Name: Monster extractie en gelijktijdige chromatografische kwantificatie van Doxorubicine en mitomycine C na Drug Delivery van de combinatie in nanopartikels met Tumor-dragende muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-10-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: Leer de gelijktijdige extractie en kwantificatie van Doxorubicine, Mitomycine C en Doxorubicinol in biologische monsters met behulp van reverse phase HPLC. Deze methode ondersteunt nanofarmacokinetisch onderzoek naar effectieve nanodragerontwerpen voor kankertherapie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

De auteurs mijn dankbaarheid uitspreken voor de subsidie van de apparatuur van de natuurwetenschappen en de Engineering Research (NSERC) Raad van Canada voor HPLC, de exploitatiesubsidie van de Canadian Institute of Health onderzoek (CIHR) en de Canadian Breast Cancer Research (CBCR) Bondgenootschap aan X.Y. Wu, en de beurs van de Universiteit van Toronto R.X. Zhang en T. Zhang.

alle dierproeven werden goedgekeurd door het dier Care Comité van University Health Network op de Ontario Cancer Institute en uitgevoerd in overeenstemming met de Canadese Raad op Animal Care Guidelines.
 1. biologische bereiding van de monsters <ol><li>verzamelen van de volbloed, belangrijke organen, en borst tumor op vooraf bepaalde tijdstippen na intraveneuze (i.v.) toediening van drug-bevattende formuleringen (b.v. DMPLN, Liposomale DOX) <ol><li>een borst tumor-dragende muis i.v. injecteren met een bereid drug-bevattende formulering.</li>
		<li>Anesthetize van de muis op de aangewezen tijd-punten (bijvoorbeeld, 15 min) door het geven van inhaleerbare 2% Isofluraan in een afgesloten kamer.</li>
		<li>De narcose muis op zijn rug leggen en zijn neus doorverbonden met een neusstuk die voortdurend 2% Isofluraan levert. 
		Opmerking: Om ervoor te zorgen dat de muis diepe verdoving ondergaat, zachtjes knijpen fore ledematen van de muis en de look voor elke twitching beweging.</li>
		<li>Grondig reinigen van de borst en buik regio's met behulp van 70% ethanol en voer vervolgens een terminal procedure van cardiale punctie op de diepe narcose muizen met behulp van een injectiespuit 1 mL EDTA en een 23 G naald.</li>
		<li>Collect de volbloed in een gelabelde Natrium heparine gespoten kunststof buis en zachtjes swirl de buis om ervoor te zorgen het verzamelde bloed komt in aanraking met de gecoate heparine van de buiswand. Verzamel minimaal 50 µL van volbloed. Houd altijd de monsters op ice.</li>
		<li>Tape alle vier ledematen van de muis te beveiligen en open de buikholte en de ribbenkast voor de muis met behulp van een paar van schaar en pincet. De darmen naar de zijkant verschuiven en druk op de lever omhoog om voldoende bloot de ader van de portal. Snijd de ader van de portal voor de afvoer van bloed.</li>
		<li>Perfuse het lichaam van de hele muis met 50 mL ijskoud 0,9% zoutoplossing door het hart met een 10 mL injectiespuit met een naald van 25 G. 
		Opmerking: Het buigen van de naald bij 90° voor de begeleiding van de injectiespuit in het portal ader.</li>
		<li>Accijnzen organen in de volgende volgorde: hart, Long, lever, milt, nieren. Weer, de tumor van de borst worden gescheiden van het omliggende bindweefsel met behulp van een paar incisie schaar op de juiste borstklier vet pad van de muis. Verzamelen van alle organen afzonderlijk in 1,5 mL polypropyleen buizen en snel bevriezen ze in vloeibare stikstof. 
		&#8203; Opmerking: de galblaas scheiden van de lever.</li>
		<li>De volbloed bij 4 ° C en verwijderde weefsels bewaren in de vriezer-80 ° C tot latere HPLC analyse.</li>
	</ol></li> <li>Uittreksel DOX, MMC en DOXol van biologische matrices.
	<ol><li>Weeg alle bevroren ontleed weefsels snel en ze vervolgens overbrengen naar een 13 mL afgerond-onderkant conische buis. Om te voorkomen dat mogelijke drug metabolisme of afbraak, houd de monsters op ice.</li>
		<li>1-5 mL lysisbuffermengsel ijskoude cel toevoegen in de buis. 
		Opmerking: De omvang van de buffer te gebruiken hangt af van het gewicht van de weefsel op basis van de verhouding van de weefsel-buffer van 1 g: 5 mL (w/v); voor kleine organen, zoals hart en milt, de verhouding is 1 g: 2 mL.</li>
