Name: Lymfkliertest orofaryngeale aspiratie Model Ventilator-geassocieerde en ziekenhuizen opgelopen bacteriële longontsteking (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 32 s
Description: Leer een muizenmodel voor orofaryngeale aspiratiepneumonie om infectieuze longontsteking te bestuderen. Deze reproduceerbare methode bootst klinische infectie na en helpt bij het testen van nieuwe therapeutische strategieën.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd gesteund door de National Institute of Allergy and Infectious Diseases op de National Institutes of Health [Grant nummers R01 AI117211, R01 AI130060 R21 AI127954 en R42 AI106375 aan BS] en de Amerikaanse Food and Drug Administration [Contract HHSF223201710199C naar BML].

Alle procedures waarbij dieren moeten worden goedgekeurd door de onderzoeker de institutionele Animal Care en gebruik Comité (IACUC).
1. bereiding van bacteriële entmateriaal
<ol><li>Isoleren van bacteriële kolonies.<ol>
<li>Streep een bacteriële stam (bijvoorbeeld, A. baumannii "HUMC1") op de drager van passend steriele agar (bval soja agar), voorzichtig om te genereren van geïsoleerde kolonies.</li>
		<li>Incubeer bij passende omstandigheden (bijvoorbeeld's nachts bij 37 ° C).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Overnachting cultuur te groeien.<ol>
<li>Selecteer een vertegenwoordiger, geïsoleerde kolonie van de agarplaat met een steriele inoculating lus en gebruik het om te enten 10 mL van passend steriele Bouillon medium (bv, al soja Bouillon).</li>
		<li>Toestaan dat de steekproef te bereiken van de stationaire fase op de juiste voorwaarden (bijvoorbeeld, 37 ° C met schudden bij 200 rpm's nachts in een geventileerd-cap, 50 mL conische flesje).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Groeien de subcultuur.<ol>
<li>100 μl van overnachting cultuur naar 10 mL verse steriele bouillon met behulp van een precisiepipet overbrengen.</li>
		<li>Toestaan tot exponentiële/log fase bij de juiste voorwaarden (bijvoorbeeld, 37 ° C met schudden bij 200 omwentelingen per minuut gedurende 3 uur in een geventileerd-cap, 50 mL conische flesje).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Wassen van de subcultuur.<ol>
<li>Verwijder de subcultuur van de drachtige omgeving.</li>
		<li>Centrifugeer bij 4.000 × g gedurende 5 min naar de pellet van de bacteriën.</li>
		<li>Gecombineerd en verwijder het supernatant.</li>
		<li>Voeg 10 mL steriele-fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) naar de pellet en vortex krachtig tot volledig geresuspendeerde.</li>
		<li>Herhaal stap 1.4.2 - 1.4.4 tweemaal, voor een totaal van 3 wasbeurten.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Aanpassen van de concentratie van bacteriële suspensie.<ol>
<li>Met behulp van een spectrofotometer die meet de optische dichtheid bij 600 nm (OD600), meten van de extinctie van de bacteriële suspensie.</li>
		<li>Voeg steriel PBS tot de bacteriële schorsing totdat de optische dichtheid van het entmateriaal zakt naar een OD600 van 0,5, met behulp van de vergelijking Cik× Vik = Cf× Vf, waarbij "C" staat voor concentratie, "V" = volume, "ik" is eerste, en "f" is definitief. * Cf moet altijd 0,5; V-f is de variabele op te lossen.</li>
		<li>Als de bacteriële vering zakt tot onder een OD600 van 0,5, Centrifugeer het bij 4.000 × g gedurende 5 min pellet de bacteriën en verwijderen van een passend bedrag van de bovendrijvende substantie te bereiken een OD600 van 0,5.</li>
		<li>Uitvoeren van seriële verdunningen in steriele PBS (b.v., drie 1:100 verdunningen te bereiken van 1 × 10-6) en plaat op steriele agar te bepalen van de correlatiecoëfficiënt dat de bacteriële concentratie in de kolonie-vormende openbaart eenheden per mL (CFUs/mL) bij een OD600 van 0,5. Opmerking: De waarde van deze correlatiecoëfficiënt zal variëren voor elke stam van elke soort en moet worden bepaald vóór entmateriaal voorbereiding voor een infectie.</li>
		<li>Na het bepalen van de correlatiecoëfficiënt, gebruiken om het maken van een entmateriaal van de gewenste concentratie (b.v., 2 × 108- 1 × 109 CFUs/mL); Als de gewenste entmateriaal groter dan de OD600 van 0,5 is, centrifugeer de bacteriële schorsing bij 4.000 × g gedurende 5 min pellet de bacteriën en verwijderen van een passend bedrag van het supernatans dat tot de gewenste concentratie.</li>
		<li>Uitvoeren in vivo pilotstudies om te bepalen van de virulentie van elke bacteriële isolaat in elke stam van muis, aangezien deze waarden tussen bacteriële isolaten van dezelfde soort en muizen van verschillende genetische achtergronden variëren zullen. Voor verschillende gram-negatieve soorten is de LD-100 in muizen over het algemeen 1-5 × 108 CFUs/muis, hoewel bepaalde stammen dodelijk in lagere entmateriaal zijn.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bevriezen identiek aliquots voor toekomstig gebruik als entmateriaal op afroep, precies, als eerder gepubliceerde8 (optioneel).<ol>
