Name: Een In Vitro Model voor het bestuderen van cellulaire transformatie door Kaposi sarcoom Herpesvirus (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-08-25T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 53 s
Description: Leer een endotheliale celcultuurmethode om KSHV-geïnduceerde maligne transformatie te bestuderen. Dit model helpt onderzoekers oncogene mechanismen te identificeren en nieuwe therapeutische strategieën voor Kaposi-sarcoom te ontwikkelen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd gesteund door de HD068322 van de K12 (SCM); R01 CA179921 en P51 OD011092 (AVM); en 14PRE20320014 van de Amerika hart Association (SB).

Opmerking: alle procedures die worden beschreven in dit protocol moeten worden uitgevoerd onder BSL-2 voorwaarden.
 1. KSHV voorraad voorbereiding <ol><li>bereiden TNE buffer: Los 292.24 mg EDTA in ddH 2 O, 225 mL brengen en aan te passen aan pH 8. Los 605.7 mg Tris in ddH 2 O, breng aan 225 mL, en aan te passen aan pH 8. EDTA en Tris oplossingen combineren, Voeg 4.38 g NaCl, aanpassen eindvolume tot 500 mL, filteren steriliseren en bewaren bij 4 ° C .</li>
	<li>De KSHV-positieve, EBV-negatieve primaire effusie lymfoom cellijn BCBL-1 in een bevochtigde incubator bij 37 ° C plus 5% CO 2 in RPMI aangevuld met 10% warmte-geïnactiveerd foetale runderserum (FBS) en antimicrobiële stoffen ongeveer 1 cultuur naar 1.2 x 10 6 cellen per mL.</li>
	<li>Voor het opwekken van KSHV productie, splitsen culturen 1:2 met verse medium en Phorbol 12-myristaat 13-acetaat (PMA) toevoegen om een eindconcentratie van 20 ng/mL en culturen Incubeer gedurende 5 dagen. Als alternatief, het behandelen van cellen met natrium butyraat (NaB; 0.1 mM) voor 3 dagen voor het opwekken van lytische virale replicatie.</li>
	<li>Verkrijgen virale deeltjes, centrifugeer eerst het supernatant bij 300 x g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur pellet van de cellen en overbrengen van supernatant naar verse buizen cultuur.</li>
	<li>Te verduidelijken het supernatant teneinde de overdracht van cellulaire puin, centrifugeer bij 2.500 x g gedurende 10 minuten bij 4 ° C. 
	Opmerking: als alternatief voor hoge snelheid centrifugeren voor verduidelijking van supernatant van cultuur, filtratie via een steriele 0,45 µm filter kan worden uitgevoerd. We hebben gezien een significante daling van de titer gebruiken filtratie; Daarom we routinematig uitvoeren de tweede stap van het centrifugeren in plaats daarvan.</li>
	<li>Vervolgens overlay 5 mL 25% sacharoseoplossing in TNE buffer met ongeveer 30 mL van de geklaarde cultuur supernatant in 6 buizen van de ultracentrifuge.</li>
	<li>Centrifuge buizen bij 75.000 x g gedurende 2 uur bij 4 ° C onder vacuüm evenwichtige.</li>
	<li>Cultuur supernatant decanteren en wissen van de rand van elke buis om zoveel supernatant en sacharose oplossing mogelijk, dan resuspendeer de pellet virus, die zijn niet altijd zichtbaar, in 150 µL van TNE buffer.</li>
	<li>Zwembad alle geresuspendeerde virus, meng goed, en het bevriezen van 25 µL aliquots bij -80 ° C .</li>
</ol> 2. Transductie van de EG met de E6 en E7 Papillomavirus Genes Opmerking: We gebruiken routinematig standaard weefselkweek kolven voor groeiende primaire EC. Echter als onvoldoende groei van de EG worden verkregen dan het gebruik van commerciële cultuur kolven moet worden beschouwd.
