Name: Een nieuwe techniek voor het genereren en Observing Chemiluminescence in een biologische instelling (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Ontdek een nieuwe intraoperatieve chemiluminescente beeldvormingstechniek met een rutheniumcomplex voor chirurgische toepassingen. Deze methode biedt een hogere signaal-ruisverhouding dan traditionele optische technieken.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs danken Prof. Jan Grimm en de heer Travis Shaffer voor hun nuttige discussies en de heer David Gregory voor het bewerken van het manuscript. Technische diensten van de MSK Animal Imaging Core Facility, gedeeltelijk ondersteund door NIH Cancer Center Support Grant P30CA008748-48, worden dankbaar erkend. De auteurs danken de NIH (K25 EB016673 en R21 CA191679, T.R. en 4R00CA178205-02, B.M.Z.), het MSK Center for Molecular Imaging and Nanotechnology (T.R.), de Tow Foundation (B.C.), en de National Science Foundation Integrative Graduate Education and Research Traineeship (IGERT 0965983 aan Hunter College voor B.C. en T.M.S.) voor hun genereuze steun. Het onderzoek gerapporteerd in deze publicatie werd ondersteund door financiering van de King Abdullah University of Science and Technology.

Ethiek statement: Alle in vivo dierexperimenten beschreven werden uitgevoerd volgens een goedgekeurd protocol en in het kader van de ethische richtlijnen van het Memorial Sloan Kettering Cancer Center (MSK) Institutional Animal Care en gebruik Comite (IACUC). 1. Bouw van een vernevelen Device <ol><li> Bevestig hout deel A (12,5 x 2,5 x 1,8 cm 3) rechtop in het midden van deel B (12,7 x 10,7 x 1,8 cm 3) met twee schroeven (4 x 25 mm 2). Attach hout deel C (11 x 2,5 x 1,8 cm 3) naar het midden van deel A (12,5 x 2,5 x 1,8 cm 3) via een schroef, zodanig dat een deel C (11 x 2,5 x 1,8 cm 3) nog verschuifbaar. Zie figuur 1. </li><li> Boor twee gaten door de onderste punt van de trekker verstuiver van een kunststof 3 oz mini spuit (D) en druk op een roestvrij stalen staaf (10 cm 1/16 &quot;steel) (E) tot twee lussen, een aan elke vorm zijde van de trekker. </li&gt; <li> Wikkel het onderste deel van de verstuiver met tape (F) aan de kabelbinders afglijden te voorkomen. Bevestig de spray fles om hout deel C (11 x 2,5 x 1,8 cm 3) met behulp van de twee plastic kabelbinders (28 cm) (G). </li><li> Snijd de 011 servomotor (I) en sluit deze met de losse kabels van de servo controle (H). Maak dan de servomotor naar de top van hout deel A (12,5 x 2,5 x 1,8 cm 3) met behulp van duct tape. </li><li> Bevestig een potlood (J) aan de servomotor hendel met de paperclip (K). Nauw sluit de buitenste delen van het potlood om de stalen staaf lussen met behulp van plastic bedekt twist draden (L) en zet de uiteinden van het potlood met duct tape. </li><li> Snijd de servomotor besturing magnetische connector (M) en sluit hem aan de luidsprekerkabel (N). Dan tape de servomotor controle-eenheid om hout deel B (12,7 x 10,7 x 1,8 cm 3). Snijd een w1 kabel met magnetische connectors doormidden en bevestig het ene deel naar het losse uiteinde van de koperen sPeaker kabel (1 m). Sluit de (magnetische) i2 tuimelschakelaar en p1 macht om de beschikbare w1-kabel en een 9V batterij. </li></ol> 2. Gevoeligheid Bepaling van de methode <ol><li> In een 1,5 ml microcentrifugebuis, worden de oplossingen van [Ru (bpy) 3] Cl 2 in omgekeerde osmose water (100 ui) in hoeveelheden van 260 pg (347 nmol), 52 ug (69 nmol), 26 ug (34 nmol) , 5 ug (6,9 nmol), 3 ug (3,5 nmol), 520 ng (694 pmol), 260 ng (347 pmol), 52 ng (69 pmol), 26 ng (34 pmol), 5 ng (6.9 pmol), en 3 ng (3,5 pmol). </li><li> Meng 100 pi van elk [Ru (bpy) 3] Cl2-oplossing met 100 ul van een waterige oplossing van ammonium cerium nitraat ((NH4) 2 Ce (NO 3) 6) in water (25 mM) op een microscoopglaasje. </li><li> Stel de acquisitie in de bioluminescentie lezer door het initialiseren van de imaging software. <ol><li> Meld u aan bij het gebruikersprofiel en kijk voor de acquiling bedieningspaneel. Klik op &quot;initialiseren&quot; en wacht tot het apparaat klaar is. </li><li> Kijk voor &quot;Imaging Mode&quot; en zorg ervoor dat &quot;Lichtende&quot; en &quot;Foto&quot; worden gecontroleerd en dat &quot;Fluorescent&quot; is aangevinkt. </li><li> Change &quot;Exposure Time&quot; instelling voor &quot;Lichtend&quot; tot 20 s. Stel de overige instellingen voor &quot;Lichtende&quot; als volgt: &quot;Binning&quot;: Medium; &quot;F / stop&quot;: 1; en &quot;Emission Filter&quot;: Open. NB: De belichtingstijden mogelijk moeten worden aangepast aan de instrumentatie en experimentele setting gebruikt, indien verschillend van de gepresenteerde setup. </li><li> Voor &quot;Foto&quot;, gebruikt u de volgende instellingen: &quot;Exposure Time&quot;: Auto; &quot;Binning&quot;: Medium; en &quot;F / stop&quot;: 8. Pas de &quot;Subject Hoogte&quot;, aldus beeldvorming target.Look voor de &quot;Field of View&quot; dropdown menu. De oorspronkelijke instelling is &quot;C.&quot; Veranderen in &quot;B&quot; (14 cm afstand tussen de cAmera en sample fase). </li></ol></li><li> Stel de vernevelaar door een microscopisch preparaat op een vel zwart papier constructie op de bodem van de imaging kamer te beschermen tegen het oxidatiemiddel. Meng 100 μLdroplet van [Ru (bpy) 3] Cl 2-oplossing met 100 ul van een waterige oplossing van (NH4) 2 Ce (NO 3) 6. Neem de groene doos draadkruis. <ol><li> Plaats de beeldvorming onderworpen aan de zwarte bouw document, zodat het interessegebied is in het midden van de groene lichtbak draadkruis op het monstertafel. Bereid de vernevelaar door het losmaken van de plastic spuitfles van de houten steun. Vul een oplossing van triethylamine (1: 3 water / ethanol) in de plastic reservoir en sluit deze de houten steun. </li><li> Plaats de vernevelaar in de bioluminescentie lezer en zorg ervoor dat het netsnoer is losgekoppeld van de vernevelaar snoer. Zorg ervoor dat de stroomschakelaaris op, de schakelaar uit is, en de rode LED brandt Plaats de vernevelaar zodanig dat de spray stroom gericht is naar het gebied van de rente op de beeldvorming onderwerp, terwijl het minimaliseren van het uitzicht obstructie van de camera naar de beeldvorming onderwerp door de sproeikop hoofd. </li><li> Plaats de kleine, zwarte stukken van de bouw papier over eventuele hot spots (bv, witte vlekken op microscopische dia&#39;s of injectieplaatsen) om ze te beschermen tegen spray. Plaats ten minste 40 cm van de vernevelaar afstandsbedieningskabel in de beeldvorming kamer, zodat het niet interfereert met de beeldvorming onderworpen, de vernevelaar of de magnetische deurgrendel. Sluit het afbeeldingssysteem deur. LET OP: De crosshair de grootte veranderen op basis van het &quot;Field of View&quot; instelling in &quot;Living Image;&quot; Zorg ervoor dat deze is ingesteld op &quot;B&quot;. </li></ol></li><li> Verwerven van een beeld door de inleiding van de imaging volgorde. Klik op &#39;Acquire &quot;in het&quot; Acquisition Control Panel. &quot; Op de eerste imaging lovertlingen, in te schakelen automatisch opslaan indien gewenst (aanbevolen) en kies een data-map. Negeer de &quot;Edit Imaging Labels&quot; dialoog tot het einde van de reeks. NB: De besturingssoftware geeft de acties van het instrument stap-voor-stap in real time. Na bereiding van de meting en het verplaatsen van de monstertafel op de juiste positie, opent de sluiter van de camera en telt de meettijd. De sluiter opening kan ook worden gehoord door een klikgeluid gegenereerd door de machine. </li><li> Als de sluiter opent, spuit drie uitbarstingen van een oplossing van triethylamine (1: 3 water / ethanol, 0,24 ± 0,04 ml per spuit burst) door het schakelen van de schakelaar driemaal chemiluminescentie genereren. NB: De sample fase zal bewegen tijdens de meting. Laat voldoende (minimaal 40 cm) kabel in het instrument om dit mogelijk te maken. Controleer of de oplossing te versproeien door de vernevelaar kan worden nagestreefd door de stijgbuis en dat er geen luchtbellen in de buis. Hebben verschillende reserve batteries de vernevelaar voor het geval dat nodig is. </li></ol> 3. In vivo beeldvorming Na Systemische injectie in de ader <ol><li> In een 1,5 ml microcentrifugebuis, bereiden 100 ui met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) oplossing die tussen 8 en 33 nmol van [Ru (bpy) 3] Cl2. Bereid een waterige oplossing van (NH4) 2 Ce (NO 3) 6 in water (25 mM) tegelijkertijd. </li><li> Intraveneus 100 ui [Ru (bpy) 3] Cl 2 in de staartader van gezonde muizen (n = 5). </li><li> Euthanaseren de muizen 10 minuten na de injectie via CO 2 stikken. <ol><li> Verwijder de huid met een Y-gesneden uit de romp en verwijder de ribbenboog in een U-vorm naar het hart en de longen bloot te leggen. Perfuseren de muizen door het snijden van een uitgang in het rechter atrium en het injecteren van 20 ml PBS door een 24 gauge naald in de linker ventrikel 18. Knip voorzichtig door de buikhuid en bloot de nieren en de lever. Snijd in de lengte door de organen om een ​​zichtbare cut te maken. </li></ol></li><li> Stel het verwerven zoals beschreven in stappen 2.3-2.6, met de volgende wijzigingen. <ol><li> Na grondig wassen van de vernevelaar kunststof reservoir, vullen met een oplossing van (NH4) 2 Ce (NO 3) 6 in water (25 mM) in plaats van triethylamine. NB: Het is belangrijk om grondig te spoelen de vernevelaar mondstuk na elk gebruik, omdat het kristalliseren (NH 4) 2 Ce (NO 3) 6 kan de spuitmond te vernietigen na een aantal toepassingen. </li></ol></li><li> Gebruik het gehele dier of orgaanmonsters voor beeldvorming. <ol><li> Voor de hele buik imaging, plaatst u de muis karkas met de open buik geconfronteerd met de camera en het hoofd wijzend naar de achterkant van het instrument. Centreer het orgel af te beelden (bv, lever of nier) in het groene lichtbak crosshair. </li><li> Fof individuele orgel beeldvorming en kwantificatie, verwijder de muis van de beeldvorming instrument en speld het naar beneden. Uitgaande van de reeds geopende lichaamsholte te snijden de inwendige organen (bijvoorbeeld nier, lever, longen, spieren, milt, hersenen en hart). Snijd door de achterpoot huid om spierweefsel accijnzen. Open voorzichtig de schedel met een scalpel aan de hersenen te snijden. <ol><li> Indien het orgaan van belang is lever, nier en milt, snijd alle organen in de helft in de lengte, leg elk orgaan op een petrischaal of een stuk van zwarte bouw papier. </li></ol></li><li> Volg de procedure in stappen 2.3-2.6 om de relatieve emissie van de chemiluminescente tracer voor enige organen vast beschreven. </li></ol></li></ol> 4. In vivo beeldvorming van de lymfeklieren <ol><li> Bereid 10 pi van een PBS-oplossing die 80 nmol [Ru (bpy) 3] Cl2. Bereid een waterige oplossing van (NH4) 2 Ce (NO 3) 6 in water (25 mM) tegelijkertijd. </li><li> Injecteer 10 pi van de oplossing subdermaal in de achterpoot van gezonde muizen (n = 5). Als negatieve controle, injecteer de contralaterale poot met 10 pi zuivere PBS. Offer de muizen via CO 2 stikken 15 minuten na de injectie. Verwijder het vel op beide achterpoten aan de lymfe kanalen bloot aan de popliteale lymfeknopen. </li><li> Stel het verwerven zoals beschreven in stap 3.4. </li><li> Verwijder de popliteale lymfeknopen uit beide achterpoten, halveer ze en te spuiten met oxidatiemiddel op een petrischaal, zoals eerder beschreven (stap 3.5.3), ten behoeve van kwantificering. </li></ol>