<li>Bereiden 1 L van bacteriële entmateriaal als hierboven, overdracht naar twee conische flesjes van 500 mL, of centrifugeer bij 4.000 × g gedurende 5 min.</li>
		<li>Negeren van 450 mL van het supernatans van elke conische flacon en resuspendeer de pellets van bacteriën in het resterende supernatant.</li>
		<li>De geconcentreerde bacteriële entmateriaal overbrengen in een bekerglas van 250 mL met een magnetische roer bar en continu mengen op de top van een bord roer bij 300 omwentelingen per minuut.</li>
		<li>Zorgvuldig overbrengen precies 600 μL van geconcentreerde bacteriële entmateriaal (bijvoorbeeld, 1 × 1010 CFUs/mL) met behulp van een precisiepipet aan een 1.6-mL cryogene flacon met precies 300 μL van steriele H2O en 300 μL van steriele glycerol; Meng en opslaan bij-80 ° C. Opmerking: De glycerol nodig voor opslag kunt verwarren de experimentele resultaten en overtollige sterfte veroorzaken, dus het is noodzakelijk om te wassen het.</li>
		<li>Wanneer klaar voor gebruik, ontdooien het monster gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur.</li>
		<li>1 mL overbrengen in een conische flacon van 50 mL, voeg 9 mL steriele PBS en centrifuge bij 4.000 × g gedurende 5 min naar de pellet van de bacteriën. Gecombineerd het supernatant en resuspendeer de vooraf bepaalde hoeveelheid CFUs (1 mL × bevroren voorraad concentratie in CFUs/mL) in een passende omvang van PBS te bereiken van de gewenste concentratie van besmettelijke entmateriaal.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. anesthetizing muizen
<ol><li>Ketamine/Xylazine Opmerking: Anesthesie met ketamine/xylazine heeft een lange duur, die genoeg tijd voor de onderzoeker die nieuw is bij deze techniek de inoculatie procedure uitvoeren biedt voordat de muis ontwaakt.<ol>
<li>10 mL van injecteerbare oplossing voor te bereiden door het combineren van 8,5 mL van pharmaceutifcal rang PBS, 1 mL 100 mg/mL stockoplossing van Ketamine (eindconcentratie 10 mg/mL), en 0,5 mL 20 mg/mL stockoplossing van Xylazine (eindconcentratie 10 mg/mL).</li>
		<li>10 μL/g beheren door intraperitoneale injectie van (IP) (bijv., 250 μL voor een 25-g-muis).</li>
		<li>Ophthalmic zalf toepassen door de ogen van de muizen verdoofd met Ketamine/Xylazine, want hun ogen gevoelig zijn voor schade tijdens langere perioden van de verdoving.</li>
		<li>Plaats de muis in een kooi en volgen totdat het wakker uit de narcose. Opmerking: Het dier mag niet worden overgelaten zonder toezicht totdat het voldoende bewustzijn te handhaven sternale lighouding heeft herwonnen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Isofluraan Opmerking: Muizen snel wakker uit narcose Isofluraan-geïnduceerde na wordt verwijderd uit de zaal inductie, zodat deze methode van anesthesie mag alleen worden gebruikt nadat ze zijn bedreven in de inoculatie procedure geworden.<ol>
<li>Plaats de naïeve muizen in een gepaste afmetingen inductie kamer met zuurstof stroomt.</li>
		<li>Nadat de kamer verzegeld afsluiten is, anesthetize de muizen met behulp van een vaporizer precisie toe te voegen Isofluraan op 4% (v/v) voor minstens 5 min; bevestigen van de narcose door het verwijderen van een muis in de zaal van de inductie en meten hoe lang het duurt om wakker uit narcose (~ 60 s). Opmerking: Let erop dat verdoving tijden kunnen variëren op basis van institutionele richtsnoeren en sommige dieren meer dan 5 min vereisen kunnen te worden volledig verdoofd.</li>
		<li>Handhaven van de narcose gedurende maximaal 10 minuten door het aanpassen van de concentratie van Isofluraan tot 2-3%; Als de totale duur van de verdoving is > 15 min, oogheelkundige zalf toepassen in de ogen van narcose muizen.</li>
		<li>Plaats de muis in een kooi en volgen totdat het wakker uit de narcose, zoals in stap 2.1.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. enten/infecteren muizen
<ol><li>Een narcose muis op te schorten, het opknoping door zijn bovenste snijtanden op een sterke, dunne snaar (b.v., tandzijde) beveiligd aan een vast object op een hoogte van ongeveer tweemaal van de muis lichaamslengte (b.v.20 cm) boven het operationele oppervlak (bijvoorbeeld laboratorium Bank).</li>
	<li>Trek voorzichtig van de muis tong uit de mond met behulp van steriele, blunt-ended pincet. De tong overbrengen in een steriele, gehandschoende vinger om te voorkomen dat per ongeluk breken van de tong van de muis. Houd de tong buiten de mond, zodat de toegang tot de orofarynx en het voorkomen van de slikken van het entmateriaal naar de kant.</li>