<ol><li>Cultuur primaire menselijke dermale microvasculaire of lymfatische EG in een bevochtigde incubator bij 37 ° C vermeerderd met 5% CO 2 in EG groeimedium (BAVA; bevat EG Basaal medium [EBM] aangevuld met BAVA-2 BulletKit [met FBS, hydrocortison, menselijke fibroblast groeifactor-B, vasculaire EG groeifactor, insuline-achtige groeifactor-1, ascorbinezuur, menselijke epitheliale groeifactor, antibiotica en heparine]) in een maatkolf van T75 cel cultuur tot ongeveer 50% samenkomst.</li>
	<li>Voor signaaltransductie, cellen cultuur PA317 LXSN 16E6E7 24 ,, 35 in een bevochtigde incubator bij 37 ° C plus 5% CO 2 in DMEM aangevuld met 10% FBS en antimicrobiële stoffen in een T150 cel cultuur kolf totdat ze ongeveer 90% heuvels. Vervolgens na een nacht bebroeden in 16 mL voedingsbodem.</li>
	<li>Het PA317 medium door centrifugatie bij 300 x g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur verduidelijken.</li>
	<li>Verwijderen van de BAVA van de EG cultuur en overlay cellen met 12 mL van het geklaarde PA317 medium en incubeer gedurende 4 h. 
	Opmerking: Centrifugeren 16 mL van geconditioneerde medium bij 300 x g gedurende 5 min resultaten in een compacte pellet die niet wordt verstoord door de zorgvuldige latere verwijdering van 12 mL van het supernatans dat verduidelijkt. Echter, als de overdracht van PA317 LXSN 16E6E7 cellen aan primaire EG culturen is een bron van zorg (de verpakkingslijn voor de cel zal snel ontgroeien EG), vervolgens filtratie van het geconditioneerde supernatant door een 0,45 µm filter voor overdracht kan worden uitgevoerd.</li>
	<li>6 mL van het PA317 medium vervangen door verse BAVA en na een nacht bebroeden.</li>
	<li>EG bijvoeding met 12 mL verse BAVA en incubeer een verdere 48 h.</li>
	<li>Tot sub cultuur de EG, verwijderen van middellange en wassen met PBS zonder kationen, 12 mL en voeg 3 mL van de oplossing van de commerciële enzymatische dissociatie (bv TrypLE) door en Incubeer bij 37 ° C gedurende 3 minuten</li>
	<li>Overbrengen in een conische tube van 15 mL celsuspensie samen en centrifugeer bij 300 x g gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur. Resuspendeer de pellet van de resulterende cel in verse BAVA en verdeel gelijkmatig in 3 x T75 kolven met een eindvolume van 12 mL BAVA per kolf.</li>
	<li>Als wilt selecteren voor EG getransduceerde met E6 en E7, G418 toevoegen om een eindconcentratie van 200 µg/mL voor twee passages, waarna de getransduceerde EG kan worden bekleed voor infectie of ingevroren in vloeibare stikstof.</li>
</ol> 3. Infectie van getransduceerde EG met KSHV <ol><li>op de dag voorafgaand aan de infectie oogst EG door enzymatische spijsvertering met behulp van de commerciële enzymatische dissociatie oplossing zoals hierboven beschreven. Resuspendeer cel pellet in 1 mL BAVA. Gebruik 5 µL van cellen te bereiden een verdunning van 1/10 in Trypan blauw. Tellen van levende cellen met behulp van een hemocytometer en zaad van 2.5 x 10 5 levende cellen in 2 mL zuiver BAVA per putje in 6 goed platen.</li>
	<li>Op de dag van de infectie, verwijderen van BAVA wassen van cellen met 3 mL PBS met calcium en magnesium per putje en voeg vervolgens 2 mL EBM. 
	Opmerking: Het is essentieel om te gebruiken van EBM in plaats van BAVA tijdens de infectie, zoals de heparine in BAVA binding van virale deeltjes en latere infectie van target EC. remmen zal</li>