<ol><li>Fong, Y., Giulianotti, P. C., Lewis, J., Koerkamp, B. G., Reiner, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFong%2C+Y+%22Imaging+and+Visualization+in+The+Modern+Operating+Room%3A+A+Comprehensive+Guide+for+Physicians%22">Imaging and Visualization in The Modern Operating Room: A Comprehensive Guide for Physicians</a>. , Springer. (2015).</li>
<li>Nguyen, Q. T., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence-guided+surgery+with+live+molecular+navigation+-+a+new+cutting+edge%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Fluorescence-guided surgery with live molecular navigation - a new cutting edge.</a> Nat. Rev. Cancer. 13 (9), 653-662 (2013).</li>
<li>Weissleder, R., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+in+the+era+of+molecular+oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Imaging in the era of molecular oncology.</a> Nature. 452, 580-589 (2008).</li>
<li>Heller, S., Zanzonico, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+probes+and+intraoperative+gamma+cameras%5BTitle%5D)+AND+%22Semin.+Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Nuclear probes and intraoperative gamma cameras.</a> Semin. Nucl. Med. 41 (3), 166-181 (2011).</li>
<li>van Dam, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraoperative+tumor-specific+fluorescence+imaging+in+ovarian+cancer+by+folate+receptor-%CE%B1+targeting%3A+first+in-human+results%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Intraoperative tumor-specific fluorescence imaging in ovarian cancer by folate receptor-α targeting: first in-human results.</a> Nat. Med. 17 (10), 1315-1319 (2011).</li>
<li>Zavaleta, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Raman-based+endoscopic+strategy+for+multiplexed+molecular+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U+S+A%22%5BJournal%5D)">A Raman-based endoscopic strategy for multiplexed molecular imaging.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. 110 (25), E2288-E2297 (2013).</li>
<li>Harmsen, S., Bedics, M. A., Wall, M. A., Huang, R., Detty, M. R., Kircher, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rational+design+of+a+chalcogenopyrylium-based+surface-enhanced+resonance+Raman+scattering+nanoprobe+with+attomolar+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Commun%22%5BJournal%5D)">Rational design of a chalcogenopyrylium-based surface-enhanced resonance Raman scattering nanoprobe with attomolar sensitivity.</a> Nat. Commun. 6, 1-9 (2015).</li>
<li>Thorek, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positron+Lymphography%3A+Multimodal%2C+High-Resolution%2C+Dynamic+Mapping+and+Resection+of+Lymph+Nodes+After+Intradermal+Injection+of+18F-FDG%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl.+Med%22%5BJournal%5D)">Positron Lymphography: Multimodal, High-Resolution, Dynamic Mapping and Resection of Lymph Nodes After Intradermal Injection of 18F-FDG.</a> Nucl. Med. 53 (9), 1438-1445 (2012).</li>
<li>Thorek, D. L. J., Riedl, C. C., Grimm, J. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24078721">Clinical Cerenkov Luminescence Imaging of 18F-FDG.</a> Nucl. Med. 55 (1), 95-98 (2014).</li>
<li>Gross, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioluminescence+imaging+of+myeloperoxidase+activity+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Bioluminescence imaging of myeloperoxidase activity in vivo.</a> Nat. Med. 15 (4), 455-461 (2009).</li>
<li>Lee, J. -J., White, A. G., Rice, D. R., Smith, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+using+polymeric+nanoparticles+stained+with+near-infrared+chemiluminescent+and+fluorescent+squaraine+catenane+endoperoxide%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Commun%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging using polymeric nanoparticles stained with near-infrared chemiluminescent and fluorescent squaraine catenane endoperoxide.</a> Chem. Commun. 49 (29), 3016-3018 (2013).</li>
<li>Lee, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+hydrogen+peroxide+with+chemiluminescent+nanoparticles%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Mater%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of hydrogen peroxide with chemiluminescent nanoparticles.</a> Nat. Mater. 6 (10), 765-769 (2007).</li>
<li>Baumes, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((thermally+activated%2C+near-infrared+chemiluminescent+dyes+and+dye-stained+microparticles+for+optical+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Chem%22%5BJournal%5D)">thermally activated, near-infrared chemiluminescent dyes and dye-stained microparticles for optical imaging.</a> Nat. Chem. 2 (12), 1025-1030 (2010).</li>
<li>Siraj, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence%2C+Phosphorescence%2C+and+Chemiluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Fluorescence, Phosphorescence, and Chemiluminescence.</a> Anal. Chem. 88 (1), 170-202 (2016).</li>
<li>Hercules, D. M., Lytle, F. E. <a target="_blank" href="http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ja00972a052">Chemiluminescence from Reduction Reactions.</a> Am. Chem. Soc. 88 (20), 4745-4746 (1966).</li>
<li>Kerr, E. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/266918014_Annihilation_Electrogenerated_Chemiluminescence_of_Mixed_Metal_Chelates_in_Solution_Modulating_Emission_Colour_by_Manipulating_the_Energetics">Annihilation electrogenerated chemiluminescence of mixed metal chelates in solution: modulating emission colour by manipulating the energetics.</a> Chem. Sci. 6, 472-479 (2015).</li>
<li>Montalti, M., Credi, A., Prodi, L., Gandolfi, M. T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMontalti%2C+M+%22Handbook+of+Photochemistry+3rd+Ed%22">Handbook of Photochemistry 3rd Ed</a>. , CRC Press Taylor & Francis Group. Boca Raton, FL, USA. 379-404 (2006).</li>
<li>Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whole+Animal+Perfusion+Fixation+for+Rhodents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Whole Animal Perfusion Fixation for Rhodents.</a> J. Vis. Exp. (65), e3564(2012).</li>
<li>Büchel, G. E., et al. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Near-infrared+intraoperative+chemiluminescent+imaging">Near-infrared intraoperative chemiluminescent imaging.</a> ChemMedChem. , (2016).</li>
<li>Ntziachristos, V., Ripoll, J., Wang, L. V., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Looking+and+Listening+to+Light%3A+the+Evolution+of+Whole-Body+Photonic+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Looking and Listening to Light: the Evolution of Whole-Body Photonic Imaging.</a> Nat. Biotechnol. 23, 313-320 (2005).</li>
<li>Koch, J. H., Gyarfas, E. C., Dwyer, F. P. <a target="_blank" href="http://www.publish.csiro.au/bi/BI9560371">Biological Activity of Complex Ions Mechanism of Inhibition of Acetylcholinesterase.</a> Austral. J. Biol. Sci. 9 (3), 371-381 (1956).</li>