	<li>Houd de muis op de tong en de 50-μL entmateriaal (bacteriële suspensie) te plaatsen in de orofarynx met behulp van een micropipet; de orofarynx ligt op de kruising van de mondholte en de keelholte naar de achterkant van de mond. Opmerking: Het is zeer belangrijk om alleen vloeistof door pipetteren tot de eerste halte op de micropipet. De muis zal stoppen met ademhalen voor een paar seconden wanneer het entmateriaal wordt geplaatst in de orofarynx; reflexieve aspiratie zal uiteindelijk de muis om in te ademen de bacteriële schorsing, aangegeven door het kenmerkende knetterend lawaai van vloeistof invoeren van de longen, wat in longontsteking infectie resulteert veroorzaken.</li>
	<li>Indien het entmateriaal niet ver ligt terug genoeg om normale ademhaling blokkeren, knijpen de neusgaten met een tang te dwingen reflexieve inademing via de mond en de volgende inademing van het entmateriaal.</li>
	<li>Na inoculatie, vrijgeven van de tong, verwijder de muis uit de schorsing tekenreeks, plaatst u deze in een kooi en volgen totdat het wakker uit de narcose, zoals in stap 2.1.</li>
</ol>4. toezicht progressie van de ziekte
Opmerking: Als gevolg van dierenleed, verschillende indicatoren moeten worden gebruikt om aan te geven wanneer er muizen komen stervende; euthanasie moet worden uitgevoerd na deze vaststelling, overeenkomstig een eerder goedgekeurde protocol van de IACUC; verschillende merkers van moribundity zijn lichaamstemperatuur, gewichtsverlies, uiterlijk, gang en andere biomarkers die kunnen worden verkregen uit bloed (bijvoorbeeld via iSTAT)9,10,11,12, 13,14,15,16.
<ol><li>De muizen volgens eerder goedgekeurde IACUC protocol (b.v., CO2 gevolgd door cervicale dislocatie) euthanaseren.</li>
	<li>Verwijder de longen uit euthanized mouse door het snijden van de luchtpijp, de longslagader en de longader dicht bij de longen.<ol>
<li>Microscopie<ol>
<li>Plaats de longen (of deel) in een mal van het specimen.</li>
			<li>Vul de specimen schimmel met optimale snijden temperatuur (O.C.T.) verbinding, volledig ondergedompeld het weefsel.</li>
			<li>Bevriezen van het monster bij-80 ° C.</li>
			<li>Het monster verzenden door een laboratorium van de pathologie afdeling te monteren op de dia's voor microscopie.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Bacteriële belasting<ol>
<li>Weeg het longweefsel op een analytische balans.</li>
			<li>Het longweefsel overbrengen conische flacon 50 mL met 2-5 mL steriele PBS (afhankelijk van de grootte van het weefsel).</li>
			<li>Meng het longweefsel met een homogenizer weefsel.</li>
			<li>Seriële verdunningen van het homogenaat in steriel PBS tot ongeveer 1000 CFUs/mL, gebaseerd op verwachte bacteriële belasting in longen uitvoeren.<ol>
<li>Bijvoorbeeld, als 1 × 109 CFUs/mg wordt verwacht, voert u drie 1:100 verdunningen: Transfer 100 μL van homogenaat 9.9 ml PBS en vortex; Dit is de eerste 1:100 verdunning. 100 μl van de eerste 1:100 verdunning overbrengen 9.9 mL PBS en vortex; Dit is de tweede 1:100 verdunning. 100 μl van de tweede 1:100 verdunning overbrengen 9.9 mL PBS en vortex; Dit is de derde en laatste 1:100 verdunning.</li>
				<li>Als bacteriële belasting in de longen onbekend is, voert een reeks verdunningen te vangen van het verwachte bereik.</li>
			</ol>
</li>
			<li>Plaat dilution(s) op steriele agar.<ol>
<li>Bereiden van steriele al soja Bouillon (TSB) met agar (TSA) platen: combineren TSB 30 g 15 g agar en 1 L water, meng met een magneetroerder, en verhit tot koken bij ~ 100 ° C gedurende 5 min. toestaan afkoelen en vervolgens autoclaaf op vloeibare cyclus voor 15 min. toestaan afkoelen tot ~ 55 ° C, transfer 10 mL vers gesteriliseerde met autoclaaf TSA aan steriele petrischalen en laat afkoelen tot kamertemperatuur. Laat droog benchtop voor 2-5 d of ongedekte onder een kast voor 10 min bioveiligheid.</li>
				<li>100 μl van de verdunning overbrengen in een petrischaal met steriele TSA en verspreid over TSA met behulp van een spreider of glazen kralen.</li>
				<li>Opslaan van de petrischaal 's nachts bij 37 ° C in een bevochtigde incubator (d.w.z., 37 ° C incubator met een ongedekte 1-L-bekerglas gevuld met water)</li>
			</ol>
</li>
			<li>Bepalen CFUs/mL Long homogenaat gebaseerd op agar beplating (bv100 CFUs op TSA plaat met 100 μl van de derde en laatste verdunning hierboven beschreven zou 100 CFUs/100 μl × 100dil #1 × 100dil #2 × 100dil #3 = 1 × 109 CFUs/mL).</li>
