Name: De bioconjugatie en radiosynthese van 89 Zr-DFO-gemerkte antilichamen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-02-12T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Leer de bioconjugatie en radiosynthese van zirkonium-89-DFO-gemerkte antilichamen voor PET-beeldvorming in oncologisch onderzoek. Dit protocol toont de zuivering en preklinische toepassing van deze radio-immunoconjugaten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs danken prof Thomas Reiner, Dr. Jacob Houghton, en Dr. Serge Lyaschenko voor behulpzaam gesprekken.

Alle van de in vivo dierproeven beschreven werden uitgevoerd volgens een goedgekeurd protocol en onder de ethische richtlijnen van het Memorial Sloan Kettering Cancer Center Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC). 1. Vervoeging van DFO-NCS naar J591 <ol><li> In een 1,7 ml microcentrifugebuis bereiden 2-5 mg / ml oplossing van J591 in 1 ml van ofwel 1x fosfaat gebufferde zoutoplossing (pH 7,4) of 0,5 M HEPES buffer (pH 7,4). </li><li> Los DFO-NCS in droog DMSO bij een concentratie van 5-10 mM (3,8-7,6 mg / ml). Ultrasone trillingen of vortex de oplossing grondig met het oog op een volledige oplossing te vergemakkelijken. </li><li> Stel de pH van de J591 oplossing 8,8-9,0 door toevoeging van kleine hoeveelheden (&lt;10 pi) 0,1 M Na 2 CO 3. </li><li> Zodra het antilichaam oplossing de juiste pH, voeg een volume van DFO-NCS die overeenkomt met een 3-4-voudige molaire overmaat van de bifunctionele chelator. <ol><li> Voor examenple, voeg 4-5 ul van 10 mM (7,6 mg / ml) DFO-NCS-oplossing (40,4 nmol DFO-NCS) 1 ml van een 2 mg / ml J591 antilichaam oplossing (13,3 nmol J591). De hoeveelheid van DMSO in het uiteindelijke waterige reactiemengsel niet meer dan 2% v / v. </li></ol></li><li> Incubeer het reactiemengsel gedurende 30 minuten bij 37 ° C op een verwarmingsblok roeren bij 350 rpm. </li><li> Na 1 uur bij 37 ° C, zuivert het resulterende immunoconjugaat met voorverpakte disposable size exclusion ontzoutingskolom met een 50.000 molecuulgewicht cut-off toepassing van 0,5 M HEPES buffer (pH 7,4) als elutiemiddel. Deze stap zal een 2 ml oplossing van het voltooide J591-DFO constructie opleveren. </li><li> Meet de concentratie van de J591-DFO construct op een UV-Vis spectrofotometer. </li><li> Als een hogere concentratie van het construct gewenst, concentreren de J591-DFO oplossing wordt met een centrifugale filtereenheid met een 50.000 molecuulgewicht cut-off. </li><li> Bewaar de oplossing van de voltooide J591-DFO immunoconjugaat bij -20 ° C in het donker. </ol> 2. Radioactief J591-DFO met 89 Zr WAARSCHUWING: Deze stap van het protocol omvat het hanteren en manipuleren van radioactiviteit. Voordat u deze stappen nemen of andere werkzaamheden met radioactiviteit onderzoekers moeten overleggen met Radiation Safety Department hun eigen instelling. Alle mogelijke maatregelen moeten worden genomen om de blootstelling aan ioniserende straling te minimaliseren. NB: In het belang van een goede radiochemische noot-houden, moet de hoeveelheid radioactiviteit in het monster worden gemeten met behulp van een dosiskalibrator en vóór