	<li>Te infecteren cellen met KSHV, voeg van 5 tot 20 µL virus voorraad aan elk putje en swirl plaat te mengen. Mock-geïnfecteerde cellen Voeg een gelijk volume TNE buffer aan elk putje.</li>
	<li>Centrifugeer platen bij 400 x g gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur en vervolgens Incubeer de platen bij 37 ° C gedurende 90 minuten</li>
	<li>Als het doel van de studie is het onderzoeken van de vroege gebeurtenissen vereisen een synchrone virale infectie, bijvoorbeeld, vroege gebeurtenissen in DOVO infectie, verwijder de virale entmateriaal op dit punt. Spoel en bijvoeding de cellen met 2 mL verse BAVA. Anders, voeg toe 2 mL BAVA en na een nacht bebroeden culturen.</li>
	<li>Cellen met 2 mL BAVA bijvoeding de dag na infectie en dan elke andere dag.</li>
	<li>Wanneer cellen ongeveer 90% heuvels, oogsten door enzymatische spijsvertering met behulp van commerciële enzymatische dissociatie oplossing zoals hierboven beschreven, dan bundelen de cellen uit drie putten in een T75, vaststellend van zowel de totale passage-nummer en de passage na infectie.</li>
	<li>Uit te breiden mock - en KSHV-besmet EG met 1:3 splitst voor ten minste twee meer passages waarna cellen kunnen worden gebruikt in experimenten of in vloeibare stikstof bevroren. 
	Opmerking: Net als bij het splitsen van EG getransduceerde met E6 en E7, onderhoud culturen van mock - en KSHV-geïnfecteerde cellen moeten worden opgesplitst alvorens samenvloeiing (~ 85 tot 90%).</li></ol>
 4. bevestiging van de besmetting met KSHV door immunofluorescentie Opmerking: detectie van de KSHV latency-associated nucleair antigeen (LANA-1/ORF73) biedt een betrouwbare kwantitatieve meting van infectie. Anti-LANA antilichamen zijn verkrijgbare.
<ol><li>De dag vóór de kleuring, putjes van de plaat twee elk met mock - of KSHV-besmet EG op een 24-well plaat op 1 x 10 5 per cellen goed in 1 mL BAVA en na een nacht bebroeden.</li>
	<li>Wassen cellen tweemaal met 500 µL van PBS plus calcium en magniseum. Wassen voor 30 s op een rockende platform.</li>
	<li>In een zuurkast extern-ventillated, herstellen van cellen met 500 µL van 4% paraformaldehyde gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur.</li>
	<li>Wassen van cellen drie keer met 500 µL van was buffer (0,1% Triton X-100 plus 0,02% geit serum in PBS plus caties).</li>
	<li>Cellen met 500 µL van 2% geit serum in was buffer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur blokkeren.</li>
	<li>Wassen van cellen drie keer met 500 µL van was buffer.</li>
	<li>Label een goed van mock - of KSHV-besmet EG met 200 µL van primair antilichaam verdund 1:100 in was buffer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur op een rocker. Incubeer de resterende twee putten in 200 µL van was buffer alleen.</li>
	<li>Wassen van cellen drie keer met 500 µL van was buffer.</li>
	<li>Label alle vier putjes met 200 µL van secundair antilichaam verdund 1:100 in was buffer gedurende 30 minuten bij kamertemperatuur op een rocker.</li>
	<li>Wassen van cellen drie keer met 500 µL van was buffer.</li>
	<li>Aan elk putje Breng 20 µL middellange met DAPI en een dekglaasje aan te monteren en te evalueren kleuring met behulp van een omgekeerde fluorescente microscoop.</li>
	<li>Bepalen het percentage infecties van KSHV-geïnfecteerde cellen door het aantal LANA-positieve kernen in minstens 200 cellen te tellen. Infectie met recombinant KSHV-Bac16 kan ook worden gevolgd via observatie van culturen voor expressie van GFP.</li>
</ol>