			<li>Berekenen van CFUs/mg longweefsel gebaseerd door het verdelen van de CFUs/mL Long homogenaat door mg Long weefsel/mL homogenaat (bijvoorbeeldals voorbeeld hierboven beschreven 100 mg van longweefsel gehomogeniseerd in 5 mL PBS, dan 1 × 109 CFUs/mL ÷ 100 mg / 5 mL = 5 × 107 gebruikt CFUs/mg).</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol><li>Media Centre, W. H. O. World Health Organization. Fact Sheet - Top 10 Causes of Death. , Available from:
 <a target="_blank" href="http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/">http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/</a> (2017).</li>
<li>Spellberg, B., Talbot, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommended+Design+Features+of+Future+Clinical+Trials+of+Antibacterial+Agents+for+Hospital-Acquired+Bacterial+Pneumonia+and+Ventilator-Associated+Bacterial+Pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia.</a> Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).</li>
<li>Kalil, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+Adults+With+Hospital-acquired+and+Ventilator-associated+Pneumonia%3A+2016+Clinical+Practice+Guidelines+by+the+Infectious+Diseases+Society+of+America+and+the+American+Thoracic+Society%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society.</a> Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).</li>
<li>Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Murine model of pneumococcal pneumonia.</a> Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).</li>
<li>Azoulay-Dupuis, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+efficacy+of+a+new+fluoroquinolone%2C+sparfloxacin%2C+against+penicillin-susceptible+and+-resistant+and+multiresistant+strains+of+Streptococcus+pneumoniae+in+a+mouse+model+of+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).</li>
<li>Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+human+pneumonia%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of human pneumonia.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).</li>
<li>Rayamajhi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-surgical+intratracheal+instillation+of+mice+with+analysis+of+lungs+and+lung+draining+lymph+nodes+by+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).</li>
<li>Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+virulent+Acinetobacter+baumannii+to+reduce+variability+of+in+vivo+studies%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies.</a> BMC Microbiology. 15, 252(2015).</li>
<li>Trammell, R. A., Toth, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Markers+for+predicting+death+as+an+outcome+for+mice+used+in+infectious+disease+research%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research.</a> Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).</li>
<li>Bast, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+murine+model+of+pneumococcal+pneumonia%3A+use+of+temperature+as+a+measure+of+disease+severity+to+compare+the+efficacies+of+moxifloxacin+and+levofloxacin%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).</li>
<li>Hankenson, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+reduced+body+temperature+determine+humane+endpoints+in+a+mouse+model+of+ocular+herpesvirus+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).</li>
<li>Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypothermic+endpoint+for+an+intranasal+invasive+pulmonary+aspergillosis+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model.</a> Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).</li>
<li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+Exacerbates+Infection+via+Hyperinflammation+by+Signaling+through+TLR4+and+RAGE%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li>
<li>Nielsen, T. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+Antibody+Protects+Against+Acinetobacter+baumannii+Infection+by+Enhancing+Bacterial+Clearance+and+Evading+Sepsis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Infectious+Diseases%22%5BJournal%5D)">Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis.</a> Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).</li>
<li>Cheng, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+serotypes+5+and+8+capsular+polysaccharides+in+protection+against+Staphylococcus+aureus+in+murine+models+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Vaccine+Immunotherapy%22%5BJournal%5D)">Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection.</a> Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).</li>
<li>Wong, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+Pathophysiological+Overview+of+Acinetobacter+Infections%3A+a+Century+of+Challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Microbiology+Reviews%22%5BJournal%5D)">Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges.</a> Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).</li>
</ol>