		<li>Een beweging omhoog / omlaag lijn kunt meng de weefselsteekproeven op ijs met een snelheid van 18.000 rpm met behulp van een elektrische hand-homogenizer. 
		Opmerking: Voltooide homogenisering vereist ongeveer 3 tot 5 herhalingen van een korte homogenisering proces van minder dan 15 s, gevolgd door weefsel koeling over ijs tussen elke korte homogenisering.</li>
		<li>Wassen van de 10 mm saw-tooth generator sonde van de homogenizer met gedestilleerd gedeïoniseerd (DDI) H 2 O, 70% ethanol en vervolgens DDI H 2 O tussen elk weefsel monster te voorkomen van kruisbesmetting.</li>
		<li>Breng 50 µL van weefsel homogenaat of volbloed in een 1,5 mL polypropyleen micro-centrifuge buis en spike met 5 µL van een interne standaard (I.S.) 4-methylumbelliferone (4-MU) (2000 ng/mL) in de buis. 
		Opmerking: 4-MU oplossing in methanol hier opgesteld.</li>
		<li>Voeg toe 250 µL van een ijskoude extractievloeistof in het buisje met volbloed of weefsel homogenaat. 
		Opmerking: De extractievloeistof bestaat uit 60% acetonitril (ACN) en 40% ammoniumacetaat (5 mM) met pH aangepast aan de pH = 3,5 met behulp van 0,05% mierenzuur. Gebruik van een 1:5 (v/v) voorbeeld: extractievloeistof aan volumeverhouding.</li>
		<li>Krachtig het mengsel gedurende 2 minuten, centrifuge op 3.000 x g kracht bij 4 o C voor 10 min en Pipetteer 200 µL supernatant in een andere vooraf gekoelde verse micro-centrifuge buis vortex.</li>
		<li>Evaporate supernatant bij 60 ° C onder een trage stroom van stikstofgas met bescherming tegen licht.</li>
		<li>Reconstrueren van het droge residu met 100 µL van ijskoude methanol, krachtig vortex voor 30 s en centrifuge bij 3000 x g bij 4 ° C voor een andere 5 min.</li>
		<li>Breng de bovendrijvende substantie in een HPLC flacon invoegen en plaatsen van monster flesjes in de lade van een autosampler voor injectie.</li>
	</ol></li></ol> 2. HPLC-instrumentatie en bewerkingsparameters <ol><li>bereiden HPLC mobiele fase met consistente reproduceerbaarheid <ol><li>500 mL HPLC-grade H 2 O met behulp van een gegradueerde cilinder meten.</li>
		<li>Meten van HPLC-grade acetonitril (ACN) met behulp van een aparte afgestudeerd cilinder 500 mL.</li>
		<li>Voeg voorzichtig 0,5 mL trifluorazijnzuur (TFA) (Let op) in elk 500 ml H 2 O en ACN te verkrijgen van de mobiele fase van H 2 O en ACN met 0,1% TFA, respectievelijk. 
		Opmerking: TFA is bijtende en giftige en onder een zuurkast laboratorium moet worden behandeld. Alle mengsels van oplosmiddelen zijn bereid bij kamertemperatuur.</li>
		<li>Filter mobiele fasen door een membraanfilter van nylon met een 0,45 µm porie grootte en breng dit in een schone HPLC reservoir flessen.</li>
	</ol></li> <li>Set-up HPLC instrumentatie voor simultane detectie van DOX, MMC, en DOXol en I.S. 4-MU.
	<ol><li>Zet de kleurovergang pomp, ambtshalve gasser, auto-sampler, fotodiode array detector en multi λ fluorescentiedetector.</li>
		<li>Input van de oorspronkelijke voorwaarden van de mobiele-fase samenstelling naar 16,5% H 2 O (0,1% TFA) en 83,5% ACN (0,1% TFA) (v/v).</li>
		<li>Set van de UV-detector op twee kanalen, één voor één 310 nm voor 4-MU (I.S.) en anderzijds op 360 nm voor MMC.</li>
		<li>De fluorescentiedetector ingesteld op twee kanalen, één voor één λ ex / λ em = 365/445 nm voor 4-MU en de andere op λ ex / λ em = 480 nm/560 nm voor DOX en DOXol, respectievelijk.</li>
		<li>Instellen van een isocratic debiet van 1,0 mL/min.</li>
		<li>Een voorgeïnstalleerde omgekeerde fase C 18 kolom (4.6 mm x 250 mm, 5 µm) bij kamertemperatuur gedurende 10 minuten basislijn verantwoordelijkzijnvoor equilibreer.</li>
	</ol></li> <li>Scheiden van drugs (DOX, MMC, DOXol en 4-MU) met kleurovergang mobiele-fase voorwaarde.
	<ol><li>Injecteren 15 µL van uitgepakte en opnieuw geconcentreerd monsters met behulp van de auto-sampler.</li>
		<li>Geleidelijk veranderen de eerste voorwaarde van de mobiele fase (zie protocol stap 2.2.2) tot 100% ACN (0,1% TFA) meer dan 18 min met behulp van de geautomatiseerde kleurovergang pomp. 
		Opmerking: Tijdens het scheidingsproces, vier kanalen (twee UV-absorberend en twee TL) verschijnen gelijktijdig met elk kanaal een drug samengestelde weergeven (Zie Protocol stap 2.2.3 en 2.2.4).</li>
		<li>100% van ACN handhaven (0,1% TFA) voor 1 min en vervolgens terugkeren naar de voorwaarde van de eerste mobiele fase binnen 1 min.</li>