Oncogenese is een meerstaps proces dat belangrijke waarborgen binnen een organisme36omzeilt. Zoals KS laesies bestaan langs een spectrum van chronische ontsteking aan ware sarcomen, vereist opheldering van bepaalde pathofysiologische processen gemedieerd door KSHV dat sommige studies worden uitgevoerd in cel cultuur modellen die ondersteuning bieden voor transformatie9. Opgemerkt moet worden dat verlies van contact inhibitie en anchorage-afhankelijke groei, fenotypes indica...

Kaposi sarcoom (KS) is een multi focale angioproliferative tumor beïnvloeden dermale, cutane en viscerale sites die meestal in het kader van geavanceerde immuun onderdrukking1 ontwikkelt. Vier epidemiologische vormen zijn beschreven: classic, een vadsig formulier buikvliesontsteking meestal oudere mensen van mediterrane en Midden-Oosten erfgoed; iatrogene, als gevolg van behandeling met Immunosuppressieve medicijnen na orgaantransplantatie; epidemie, een AIDS-definiëren kanker; en endemisch, een HIV-zelfstandige vorm vaak voor bij kinderen in endemische gebieden in Afrika. Met de komst van effectieve combinatie regimes van de anti-retrovirale geneesmiddelen voor de behandeling van HIV, is epidemische KS veel minder vaak gediagnosticeerd in ontwikkelingslanden. De klinisch agressieve endemische en epidemische vormen blijven echter onder het meest gediagnosticeerde kankers in vele Afrikaanse landen2,-3,4. Daarom is de identificatie van effectieve pathogenese-gerichte medicijnen voor behandeling van KS een onderzoeksprioriteit.
Histologisch, worden KS laesies gekenmerkt door uitgebreide maar abnormale neovascularization waarbij spindel cellen van EG oorsprong discontinue vasculaire netwerken5vormen. Deze abnormale schepen ("vasculaire spleten") toestaan extravasation van erytrocyten, waardoor laesies hun karakteristieke kleur. Daarnaast bevatten laesies talrijke leukocyten, die kenmerkend zijn voor chronische ontsteking (dat wil zeggen, lymfocyten, macrofagen en plasmacellen). Regressie van KS letsels na immuunsysteem reconstitutie werd genoemd, wat suggereert dat KS kenmerken van zowel een hyper-proliferatieve laesie en een ware tumor6,7,8,9 heeft.
KS herpesvirus (KSHV), de verwekker van KS, werd in 199410geïdentificeerd. Sinds dan veel in vitro cultuur van de cel modellen zijn ontwikkeld zodat de pathogenese studies, met inbegrip van cellen transplanteren van tumor biopsie materiaal en primaire of uiting van telomerase EG geïnfecteerd met KSHV in vitro11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18. geen van de momenteel beschikbare modellen volledig recapituleert de KS tumor communicatie, maar alle waardevolle kennis aan ons begrip van de pathobiology van KSHV infectie hebben bijgedragen. In tegenstelling tot de andere bekende tumorigene Humaan herpesvirus Epstein - Barr virus (EBV), wordt het KSHV niet gemakkelijk transformeren bij cellen in cultuur na DOVO infectie19,20,21, 22. echter deze beperking heeft overwonnen door transducing primaire menselijke EG van hetzij microvasculaire of lymfatische oorsprong gemengd met de E6 en E7 genen van humaan papillomavirus typen 16 voorafgaand aan infectie met KSHV23,24 . Uitdrukking van deze exogene oncogenen verhoogt drastisch het transformerende potentieel van KSHV in vitro gedeeltelijk door de toekenning van aanvullende remming van de Retinoblastoom eiwitten en p5323,24. Deze EG transductie methode heeft toegestaan meerdere laboratoria vast te stellen van belangrijke wijzigingen in ontvangende cel de expressie van genen die worden veroorzaakt door infectie van de KSHV en die lijken te vergemakkelijken van KS cel overleving en proliferatie25,26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31 , 32. de hierin beschreven protocollen zijn eenvoudig en zeer reproduceerbaar, en zal resulteren in het genereren van leeftijd - en passage-matched KSHV-geïnfecteerde EG en mock-geïnfecteerde besturingselementen die kunnen worden gekweekt voor veel langer dan primaire cellen en zal zorgen voor het onderzoek van oncogene mechanismen werkzaam bij KSHV. Hoewel het protocol bevat een methode voor de productie van wild type KSHV uit de primaire effusie lymfoom cellijn BCBL-1, E6/E7-vereeuwigd EG zijn ook zeer gevoelig voor infectie met recombinant BACmid afgeleid KSHV-BAC1630. Protocollen voor bereiding van BAC16 worden elders beschreven33,34.

<table><tbody><tr><td>BCBL-1 cellen</td><td>NIH AIDS Reagent Program</td><td>3233</td><td></td></tr><tr><td>PA317 cellen</td><td>ATCC</td><td>CRL-2203</td><td></td></tr><tr><td>Neonatal dermale microvasculaire endotheelcellen</td><td>Lonza</td><td>CC-2505</td><td></td></tr><tr><td>EBM-2 basaal medium</td><td>Lonza</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>anti-KSHV LANA/ORF 73</td><td>Advanced Biotechnologies</td><td>13-210-100</td><td></td></tr><tr><td>TrypLETMExpress, zonder fenolrood</td><td>ThermoFisher</td><td>12604013</td><td></td></tr><tr><td>RPMI</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS met calcium en magnesium</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

een in vitro model voor het bestuderen van cellulaire transformatie door kaposi sarcoom herpesvirus

