Name: Afleiding van menselijke embryonale stamcellen door Immunosurgery (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-12-13T00:28:00.000+00:00
Duration: 11 min 56 s
Description: Leer hoe menselijke embryonale stamcellen worden afgeleid via immunochirurgische isolatie van de binnenste celmassa. Dit protocol toont de essentiële stappen voor succesvolle stamcelderivatie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

AEC is een fellow van de Jane Coffin Childs Memorial Fund for Medical Research en Merck Research Laboratories. Wij danken D. Egli en C. Cowan voor experimentele advies en discussie.

<html> Ingevroren menselijke embryo&#39;s worden gebruikt voor menselijke embryonale stamcellen (hES) cel afleiding werden geschonken voor onderzoek na goed geïnformeerde toestemming onder onderzoeksprotocollen die werden beoordeeld en goedgekeurd door zowel de commissie voor het gebruik van menselijke proefpersonen en het embryonale stamcelonderzoek toezichtscommissie aan de Harvard Universiteit . Schriftelijk protocol hieronder is gebaseerd op gepubliceerde parameters gerapporteerd door Cowan et al.. 2004, met lichte wijzigingen. Embryo Cultuur Dooi menselijke embryo&#39;s met behulp van Quinn&#39;s Advantage Kit Ontdooi en cultuur in druppels van Global medium aangevuld met 15% Plasmanate tot ontwikkeling aan de uitgebreide blastocyst stadium. Immunosurgery op basis van isolatie van de binnenste celmassa Bereiding: <ol><li> Bereid je platen voor het verwijderen van de zona pellucida en immunosurgery (zie hieronder) door het opzetten van druppels van elke oplossing in 10cm platen. Overlay met minerale olie om verdamping te voorkomen. Bereid een enkele rij per embryo bedoeld voor afleiding. <ul><li> EmbryoMax Zure Tyrodes, te gebruiken zoals het is. </li><li> hES cell afleiding media: 75% KO-DMEM, 10% KO-Serum vervanging, 10% Plasmanate, 2,5% ES-cel-getest foetaal bovine serum (FBS), 2mm Glutamax-I, 1% niet-essentiële aminozuren, 50 eenheden / ml penicilline, streptomycine 50μg/ml, 0.055mM b-mercapto-ethanol, 5ng/ml bFGF. </li><li> Konijn anti-humaan rode bloedcellen primaire antilichaam, gereconstitueerd volgens de fabrikant de suggestie, verdund tot 1:10 met HES cel afleiding media. </li><li> Cavia complement serum, gereconstitueerd volgens de fabrikant de suggestie, verdund tot 1:10 met HES cel afleiding media. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_9_18_6/574_Figure-01.png" alt="574_Figure-01" width="600" height="166" /> </li></ul></li><li> Evenwicht alle platen tot 37 ° C in weefselkweek incubator voor gebruik. </li><li> Pull 50μl-100μl capillaire pipetten (VWR) voor gebruik in de overdracht van embryo&#39;s. Gesneden eindigt met diamant pen en te gebruiken met de mond pipet buis voorzien van een 0.2μm filter. </li></ol> Immunosurgery Procedure: Opmerkingen: <ul><li> In deze procedure worden cellen van de trophectoderm vernietigd door korte blootstelling aan antilichamen gericht tegen menselijke cellen in combinatie met complement activiteit. Daarom is het protocol werkt het beste met een hoge kwaliteit embryo&#39;s met een intact trophectoderm, omdat alleen de structurele integriteit van de blastocyst voorkomt dat de ICM uit ook gevoelig zijn voor de immunologische reactie. </li><li> Alle procedures uitgevoerd met behulp van een dissectie bereik uitgerust met verwarmde podium. </li></ul> Stappen: <ol><li> De mond spoelen pipet om gebruikt te worden voor de embryo transfer met FBS om embryo&#39;s te voorkomen plakken. </li><li> Transfer blastocyst van cultuur schotel naar hES houden druppel van AT schotel. </li><li> Begin de procedure door de overdracht van blastocyt van Hes druppel door reeks van AT druppels. In de derde drop, pas op voor ontbinding van de zona pellucida (meestal 5 tot 30 seconden). Wees niet te over-te behandelen of embryo integriteit kan worden aangetast. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_2/574_Figure-02.png" alt="574_Figure-02" width="551" height="273" /> </li><li> Overdracht door de blastocyst serie van hES cel afleiding media daalt tot af te spoelen AT. Vooraf laden pipet met media is aan te raden om meteen te neutraliseren AT reactie. Blastocysten kan hier worden gehouden totdat alle zijn AT-verwerkt. </li><li> Overdracht blastocyst door reeks primaire antistof druppels, waardoor in de derde dalen gedurende 30 minuten incubatie bij 37 ° C in een weefselkweek incubator. </li><li> Overdracht door de blastocyst serie van hES cel afleiding media valt af te spoelen primair. </li><li> Overdracht blastocyst door reeks van complement druppels, waardoor er in de derde dalen om naar te kijken voor de lysis van trophectoderm cellen. Let op blastocyst voor de eerste 30 seconden op het podium voor &quot;borrelen&quot; van trophectoderm cellen als ze lyseren. Als lysis wordt waargenomen binnen deze termijn, blijven schotel op microscoop podium om de reactie tot aan de voltooiing te controleren. Als er geen borrelende wordt waargenomen tijdens de eerste 30 seconden terug te keren naar incubator, controleren elke 5 minuten tot de meeste van de trophectoderm heeft gelyseerd. Dit kan 5-15 minuten. Monitor reactie nauw samen om de reactietijd en de potentiële schade aan de binnenste celmassa te minimaliseren. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_3/574_Figure-03.png" alt="574_Figure-03" width="571" height="273" /> </li><li> Overdracht door de blastocyst serie van hES cel afleiding media valt te wassen te vullen activiteit. </li><li> Met behulp van glazen pipet met een diameter die iets kleiner dan de blastocyst (getrokken van 10μl VWR capillaire buizen), trek de blastocyst omhoog en omlaag om ontdoen grootste deel van de gelyseerde trophectoderm. g &quot;alt =&quot; 574_Figure-0 &quot;width =&quot; 577 &quot;height =&quot; 270 &quot;/&gt; </li><li> Plaat ICM isoleren op feeder cellen van mitotisch geïnactiveerd muis embryo fibroblasten (MEFs). MEF moeten worden voorbereid op de dag voor afleiding en is overgeschakeld naar hES cell afleiding media dag van. 4-goed NUNC gerechten werken goed voor de eerste stappen van afleiding. </li><li> Niet storen plaatje voor de eerste 1-2 dagen. Daarna, dagelijks controleren op uitgroei van embryonale stamcellen kolonies (meestal na 1-2 weken zichtbaar). Media moet worden veranderd in half volumes om de andere dag begint op dag 3. </li></ol> ES-cel uitgroei en passage Wanneer de hES cel uitgroei heeft ongeveer 0,5 mm of meer bereikt, is het klaar voor de uitbreiding door mechanische plukken. <ol><li> Mechanisch verspreiden de helft van de uitgroei en transfer naar nieuwe platen met verse feeders. Embryonale stamcellen groepjes moet worden ongeveer 30-50 cellen per stuk. Laat andere helft van de uitgroei als een back-up voor de eerste passage (p1). De uitgroei (p0) kan worden gekozen uit verschillende periodes, omdat het blijft groeien. <img src="/files/ftp_upload/old/574_2008_7_21_5/574_Figure-05.png" alt="574_Figure" width="639" height="219" /> </li><li> Secundaire kolonies kunnen op dezelfde manier worden verspreid en uitgebreid over grotere cultuur gerechten tot passages 3-5, op welk moment de nieuwe cellijnen kunnen worden aangepast aan enzymatische passage met trypsine. Het serum gehalte van de cultuur media moeten ook geleidelijk worden verlaagd tot 1% en 0% tijdens deze eerste passages te ES celdifferentiatie te minimaliseren. </li><li> Alle gevestigde embryonale stamcellijnen moet worden dwarshelling van bevriezing van een deel van de vroege passages voor toekomstige uitbreidingen. </li><li> Daarnaast moet elke cellijn worden gekenmerkt door karyotype analyse en gevalideerd door pluripotentie en differentiatie studies in vitro en in vivo. </li></ol>

