Met behulp van micro-computertomografie voor de evaluatie van de ontwikkeling van tumoren en follow-up van de respons op de behandeling in een muismodel van longkanker

Het algemene doel van deze video is om de voordelen van het gebruik van Micro CT te identificeren voor de beoordeling van tumorontwikkeling, behandelingsrespons en andere experimenten in muismodellen van longkanker. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen op het gebied van longkanker bij het gebruik van muismodel, zoals wanneer tumoren beginnen te groeien, de groeisnelheid en de reactie op therapeutische interventies. Deze techniek stelt ons in staat om te identificeren welke dieren moeten worden uitgesloten van ons onderzoek, terwijl we realtime veranderingen in hun tumorgrootte detecteren.

De techniek bespaart tijd en moeite en vermindert aanzienlijk het aantal muizen per studiegroep. Open vanuit de Micro-CT-scanner de computerbediening en open de softwarepakket genaamd RMCT2"Begin vervolgens met de opwarmcyclus. Bereid vervolgens de scanner-steun voor de muis voor door deze in plastic te wikkelen.

Vervolgens verdooft u de muis met isofluraan en bevestigt u dat deze verdoofd is met een huidpin. Een zachte prik van een kleine huidplooi is voldoende. Breng vervolgens een oftalmische zalf aan om droge hoornvliezen te voorkomen.

Plaats nu de muis met de rug naar boven op de steun. Houd het hoofd van de muis vast en trek het lichaam naar beneden vanaf de onderste ledematen om het lichaam symmetrisch te strekken en recht te trekken. Leid vervolgens het anesthesiegas naar de kamer en plaats de gasslang naast de neus van het dier om continu anesthesie toe te dienen.

Wikel vervolgens de muis en de steun in plastic om de muis op zijn plaats te houden. Zorg ervoor dat de muis stevig zit, want elke beweging of draaiing tijdens de scan resulteert in wazig, onbruikbaar beeld. Sluit nu de kamer, stel het systeem in op 90 kilovolt en 160 microampère, en stel de scantijd in op 4,5 minuten.

Stel het beeldbereik in op 24 millimeter. Stel vervolgens het systeem in op synchrone modus voor hartslagen. Maak nu een nieuwe map in de database voor de nieuwe afbeeldingen en start de scan.

Nadat de scan is voltooid, verplaatst u de muis naar een lege kooi en observeert u deze totdat deze bijkomt. Plaats de muis niet terug bij zijn huisgenoten totdat deze volledig is hersteld van de anesthesie. Open de seriële micro CT-beeldbestanden in image J.Blader door alle afbeeldingen van elke muis van de nek tot de buik of vice versa.

Gebruik nu scans van naïeve wild-type muizen om de dichtheid van verschillende gebieden en normale anatomische structuren in de borstkas te identificeren. Scroll omhoog naar de witachtige buikvliezen en het diafragma en identificeer het gebied door de borstkas en tot aan de nek. Let op de bottenachtige borstvijverlandmerken, het borstbeen en de wervelkolom en ribben.

Identificeer vervolgens het hart aan de voorkant van de borstkas en de belangrijkste bloedvaten in de buurt van het hart en in het mediastinum. Het tracheale lumen is een kleine donkere cirkel op het niveau van de nek en de bovenste borstkas, die zich splitst in de rechter en linker hoofdbronchiën, en vervolgens verder vertakt in steeds kleinere bronchiën. Merk op dat elke bronchus nauw verbonden is met twee of drie bloedvaten.

Begin nu met het onderzoeken van de scans van niet-geïnduceerde DT-muizen en identificeer het voorkomen van eventuele afwijkingen. Sluit muizen met abnormale pre-inductielondschaduwen, zoals knobbeltjes of emfysemauze bultjes, uit van het experiment. Gebruik voor dit experiment muizen met normale longscans die FGF9-geïnduceerde tumoren kunnen produceren.

Om de tumoren te induceren, geef doxycycline in hun voer met 200 delen per miljoen. Voer na 10 weken een tweede Micro-CT-scan uit van deze muizen om de ontwikkeling van tumorknobbeltjes in hun longen te bevestigen. Verdeel vervolgens de muizen in twee groepen.

Gebruik de FGFR-blokker AZD4547 bij één groep via een maagsonde. Doe dit gedurende 6 dagen per week gedurende 10 weken. Geef de andere groep een placebo.

Volg de veranderingen in de nodulaire schaduwen op door een derde scan uit te voeren vier tot vijf weken na de behandeling. Later, aan het einde van de volledige 10 weken behandeling, voer een vierde scan uit. Identificeer vervolgens dynamische veranderingen in de tumorknobbeltjes, als reactie op de behandeling, door vergelijkbare posities binnen de seriële scanafbeeldingen op de verschillende tijdstippen te vergelijken.

Zoek naar het verschijnen of verdwijnen van eventuele abnormale schaduwen. Het is van cruciaal belang om correct te oriënteren op dezelfde anatomische positie om de resultaten te interpreteren. Gebruik gemakkelijk te identificeren anatomische landmerken binnen de borstkas, zoals de luchtpijp, zijn vertakking, de rechter en linker hoofdbronchiën, de aorta en grote bloedvaten en het diafragma.

Vanwege lichaamsgewichten zijn botten minder nuttige landmerken. Nadat u een muis hebt gedood en toegang hebt gekregen tot zijn nek en longen, snijdt u het hart en de thymusklier weg. Plaats een pincet achter de luchtpijp om deze te scheiden van de slokdarm.

Canuleer vervolgens de luchtpijp met een G24-canule en zet de canule vast door een hechtdraad rond de inter-tracheale punt te knopen. Blaas nu op en fixeer de long met ijskoud 4%PFA via de canule met een kolom van 25 cm. Haal vervolgens de canule los en draai de knoop op de luchtpijp vast om PFA-lekkage te voorkomen.

Snijd nu de bovenste luchtpijp af, inclusief de bevestiging aan de larynx. En terwijl u aan de hechtdraad van de luchtpijp trekt, verwijdert u de luchtpijp en de longen van alle bevestigingen. Verwijder vervolgens de luchtpijp met de longen in blanco.

Plaats de weefsels in een 15 ml buis met 5 ml kamertemperatuur 4%PFA. Laat de longen overnacht in PFA voor volledige weefselpenetratie en fixatie. Verwerk vervolgens het weefsel zoals gewoonlijk.

Bij het pre-screenen van 8-12 weken oude DT-muizen voor deze studie, vertoonde ongeveer de helft longafwijkingen in de Micro-CT-scan, waardoor