opgenomen en na Stappen 2,2-2,13 in onderstaand protocol. Dit zal helpen bij de nauwkeurige bepaling van de radiochemische opbrengst en specifieke activiteiten. <ol><li> Bereid een oplossing van 0,5-2,0 mg J591-DFO in 200 gl 0,5 M HEPES buffer, pH 7,5. </li><li> Pipetteer een hoeveelheid van de &lt;sup&gt; 89 Zr 4+ stockoplossing (meestal geleverd in 1,0 M oxaalzuur) die overeenkomt met 1,0-6,0 mCi (37-222 MBq) in een 2 ml plastic schroefdop microcentrifugebuisje. Pas het volume van deze oplossing tot een totaal 300 ul met behulp van 1,0 M oxaalzuur. </li><li> Stel de pH van de 89 Zr 4+ oplossing 6,8-7,5 met 1,0 M Na 2 CO 3. Begin met het toevoegen van 250 ui van 1,0 M Na 2 CO 3 tot 89 Zr 4+ oplossing en alsnog kleinere (&lt;10 pi) aliquots van base om de gewenste pH te bereiken. </li><li> Voeg de gewenste hoeveelheid pH-ingestelde 89 Zr 4+ oplossing van het J591-DFO bereid in stap 2.1. </li><li> Controleer de pH van het radioactief reactiemengsel zodat deze binnen het gewenste bereik van 6,8-7,5 valt. </li><li> Incubeer de radioactief reactiemengsel gedurende 60 minuten bij kamertemperatuur op een verwarmingsblok roeren bij 350 rpm. </li><li> Na 60 min incubatie, het meten van het radiolabeling opbrengst van de reactie met radio-TLC. <ol><li> Hiertoe spot 1 uCi van het radioactief reactiemengsel op een silica geïmpregneerde TLC strip. Laat het monster te drogen, lopen de TLC met behulp van een eluens van 50 mM DTPA (pH 5,5) en het analyseren van de TLC strook met behulp van een radio-TLC scanner. 89 Zr 4+ gebonden aan de J591-DFO construct zal verschijnen op de oorsprong (V f &lt;0,1), terwijl de gratis 89 Zr 4+ kationen worden gechelateerd door DTPA en elueren met het oplosmiddel voorzijde (R f&gt; 0,9). </li><li> Bereken de radiolabeling opbrengst van de reactie door integratie van de radiochromatogram, het gebied verdelen onder de curve van Rf 0,0-0,1 door het totale gebied onder de curve en met 100 te vermenigvuldigen. </li></ol></li><li> Als de radiolabeling rendement voldoende (typisch een theoretische specifieke activiteit van&gt; 2 mCi / mg), Schrik de reactie af met 5 ui 50 mM DTPA, pH 5,5. </li><li> Zuiveren het resulterende immunoconjugaat USING voorverpakte disposable size exclusion ontzoutingskolom met een 50.000 molecuulgewicht cut-off met een eluens van ofwel 0,9% steriele zoutoplossing met 5 mg / ml gentisinezuur of 0,25 M natriumacetaat (pH 5,5) met 5 mg / ml gentisinezuur . Deze stap zal een 2 ml oplossing van het voltooide 89 Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugaat opleveren. </li><li> Na zuivering, controleren de radiochemische zuiverheid van de 89 Zr-DFO-J591 middels radio-TLC zoals beschreven in stap 2.7. </li><li> Bereken de totale radiolabeling opbrengst van de reactie van de hoeveelheid activiteit aanvankelijk de antilichaamoplossing toegevoegd door de hoeveelheid radioactiviteit die met het gezuiverde 89 Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugaat delen. </li><li> Bereken de uiteindelijke specifieke activiteit van de hoeveelheid activiteit die met het gezuiverde 89 Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugaat de oorspronkelijke massa van DFO-J591 in de radiolabeling reactie verdelen. </li><li> Als een hogere concentratie gewenst, concentreren the 89 Zr-DFO-J591-oplossing met behulp van een centrifugaal filter unit met een 50.000 moleculair gewicht cut-off. OPMERKING: De gentisinezuur in de laatste zuiveringsstap een radio-beschermende gebruikt om de degradatie van het antilichaam die worden veroorzaakt door radiolyse 46 Hoewel het opslaan van de 89 Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugaat gedurende 48 uur bij 4 ° C. mogelijk is, wordt het niet aanbevolen. Als de radioimmunoconjugaat wordt opgeslagen, gebruikt 0,25 M natriumacetaat (pH 5,5) met 5 mg / ml gentisinezuur als opslagbuffer om het risico van hypochloriet gemedieerde radiolyse minimaliseren. 47 </li></ol> 3. In vivo PET beeldvorming met 89 Zr-DFO-J591 LET OP: Net als in Protocol paragraaf 2, deze stap van het protocol heeft betrekking op de behandeling en manipulatie van radioactiviteit. Voordat u deze stappen onderzoekers moeten overleggen met Radiation Safety Department hun eigen instelling. Alle possible maatregelen moeten worden genomen om de blootstelling aan ioniserende straling te minimaliseren. <ol><li> In mannelijke athymische naakt muizen, subcutaan implantaat 5 x 10 6 LNCaP prostaatkankercellen en laat deze door te groeien naar een 100-150 mm 3 xenogreffe (3-4 weken na inenting). 44 </li><li> Verdun 89 Zr-DFO-J591 radioimmunoconjugaat tot een concentratie van 1,0 mCi / ml in 0,9% steriele zoutoplossing. </li><li> Injecteer 200 ui 89 Zr-DFO-J591 (200 uCi; 7,4 MBq). In de laterale staartader van de xenograft-dragende muizen 48 </li><li> Op het gewenste beeldvormende tijdstip (bijvoorbeeld 12, 24, 48, 72, 96 of 120 uur na injectie), verdoven de muis met een 2% isofluraan: zuurstof gasmengsel. </li><li> Plaats de muis op het bed van het kleine dier PET-scanner en anesthesie onderhouden tijdens de scan met een 1% isofluraan: zuurstof gasmengsel. Voorafgaand aan het plaatsen van het dier op de scanner bed, controleren verdoving met behulp van de teen-snuifje methode en apply oogzalf om de ogen van de muis om te drogen tijdens de anesthesie te voorkomen. 49 </li><li> Het verwerven van de PET gegevens voor de muis via een statische scannen met een minimum van 40 miljoen samenvallende gebeurtenissen met een energie raam van 350-700 keV en toeval timingvenster 6 nsec. 50 </li><li> Na het voltooien van de overname van het beeld, hoeft de muis niet onbeheerd achter en plaats het niet in een kooi met andere muizen tot hij weer bij bewustzijn is. </li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Tijdens de constructie, radiolabeling en beeldvorming van 89 Zr-DFO-gelabeld radioimmunoconjugaten algemeen een tamelijk eenvoudige procedure, is het belangrijk om een aantal belangrijke overwegingen in gedachten tijdens elke stap van het proces houden. Bijvoorbeeld, misschien wel de meest waarschijnlijke bron van zorg tijdens de vervoeging stap van de procedure is de samenvoeging van het antilichaam tijdens de conjugatiereactie. Dit probleem is meestal een product van slechte menging van de conjugatie reacti...