<li>Juris, A., Balzani, V., Barigelletti, F., Campagna, S., Belser, P., Zelewsky, A. V. <a target="_blank" href="https://yoon.chem.wisc.edu/sites/yoon.chem.wisc.edu/files/Rubpy2.pdf">Ru(II) polypyridine complexes: photophysics, photochemistry, electrochemistry, and chemiluminescence.</a> Coord. Chem. Rev. 84, 85-277 (1988).</li>
<li>Knoll, J. D., Turro, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+and+utilization+of+ruthenium+and+rhodium+metal+complex+excited+states+for+photoactivated+cancer+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Coord.+Chem.+Rev%22%5BJournal%5D)">Control and utilization of ruthenium and rhodium metal complex excited states for photoactivated cancer therapy.</a> Coord. Chem. Rev. 282, 110-126 (2015).</li>
<li>Haley, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacology+and+toxicology+of+the+rare+earth+elements%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharm.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pharmacology and toxicology of the rare earth elements.</a> J. Pharm. Sci. 54 (5), 663-670 (1965).</li>
<li>Siekierski, S., Mioduski, T., Salomon, M. <a target="_blank" href="https://srdata.nist.gov/solubility/IUPAC/SDS-13/SDS-13.pdf">IUPAC Commission on Solubility Data. Solubility Data Series. Vol 13. Scandium, Yttrium, Lanthanum, and Lanthanide Nitrates</a>. , Pergamon Press. (1983).</li>
<li>Reiner, T., Jantke, D., Marziale, A. N., Raba, A., Eppinger, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metal-Conjugated+Affinity+Labels%3A+A+New+Concept+to+Create+Enantioselective+Artificial+Metalloenzymes%5BTitle%5D)+AND+%22ChemistryOpen%22%5BJournal%5D)">Metal-Conjugated Affinity Labels: A New Concept to Create Enantioselective Artificial Metalloenzymes.</a> ChemistryOpen. 2, 50-54 (2013).</li>
<li>Zanarini, S., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/231643557_Synthesis_and_Electrochemiluminescence_of_a_Rubpy3-Labeled_Coupling_Adduct_Produced_on_a_Self-Assembled_Monolayer">Synthesis and Electrochemiluminescence of a Ru(bpy)3-Labeled Coupling Adduct Produced on a Self-Assembled Monolayer.</a> J. Phys. Chem. C. 112 (8), 2949-2957 (2008).</li>
<li>Liu, R., Lv, Y., Hou, X., Yang, L., Mester, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Quantitation+Using+Ru-NHS+Ester+Tagging+and+Isotope+Dilution+High-Pressure+Liquid+Chromatography-Inductively+Coupled+Plasma+Mass+Spectrometry+Determination%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Protein Quantitation Using Ru-NHS Ester Tagging and Isotope Dilution High-Pressure Liquid Chromatography-Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry Determination.</a> Anal. Chem. 84 (6), 2769-2775 (2012).</li>
<li>Jantke, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0022328X13004142">Synthetic strategies for efficient conjugation of organometallic complexes with pendant protein reactive markers.</a> J. Organomet. Chem. 744, 82-91 (2013).</li>
<li>Aoki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+xenograft+mouse+model+of+diffuse+pontine+glioma+designed+for+therapeutic+testing%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">An experimental xenograft mouse model of diffuse pontine glioma designed for therapeutic testing.</a> J Neurooncol. 108 (1), 29-35 (2012).</li>
<li>Forster, R. J., Bertoncello, P., Keyes, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrogenerated+Chemiluminescence%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Rev.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">Electrogenerated Chemiluminescence.</a> Annual Rev. Anal. Chem. 2, 359-385 (2009).</li>
<li>Connell, T. U., James, J. L., White, A. R., Donnelly, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+Labelling+with+Versatile+Phosphorescent+Metal+Complexes+for+Live+Cell+Luminescence+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Eur.+J%22%5BJournal%5D)">Protein Labelling with Versatile Phosphorescent Metal Complexes for Live Cell Luminescence Imaging.</a> Chem. Eur. J. 21 (40), 14146-14155 (2015).</li>
<li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synthesis%2C+labeling+and+bioanalytical+applications+of+a+tris%282%2C2%E2%80%B2-bipyridyl%29ruthenium%28II%29-based+electrochemiluminescence+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">Synthesis, labeling and bioanalytical applications of a tris(2,2′-bipyridyl)ruthenium(II)-based electrochemiluminescence probe.</a> Nat. Protoc. 9 (5), 1146-1159 (2014).</li>
<li>Bœuf, G., et al. <a target="_blank" href="https://www.researchgate.net/publication/262418715_Encapsulated_RutheniumII_Complexes_in_Biocompatible_PolyDL-lactide-co-glycolide_Nanoparticles_for_Application_in_Photodynamic_Therapy">Encapsulated Ruthenium(II) Complexes in Biocompatible Poly(d,l-lactide-co-glycolide) Nanoparticles for Application in Photodynamic Therapy.</a> ChemPlusChem. 79 (1), 171-180 (2014).</li>
<li>Loizidou, M., Seifalian, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanotechnology+and+its+applications+in+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Brit.+J.+Surgery%22%5BJournal%5D)">Nanotechnology and its applications in surgery.</a> Brit. J. Surgery. 97 (4), 463-465 (2010).</li>
<li>Barry, N. P. E., Sadler, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Challenges+for+Metals+in+Medicine%3A+How+Nanotechnology+May+Help+To+Shape+the+Future%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Nano%22%5BJournal%5D)">Challenges for Metals in Medicine: How Nanotechnology May Help To Shape the Future.</a> ACS Nano. 7, 5654-5659 (2013).</li>
<li>Hasan, K., Bansal, A. K., Samuel, I. D. W., Roldán-Carmona, C., Bolink, H. J., Zysman-Colman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+the+Emission+of+Cationic+Iridium+%28III%29+Complexes+Towards+the+Red+Through+Methoxy+Substitution+of+the+Cyclometalating+Ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Sci.+Rep%22%5BJournal%5D)">Tuning the Emission of Cationic Iridium (III) Complexes Towards the Red Through Methoxy Substitution of the Cyclometalating Ligand.</a> Nat.Sci. Rep. 5, 1-15 (2015).</li>
<li>Truong, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemiluminescence+detection+with+water-soluble+iridium%28III%29+complexes+containing+a+sulfonate-functionalised+ancillary+ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Analyst%22%5BJournal%5D)">Chemiluminescence detection with water-soluble iridium(III) complexes containing a sulfonate-functionalised ancillary ligand.</a> Analyst. 139 (22), 6028-6035 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Hier hebben wij voorgesteld een technologie die in staat is optisch afbakenen weefsel via de emissie van fotonen door een chemiluminescente reporter is. In tegenstelling tot andere, meer gevestigde technologieën 4, 5, 6, 7, 8, 9, chemiluminescente reporter dit systeem gebruik van een beeldvormende sonde die niet-radioactieve...