De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.

Om zeker te zijn, zijn muizen niet miniatuur mens. Muismodellen verkregen resultaten moeten worden beschouwd in de context en vervolgens geïnterpreteerd voor toepasbaarheid voor de mens, op basis van verschillen en overeenkomsten tussen de twee soorten6. Het is ook belangrijk om te kiezen van de juiste muis stam als bepaalde zijn meer vatbaar voor sommige infecties dan andere; hetzelfde geldt voor de pathogene stam van keuze16.
Het is essentieel ...

Infectie van de lagere luchtwegen is's werelds dodelijkste overdraagbare ziekten en de meest voorkomende doodsoorzaak in ontwikkelingslanden1. Wereldwijd, deze infecties zijn goed voor meer dan 3.2 miljoen sterfgevallen1. Daarnaast nosocomiale pneumonie behoort tot de gemeenschappelijkste en dodelijke vormen van gezondheidszorg verworven infecties, en wordt veroorzaakt door de meeste antibiotica-resistente pathogenen2,3. De typische route van verwerving van bacteriële longontsteking voor beide Gemeenschap overgenomen en nosocomiale pneumonie is de ambitie van orofaryngeale inhoud in de longblaasjes. Lymfkliertest modellen gebruikt bij het bestuderen van deze ziekten vaak gebruiken intranasale inoculatie4, neerlegging van veel van de bacteriën buiten de longen, waardoor af-target complicaties en symptomen zoals sinusitis en fysieke trauma's, die elkaar met de ziekte progressie in de mens die de modellen zijn ontworpen om te emuleren. Andere modellen kunnen gebruiken inademing chambers en micromisting apparaten, die nauwkeuriger nabootsen schimmel, virale en tuberculose pneumonieën, maar doen niet nauwkeurig de normale route van acquisitie voor typische bacteriële pneumonieën recapituleren.
De lymfkliertest orofaryngeale aspiratie pneumonie model kan worden gebruikt om na te bootsen de natuurlijke route en pathogenese van bacteriële longontsteking. Door inoculating 50 µL van de bacteriële suspensie in de orofarynx van narcose muizen met behulp van een precisiepipet, ontstaat reflexieve aspiratie, wat resulteert in infectieuze longontsteking. Met behulp van dit model, kan men de pathogenese van longontsteking-veroorzakende pathogenen en nieuwe behandelingen ter bestrijding van deze ziekten met een hogere betrouwbaarheid model, meer analoog aan aspiratie pneumonie infecties waargenomen in mens onderzoeken. Bovendien, in tegenstelling tot soortgelijke modellen die door de mondholte5,6 infecteren, dit model zorgt u ervoor dat de volledige entmateriaal de longen in plaats van de darm bereikt, waar het off-site ontstekingen en infecties, zoals gastritis kan veroorzaken en enteritis. Ten slotte, in tegenstelling tot een andere gepubliceerde model dat vereist een Laryngoscoop en inoculates via de luchtpijp7, dit model niet verhindert de luchtwegen met een maagsonde naald en vereist geen injectie voor entmateriaal levering. Inoculatie is daarentegen afhankelijk van de natuurlijke aspiratie reflex van de muis.