Vanwege hun opmerkelijke gevoeligheid, affiniteit en selectiviteit zijn antilichamen lang beschouwd als veelbelovend vectoren voor de afgifte van radio-isotopen kankercellen. Echter hun toepassing in positron emissie tomografie (PET) beeldvorming belemmerd door het ontbreken van een geschikte positron emitterende radio-isotopen voor etikettering. 1-3 Eén van de belangrijkste overwegingen bij het ​​ontwerpen van radioimmunoconjugaten is matching de fysieke verval half- levensduur van de radio-isotoop voor de in vivo farmacokinetiek van het antilichaam. Meer specifiek antilichamen vaak relatief lange meerdaagse biologische halfwaardetijden en dienen derhalve met radioisotopen met vergelijkbare fysische halfwaardetijd worden gelabeld. Voor PET-imaging-toepassingen, hebben antilichamen oudsher radioactief gemerkt geweest met 64 Cu (t 1/2 = 12,7 uur), 86 Y (t 1/2 = 14,7 uur), of 124 I (t 1/2 = 4.18 d). 4, 5 Echter, elk vandeze radio-isotopen bezit belangrijke beperkingen die hun geschiktheid voor klinische beeldvorming belemmeren. Terwijl radioimmunoconjugaten gelabeld met 86 Y en 64 Cu veelbelovend preklinische onderzoeken hebben aangetoond, zowel isotopen bezitten de fysische halfwaardetijd te korte effectief voor beeldvorming bij de mens zijn. 124 I daarentegen een bijna ideale fysische halfwaardetijd beeldvorming met antilichamen, maar het is duur en heeft suboptimale verval eigenschappen die leiden tot relatief lage resolutie ziektebeelden. Bovendien kan 124-gemerkte radioimmunoconjugaten gelden dehalogenering in vivo, een proces dat tumor-tot-achtergrond activiteit verhoudingen kunnen verlagen. 6,7 De rit naar een positron emitterende radio-isotoop te verdringen 64 Cu, 86 Y vinden, en 124 ik in radioimmunoconjugaten heeft de recente stijging van onderzoek aangewakkerd op 89 Zr-gelabelde antilichamen. 8-12 THij reden voor de komst van 89 Zr is eenvoudig: het radiometaal bezit bijna ideaal chemische en fysische eigenschappen voor gebruik in diagnostische PET radioimmunoconjugaten 13 89 Zr wordt geproduceerd via de 89 Y (p, n) 89 Zr reactie op een cyclotron met een. commercieel verkrijgbaar en 100% natuurlijk voorkomende 89 Y doel. 14,15 De radiometaal een positron opbrengst van 23%, vervalt met een halfwaardetijd van 78,4 uur en zendt positronen met relatief lage energie van 395,5 keV (figuur 1). 13,16,17 Het is belangrijk op te merken dat 89 Zr geeft ook een hoge energie 909 keV γ-ray 99% rendement. Hoewel deze emissie niet energetisch bemoeien met de uitgezonden 511 keV fotonen, is het nodig extra aandacht met betrekking tot transport, handling, en dosimetrie. Ondanks dit voorbehoud kan bederf eigenschappen uiteindelijk dat 89 Zr niet alleen een gunstiger half-leven voor beeldvorming met antilichamen dan 86 Y en 64 Cu maar kunnen ook hogere resolutie beelden dan 124 I, die positronen uitzendt met hogere energieën van 687 en 975 keV en een aantal fotonen met energieën in 100-150 keV van de 511 keV-positron gemaakt fotonen. 13 Voorts, 89 Zr is ook veiliger te hanteren, minder duur om te produceren, en residualizes in tumoren effectiever dan de radioactieve tegenhanger. 18,19 Een mogelijke beperking van 89 Zr is dat het niet hoeft een therapeutisch isotopoloog, bijvoorbeeld 86 Y (PET) vs. 90 Y (therapie). Dit voorkomt de opbouw van chemisch identieke, surrogaat beeldvormende middelen die kunnen worden toegepast als dosimetrische scout hun therapeutische tegenhangers. Dat gezegd hebbende, onderzoeken suggereren dat 89 Zr-gelabelde antilichamen hebben potentieel als beeldvorming surrogaten voor 90 Y- en 177 Lu-gelabeld immuunconjugaten.20,21 Vanuit chemisch oogpunt, een groep IV metaal, 89 Zr bestaat als een 4 kation in waterige oplossing. De Zr 4+ ion is zeer geladen, relatief groot (effectieve ionenradius = 0,84 Å), en kan worden aangemerkt als een &quot;harde&quot; catie. Als zodanig vertoont een voorkeur voor liganden dragen maximaal acht harde, anionisch zuurstof donoren. Gemakkelijk de meest voorkomende chelator gebruikt in 89 Zr-gemerkte radioimmunoconjugaten is desferrioxamine (DFO), een siderophore afgeleide acyclische chelator dragende drie hydroxamaat groepen. De ligand stabiel coördineert de Zr 4+ kation snel en zuiver bij kamertemperatuur in biologisch relevante pH, en het verkregen Zr-DFO complex blijft stabiel in de loop van meerdere dagen in zoutoplossing, bloed serum, en volbloed. 