In de afgelopen decennia hebben beeldtechnologieën van de manier waarop artsen diagnosticeren en monitoren van de ziekte van een revolutie. Deze beeldvormende technieken zijn echter grotendeels beperkt tot gehele lichaam systemen, zoals positron emissie tomografie (PET), enkelvoudige foton-emissie-computertomografie (SPECT), computertomografie (CT) en magnetische resonantie imaging (MRI) is. Bijzondere aandacht is besteed aan kanker, en technologische doorbraken imaging zijn sterk verbeterd de manier waarop deze ziekte wordt gediagnosticeerd en behandeld. Ondanks deze vooruitgang, er is een plek waar deze beeldvormende technieken gewoon niet passen: de operatiekamer. Terwijl het gehele lichaam technieken helpen bij chirurgische planning, ze meestal onvoldoende ruimtelijke resolutie hoog genoeg om artsen te helpen bepalen realtime of alle tumorweefsel is verwijderd of resttumorweefsel verborgen blijft aan de snijvlakken 1. Ervoor zorgen dat er geen infiltratievetumor marges zijn achtergelaten is een van de belangrijkste chirurgische doelen, en chirurgen moeten een strakke-koord tussen strenge en voorzichtige weefsel resectie te lopen. Als er te veel wordt verwijderd, worden ongewenste bijwerkingen voor de patiënt vergroot; als er te weinig wordt verwijderd, worden recidief steeg met 2, 3. Daarom is het cruciaal om nauwkeurige tumorgrenzen bakenen, en wij geloven dat chemiluminescente intra-operatieve beeldvorming kan bijdragen tot de nauwkeurigheid van de identificatie van tumor marges te verbeteren door te helpen chirurgen kwaadaardig weefsel dat anders onopgemerkt bestaande technieken kunnen blijven visualiseren. Er zijn vele imaging technologieën momenteel onderzocht voor hun mogelijke bruikbaarheid als intra-operatieve imaging systemen. Deze omvatten β- en γ-straling-emitterende probes 4, 5 optische fluorescentie, Raman spectroscopie 6 </sup&gt;, 7 en Cherenkov luminescentie 8, 9. Tot dusver is geen van deze zijn vestigen standaard klinische instrumenten. Optische fluorescentiebeeldvorming dusver bewezen als de meest veelbelovende van deze technieken en is dus het meest onderzocht. Hoewel reeds aangetoond dat het een waardevol instrument voor vele toepassingen, is niet zonder beperkingen. Sterker nog, zijn belangrijkste nadeel is de achtergrond fluorescentie gegenereerd door inherent Autofluorescente biologisch weefsel. Deze achtergrond autofluorescente signaal is een product van de excitatie van het omringende weefsel, naast de fluorofoor door de externe lichtbron nodig voor het genereren van een fluorescerend signaal. Vanuit praktisch oogpunt kan deze autofluorescentie mogelijk leiden tot lage signaal-ruisverhoudingen, die het nut van deze technologie in de operatiekamer kan beperken. de voornaamstevoordeel van chemiluminescentie imaging via fluorescentiebeeldvorming is dat er geen excitatie licht nodig is. Daardoor is er geen achtergrond autofluorescentie. In chemiluminescentie beeldvorming wordt de excitatie-energie plaats chemisch gegenereerd. Deze werkwijze geeft geen ongewenste achtergrondsignaal en kan daarom leiden tot hogere signaal-ruisverhoudingen. Dit kan uiteindelijk leiden tot nauwkeuriger en nauwkeurige detectie van snijvlakken. Enigszins verrassend is het nut van deze aanpak als een intra-operatieve beeldvormende techniek onontgonnen 10 gebleven. Inderdaad, het dichtst voorbeeld van deze techniek is de oxidatie van luminol door myeloperoxidase in muizen 11, 12, 13. Chemiluminescente biomedische beeldvorming is daarmee tamelijk onontgonnen onderzoeksgebied dat de volgende voordelen kunnen bieden: (1) minimale autofluorescentie resulteert in een lage achtergrondsignaal met higher signal-to-noise ratio&#39;s; (2) afstembare golflengten van chemiluminescente emissie variëren van het zichtbare naar het nabije-infrarood; en (3) functionalizable chemoluminescente complexen die in combinatie met linker technologieën en gerichte biomoleculen reeds bestaande, toegang tot volledige bibliotheken van gerichte moleculaire beeldvorming sondes 14. Deze proof-of-principle studie toont het potentieel nut van chemiluminescent beeldvorming in de biomedische omgeving met behulp van een ruthenium-based imaging middel. De chemiluminescente eigenschappen van deze verbinding zijn goed bestudeerd, met onderzoeken die teruggaat tot het midden van de jaren 1960 15. Bij chemische activatie agens produceert het licht bij ongeveer 600 nm 16, die goed geschikt is voor medische beeldvorming doeleinden. De activeringsenergie wordt geleverd door een redoxreactie die leidt tot een aangeslagen toestand-die een levensduur van 650 ns in water 17 heeft -follverschuldigd door het genereren van fotonen op relaxatie van deze aangeslagen toestand. Door het gebruik van een speciaal ontworpen remote vernevelaar, waren we in staat om de verbinding zowel ex vivo en in vivo te detecteren. De resultaten van initiële experimenten zijn veelbelovend, suggereert verder onderzoek van deze technologie.