<table><tbody><tr><td>Agar</td><td>BD</td><td>214530</td><td>Combineer met TSB om TSA te maken</td></tr><tr><td>Beads, Borosilicate Glass</td><td>Kimble</td><td>135003</td><td>Steriliseer door te bakken of autoclaven voor elke gebruik</td></tr><tr><td>Beaker, 250 mL</td><td>Pyrex</td><td>1003</td><td>Gebruikt tijdens nauwkeurige aliquotering van geconcentreerde bacteriële inocula</td></tr><tr><td>Centrifuge</td><td>Sorvall</td><td>ST 40R</td><td>Capabel voor 4.000&times;g bij 4&deg;C</td></tr><tr><td>Chamber for Anesthesia</td><td>Kent Scientific Corporation</td><td>VetFlo-0720</td><td>Biedt plaats aan maximaal 5 muizen</td></tr><tr><td>Cryomold, Intermediate Size</td><td>Sakura Tissue-Tek</td><td>4566</td><td>Weggeef vinyl speciaalmold, 15&times;15&times;5 mm</td></tr><tr><td>Dental Floss</td><td>Oral-B</td><td>37000469537</td><td>Bind aan stabiele post ongeveer 6" boven tafelhoogte</td></tr><tr><td>Forceps</td><td>VWR</td><td>82027-440</td><td>Gebruikt om voorzichtig de tong uit de mond van de muis te trekken</td></tr><tr><td>Homogenizer for Lung Tissue</td><td>Omni International</td><td>TM125-115</td><td>Autoclaveer voor het eerste gebruik; spoel tussen monsters</td></tr><tr><td>Isoflurane for Anesthesia</td><td>Abbott</td><td>10015516</td><td>Alternatieve drug kan worden gebruikt; pas procedure dienovereenkomstig aan</td></tr><tr><td>iSTAT Cartridge</td><td>Abbott</td><td>03P79-25</td><td>Er zijn verschillende cartridges beschikbaar om aan uw behoeften te voldoen</td></tr><tr><td>Ketamine, 100 mg/mL</td><td>Western Medical Supply</td><td>4165</td><td>Verdun 1:10 in PBS tot 1 mg/mL en combineer met Xylazine op 1 mg/mL</td></tr><tr><td>Ointment for Eyes</td><td>Akorn</td><td>Tears Renewed</td><td>Vermijd het aanraken van het oog met de punt van de dispenser</td></tr><tr><td>Optimal Cutting Temperature (O.C.T.) Compound</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-730-571</td><td>Gebruikt om longmonsters bij -80 &deg;C te bevriezen om voorbereiding voor pathologie sectie te maken</td></tr><tr><td>Petri Dish</td><td>VWR</td><td>25384-302</td><td>Polystyreen, wegwerpbaar, gesteriliseerd, 100&times;15 mm</td></tr><tr><td>Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td><td>Corning</td><td>21-031-CM</td><td>Dulbecco's PBS zonder calcium en magnesium</td></tr><tr><td>Pipette Tips, 200-&mu;L</td><td>VWR</td><td>10017-044</td><td>Autoclaveer voor gebruik</td></tr><tr><td>Pipetter, 200-&mu;L</td><td>Gilson</td><td>Pipetman P200</td><td>Autoclaveer en kalibreer voor gebruik</td></tr><tr><td>Spreader, Bacterial Cell</td><td>Bel-Art</td><td>F377360006</td><td>Steriliseer door te bakken of autoclaven voor elke gebruik</td></tr><tr><td>Stir Bar, Magnetic, 7.9 mm Diameter &times; 38.1 mm Length</td><td>VWR</td><td>58948-150</td><td>Gebruikt voor het roeren van geconcentreerde bacteriële inocula tijdens aliquotering</td></tr><tr><td>Stir Plate, Magnetic</td><td>Corning</td><td>PC-620D</td><td>Gebruikt voor het roeren van geconcentreerde bacteriële inocula tijdens aliquotering</td></tr><tr><td>Tryptic Soy Broth (TSB)</td><td>BD</td><td>211822</td><td>Combineer met Agar om TSA te maken</td></tr><tr><td>Vial, Conical, Sterile, 50 mL</td><td>Corning</td><td>431720</td><td>Gebruikt voor het voorbereiden van bacteriële inocula</td></tr><tr><td>Vial, Conical, Sterile, 500 mL</td><td>Corning</td><td>431123</td><td>Gebruikt om inocula te concentreren voor het voorbereiden van bevroren inocula</td></tr><tr><td>Vial, Cryogenic, 2.0 mL</td><td>Corning</td><td>430659</td><td>Gebruikt voor kryogene opslag van geconcentreerde bacteriële inocula</td></tr><tr><td>Xylazine, 20 mg/mL</td><td>Akorn</td><td>AnaSed Injection</td><td>Verdun 1:20 in PBS tot 1 mg/mL en combineer met Ketamine op 1 mg/mL</td></tr></tbody></table>