		<li>Opnieuw de conditie van de kolom met de eerste mobiele fase stroom snelheid van 1,5 mL/min voor 4 min voor de volgende monster injectie.</li>
	</ol></li></ol> 3. Validatie van de HPLC <ol><li>bereiden arbeidsnormen van DOX, MMC en DOXol en 4-MU (I.S.).
	<ol><li>Weigh afzonderlijk 1 mg van DOX en MMC drug poeder (voorzichtig) en 4-MU op een klein gewicht van papier (3 x 3 inch 2) frisse. 
		Opmerking dat alle antikanker geneesmiddelen worden beschouwd als een gevaar voor de gezondheid die acute toxiciteit en geslachtscellen mutageniteit op inademing of inslikken veroorzaken kan. Zij moeten voorzichtig worden omgegaan met handschoenen en maskers.</li>
		<li>De gewogen DOX, MMC en 4-MU overzetten naar een nieuwe afzonderlijke 1,5 mL polypropyleen micro-centrifuge buis.</li>
		<li>, Voeg 1 mL van methanol en vortex kort te verkrijgen van 1 mg/mL concentratie van DOX en MMC.</li>
		<li>Voeg 1 mL methanol in een flesje dat vooraf gewogen 1 mg DOXol (Let op) en vortex kort te verkrijgen van 1 mg/mL concentratie van DOXol. 
		Opmerking: DOXol is een metaboliet van cardio-giftig en moet voorzichtig worden omgegaan,.</li>
		<li>Pipetteer 20 µL van bereide voorraad oplossingen van DOX, MMC, DOXol en 4-MU in een nieuwe aparte 1,5 mL polypropyleen micro-centrifuge buis en voeg 980 µL van methanol te verkrijgen van een standaard werken van 20 µg/mL van elk medicijn.</li>
		<li>Verdun 20 µg/mL DOX, MMC en DOXol gebruik van methanol om te verkrijgen van de arbeidsnormen van 50 ng - 20 µg /mL voor DOX, MMC en DOXol en 2000 ng/mL voor I.S. 4-MU.</li>
		<li>Zegel van de dop van de tube van werkende oplossingen met een smal stuk van paraffine film dekking te voorkomen van methanol verdamping, wikkel de hele buis met aluminiumfolie om te voorkomen dat blootstelling aan direct licht en opslag bij -20 ° C.</li>
	</ol></li> <li>Bepalen de lineariteit, precisie en nauwkeurigheid van DOX, MMC en DOXol in biologische matrices (dat wil zeggen, volbloed en tumor homogenaat).
	<ol><li>Gelijktijdig spike 5 µL van arbeidsnormen van DOX en DOXol (50 ng/mL - 20 µg/mL), MMC (1000 ng/mL - 16 µg/mL), en 4-MU (2 µg/mL) in 50 µL van lege volbloed of weefsel homogenaat in polypropyleen micro-centrifuge buizen naar verkrijgen van de curve van de standaard concentratie variërend van 5-2000 ng/mL voor drug compounds en 200 ng/mL voor 4-MU (I.S.).</li>
		<li>Uitvoeren van de drug extractie assay beschreven in Protocol 1.2.</li>
		<li>Gebruik lage, gemiddelde en hoge concentraties van DOX en DOXol (50, 500 en 2000 ng/mL) en MMC (100, 1000, 2000 ng/mL) voor intra - en intersite - dag precisie en nauwkeurigheid. 
		Opmerking: Bereiden verse standaard concentraties op de dag van analyse.</li>
	</ol></li> <li>Analyse van monsters <ol><li>injecteren 15 µL van het monster met behulp van de auto-sampler.</li>
		<li>Geleidelijk veranderen de mobiele fase meer dan 0 tot en met 18 min, verhoging van de samenstelling van ACN over de interval.</li>
		<li>Na 18 min, houd de toestand van de mobiele fase 1 min.</li>
		<li>Terug te keren naar de oorspronkelijke toestand over de volgende 2 min, dan opnieuw equilibreer gedurende 4 minuten vóór de volgende injectie.</li>
		<li>Na elk monster lopen, er rekening mee dat de pieken van de drug compounds met hun retentietijd als volgt worden weergegeven: MMC, DOXol, 4-MU (I.S.) en DOX.</li>
		<li>De piekoppervlakte onder de curve (AUC) van drug verbindingen met behulp van HPLC-software integreren.</li>
		<li>Berekenen van de AUC verhouding tussen individuele drug samengestelde en I.S. (vergelijking 1) en de standaard curven bereid volgens dezelfde extractie procedures gebruiken om te bepalen van de concentraties van de drug van DOX, MMC en DOXol in DMPLN formulering. 
		<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56159/56159eq1.jpg" /></li> <li>de drug herstel percentage (vergelijking 2) berekenen door het vergelijken van de concentraties van de drug gereconstitueerd gebruik van methanol uit de extracten van puntige biologische monsters die van de standaard (&#34; nette &#34;) oplossing in methanol van de drug. 
		<img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56159/56159eq2.jpg" /></li></ol></li></ol>