<table><tbody><tr><td>Wood part A (12.5 &times; 2.5 &times; 1.8 cm)</td><td>&nbsp;Woodcraft</td><td>131404</td><td>Geknipt uit een 3/4&rdquo; x 24&rdquo; x 30&rdquo; berken multiplexplaat</td></tr><tr><td>Wood part B (12.7 &times; 10.7 &times; 1.8 cm)</td><td>Woodcraft</td><td>131404</td><td>Geknipt uit een 3/4&rdquo; x 24&rdquo; x 30&rdquo; berken multiplexplaat</td></tr><tr><td>Wood part C (11 &times; 2.5 &times; 1.8 cm)</td><td>Woodcraft</td><td>131404</td><td>Geknipt uit een 3/4&rdquo; x 24&rdquo; x 30&rdquo; berken multiplexplaat</td></tr><tr><td>Schroeven (4 &times; 25 mm)</td><td>Screwfix</td><td>79939</td><td></td></tr><tr><td>Harmon Face Values 3 oz mini sprayer</td><td>Bed, Bath and Beyond</td><td></td><td></td></tr><tr><td>roestvrijstalen staaf (10 cm van 1/16&rdquo; staal)</td><td>Metals Depot Int. Inc.</td><td>2192</td><td></td></tr><tr><td>Potlood Classic HB</td><td>Papermate</td><td>58592</td><td></td></tr><tr><td>Paperclip</td><td>Office Depot</td><td>221720</td><td></td></tr><tr><td>luidsprekerkabel</td><td>RCA Inc.</td><td>AH1650SN</td><td></td></tr><tr><td>Energizer 9V alkalische batterij</td><td>Energizer Holdings Inc.</td><td>EN22</td><td></td></tr><tr><td>Hitech HS-82MG Micro Servo Motor, 3.4 kg/cm uitgangsmoment bij 6V</td><td>Hitech RCD USA Inc.</td><td>32082S</td><td></td></tr><tr><td>Naam</td><td>Bedrijf</td><td>Catalogusnummer</td><td>Opmerkingen</td></tr><tr><td>28 cm plastic kabelbinders</td><td>General Electric Inc.</td><td>50725</td><td></td></tr><tr><td>Ductape</td><td>3M Inc.</td><td>3939</td><td></td></tr><tr><td>littleBits w1 draad</td><td>littleBits Inc.</td><td>w1 draad</td><td></td></tr><tr><td>littleBits p1 voeding</td><td>littleBits Inc.</td><td>p1 voeding</td><td></td></tr><tr><td>littleBits i2 schakelknop</td><td>littleBits Inc.</td><td>i2 schakelknop</td><td></td></tr><tr><td>littleBits 011 servo</td><td>littleBits Inc.</td><td>011 servo</td><td></td></tr><tr><td>20 cm kunststof ommantelde draaddraaiklemmen</td><td>Four Star Plastics</td><td>71TIE8000</td><td></td></tr><tr><td>Tris(2,2&prime;-bipyridyl)dichlororuthenium(II) hexahydraat</td><td>Sigma-Aldrich Inc.</td><td>224758</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ammonium cerium(IV) nitraat</td><td>Sigma-Aldrich Inc.</td><td>22249</td><td></td></tr><tr><td>Isofluoraan</td><td>Baxter Healthcare</td><td>1001936060</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PBS1</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>2854</td><td></td></tr><tr><td>Triethylamine</td><td>Sigma-Aldrich Inc.</td><td>T0886</td><td></td></tr><tr><td>Water</td><td></td><td></td><td>Water werd gezuiverd met een Milipore Mili-Q (R &ge; 18 M&Omega;)</td></tr><tr><td>Vrouwelijke naakte (outbred) muizen</td><td>Jackson Laboratories</td><td>1929</td><td>leeftijd 5 - 6 weken</td></tr><tr><td>Stam C57BL/6J&nbsp;&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NU/J mannelijke muizen op&nbsp;</td><td>Jackson Laboratories</td><td>2019</td><td>leeftijd 6 &ndash; 8 weken</td></tr><tr><td>IVIS 200 bioluminescentielezer</td><td>Caliper Live Science</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Live Image 4.2 software</td><td>Perkin-Elmer</td><td>128165</td><td></td></tr><tr><td>Microscoopglazen</td><td>ThermoScientific</td><td>4951PLUS4</td><td></td></tr></tbody></table>