lymfkliertest orofaryngeale aspiratie model ventilator-geassocieerde en ziekenhuizen opgelopen bacteriële longontsteking

Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia

Lymfkliertest infectie modellen zijn van cruciaal belang voor het begrijpen van de pathogenese van de ziekte en het testen van de werkzaamheid van roman therapeutics ter bestrijding van de causatieve pathogenen. Besmettelijke longontsteking is een van de meest voorkomende infecties die door patiënten in de kliniek en garandeert dus een passende in-vivo -model. Typische longontsteking modellen gebruiken intranasale inoculatie, die deposito's buitensporige organismen buiten de longen, waardoor af-target complicaties en symptomen, zoals sinusitis, gastritis, enteritis, fysieke trauma's of microparticle condens om na te bootsen aërosol verspreiding meer typisch van virale, tuberculose of schimmel longontsteking. Deze modellen komen niet nauwkeurig overeen met de pathogenese van typische Gemeenschap - of gezondheidszorg-verworven bacteriële longontsteking. Daarentegen bootst dit lymfkliertest model van orofaryngeale aspiratie longontsteking het parcours van de druppel in gezondheidszorg opgelopen longontsteking. Enten van 50 µL van de bacteriën veroorzaakt schorsing in de orofarynx van narcose muizen reflexieve aspiratie, wat in longontsteking resulteert. Met dit model kan men onderzoeken de pathogenese van longontsteking-veroorzakende pathogenen en nieuwe behandelingen om deze ziekten te bestrijden.

Door het protocol nauwgezet te volgen, kan reproduceerbaar zijn en robuuste gegevens gemakkelijk worden verkregen. Het is van cruciaal belang zich strikt houden aan iemands aangepast entmateriaal voorbereiding protocol voor experimenten worden vergeleken met een elkaar. Het is ook belangrijk om goed muizen tijdens de procedure van de infectie. Zorg ervoor dat muizen in een kamer van de verdoving verstoken van Isofluraan plaatsen. Muizen zullen raak in paniek als ze worden geplaatst in een...

Besmettelijke longontsteking is een van de meest voorkomende infecties bij de mens. Een passende in-vivo -model is van cruciaal belang voor het begrijpen van de pathogenese van de ziekte en het testen van de werkzaamheid van roman therapeutics. Met dit model lymfkliertest orofaryngeale aspiratie longontsteking, kan men de pathogenese en nieuwe behandelingen tegen deze dodelijke infecties onderzoeken.

Lymfkliertest orofaryngeale aspiratie Model Ventilator-geassocieerde en ziekenhuizen opgelopen bacteriële longontsteking

Murine infection models are critical for understanding disease pathogenesis and testing the efficacy of novel therapeutics designed to combat causative ...