<ol><li>Cowan, C. A., Klimanskaya, I., McMahon, J., Atienza, J., Whitmyer, J., Zucker, J. P., Wang, S. P., Morton, C. C., McMahon, A. P., Powers, D., Melton, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+embryonic+stem-cell+lines+from+human+blastocysts%5BTitle%5D)+AND+%22N+ENGL+J+MED%22%5BJournal%5D)">Derivation of embryonic stem-cell lines from human blastocysts.</a> N ENGL J MED. 350 (13), 1353-1356 (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te melden.

Het protocol hier gepresenteerde biedt onderzoekers met een beknopte, gemakkelijk te volgen schets van hoe je afleiden menselijke embryonale stamcellijnen door immunosurgical isolatie van de binnenste celmassa.

<table><tbody><tr><td>Quinn&amp;rsquo;s Advantage Thaw Kit </td><td>Sage</td><td>ART-8016</td><td></td></tr><tr><td>Global medium</td><td>Life Global</td><td>GMGB-050</td><td></td></tr><tr><td>Plasmanate</td><td>Talecris</td><td>61325</td><td></td></tr><tr><td>EmbryoMax Acidic Tyrodes</td><td>Chemicon International</td><td>MR-004-D</td><td></td></tr><tr><td>KO-DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>10829-018</td><td></td></tr><tr><td>KO-Serum Replacement</td><td>Invitrogen</td><td>10828-028</td><td></td></tr><tr><td>Defined foetaal bovien serum, getest op ES-cellen</td><td>Hyclone</td><td>SH30070.03</td><td></td></tr><tr><td>Glutamax-I</td><td>Invitrogen</td><td>35050-079</td><td></td></tr><tr><td>Niet-essentiële aminozuren</td><td>Invitrogen</td><td>11140-076</td><td></td></tr><tr><td>Penicilline/Streptomycine</td><td>Invitrogen</td><td>15070-063</td><td></td></tr><tr><td>Recombinante humane basale fibroblastengroeifactor</td><td>Invitrogen</td><td>13256-029</td><td></td></tr><tr><td>Beta-mercapto&amp;#8211;ethanol </td><td>Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>Konijn anti-humane rode bloedcel primair antilichaam</td><td>Rockland Immunochemicals</td><td>109-4139</td><td></td></tr><tr><td>Cavia-complementserum</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-1639</td><td></td></tr><tr><td>Capillaire pipetten in maten van 10 µL, 50 µL, 100 µL</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mondpipetten met slang</td><td>VWR international</td><td></td><td>geleverd bij capillaire pipetten van VWR</td></tr><tr><td>0,2 µm Acrodisc spuitfilter </td><td>Pall Corporation</td><td>PN4192</td><td></td></tr><tr><td>0,5% Trypsine-EDTA</td><td>Invitrogen</td><td>25300-120</td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekschalen</td><td>VWR international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Weefselkweekschalen</td><td>Nalge Nunc international</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nikon SMZ1500 dissectiescoop uitgerust met Nikon Tokai Hit ThermoPlate verwarmingstafel </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Muizen embryonale fibroblasten (E12.5)</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

afleiding van menselijke embryonale stamcellen door immunosurgery

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Het vermogen van menselijke embryonale stamcellen om zichzelf te vernieuwen en te differentiëren in alle celtypen van het lichaam, suggereert dat zij een grote belofte voor zowel de medische toepassingen en als een research tool voor het aanpakken van fundamentele vragen bij ontwikkeling en ziekte vast te houden. Hier bieden wij een beknopte, stap-voor-stap protocol voor de winning van menselijke embryonale stamcellen uit embryo&#39;s door immunosurgical isolatie van de binnenste celmassa.