De auteurs hebben geen concurrerende financiële belangen en belangenconflicten.

Vergeleken met andere chromatografische methoden waarmee de detectie van een enkele drug soort tegelijk, vermag het huidige protocol van HPLC kwantificeren gelijktijdig drie drug compounds (DOX, MMC en DOXol) in de matrix dezelfde biologische zonder naar de nood voor wijzigen de mobiele fase. Deze voorbereiding en analyse methode is succesvol toegepast om te bepalen van de farmacokinetiek en bio-verdeling van twee nanoparticle gebaseerde drug afgiftesystemen (dat wil zeggen, Liposomale DOX en DMPLN)<sup class="x...

Chemotherapie is een primaire behandeling modaliteit voor vele vormen van kanker, maar het is vaak geassocieerd met ernstige bijwerkingen en beperkte doeltreffendheid als gevolg van resistentie tegen geneesmiddelen en andere factoren1,2,3. Ter verbetering van het resultaat van de chemotherapie zijn drug combinatie regimes toegepast in de kliniek op basis van overwegingen, zoals niet-overlappende toxicities, verschillende mechanismen voor drug actie, en niet-cross drug weerstand4,5 , 6. in klinische proeven, een betere respons van de tumor werd vaak waargenomen met behulp van gelijktijdig toegediend drug combinaties in vergelijking met een regime van sequentiële drug levering7,8. Nochtans, als gevolg van sub-optimale bio-distributie van gratis drug formulieren, gelijktijdige injectie van meerdere drugs kan veroorzaken prominente normale weefsel toxiciteit die opweegt tegen het therapeutisch effect9,10,11. Nanocarrier gebaseerde drug delivery is gebleken om de farmacokinetiek en bio-distributie van ingekapselde drugs, verbetering van de tumor-gerichte accumulatie12,13,14te wijzigen. Zoals besproken in onze recente artikelen, nanodeeltjes samen geladen met synergetische drug combinaties is gebleken dat de mogelijkheid om te verzachten de problemen door gratis drug combinaties, door hun gecontroleerde temporele en ruimtelijke co levering van meerdere geneesmiddelen om tumor weefsel, waardoor de drug van de synergetische effecten tegen kanker cellen4,15,16. Dientengevolge, zijn superieure therapeutische werking en lage toxiciteit aangetoond in beide pre-klinische en klinische studies4,17,18.
Onze vorige in vitro studies gevonden dat de combinatie van twee geneesmiddelen, Doxorubicine (DOX) en mitomycine C (MMC), een synergie-effect tegen verschillende borst kanker cellen lijnen geproduceerd en, bovendien, CO laden DOX en MMC binnen polymeer-lipide hybride nanodeeltjes (DMPLN) heeft verschillende kruisresistente bijbehorende efflux pompen (bijvoorbeeld P-glycoproteïne en borst kanker resistente eiwit)19,20,21overwonnen. In vivo, DMPLN ingeschakeld ruimtelijke-temporele co levering van DOX en MMC naar sites van de tumor en verhoogde biologische beschikbaarheid van drugs in kankercellen, zoals aangegeven door matiging van de vorming van de DOX metaboliet doxorubicinol (DOXol)22. Dientengevolge, verbeterd de DMPLN tumor cel apoptosis, tumor groeiremming en langdurige gastheer overleven in vergelijking met gratis DOX en MMC combinatie of een liposomaal DOX formulering22,23,24, 25.
Analyseren van de werkelijke hoeveelheid drugs mede geleverd door een nanocarrier is van cruciaal belang voor het ontwerpen van effectieve nanoparticle formuleringen. Veel methoden zijn ontwikkeld om te analyseren van het plasma niveau van één DOX of MMC doses met behulp van hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) alleen of in combinatie met de Spectrometrie van de massa (MS)26,27,28 , 29 , 30 , 31 , 32 , 33 , 34. deze methoden zijn echter vaak tijdrovend en onpraktisch voor combinatietherapie zoals een groot aantal biologische monsters apart worden voorbereid voor de analyse van meerdere drugs moet (soms met inbegrip van drug metabolieten). Naast de binding aan eiwitten sterk plasma van DOX en MMC hebben rode bloedcellen ook een grote capaciteit om te binden en het concentreren van vele geneesmiddelen35,36. Dus, plasma analyse voor DOX of MMC kan het verduisteren van werkelijke bloed drug concentraties. Het huidige werk (Figuur 1) beschrijft een eenvoudige en robuuste meerdere drug methode voor de analyse met behulp van omgekeerde fase HPLC gelijktijdig uitpakken en kwantificeren van DOX, MMC en de DOX metaboliet doxorubicinol (DOXol) van volbloed en verschillende weefsels ( bijvoorbeeld tumoren). Het is met succes toegepast om te bepalen van de farmacokinetiek en de bio-distributie van DOX en MMC en de vorming van DOXol na drug levering via gratis oplossingen of nanoparticle vormen (dat wil zeggen, DMPLN en Liposomale DOX) in een orthotopically lymfkliertest borst-tumor muismodel geïmplanteerd na intraveneuze (IV) injectie22.