An In Vitro Model for Studying Cellular Transformation by Kaposi Sarcoma Herpesvirus

Kaposi sarcoom (KS) is een ongewone tumor bestaat uit delende cellen van de spindel dat is geïnitieerd door infectie van endotheliale cellen (EG) met KSHV, en meestal ontwikkelt in de instelling bij immuunsuppressie. Ondanks decennia van onderzoek, optimale behandeling van KS blijft slecht gedefinieerde en klinische resultaten zijn vooral ongunstige in resource-beperkte instellingen. KS laesies worden gedreven door pathologische angiogenese, chronische ontsteking en oncogenese en verschillende in vitro cel cultuur modellen zijn ontwikkeld om deze processen te bestuderen. KS vloeit voort uit KSHV-geïnfecteerde cellen van de oorsprong van het endotheel, dus EG-afstamming-cellen zorgen voor de meest geschikte in vitro surrogaten van de voorloper van de spindel cel. Echter, omdat EG hebben een levensduur beperkt in vitro , en zoals de oncogene mechanismen werkzaam bij KSHV zijn minder efficiënt zijn dan die van andere tumorigene virussen, is moeilijk te beoordelen van de processen van transformatie in primaire of telomerase-vereeuwigd EC. Daarom werd een nieuwe EG gebaseerde cultuur model ontwikkeld dat ondersteunt transformatie na infectie met KSHV. Ectopische uitdrukking van de genen van de E6 en E7 van humaan papillomavirus type 16 zorgt voor uitgebreide cultuur van leeftijd - en passage-matched mock - en KSHV-besmette EG en ondersteunt de ontwikkeling van een echt getransformeerd (dat wil zeggen, tumorigene) fenotype in geïnfecteerde celculturen . Dit hanteerbare en zeer reproduceerbaar model van KS heeft de ontdekking van verschillende essentiële signaalroutes met een hoog potentieel voor vertaling in klinische instellingen vergemakkelijkt.

De morfologie van primaire EG klassiek wordt beschreven als "kasseistrook stone", en deze morfologie is niet gewijzigd door de uitdrukking van het papillomavirus E6 en E7 genen (figuur 1A). Expressie van de E6 en E7 genen alleen er niet toe brengt een getransformeerde fenotype; Dus, cellen zijn gevoelig voor remming contact en zal ophouden verdelen bij het bereiken van de samenvloeiing in cultuur. De cellen zal echter vermenigvuldigen en regrow tot samenkomst op trypsineb...

Kaposi sarcoom (KS) is een tumor die is veroorzaakt door infectie met de oncogene virus Humaan herpesvirus-8/KS herpesvirus (HHV-8/KSHV). De endothelial cell cultuur model hier beschreven is uniek geschikt voor de studie van de mechanismen waarmee KSHV gastheer cellen transformeert.

Een In Vitro Model voor het bestuderen van cellulaire transformatie door Kaposi sarcoom Herpesvirus

Kaposi sarcoma (KS) is an unusual tumor composed of proliferating spindle cells that is initiated by infection of endothelial cells (EC) with KSHV, and ...

Het algemene doel van deze procedure is het voorbereiden van leeftijd- en passagenegestandaardiseerde mock-geïnfecteerde KSHV-endotheelcellen om de studie van KSHV-geassocieerde veranderingen in de genexpressie van de gastheercel mogelijk te maken, inclusief alteraties die maligne transformatie aansturen in de context van passende controles. Deze methode kan helpen bij het definiëren van de belangrijkste pathofysiologische veranderingen in de biologie van de gastheercel die leiden tot KSHV-geassocieerde kankers, waardoor nieuwe therapeutische targets voor ziektepreventie of -behandeling kunnen worden geïdentificeerd. Het belangrijkste voordeel van dit systeem is dat maligne transformatie van endotheelcellen na infectie met KSHV snel en reproduceerbaar optreedt, wat de studie van vroege gebeurtenissen in het oncogene proces met leeftijd- en passagenegestandaardiseerde controlecellen mogelijk maakt. Hoewel dit model van virale oncogenese inzicht kan verschaffen in de ontwikkeling van het Kaposisarcom, kan het ook worden toegepast op andere kankertypen. Omdat het Kaposisarcom een vasculaire tumor is, strekken de implicaties van dit celkulturmodel zich uit tot het begrijpen van andere

an-vitro-model-for-studying-cellular-transformation-kaposi-sarcoma

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Christopher CW Hughes beschrijft het nut van zijn cultuur systeem voor het bestuderen van angiogenese in vitro. Hij legt het belang van de fibroblasten dat een kritische, nog niet geïdentificeerde, oplosbare factor die het mogelijk maken endotheelcellen aan schepen in de cultuur vorm die tak, de juiste vorm lumen, en ondergaan anastomose afscheiden.