Afleiding van menselijke embryonale stamcellen door Immunosurgery

Het vermogen van menselijke embryonale stamcellen tot zelfvernieuwing en differentiatie in alle celtypen van het lichaam suggereert dat zij een groot potentieel hebben voor zowel ...

Hallo, mijn naam is Alice Chen. Ik ben postdoc in het melting lab en vandaag zal ik u demonstreren hoe we embryonale stamcellen winnen uit menselijke embryo's. We ontvangen embryo's in verschillende stadia van ontwikkeling en kweken deze in vitro totdat ze het juiste stadium van uitgebreide blastocysten hebben bereikt.Dit zijn voorbeelden van hoe het embryo zich ontwikkelt vanaf het eerste stadium, het eencellige stadium, tot de vroege blastocyst, en vervolgens de uitgebreide blastocyst waaruit we humane embryonale stamcellen afleiden. Hoogwaardige embryo's die zijn geselecteerd voor afleiding worden vervolgens overgebracht via drie druppels ACE-oplossing, waarbij u ze laat rusten en wacht op de oplossing van de zona pellucida. Het denudatieproces is een aspecifiek proces waarbij het konijnen anti-humaan antilichaam zich bindt aan de buitenste cellaag.In dit geval gaat het om de trifecta derm. Na toevoeging van guinea pig serum complement zullen al deze cellen waaraan antilichamen zijn gebonden, lyseren. Ter voorbereiding maken we drie platen klaar.De eerste plaat is voor ACE tyros, die we gebruiken om de zita te verwijderen. De tweede en derde platen zijn voor immunochirurgie. Ik begin eerst met het voorbereiden van de plaat waarop we de acid tyros-druppels en de afgeleide menselijke embryonale stamcellen zullen plaatsen.Mediadruppels. Bereid drie druppels zuur tyros voor aan de linkerzijde van de plaat, en aan de rechterzijde van de plaat bereid je drie druppels menselijke ES-cultuurmedia. De tweede plaat bevat het primaire antilichaam, namelijk konijn anti-menselijk RBC.Opnieuw wordt de linkerkant van de plaat toegewezen aan het primaire antilichaam, drie druppels per embryo, en de rechterkant van de plaat aan de menselijke ES-cultuur. Voor de complementplaat worden opnieuw druppels medium gebruikt, drie druppels per embryo. We plaatsen wederom drie druppels complement aan de linkerkant van de plaat en vervolgens drie druppels menselijke ES-cultuurmedium aan de rechterkant van de plaat.Nogmaals: elke rij is bestemd voor een embryo. Alle drie de platen worden bedekt met minerale olie om verdamping te voorkomen en in de incubator geplaatst voor equilibratie. Dit is een dissectiescoop in een bemonsteringskast met een laminaire luchtstroom, net als bij weefselkweek, en dit is waar we het grootste deel van onze manipulaties van menselijke embryo's uitvoeren.Het eerste dat u wilt voorbereiden voordat u met uw embryo's begint, zijn mondpipetten. Dit is de standaardslang voor mondpipetten, met als enige uitzondering dat we een filter van 0,2 micron hebben geplaatst tussen uw mond en de plek waar de pipet komt. Dit is uitsluitend om de steriliteit te waarborgen.Ik zal demonstreren hoe u mondpipetten trekt. Ik trek graag verschillende maten. Al deze materialen zijn verkrijgbaar bij VWR en ik trek diameters van 10 µL, 50 µL en 100 µL.Nu gebruik ik een diamantpen om de montagebuis door te snijden. Voor deze eerste stap is een vrij grote diameter gewenst, omdat u het gehele embryo hanteert. Hoogwaardige embryo's die zijn geselecteerd voor derivatie worden vervolgens via drie druppels overgebracht.Voeg de reagentia toe door simpelweg van de