<table><tbody><tr><td>Doxorubicin&nbsp;</td><td>Polymed Theraeutics</td><td>111023</td><td>Antikankermedicijn</td></tr><tr><td>Mitomycin C</td><td>Polymed Theraeutics</td><td>060814</td><td>Antikankermedicijn</td></tr><tr><td>Doxorubicinol (DOXol)</td><td>Toronto Research Chemicals</td><td>D558020</td><td>Metaboliet van DOX</td></tr><tr><td>4-Methylumbelliferone natriumzout&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1508</td><td>Interne standaard</td></tr><tr><td>Myristinezuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>544-63-8&nbsp;&nbsp;</td><td>Materialen voor poly-lipid hybride nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Polyoxyethyleen (100) stearaat</td><td>Spectrum</td><td>M1402</td><td>Materialen voor poly-lipid hybride nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Polyoxyethyleen (40) stearaat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3440</td><td>Materialen voor poly-lipid hybride nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Pluronic F68 (PF68)</td><td>BASF Corp.</td><td>9003-11-6</td><td>Materialen voor poly-lipid hybride nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Ultrasone behandeling (UP100H)</td><td>Hielscher, Ultrasound Technology</td><td>NA</td><td>Bereiding van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Waterbad (ISOTEMP 3016HS)</td><td>Fisher Scientific</td><td>NA</td><td>Bereiding van nanodeeltjes</td></tr><tr><td>Liposomale Doxorubicin&nbsp; (Caelyx)</td><td>Janssen</td><td>Gekocht bij de apotheek van het Princess Margaret Hospital</td><td>Klinisch goedgekeurde nanodeeltjesformulering&nbsp;</td></tr><tr><td>HPLC-grade methanol</td><td>Caledon Chemicals</td><td>6701-7-40</td><td>HPLC mobiele fase samenstelling</td></tr><tr><td>HPLC-grade H2O</td><td>Caledon Chemicals</td><td>8801-7-40</td><td>HPLC mobiele fase samenstelling</td></tr><tr><td>HPLC-grade acetonitril&nbsp;</td><td>Caledon Chemicals</td><td>1401-7-40</td><td>HPLC mobiele fase samenstelling</td></tr><tr><td>Trifluorazijnzuur</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>302031</td><td>HPLC mobiele fase samenstelling</td></tr><tr><td>0,45 &mu;m nylon membraanfilterpapier</td><td>Whatman</td><td>WHA7404004</td><td>HPLC mobiele fase bereiding</td></tr><tr><td>1cc plastic spuiten</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>2606-309659</td><td>Behandeling injectie</td></tr><tr><td>5cc plastic spuiten</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>2608-309646</td><td>Weefselcollecties</td></tr><tr><td>30G 1/2 naalden</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305106</td><td>Behandeling injectie</td></tr><tr><td>25G 5/8 naalden</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>305122</td><td>Weefselcollecties</td></tr><tr><td>Steriele 0,9% zoutoplossing</td><td>University of Toronto House Brand</td><td>1011</td><td>Weefselperfusie</td></tr><tr><td>13 