een nieuwe techniek voor het genereren en observing chemiluminescence in een biologische instelling

A Novel Technique for Generating and Observing Chemiluminescence in a Biological Setting

Intraoperatieve beeldvormingstechnieken hebben het potentieel om chirurgische ingrepen veiliger en effectiever te maken; om deze redenen verplaatsen dergelijke technieken zich snel naar de operatiekamer. Hier presenteren we een nieuwe aanpak die een nog niet verkende techniek voor intraoperatieve beeldvorming gebruikt: chemiluminescente beeldvorming. Deze methode maakt gebruik van een op ruthenium gebaseerde chemiluminescente reporter samen met een op maat gemaakt vernevelaarsysteem om ex vivo of in vivo beelden met hoge signaal-ruisverhoudingen te produceren. De op ruthenium gebaseerde reporter produceert licht na blootstelling aan een waterige oxiderende oplossing en herreductie binnen het omringende weefsel. Deze methode heeft ons in staat gesteld om reporterconcentraties zo laag als 6,9 pmol/cm2 te detecteren. In dit werk presenteren we een visuele gids voor onze proof-of-concept in vivo studies met subdermale en intraveneuze injecties bij muizen. De resultaten suggereren dat deze technologie een veelbelovende kandidaat is voor verder preklinisch onderzoek en uiteindelijk een nuttig hulpmiddel in de operatiekamer kan worden.