22 Computational studies suggereren sterk dat DFO vormt een hexagecoördineerd complex met Zr 4+ waarbij het ​​metaalcentrum gecoördineerd om de drie neutral en drie anionische zuurstof donors van het ligand en twee exogene water liganden (Figuur 2). 23,24 De in vivo gedrag van radioimmunoconjugaten gebruik 89 Zr-DFO conjugatie scaffold is over het algemeen uitstekend. In sommige gevallen, beeldvorming en acute biodistributie studies hebben verhoogde activiteit in de botten van muizen geïnjecteerd met 89 Zr-gemerkte antilichamen, gegevens blijkt dat de osteophilic 89 Zr 4+ kation vrijkomt uit de chelator in vivo en vervolgens Hermineraliseert geopenbaard in het bot. 25 Onlangs is een aantal onderzoeken naar de ontwikkeling van nieuwe 89 Zr 4+ chelatoren bijzonder liganden met acht zuurstof donors zijn verschenen in de literatuur. 24,26,27 echter momenteel DFO is de meest toegepaste chelator in 89 Zr gelabeld radioimmunoconjugaten met een ruime marge. Een verscheidenheid van verschillendebioconjugatie strategieën zijn gebruikt om DFO hechten aan antilichamen, waaronder bioorthogonal click chemie, de reactie van thiol reactieve DFO constructen met cysteïnen in het antilichaam en de reactie van geactiveerde ester dragende DFO constructen met lysinen in het antilichaam. 4,28- 30 Gemakkelijk de meest algemene strategie, echter is het gebruik van een isothiocyanaat dragende derivaat van DFO DFO-NCS (figuur 2). 22 Deze handel verkrijgbaar bifunctionele chelator robuust en betrouwbaar vormt stabiele, covalente bindingen thioureum met de lysinen van de antilichaam (Figuur 3). De afgelopen jaren zijn diverse 89 Zr-DFO-gelabelde radioimmunoconjugaten gerapporteerd in de literatuur. Preklinische onderzoeken bijzonder overvloedig zijn, die antilichamen variëren van de meer bekende cetuximab, bevacizumab, en trastuzumab meer esoterische antilichamen zoals T-CD105 targetingRC105 en fPSA-targeting 5A10. 30-36 Meer recent, een klein aantal van de vroege fase van klinisch onderzoek met 89 Zr-DFO-gelabelde antilichamen naar voren zijn gekomen in de literatuur. Concreet groepen in Nederland hebben gepubliceerde studies in dienst 89 Zr-DFO-cmAb U36, 89 Zr-DFO-ibritumomabtiuxetan, en 89 Zr-DFO-trastuzumab. 21,32,37 Daarnaast is er een reeks andere klinische studies met 89 Zr-gelabelde radioimmunoconjugaten zijn momenteel aan de gang, met inbegrip van onderzoek hier in het Memorial Sloan Kettering Cancer Center met behulp van het PSMA-targeting 89 Zr-DFO-J591 voor prostaatkanker beeldvorming en de HER2-targeting 89 Zr-DFO-trastuzumab voor borstkanker beeldvorming. 23, 30 Bovendien, terwijl radiogelabelde antilichamen blijven de meest voorkomende 89 Zr-gemerkte radiofarmaceutica, het radiometaal ook steeds meer gebruikt met andere vectoren, zoals peptiden, proteïnen en nanomaterialen. 38-43 </sup&gt; De modulariteit van deze 89 Zr-DFO etikettering methodiek is een enorme aanwinst. Het repertoire van-biomarker targeting antilichamen is steeds groeiende, en de belangstelling voor het uitvoeren van in vivo PET beeldvorming met deze constructen wint steeds meer terrein. Hierdoor wij dat de ontwikkeling van gestandaardiseerde werkwijzen en protocollen het veld kunnen profiteren. Een uitstekende schriftelijke experimentele protocol voor DFO-NCS vervoeging en 89 Zr radiomerking is al gepubliceerd door Vosjan, et al. 22 We hebben het gevoel dat de visuele demonstratie die door dit werk verder zou kunnen helpen onderzoekers nieuw voor deze technieken. In het protocol bij de hand, zal het prostaatspecifiek membraan antigen gericht antilichaam J591 worden gebruikt als een modelsysteem illustreert (1) de bioconjugatie van de bifunctionele chelator DFO-isothiocyanaat met een antilichaam, (2) de radiosynthese en zuivering van de 89 Zr-DFO-mAb radioimmunoconjugaat,en (3) In vivo PET beeldvorming met 89 Zr-DFO-mAb radioimmunoconjugaat in een muismodel van kanker. 23,44,45