ml verrond-bodem conische buis&nbsp;</td><td>SARSTEDT</td><td>62.515.006</td><td>Prolypropyleen, weefselhomogenisatie</td></tr><tr><td>Alpha Minimum Essential Medium (MEM)&nbsp;</td><td>Gibco</td><td>12571063</td><td>Celmedium</td></tr><tr><td>1 x fosfaatbufferoplossing</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td>Weefselhomogenisatie</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>X100-100 ML</td><td>Weefselhomogenisatie</td></tr><tr><td>Mierenzuur</td><td>Caledon Chemicals</td><td>1/5/3840</td><td>Aanpassen pH voor extractie oplosmiddel</td></tr><tr><td>Natriumheparine besproeide plastic buisjes</td><td>Becton, Dickinson and Company</td><td>367878</td><td>Bloedverzameling</td></tr><tr><td>Analytische weegschaal&nbsp;</td><td>Sartorius&nbsp;</td><td>CPA225D</td><td>NA</td></tr><tr><td>pH-meters&nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-637-671</td><td>accumet BASIC</td></tr><tr><td>Vortexmixer</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-215-365</td><td>Vortexing van monsters op gewenste snelheid</td></tr><tr><td>1,5 ml&nbsp; Microcentrifugebuis</td><td>Fisherbrand</td><td>2043-05408129</td><td>Prolypropyleen</td></tr><tr><td>Model 1000 homogenisator</td><td>Fisher Scientific</td><td>08-451-672</td><td>Weefselhomogenisatie</td></tr><tr><td>Centrifuge 5702R</td><td>Eppendorf</td><td>5702R</td><td>Extractievoorbereiding</td></tr><tr><td>Verwarmd verdampersysteem</td><td>Glas-Col</td><td>NA</td><td>Sample reconstitutie</td></tr><tr><td>HPLC-schroefdraadverduisters</td><td>DIKMA</td><td>5320</td><td>HPLC-monsterinjectie</td></tr><tr><td>HPLC-schroefdoppen met PTFE witte siliconen septa</td><td>DIKMA</td><td>5325</td><td>HPLC-monsterinjectie</td></tr><tr><td>HPLC Polypropyleen inzet&nbsp;&nbsp;</td><td>Agilent Technologies</td><td>5182-0549</td><td>Maximaal volume 250 &mu;l, HPLC-monsterinjectie</td></tr><tr><td>Xbridge C18 Kolom</td><td>Waters Corporation</td><td>186003117</td><td>Geneesmiddelenanalyse</td></tr><tr><td>Gradiëntpomp&nbsp;</td><td>Waters Corporation</td><td>W600</td><td>Geneesmiddelenanalyse</td></tr><tr><td>Autosampler</td><td>Waters Corporation</td><td>W2707</td><td>Geneesmiddelenanalyse</td></tr><tr><td>Fotodiode arraydetector&nbsp;</td><td>Waters Corporation</td><td>W2998</td><td>Geneesmiddelenanalyse</td></tr><tr><td>Multi &lambda; fluorescentiedetector&nbsp;</td><td>Waters Corporation</td><td>W2475</td><td>Geneesmiddelenanalyse</td></tr><tr><td>EMPOWER 2</td><td>Waters Corporation</td><td>NA</td><td>Gegevensanalysesoftware</td></tr><tr><td>Wetenschapper</td><td>Micromath</td><td>NA</td><td>Farmacokinetische analyse</td></tr><tr><td>Vrouwelijke Balb/c muizen</td><td>Jackson Laboratory</td><td>001026</td><td>In vivo</td></tr><tr><td>EMT6/WT borstkankercellen</td><td>Verstrekt door Dr. Ian Tannock; Ontario Cancer Institute</td><td>NA</td><td>In vivo</td></tr></tbody></table>