De vernevelaar systeem in dienst Protocol 1 omschreven kan worden opgebouwd uit gemakkelijk verkrijgbare materialen tegen een lage kostprijs. Het is bedoeld om een inzet op afstand getriggerde sproeien van het reducerende / oxiderende stof in een bioluminescente reader (figuur 1). Ons ontwerp zorgt voor een veilig gebruik van de vernevelaar in de bioluminescentie lezer op 14 cm afstand van de lens. Geen beslaan of vervaging van de lens werd waargenomen tijdens de operati...

Dit protocol beschrijft een nieuwe intraoperatieve beeldvormingstechniek die gebruik maakt van een rutheniumcomplex als bron van chemiluminescente lichtemissie, waardoor hoge signaal-ruisverhoudingen worden geproduceerd tijdens in vivo beeldvorming. Intraoperatieve beeldvorming is een groeiend veld dat de manier waarop chirurgische ingrepen worden uitgevoerd, zou kunnen revolutioneren.

Een nieuwe techniek voor het genereren en Observing Chemiluminescence in een biologische instelling

Intraoperative imaging techniques have the potential to make surgical interventions safer and more effective; for these reasons, such techniques are ...

Het algemene doel van dit protocol is om een nieuwe preklinische, interoperatieve, chemiluminescente beeldvormingstechniek aan te bieden die voordelen kan bieden boven bestaande optische technieken in termen van signaal-ruisverhoudingen en detectielimieten. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van sleutelvragen die in veel vakgebieden met betrekking tot de biologische wetenschappen niet toegankelijk waren met traditionele optische beeldvormingstechnieken. De belangrijkste voordelen van deze techniek zijn dat deze een hoge signaal-ruisverhouding heeft en dat deze geen direct licht of straling vereist.Wat we hebben gevonden is dat de implicaties van deze techniek zich echt uitstrekken naar interoperatieve beeldvorming van meerdere ziektetoestanden, inclusief kanker, vanwege de hoge signaal-ruisverhoudingen die deze techniek te bieden heeft. Aangezien voor deze techniek geen invallend licht nodig is, zijn er geen problemen met absorptie van invallend licht. Verder is er een grote chemische toolbox beschikbaar om het chemiluminescente kernmolecuul te functionaliseren.Om de procedure te beginnen, bereid 100 microliter standaardoplossing van tris(bypyridine)ruthenium(II)chloride in omgekeerd osmosewater. Combineer vervolgens elke standaard met 100 microliter van een 25 millimolair oplossing van ammonium ceriumnitraat in omgekeerd osmosewater op een microscoopglaasje. Open de bioluminescentielezer-beeldvormingssoftware en klik op initialiseren.In de beeldvormingsmodus, zorg ervoor dat luminescent en fotograaf zijn aangevinkt en fluorescerend is niet aangevinkt. Stel de luminescente belichtingstijd, binning, f/stop en emissiefilterparameters in. Stel de fotobelichtingstijd, binning en f/stop parameters in.Stel vervolgens de hoogte van het onderwerp overeenkomstig in met het te beeldvormen monster. Stel het gezichtsveld in op B voor een afstand van 14 centimeter tussen de camera en de monsterstandaard. Bedek de bodem van de bioluminescentielezer-beeldvormingskamer op de monsterstandaard met zwart constructiepapier.Plaats vervolgens het eerste glaasje met de druppel standaardmengsel op de monsterstandaard met de druppel gecentreerd in het groene lichtkruishaar van de lichtbak. Vul vervolgens de drie-ounce spuitfles van een op maat gemaakte vernevelaar met de 1:3 oplossing van triethylamine in een 50/50 oplossing van water en ethanol. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen in de aspiratiepijp zijn.Plaats de vernevelaareenheid in de beeldvormingskamer met de spuitmond gericht op de te beeldvormen druppel zonder het camerabeeld van de druppel te belemmeren. Zorg ervoor dat de aan/uit-schakelaar van de vernevelaar en de aan-indicator aan staan, de magnetische schakelknop uit staat en de aansluitkabels van de vernevelaar en de afstandsbediening niet verstrikt zijn. Bedek hete plekken zoals markeringen op het glaasje met kleine stukjes zwart constructiepapier.Plaats ten minste 40 centimeter van de afstandsbedieningskabel van de vernevelaar in de beeldvormingskamer. Sluit de deur van de kamer voorzichtig zonder de kabels van de vernevelaar te knijpen. Klik in de instrumentsoftware op verwerven, schakel auto-opslaan in en stel de pad van het gegevensbestand in.Start de beeldvormingssequentie. Wanneer de sluiter opengaat met een hoorbaar klikje, schakel de vernevelaarschakelaar drie keer om om drie uitbarstingen van de triethylamineoplossing op het monster te spuiten. Herhaal de procedure met elk standaardmonster om de minimaal detecteerbare concentratie van het rutheniumbeeldvormingsmiddel te bepalen.Om de in vivo-beeldvormingsprocedure te beginnen, bereid 100 microliter oplossing met tussen de 8 en 33 nanomolen van tris(bypyridine)ruthenium(II)chloride in fosfaatgebufferd zoutoplossing. Bereid een 25-millimolaire waterige oplossing van ammonium ceriumnitraat. Injecteer vervolgens intraveneus 100 microliter van het rutheniumbeeldvormingsmiddel in de staartader van gezonde muizen.Offer de muizen 10 minuten na injectie op door kooldioxide-asfyxiatie. Verwijder de huid van het romp met een Y-snede en verwijder vervolgens de costale boog om het hart en de longen bloot te leggen. Snijd een uitlaat in het rechter atrium en injecteer 20 milliliter PBS door een naald van 24 gauge in het linker ventrikel.Snijd door de buikhuid om de nier en lever bloot te leggen. Als het orgaan van belang de lever, nier of milt is, maak een zichtbare longitudinale snede door het orgaan. Bereid een nieuwe beeldvormingssequentie voor in de bioluminescentielezer-software.Voor beeldvorming van de hele buik, plaats de muis in de beeldvormingskamer met de open buik naar de camera gericht en het hoofd naar de achterkant van het instrument. Centreer het orgaan van belang in het groene lichtkruishaar. Spoel de spuitfles en de spuitmond van de vernevelaareenheid grondig door en vul vervolgens de fles met de ammonium ceriumnitraatoplossing.Plaats de vernevelaar in de beeldvormingskamer met de spuitmond op de beeldvormingsplaats gericht. Zorg ervoor dat de camera onbelemmerd is, dat de kabels niet verstrikt zijn en dat ten minste 40 centimeter van de afstandsbedieningskabel in de kamer is. Sluit de kamer en start de beeldvormingssequentie.Wanneer de sluiter opent met een klik, schakel de schakelaar drie keer om om drie uitbarstingen van het oxidatiemiddel op de beeldvormingsplaats te spuiten. Verwijder na de beeldvorming de vernevelaareenheid en spoel de spuitmond grondig om kristallisatie van het ammonium ceriumnitraat te voorkomen. Voor verdere individuele orgaanbeeldvorming en kwantificering, verwijder de muis uit het instrument en verwijder de inwendige organen beginnend vanaf de open lichaamsholte.Snijd door de huid van de achterpoot om monsters van spierweefsel te verwijderen. Als het orgaan van belang de lever, nier of milt is, snijd het orgaan longitudinaal doormidden. Plaats vervolgens het orgaan op een petrischaal of stuk zwart constructiepapier.Beeld elk orgaan op dezelfde manier af als het hele dier, spoel de spuitmond na elke sequentie grondig af. In deze procedure werden muizen geïnjecteerd met een rutheniumgebaseerd beeldvormingsmiddel en