eerste druppel naar de tweede en vervolgens naar de derde druppel over te gaan, waar u het laat rusten en wacht op de oplossing van de zap palita. Dit proces duurt gewoonlijk minder dan 30 seconden, en u kunt de zap palita daadwerkelijk zien oplossen. Wanneer de zap palita volledig is opgelost.De embryo's worden vervolgens overgebracht via drie wasdruppels van humaan ES-kweekmedium, waarbij ze respectievelijk door de eerste, tweede en derde wasdruppel gaan. Daarna wordt het embryo overgebracht naar druppels met het primaire antilichaam, opnieuw via de eerste, tweede en derde druppel, waarna het gedurende een half uur wordt geïncubeerd in de weefselkweekincubator. De lysis van de trofectoderme laag wordt zichtbaar wanneer er bellen ontstaan bij de cellen aan de buitenkant van het embryo. Dit markeert het begin van de lysis van de trofectodermale cellen.Wanneer de lysis duidelijk zichtbaar is langs de gehele buitenrand van het embryo, is het embryo klaar om gewassen te worden via de drie druppels humanus culture Media. Na de immunos-chirurgie worden de embryo's mechanisch getritureerd met behulp van een kleinere mondpipet. Deze mondpipet dient een kleinere diameter te hebben dan de eerste pipet, zodat het proces van trituraties efficiënter kan worden uitgevoerd voor het afschrapen van de lys-trifecta.Dermale cellen. Aan het einde van de mechanische bewerking blijft er een cluster cellen in het centrum over. De binnenste celmassa is intact.Hieromheen bevinden zich veel gelyseerde trifecta dermale cellen, evenals enkele intacte trifecta dermale cellen. Dit isolaat van de inner cell mass wordt vervolgens geplaatst in een well die is voorbereid met feeder-laagcellen van muizenembryo's. De plaat met feeder-laagcellen werd de avond ervoor voorbereid, en vanochtend heb ik het medium vervangen van medium voor muizenembryonale fibroblasten naar medium voor de derivatie van humane es-cellen.Het isolaat van de inner cell mass wordt vervolgens na complementatie uit de wasdruppels overgebracht naar deze put met de feeder-laagcellen. Deze schaal wordt daarna teruggeplaatst in de incubator en enkele dagen ongestoord gelaten om de aanhechting van het inner cell mass-isolaat mogelijk te maken. Dit is een voorbeeld van hoe de uitgroei zich ontwikkelt.Wanneer de uitgroei groot genoeg is, kunnen we de eerste passage starten door deze uitgroei in tweeën te splitsen. Er zijn nu 14 dagen verstreken sinds de oorspronkelijke afleiding, en hier is een voorbeeld van een uitgroei van een van onze afleidingen.Dit is een voorbeeld van een dergelijke uitgroei, waarvan ik vandaag de helft ga wegnemen. Deze uitgroei wordt in tweeën gedeeld en vervolgens in vierkante stukjes gesneden, waarna elk van deze stukjes wordt overgebracht naar een nieuwe well met feeder-cellen. Het is raadzaam om de helft van de uitgroei ongemoeid te laten, zodat u een voortdurende bron van cellen behoudt om op terug te grijpen voor het vermeerderen van uw cellen en als back-up voor elke passage die u uitvoert.Voor de eerste twee tot drie passages is het raadzaam om op deze wijze mechanisch te passagen en de cellen uiteindelijk te laten adapteren aan enzymatische dissociatie voor een efficiëntere passage. Ons laboratorium deriveert consistent menselijke embryonale stamcellijnen voor gebruik bij het begrijpen van ontwikkeling en differentiatie.Deze lijnen worden ook wereldwijd gedistribueerd aan stamcelonderzoekers. Ik denk dat er vier