<table><tbody><tr><td>p-SCN-Bn-DFO</td><td>Macrocyclics</td><td>B-705</td><td>Bewaar bij -80 &deg;C</td></tr><tr><td>[89Zr]Zr-oxalate</td><td>Diverse, inclusief Perkin-Elmer</td><td></td><td>Opgelet: Radioactief materiaal</td></tr><tr><td>PD-10 Desalting Columns</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0851-01&nbsp;</td><td>Bewaar bij kamertemperatuur</td></tr><tr><td>Amicon Ultra-4 Centrifugal Filter Units</td><td>EMD Millipore</td><td>UFC805024</td><td>Bewaar bij kamertemperatuur</td></tr><tr><td>Silica Gel Impregnated RadioTLC Paper</td><td>Agilent Technologies</td><td>SGI0001</td><td>Snijd in stroken van 0,5 cm breed</td></tr></tbody></table>

de bioconjugatie en radiosynthese van<sup&gt; 89</sup&gt; zr-dfo-gemerkte antilichamen

The Bioconjugation and Radiosynthesis of 89Zr-DFO-labeled Antibodies

De uitzonderlijke affiniteit, specificiteit en selectiviteit van antilichamen maken ze bijzonder aantrekkelijk vectoren voor tumor gerichte PET radiofarmaca. Door hun meerdaagse biologische halfwaardetijd, moet antilichamen met positron emitterende radionucliden met relatief lange fysieke verval halfwaardetijden worden gelabeld. Traditioneel, de positron emitterende isotopen 124 I (t 1/2 = 4,18 d), 86 Y (t 1/2 = 14,7 uur) en 64 Cu (t 1/2 = 12,7 uur) gebruikt om antilichamen te labelen PET beeldvorming. Meer recent is echter het veld is getuige een dramatische toename van het gebruik van de positron emitterende radiometaal 89 Zr in antilichamen gebaseerde PET beeldvorming. 89 Zr is een nagenoeg ideaal radioisotoop PET beeldvorming met immunoconjugaten, als het product heeft een fysische halveringstijd -leven (t 1/2 = 78,4 uur) die verenigbaar is met de in vivo farmacokinetiek van antilichamen en zendt een relatief lage energy positron dat hoge resolutie beelden produceert. Bovendien kunnen antilichamen ronduit worden gemerkt met 89 Zr behulp van de-siderofoor afgeleid chelator desferrioxamine (DFO). In dit protocol wordt het prostaatspecifiek membraan antigen gericht antilichaam J591 worden gebruikt als een modelsysteem illustreert (1) de bioconjugatie van de bifunctionele chelator DFO-isothiocyanaat met een antilichaam, (2) de radiosynthese en zuivering van 89 Zr- DFO-mAb radioimmunoconjugaat, en (3) In vivo PET beeldvorming met een 89 Zr-DFO-mAb radioimmunoconjugaat in een muismodel van kanker.

De eerste stap in dit protocol de vervoeging van DFO-NCS aan het antilichaam is meestal vrij robuust en betrouwbaar. In het algemeen kan de gezuiverde-chelator gemodificeerde immunoconjugaat verkregen in&gt; 90% opbrengst en met 3 molaire equivalenten van DFO-NCS in de eerste conjugatiereactie een mate-van-labeling van de chelator van ongeveer 1.0-1.5 DFO verkregen / mAb. De 89 Zr radiomerking en zuivering stappen van de procedure zijn eveneens eenvoudig. Bij de concentraties die in het bovenstaande protocol,...