a-novel-technique-for-generating-observing-chemiluminescence

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bio-engineering

Methoden voor bioluminescentie beeldvorming van bacteriële infecties bij levende dieren beschreven. Ziekteverwekkers worden aangepast om luciferase te drukken waardoor optisch het gehele lichaam van infecties in levende dieren. Diermodellen kunnen besmet zijn met luciferase uitdrukken pathogenen en de daaruit voortvloeiende beloop van de ziekte gevisualiseerd in real-time door bioluminescentie imaging.

Met behulp van Luciferase naar Afbeelding bacteriële infecties in Muizen

Hierin beschrijven we de methoden om te bouwen, visualiseren en kwantificeren van de bioluminescente reacties van zowel vuurvlieg en Renilla luciferase enzymen uitgedrukt in gemetastaseerde borstkanker cellen tijdens hun groei en...

In vivo Dual ondergrond Bioluminescent Imaging

Circadiane klokken functioneren binnen de individuele cellen, dat wil zeggen, ze zijn cel-autonoom. We beschrijven werkwijzen voor het genereren van cel-autonome klok modellen niet-invasieve, luciferase-gebaseerde real-time bioluminescentie technologie. Reporter cellen handelbaar, functionele modelsystemen voor het bestuderen van circadiane biologie.

Monitoring Cell-autonome circadiane klok Rhythms of genexpressie met behulp van Luciferase Bioluminescentie Reporters

Bioluminescent Bacteriële Imaging<em&gt; In Vivo</em

In this video, we describe a method highlighting the utility of bioluminescence assay for sensitive and rapid screening of drugs. These drugs can be tested alone or in combination to assess the synergism in their mode of action.

Cellular Bioluminescence Based Assay: A High Throughput Method for Combinatorial Drug Screening

Zoogdierlijke cellen die het bacteriële bioluminescentie gencassette...

Autonoom Bioluminescente zoogdiercellen voor continue en real-time monitoring van de cytotoxiciteit

Interacties tussen eiwitten zijn fundamenteel voor alle cellulaire processen. Met Bioluminescentie Resonance Energy Transfer, kan de interactie tussen twee eiwitten worden gecontroleerd in levende cellen en in real time. Bovendien kunnen de effecten van potentieel pathogene mutaties worden beoordeeld.

Onderzoeken eiwit-eiwit interacties in levende cellen met behulp van bioluminescentie resonantie energieoverbrenging

Het uitbreiden van de stichting en de toepasbaarheid van fluorescentie door Unbound Opwinding van luminescentie (FUEL) door inventarisatie van de relevante beginselen en demonstreren van de verenigbaarheid ervan met een veelheid aan fluoroforen en antilichaam-gerichte voorwaarden.

Een stap verder BRET: Fluorescentie door geconsolideerd Opwinding van luminescentie (FUEL)

Genetisch gecodeerde luciferase is een populaire niet-invasieve verslaggever van genexpressie. Gebruik van een geautomatiseerde longitudinale luciferase imaging gas - en temperatuur-geoptimaliseerde recorder (ALLIGATOR) staat longitudinale opname van bioluminescente cellen onder een brede waaier van voorwaarden stelt. Hier laten we zien hoe ALLIGATOR kan worden gebruikt in het kader van circadiane ritmen onderzoek.

Flexibele meting van bioluminescente verslaggevers met behulp van een geautomatiseerde longitudinale Luciferase Imaging Gas - en temperatuur-geoptimaliseerde Recorder (ALLIGATOR)

Lichte productie regelen bioluminescente bacterie via allerlei mechanismen, zoals quorum sensing. Deze nieuwe methode kan de behandeling in situ van bioluminescentie en de correlatie van licht emissie celdichtheid. Een kunstmatige bioluminescente Escherichia coli systeem maakt het mogelijk de karakterisatie van lux operons, Lux eiwitten en hun samenspel.

In Situ Meting en de correlatie van de celdichtheid en lichte emissie van bioluminescente bacterie

Bioluminescentie - licht uitgezonden door een luciferase-enzym dat een substraat met kleine moleculen oxideert, een luciferine - kan worden gebruikt om fotosensorische eiwitten te activeren, waardoor een andere dimensie wordt toegevoegd aan lichtstimulatie en de manipulatie van een veelheid aan lichtgemedieerde functies in cellen op temporele en ruimtelijke schalen mogelijk wordt.

Bioluminescente optogenetica 2.0: Bioluminescentie benutten om fotosensorische eiwitten in vitro en in vivo te activeren

Ontdek een nieuwe intraoperatieve chemiluminescente beeldvormingstechniek met een rutheniumcomplex voor chirurgische toepassingen. Deze methode biedt een hogere signaal-ruisverhouding dan traditionele optische technieken.

Een nieuwe techniek voor het genereren en Observing Chemiluminescence in een biologische instelling

Meer video's verkennen