protein-expression-different

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

In de post-humane genomics-tijdperk, de beschikbaarheid van recombinante eiwitten in de moedertaal van conformaties is cruciaal voor structurele, functionele en therapeutisch onderzoek en ontwikkeling. Hier beschrijven we een test-en grootschalige eiwitexpressie systeem humane embryonale nier 293T cellen die kunnen worden gebruikt om een ​​verscheidenheid van recombinante eiwitten.

Een handig en algemene uitdrukking platform voor de productie van de uitgescheiden eiwitten uit menselijke cellen

Planten bieden een nieuw systeem voor de productie van farmaceutische eiwitten op commerciële schaal die is beter schaalbaar, kostenefficiënte en veilige dan de huidige expressie paradigma. In deze studie, rapporteren we een eenvoudig en handig, toch schaalbare aanpak van target-gen-bevattende...

Efficiënte Agroinfiltration van planten voor High-level Tijdelijke expressie van recombinante eiwitten

Ontwikkelen biotinylatable fusie-eiwitten heeft veel potentiële toepassingen in diverse gebieden van onderzoek. Recombinant eiwit-engineering is een rechttoe rechtaan procedure die is kosteneffectief, het verstrekken van hoge opbrengsten van op maat gemaakte eiwitten.

Expressie, isolatie en zuivering van oplosbare en onoplosbare Biotinylated Eiwitten voor Nerve Tissue Regeneration

De expressie van recombinante eiwitten door zoogdiersystemen wordt een aantrekkelijke methode voor het produceren van eiwitcomplexen voor structurele biologie. Hier presenteren we een eenvoudig maar zeer efficiënt expressiesysteem dat gebruik maakt van in suspensie gekweekte zoogdiercellen om eiwitcomplexen te zuiveren voor structurele studies.

Recombinante eiwitexpressie voor Structurele Biologie in HEK 293F Suspension cellen: een nieuwe en toegankelijke aanpak

Eiwit co-expressie is een krachtige alternatief voor de reconstitutie in vitro van eiwitcomplexen, en helpt bij het uitvoeren van biochemische en genetische tests in vivo. Hier rapporteren we over het gebruik van eiwit co-expressie in Escherichia coli om eiwitcomplexen te verkrijgen en om de mutatiefrequentie van cellen af te stemmen.

De veelzijdige voordelen van Protein Co-expressie in<em&gt; Escherichia coli</em

De productie op laboratoriumschaal van eukaryote eiwitten met passende post-translationele modificatie vormt een belangrijke barrière. Hier is een robuust protocol met snelle implementatie en doorlooptijd voor eiwitexpressie met behulp van een zoogdier-expressiesysteem. Dit systeem ondersteunt selectieve aminozuren, selectieve markering van eiwitten en kleine moleculaire modulatoren van glyconsamenstelling.

High Yield Expressie van recombinante humane eiwitten met de Transient Transfectie van HEK293 cellen in suspensie

Nonlytic insectencel expressiesystemen onderbenut productie, cellulair transport / lokalisatie en recombinante eiwitten functionele analyse. We beschrijven werkwijzen voor expressievectoren en transiënte daaropvolgende eiwitexpressie genereren handel verkrijgbaar Lepidoptera cellijnen. De co-localisatie van Bemisia tabaci aquaporins met fluorescente subcellulaire markereiwitten wordt gepresenteerd.

Transiënte expressie en cellulaire lokalisatie van recombinante eiwitten in gekweekte insectencellen

Dit manuscript beschrijft een algemene aanpak voor op maat gemaakte ontwerp van microbiële teelt media. Deze optie is ingeschakeld door een iteratieve werkstroom combineren Kriging gebaseerde experimentele design en microbioreactor technologie voor voldoende teelt doorvoer, die wordt ondersteund door lab robotica om betrouwbaarheid en snelheid in vloeistof behandeling van media voorbereiding.

Generic-Protocol voor optimalisatie van heterologe eiwitproductie met behulp van geautomatiseerde Microbioreactor technologie

Dit protocol beschrijft een warmte schok-geïnduceerde proteïne expressie systeem (pDHsp/V5-zijne/sf9 cel), die kan worden gebruikt voor het uitdrukken van vreemde proteïnen of evaluatie van de anti-apoptotic activiteit van potentiële buitenlandse eiwitten en hun afgeknotte amino zuren in insect cellen.

Voorbijgaande expressie van buitenlandse genen in Insect cellen (sf9) voor eiwit functionele Assay

Hier presenteren we de protocollen voor het gebruik van het insect cel en baculovirus eiwit expressie systeem voor de productie van grote hoeveelheden uitgescheiden eiwithoudende gewassen voor eiwit kristallisatie. Een vector baculovirus expressie is gewijzigd met GP67 of insect hemolin signaal peptide voor plant secretie eiwituitdrukking in insect cellen.

Wijzigen Baculovirus expressievectoren voor de productie van plantaardige eiwitten in Insect cellen uitgescheiden

Het baculovirus expressie vectorsysteem (BEVS) is een robuust platform voor expressiescreening en productie van eiwit arginine methyltransferases (PRMT's) voor biochemische, biofysische en structurele studies. Milligram hoeveelheden materiaal kunnen worden geproduceerd voor de meerderheid van PRMT's en andere eiwitten van belang die een eukaryotische expressie platform vereisen.

Productie van recombinante PRMT-eiwitten met behulp van het Baculovirus Expression Vector System

Ontdek een vergelijkende analyse van recombinant eiwitexpressie in bacteriën, insectencellen en plantensystemen. Deze methode helpt onderzoekers om de optimale productieplatformen te selecteren voor humane recombinante eiwitten.

Een vergelijkende analyse van recombinant eiwit expressie in verschillende biofactories: Bacteriën, Insect Cells and Plant Systems (Video) | JoVE Journal

Een vergelijkende analyse van recombinant eiwit expressie in verschillende biofactories: Bacteriën, Insect Cells and Plant Systems

Meer video's verkennen