hoofdfactoren zijn die het succes van de derivatie beïnvloeden. De eerste heeft betrekking op de kwaliteit van het embryo, wat ook afhangt van de genetische achtergrond, hoe goed de embryo's waren ingevroren en ontdooid, en tevens van de kwaliteit van de in vitro cultuur tot aan de derivatiefase bij de blastocyst.De tweede factor is waarschijnlijk de kwaliteitsintegriteit van de binnenste celmassa na isolatie; dit kan afhangen van de gebruikte techniek voor het isoleren van de binnenste celmassa en kan daarnaast afhankelijk zijn van ervaring en vaardigheid. De derde factor is hoe goed de geïsoleerde binnenste celmassa hecht aan de feederlagen, en de vierde factor is de uitgroei van dit ICM-isolaat. Ik denk niet dat dit technisch gezien een moeilijk proces is.Het vereist enkel wat oefening. In feite is elke stap vrij eenvoudig, dus zolang u het protocol kunt volgen en een beetje oefent, denk ik dat iedereen dit kan. Wat we in het laboratorium hebben vastgesteld, is dat elke lijn enigszins verschilt om redenen die we niet volledig begrijpen.Stel dat u het differentiatiepotentieel van 10 lijnen zou testen; mogelijk hebben twee of drie van deze lijnen een grotere kans om zich te ontwikkelen tot het type cel waarin u geïnteresseerd bent. Ik vermoed dat deze verschillen te maken hebben met het stadium waarin de cellen zich bevonden, het stadium van het embryo waaruit de embryonale stamcellijnen zijn afgeleid, alsook met de handmatige behandeling van deze cellen. Ik denk dat hun eigenschappen soms veranderen; de heterogeniteit van de cellijnen en hun potentieel is iets waar elke stamcelonderzoeker rekening mee moet houden.Nogmaals, ik weet niet wat dit veroorzaakt, maar als voorbeeld voor mijn onderzoek is ons uiteindelijke doel het maken van insuline-producerende bètacellen van de pancreas. De eerste stap om dit type cellijn te maken, is het genereren van endoderm uit embryonale stamcellen. Bij een vergelijking tussen 10 tot 20 lijnen stelden we vast dat één of twee van deze lijnen efficiënt endoderm kunnen genereren, terwijl de helft dit wellicht minder efficiënt kan en sommige lijnen het helemaal niet goed kunnen genereren. Via dit initiële screeningsproces selecteren we dus cellen die een hogere neiging hebben om het gewenste celtype te vormen, en we gaan verder met de resterende differentiatie met behulp van deze celtypen.De eerste afleiding van menselijke embryonale stamcellen werd in 1998 gerapporteerd door Thompson et al., en in 2004 rapporteerde ons laboratorium de afleiding van 17 nieuwe menselijke embryonale stamcellijnnen. Door deze gepubliceerde protocollen aan te passen, waarbij deze aanpassingen er echt op gericht waren om het afleidingsproces te stroomlijnen, zijn wij tot een verbeterde methode gekomen. Deze bestaan uit wijzigingen in de samenstelling van het medium, de wijze waarop de cellen worden gepassaged en de manier waarop ze worden ingevroren en ontdooid.Sindsdien zoeken we bij elke derivatie naar nieuwe manieren om het protocol en de derivatiesnelheid te verbeteren. Ons laboratorium onderzoekt bijvoorbeeld alternatieve manieren om de inner cell mass te isoleren, waarbij geen gebruik wordt gemaakt van xeno-reagentia zoals het konijnenantilichaam of het cavia-serumcomplement, maar waarbij de inner cell mass meer mechanisch wordt gedisseceerd. Hopelijk leiden deze methoden tot een ten minste vergelijkbare, zo niet betere manier om de inner cell mass te isoleren.