Christopher Hughes: Een in vitro model voor de Studie van angiogenese (Interview)

Beschrijven we een protocol voor de fabricage van microfluïdische apparaten die cel te vangen en cultuur kunnen inschakelen. In deze benadering patroon microstructuren, zoals groeven in microfluïdische kanalen worden gebruikt om lage shear stress regio's waarbinnen de cel kan dock te creëren.

Een microfluïdische apparaat met Groove patronen voor het bestuderen van Cellular Gedrag

Dit protocol beschrijft het gebruik van micro-injectie en een hoge resolutie beeldvorming in...

Micro-injectie technieken voor het bestuderen van mitose in de Drosophila melanogaster Syncytieel Embryo

Ionische stroom van BK kanalen wordt geregistreerd met behulp van patch-clamp technieken. BK kanalen worden uitgedrukt...

Patch Clamp en perfusie technieken voor het bestuderen van Ion Channels Uitgedrukt in Xenopus Eicellen

De aard van de interactie tussen hematopoietische stamcellen en progenitorcellen (HSPCs) en beenmerg nissen wordt slecht begrepen. Aangepaste hardware wijzigingen en een meerstaps overname protocol maken het gebruik van twee-foton en confocale microscopie beeld ex vivo gemerkte HSPCs geadopteerd in beenmerg gebieden volgen interacties en beweging.

In Vivo 4-dimensionale Tracking van hematopoietische stamcellen en progenitorcellen in volwassen muis calvarial Bone Marrow

We beschrijven een methode voor depletie-reddingsexperimenten die de cellulaire integriteit en eiwithomeostase behoudt. Adenofectie maakt functionele analyses van eiwitten mogelijk binnen biologische processen die afhankelijk zijn van fijn afgesteld actine-gebaseerde dynamica, zoals mitotische celdeling en myogenese, op het niveau van een enkele cel.

Adenofection: Een methode voor het bestuderen van de rol van de Molecular Begeleiders in Cellular Morfodynamica door uitputting-Rescue Experimenten

Deze studie schetst kwantitatieve metingen van synaptische grootte en lokalisatie, spier morfologie, en mitochondriale vorm in C. elegans met behulp van vrij beschikbare beeldverwerkings hulpmiddelen. Deze aanpak maakt het mogelijk toekomstige studies in C. elegans te kwantificatief vergelijken de omvang van weefsel en organel structurele veranderingen als gevolg van genetische mutaties.

Kwantitatieve benaderingen voor de studie van cellulaire structuren en organelle morfologie in Caenorhabditis elegans

De huidige studie biedt gedetailleerde in vitro ubiquitylatie assay protocollen voor de analyse van E3 ubiquitine ligase katalytische activiteit. Recombinante eiwitten werden tot expressie gebracht met behulp van prokaryote systemen zoals Escherichia coli-cultuur.

In vitro Analyse van E3 Ubiquitine Ligase Functie

Hier bieden we het gedetailleerde protocol van een transformatiemethode in één stap, gemedieerd door Agrobacterium tumefaciens om samengestelde planten te produceren.

Een efficiënte en reproduceerbare methode voor het produceren van samengestelde planten door Agrobacterium rhizogenes-gebaseerde harige worteltransformatie

Het protocol beschrijft de inductie van harige wortels met behulp van Arabidopsis primaire bloeiwijzestengels en Brassica napus hypocotyls. De harige wortels kunnen worden gekweekt en gebruikt als explantaten om transgene planten te regenereren.

Transformatie en regeneratie van harige wortels bij Arabidopsis thaliana en Brassica napus

Leer een endotheliale celcultuurmethode om KSHV-geïnduceerde maligne transformatie te bestuderen. Dit model helpt onderzoekers oncogene mechanismen te identificeren en nieuwe therapeutische strategieën voor Kaposi-sarcoom te ontwikkelen.

Een In Vitro Model voor het bestuderen van cellulaire transformatie door Kaposi sarcoom Herpesvirus

Meer video's verkennen