Vanwege zijn meerdaagse radioactieve halfwaardetijd en gunstige vervaleigenschappen, is het positron-emitterende radiometaal 89Zr uitermate geschikt voor gebruik in antilichaamgebaseerde radiofarmaca voor PET-beeldvorming. In dit protocol worden de bioconjugatie, radiosynthese en preklinische toepassing van 89Zr-gelabelde antilichamen beschreven.

De bioconjugatie en radiosynthese van<sup&gt; 89</sup&gt; Zr-DFO-gemerkte antilichamen

The exceptional affinity, specificity, and selectivity of antibodies make them extraordinarily attractive vectors for tumor-targeted PET ...

Het algemene doel van deze procedure is om een radio-immunoconjugaat te synthetiseren dat gelabeld is met zirconium 89 DFO en de prestaties hiervan in vivo te evalueren. Dit wordt bereikt door eerst de chelator deferoxamine aan het antilichaam te koppelen. De tweede stap is het radiolabelen van het antilichaam-DFO-conjugaat met zirconium 89.Vervolgens wordt het radio-immunoconjugaat gezuiverd met behulp van grootte-uitsluitingschromatografie. De laatste stap is het uitvoeren van positronemissietomografie of PET-imaging bij kleine dieren in een muismodel voor kanker. Uiteindelijk wordt PET-imaging gebruikt om beelden te verkrijgen van de in vivo distributie van het met zirconium 89 gelabelde radio-immunoconjugaat.Over het algemeen kunnen personen die nieuw zijn met deze methode problemen ondervinden, omdat de pH-instelling van de zirconium 89-oxalaatoplossing enigszins lastig kan zijn. Ik zal deze procedure demonstreren samen met Dalia Abdi, een laborant in ons laboratorium. Bereid eerst een oplossing van 2 tot 5 mg/mL J 5 91 voor in 1 mL 0,5 M HEPes-buffer in een 1,7 mL microcentrifugebuis; los D-F-O-N-C-S op in droge DMSO bij een concentratie tussen 5 en 10 mM, en soniceer en vort

the-bioconjugation-and-radiosynthesis-of-89zr-dfo-labeled-antibodies

Research

JoVE Journal

Chemistry

Scheikunde

This video describes the technique of pretargeted radioimmunotherapy or PRIT, in which immunoconjugates followed by radioligands are administered for treating tumors. This radioimmunotherapy reduces radiation doses to healthy tissues and utilizes radionuclides with very low half-lives incompatible with antibody-based vectors.

Pretargeted Radioimmunotherapy: A Method for Targeted Delivery of Therapeutic Radionuclides to Tumors

This video demonstrates a technique involving a radioimmunoconjugate for the in vivo imaging of a tumor in a mouse model. Upon injection of the radioimmunoconjugate, the antibodies of the conjugate bind to a specific membrane antigen on the cancer cells. The radiotracer of the conjugate emits positrons that interact with neighboring electrons to produce energy, which is detected by a positron emission tomography (PET) scanner to create an image of the tumor.

An In Vivo PET Imaging Technique to Detect Tumors in a Murine Model Using Radiolabeled Antibodies

De bioorthogonale inverse elektrone-vraag Diels-Alder cycloadditie is gebruikt om een effectieve en modulaire pretargeted PET-beeldvormingsstrategie voor kanker te creëren. In dit protocol worden de stappen van deze methodologie beschreven in de context van een modelsysteem dat gebruikmaakt van het op colorectale kanker gerichte antilichaam huA33 en een 64Cu-gelabelde radioligand.

Het benutten van de Bioorthogonal Inverse Electron Demand Diels-Alder Cycloadditiereacties voor Pretargeted PET Imaging

Een gedetailleerde procedure voor de synthese van een 125 I-gemerkt azide en het radioactief merken van dibenzocyclooctyne (DBCO) -groep geconjugeerd, 13-nm-sized goud nanodeeltjes met behulp kopervrij click reactie wordt beschreven.