monster extractie en gelijktijdige chromatografische kwantificatie van doxorubicine en mitomycine c na drug delivery van de combinatie in nanopartikels met tumor-dragende muizen

Sample Extraction and Simultaneous Chromatographic Quantitation of Doxorubicin and Mitomycin C Following Drug Combination Delivery in Nanoparticles to Tumor-bearing Mice

Combinatie chemotherapie wordt vaak gebruikt in de kliniek voor de behandeling van kanker; echter kunnen bijbehorende nadelige effecten op de normale weefsel beperken het therapeutisch nut hebben. Nanoparticle gebaseerde drug combinatie is aangetoond dat het verminderen van de problemen van gratis drug combinatietherapie. Onze vorige studies hebben aangetoond dat de combinatie van twee geneesmiddelen, Doxorubicine (DOX) en mitomycine C (MMC), een synergie-effect tegen beide RattenUitrustingen geproduceerd en menselijke borstkanker cellen in vitro. DOX en MMC mede geladen polymeer-lipide hybride nanodeeltjes (DMPLN) overgeslagen verschillende efflux vervoerder pompen die multidrug resistentie en aangetoonde verbeterde werkzaamheid in borst tumor modellen verlenen. Vergeleken met conventionele oplossing vormen, werd deze superieure werkzaamheid van DMPLN toegeschreven aan de gesynchroniseerde farmacokinetiek van DOX en MMC en verhoogde intracellulaire drug biologische beschikbaarheid binnen de tumorcellen ingeschakeld door de nanocarrier PLN.
Om te evalueren van de farmacokinetiek en bio-distributie van samen toegediend DOX en MMC in zowel gratis oplossing en nanoparticle vormen, een eenvoudige en efficiënte multi geneesmiddelenanalyse-methode met behulp van reverse-fase hoge prestatie vloeibare chromatografie (HPLC) was ontwikkeld. In tegenstelling tot de eerder gemelde methoden die DOX of MMC afzonderlijk geanalyseerd in het plasma, is deze nieuwe HPLC-methode kunnen gelijktijdig kwantificeren DOX, MMC en een grote cardio-toxisch DOX metaboliet, doxorubicinol (DOXol), in verschillende biologische matrices ( bijvoorbeeld volbloed, borst tumor en hart). Een dubbele TL- en UV absorberend sonde 4-methylumbelliferone (4-MU) werd gebruikt als een interne standaard (I.S.) voor one-step detectie van meerdere geneesmiddelenanalyse met verschillende detectie golflengtes. Deze methode werd succesvol toegepast om te bepalen van de concentraties van DOX en MMC geleverd door zowel de nanoparticle als de oplossing benaderingen in volbloed en verschillende weefsels in een orthotopic borst tumor lymfkliertest model. De analytische methode gepresenteerd is een nuttig hulpmiddel voor pre-klinische analyse van de nanoparticle gebaseerde levering van drug combinaties.

Twee antikanker geneesmiddelen, DOX en MMC, evenals de DOX metaboliet, DOXol, werden gelijktijdig ontdekt een biologische ongehinderd onder dezelfde toegepaste gradiënt HPLC staat gebruik van 4-MU als de I.S. voor zowel de fluorescentie en UV detectoren. DOX, MMC, DOXol en 4-MU waren goed van elkaar gescheiden met retentietijden van 5.7 min voor MMC, 10.4 min voor DOXol, 10.9 min. voor 4-MU en 11.1 min voor DOX (Figuur 2). Elk medicijn in volbloed en verschil...

Dit protocol beschrijft een efficiënte en handige analytische proces van extractie van het monster en gelijktijdige bepaling van meerdere drugs, Doxorubicine (DOX), mitomycine C (MMC) en een cardio-toxisch DOX metaboliet, doxorubicinol (DOXol), in de biologische monsters uit een preklinische borst tumor model behandeld met nanoparticle formuleringen van synergetische drug combinatie.

Monster extractie en gelijktijdige chromatografische kwantificatie van Doxorubicine en mitomycine C na Drug Delivery van de combinatie in nanopartikels met Tumor-dragende muizen

Combination chemotherapy is frequently used in the clinic for cancer treatment; however, associated adverse effects to normal tissue may limit its ...

Het algemene doel van dit analytisch protocol is om tegelijkertijd de twee anti-kankergeneesmiddelen Doxorubicine en Mitomycine C, die worden getransporteerd door polymeer-lipide hybride nanodeeltjes, en de metaboliet van Doxorubicine, Doxorubicinol, in biologische matrices te extraheren en te kwantificeren met behulp van een eenvoudige en robuuste reverse phase hogedrukvloeistofchromatografie methode. Deze methode kan helpen om belangrijke vragen in het veld van nanogeneeskunde te beantwoorden, zoals hoe een effectief nanocarriersysteem te ontwerpen op basis van de nanofarmacokinetiek van geneesmiddelcombinaties. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het mogelijk maakt om tegelijkertijd drie geneesmiddelverbindingen in dezelfde biologische matrix te kwantificeren, zonder dat de mobiele fase van HPLC hoeft te worden gewijzigd.Deze methode kan dus inzicht bieden in de biologische gedragingen van Doxorubicine, Mitomycine C en Doxorubicinol in primaire borsttumoren. Het kan ook worden toegepast op andere kankersoorten die met vergelijkbare geneesmiddelen worden behandeld. Visuele demonstratie van deze methode is cruciaal, omdat efficiënte stapsgewijze voorbereidingsstapp

sample-extraction-simultaneous-chromatographic-quantitation

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Kankeronderzoek

Insonation van microbellen is een veelbelovende strategie voor tumor ablatie op kortere gemiddelde akoestische bevoegdheden, alsmede voor de gerichte toediening van geneesmiddelen. Het doel van deze studie is het ontwikkelen van low duty cycle echografie pulserende strategieën en nanocarriers aan niet-thermische microvasculair ablatie en laadvermogen levering aan subcutane C6 glioma te maximaliseren.

Contrast Echografie doelgerichte behandeling van gliomen in Muizen via Drug-Bearing Nanodeeltje Levering en microvasculaire Ablation

We beschrijven een werkwijze voor beeldvorming respons op...

Leef Imaging van de Drug antwoorden in de tumor micro-omgeving in muismodellen van Kanker van de Borst

Dit artikel beschrijft de procedures voor optische beeldvorming analyse van de tumor-gerichte nanodeeltjes, HerDox. In het bijzonder wordt gebruik van de gedetailleerde multimode beeldvormingsinrichting voor het detecteren en beoordelen van tumor targeting tumorpenetratie beschreven.