derivation-of-human-embryonic-stem-cells-by-immunosurgery

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol beschrijft de afleiding van transplanteerbare hematopoietische stamcellen uit muis embryonale stamcellen (ESC) en de daaropvolgende injectie in dodelijk bestraalde ontvangende muizen. In het kort, worden ESC gedifferentieerd embryoid lichamen, die vervolgens besmet zijn met retrovirale HoxB4 en co-gekweekt met OP9 stromale cellen en hematopoietische cytokines.

Afleiding van hematopoietische stamcellen van muriene embryonale stamcellen

Deze video toont de procedure voor het genereren van geïnduceerde pluripotente stamcellen met behulp van induceerbare lentivirus die uitdrukken Oct4, Sox2, c-Myc en Klf4.

Het genereren van iPS Cellen van MEF door gedwongen Expressie van Sox-2, okt-4, c-Myc en Klf4

Het vermogen van embryonale kiemcellen om in primordiale kiemcellen differentiëren tijdens de vroege ontwikkelingsstadia is een perfect model om onze hypothese te pakken over kanker en onvruchtbaarheid. Dit protocol laat zien hoe primordiale kiemcellen van de ontwikkeling van gonaden isoleren in 10.5-11.5 dagen na coitum muizenembryo's.

Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal

Geregisseerd differentiatie van hESC 's in de specifieke cellen heeft gegenereerd veel belangstelling voor regeneratieve geneeskunde. Wij bieden een beknopte, stap-voor-stap protocol voor het bepalen van...

Lot in kaart brengen van menselijke embryonale stamcellen door teratoom Formation

Muis embryonale stamcellen kunnen in vitro worden gedifferentieerd tot T-cellen met behulp van het OP9-DL1 co-cultuursysteem. Succes bij deze procedure vereist zorgvuldige aandacht voor reagens/celonderhoud en belangrijke techniekgevoelige stappen. Hier bespreken we deze kritieke parameters en bieden we een gedetailleerd protocol om de adoptie van deze technologie te stimuleren.

Afleiding van T cellen In Vitro Van muis embryonale stamcellen

Generatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen biedt fascinerende perspectieven voor de afleiding van autologe transplantaties. Echter, de progressie door middel van een pluripotente toestand en moeizaam re-differentiatie nog belemmert klinische vertaling. Hier beschrijven we de afleiding van volwassen humane fibroblasten en hun directe omzetting in geïnduceerde neurale progenitor cellen en de daaropvolgende differentiatie tot neuronale lijnen.

Afleiding van volwassen menselijke fibroblasten en hun directe omzetting in Expandable Neural Progenitor Cellen

Genoombewerking van humane pluripotente stamcellen (hPSC's) kan snel en efficiënt worden uitgevoerd. Hier wordt een robuuste experimentele procedure gepresenteerd om hPSC's genetisch te manipuleren, zoals geïllustreerd door het bewerken van het AAVS1-veilige havenlocus om EGFP tot expressie te brengen en antibioticaresistentie te introduceren.

Oprichting van Genome bewerkte menselijke pluripotente stamcellijnen: Van Targeting naar Isolation

Hier beschrijven we een werkwijze voor het zuiveren van gedifferentieerde menselijke embryonale stamcellen die zijn toegewijd aan de definitieve endoderm ter verbetering van downstreamtoepassingen en verdere onderverdelingen.

Een snelle en efficiënte methode voor het zuiveren van Endoderm Cellen Generated van menselijke embryonale stamcellen

Dit protocol beschrijft de methoden voor het construeren van een gehumaniseerd muismodel voor beenmerg/lever/thymus met stamcelgebaseerde geëngineerde immuniteit tegen HIV-infectie.

Stamcel-Based Engineered immuniteit tegen HIV infectie in het gehumaniseerde muismodel

Dit artikel beschrijft een protocol om efficiënt ontlenen en cultuur pluripotente stamcellijnen uit muis embryo's in het blastocyst stadium.

Afleiding van stamcellijnen uit muis voor inplanting embryo 's

Leer hoe menselijke embryonale stamcellen worden afgeleid via immunochirurgische isolatie van de binnenste celmassa. Dit protocol toont de essentiële stappen voor succesvolle stamcelderivatie.

Afleiding van menselijke embryonale stamcellen door Immunosurgery

Meer video's verkennen