Een geoptimaliseerde protocol voor de efficiënte Radioactief merken van Gold Nanodeeltjes met behulp van een<sup&gt; 125</sup&gt;-Gemerkte azide prosthetische groep

Hier beschrijven we een protocol voor het radiolabelen en in vivo testen van tridentaat 99mTc(I) chelaat-tetrazine afgeleiden voor pre-targeting en bioorthogonale chemie.

Voorbereiding en evaluatie van<sup&gt; 99m</sup&gt; Tc-gelabelde tridentaat Chelates voor Pre-targeting Met behulp Bioorthogonal Chemistry

Viral afkomstige peptiden gekoppeld aan antilichaam-geconjugeerde (ACs) is een aanpak die wint dynamiek als gevolg van het potentieel van het leveren van moleculaire payloads met verhoogde tumor cel accumulatie. Gebruik makend van gemeenschappelijke methoden voor evaluatie van peptide conjugatie, AC en lading intracellulaire accumulatie en tumor gericht op, helpt dit protocol onderzoekers tijdens de cruciale eerste ontwikkelingsfasen.

Eerste beoordeling van antilichaam-geconjugeerde bewerkt met virale afkomstige peptiden voor verhoging van cellulaire accumulatie en verbetering van de Tumor gericht op

Dit protocol beschrijft de synthese en de karakterisering van een trans- Cycloocteen (TCO)-gemodificeerde antilichaam en een 177Lu-geëtiketteerden tetrazine (Tz) radioligand voor pretargeted radioimmunotherapy (PRIT). Daarnaast geeft het het gebruik van deze twee constructies voor in vivo ook en longitudinale therapie studies in een lymfkliertest model van colorectal kanker.

Pretargeted Radioimmunotherapy op basis van de Inverse Electron vraag Diels-Alder reactie

In dit protocol beschrijven we de synthese van PODS, een phenyoxadiazolyl methyl-sulfon gebaseerde reagens voor de site-selectieve bevestiging van cargos aan de thiolen van biomoleculen, met name antilichamen. Daarnaast beschrijven we de synthese en de karakterisering van een Peul-bevattende bifunctionele complexvormer en zijn geconjugeerde aan een model antilichaam.

Synthese en Bioconjugation van Thiol-reactieve reagentia voor de oprichting van Site-selectief bewerkt Immunoconjugates

Hier wordt een methode beschreven om de bindingsaffiniteit (KD) van radioactief gelabelde antilichamen tegen geïmmobiliseerde antigenen te bepalen. KD is de evenwichtsdissociatieconstante die kan worden bepaald uit een verzadigingsbindingsexperiment door de totale, specifieke en niet-specifieke binding van een radioactief gelabeld antilichaam in verschillende concentraties aan zijn antigeen te meten.

Bepaling van bindingsaffiniteit (KD) van radioactief gelabelde antilichamen tegen geïmmobiliseerde antigenen

Hier wordt een protocol gepresenteerd voor het radioactief labelen van cellen met een positronemissietomografie (PET) radio-isotoop, 89 Zr (t1/2 78,4 uur), met behulp van een kant-en-klaar radioactief labelend synthon, [89 Zr]Zr-p-isothiocyanatobenzyl-desferrioxamine ([89Zr]Zr-DBN). Radiolabeling van cellen met [89Zr]Zr-DBN maakt niet-invasieve tracking en beeldvorming mogelijk van toegediende radioactief gelabelde cellen in het lichaam met PET tot 7 dagen na toediening.

Positronemissietomografie Beeldvorming van celhandel: een methode voor celradiolabeling

Dit werk beschrijft de geautomatiseerde productie van maximaal 1,7 GBq van [68Ga]Ga-FAPI-46 op de iPHASE MultiSyn synthesizer voor PET-beeldvorming van fibroblast activatie-eiwit.

Een geautomatiseerde radiosynthese van [68Ga]Ga-FAPI-46 voor routinematig klinisch gebruik

Leer de bioconjugatie en radiosynthese van zirkonium-89-DFO-gemerkte antilichamen voor PET-beeldvorming in oncologisch onderzoek. Dit protocol toont de zuivering en preklinische toepassing van deze radio-immunoconjugaten.

De bioconjugatie en radiosynthese van

Meer video's verkennen