Analyse van Gerichte Viral Eiwit Nanodeeltjes Geleverd aan HER2 + Tumoren

Een voorbeeld van een nano geneesmiddel op basis polymalic zuur gepresenteerd naar het rationele ontwerp van gepersonaliseerde geneeskunde die voor kanker. Het beschrijft de synthese van een nano geneesmiddel Her2-positieve menselijke borst kanker in naakt muizen.

Polymalic Acid-gebaseerde Nano Biopolymeren voor Targeting van Multiple Tumor Markers: een kans voor Gepersonaliseerde Geneeskunde?

Wij beschrijven hierin de methode van op fiber gebaseerde confocale fluorescente microscopie (FCFM) gebaseerde beeldvorming, die een innovatieve manier biedt om fysiologische fenomenen op cellulair en subcellulair niveau bij dierlijke onderwerpen te begrijpen.

Chemotherapie-geïnduceerde vaattoxiciteit - Real-time<em&gt; In vivo</em&gt; Beeldvorming van Vessel Impairment

De heterogene intra-tumorale accumulatie van liposomen is in verband gebracht met een abnormale tumormicro-omgeving. Hierin worden methoden gepresenteerd om de tumormicrocirculatie te meten door middel van perfusiebeeldvorming en verhoogde interstitiële vloeistofdruk (IFP) met behulp van een beeldgestuurd robotsysteem. Metingen worden vergeleken met de intra-tumorale accumulatie van liposomen, bepaald met behulp van volumetrische micro-CT-beeldvorming.

Ruimtelijke Metingen van perfusie, interstitiële vloeistof druk en liposomen accumulatie in solide tumoren

Een protocol voor de bereiding en karakterisering van lipofiele doxorubicine pro-geneesmiddel beladen 1,2-distearoyl- sn glycero-3-phosphoethanolamine- N - [amino (polyethyleenglycol) -2000] (DSPE-PEG) micellen wordt beschreven.

Bereiding en karakterisering van lipofiele doxorubicine Pro-drug micellen

Nanodeeltjes zijn in opkomst als veelbelovende dragersystemen voor een groot aantal indicaties. Hier beschrijven we een eenvoudige maar krachtige methode om zijde nanodeeltjes produceren met behulp van reverse engineered Zijdevlinder zijde. Deze zijde nanodeeltjes kunnen gemakkelijk worden geladen met een therapeutische payload en vervolgens verkend voor drug delivery applicaties.

Fabricage en Drug Delivery Toepassingen van Silk Nanodeeltjes

Het slechte begrip van de in vivo prestaties van nanomedicijnen belemmert hun klinische translatie. Procedures om het in vivo gedrag van kanker nanomedicijnen op systemisch, weefsel-, enkelcellig en subcellulair niveau te evalueren bij tumordragende immuuncompetente muizen worden hier beschreven. Deze aanpak kan onderzoekers helpen om veelbelovende kanker nanomedicijnen te identificeren voor klinische translatie.

A Comprehensive Procedure voor het evalueren<em&gt; In Vivo</em&gt; Prestaties of Cancer Nanomedicines

In dit protocol worden doxorubicine-geladen AS1411-g-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes gesynthetiseerd via driestapsamidereacties. Vervolgens wordt doxorubicine geladen en afgeleverd om kankercellen te targeten voor kankertherapie.

Synthese van Aptamer-PEI-g-PEG gemodificeerde gouden nanodeeltjes geladen met Doxorubicine voor gerichte medicijnafgifte

Hier beschrijven we het protocol voor in vivo toediening van magnetische ijzeroxide nanodeeltjes die RNA-oligomeren vervoeren naar uitgezaaide borstkanker in diermodellen, waardoor een klinisch haalbare benadering wordt geboden voor de therapeutische uitschakeling van oncogene nucleïnezuren.

Monitoring van de accumulatie van nanodrugs bij borstkankermetastasen bij muizen

Leer de gelijktijdige extractie en kwantificatie van Doxorubicine, Mitomycine C en Doxorubicinol in biologische monsters met behulp van reverse phase HPLC. Deze methode ondersteunt nanofarmacokinetisch onderzoek naar effectieve nanodragerontwerpen voor kankertherapie.

Monster extractie en gelijktijdige chromatografische kwantificatie van Doxorubicine en mitomycine C na Drug Delivery van de combinatie in nanopartikels met Tumor-dragende muizen (Video) | JoVE Journal

Monster extractie en gelijktijdige chromatografische kwantificatie van Doxorubicine en mitomycine C na Drug Delivery van de combinatie in nanopartikels met Tumor-dragende muizen

Meer video's verkennen