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van sleutelvragen op het gebied van antibioticaresistentie over nieuwe therapeutische middelen met een behandeling van ventilatie-geassocieerde pneumonie. Het grote voordeel van deze techniek is dat het de klinische infectie nauwkeurig repliceert op een snelle en gemakkelijk reproduceerbare manier. Om de muizen te inoculeren, hangt u het eerste geanesthetiseerde dier aan zijn bovenste snijtanden op aan een sterk dunne draad.Beveilig het aan een vast object boven het werkoppervlak, op een hoogte van ongeveer twee keer de lichaamslengte van de muis. Gebruik steriele, stompe forceps om voorzichtig de tong eruit te trekken en breng de tong over op steriele, behandschoende vingers om toegang te geven tot de orale farynx. Druk de zuiger van een micropipet tot de eerste stop om 50 microliter van het inoculum in de orale farynx te plaatsen, totdat de muis door reflexieve aspiratie de bacteriesuspensie inademt.De muis zal een paar seconden stoppen met ademen wanneer het inoculum in de orale farynx wordt geplaatst, en uiteindelijk zal reflexieve aspiratie ervoor zorgen dat de bacteriesuspensie wordt ingeademd, wat kenmerkend is door het kenmerkend

murine-oropharyngeal-aspiration-model-ventilator-associated-hospital

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Source: Lenhard, A. et al. A Mouse Model for the Transition of Streptococcus pneumoniae from Colonizer to Pathogen upon Viral Co-Infection Recapitulates Age-Exacerbated Illness. J. Vis. Exp. (2022)This video demonstrates a mouse co-infection model in which the influenza virus triggers the transition of Streptococcus pneumoniae from a colonizer to a pathogen. It outlines the steps involved in bacterial colonization, viral infection, and disease progression.

A Mouse Model to Study the Pathogenic Transition of Streptococcus pneumoniae Following Viral Co-Infection

Source: Nielsen, T. B., et al., Murine Oropharyngeal Aspiration Model of Ventilator-associated and Hospital-acquired Bacterial Pneumonia. J. Vis. Exp. (2018)This video demonstrates the procedure of delivering bacteria through the oropharynx into the lungs of an anesthetized mouse to induce lung infection and trigger an immune response.

Preparation of a Murine Oropharyngeal Aspiration Model to Establish Bacterial Lung Infections

This video demonstrates the establishment of lung infection in an immunocompetent rodent model via intubation and installation of bacterial suspensions into lung lobes. This model enables antibacterial efficacy studies in immunocompetent animals.

Intrabronchial Instillation of Streptococcus pneumoniae in Immunocompetent Rodent Models

We hebben een muislongletselmodel ontwikkeld door intra-tracheale injectie van bacteriën Pseudomonas aeruginosa. Dit model bootst longletsel tijdens pneumonie na en is klinisch relevant.

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Terwijl in vitro studie van gastheer-pathogeen interacties de karakterisering van specifieke immuunresponsen mogelijk maakt, zijn in vivo modellen vereist om de effecten van complexe responsen te observeren. Door gebruik van Candida albicans blootstelling gevolgd door Pseudomonas aeruginosa-gemedieerde longinfectie, hebben we een muismodel gevestigd van microbiële interacties betrokken bij de pathogeniteit van ventilateur-geassocieerde pneumonie.

Bestuderen van microbiële gemeenschappen<em&gt; In Vivo</em&gt;: Een model van de Host-gemedieerde interactie tussen<em&gt; Candida albicans</em&gt; En<em&gt; Pseudomonas aeruginosa</em&gt; In het Airways

Verscheidene werkwijzen zijn beschreven in de literatuur voor het modelleren van bacteriële pneumonie bij muizen. Hierin beschrijven we een niet-invasieve, goedkope, snelle werkwijze voor het induceren via aspiratie pneumonie (bijvoorbeeld inhalatie) van een bacterieel inoculum gepipetteerd in de orofarynx. Downstream methoden voor de beoordeling van de pulmonaire aangeboren immuunrespons zijn ook gedetailleerd.

Een niet-invasieve en Technisch Niet-intensieve methode voor Inductie en fenotypering van experimentele bacteriële longontsteking in Muizen

Dit protocol induceert acute longschade bij een muis met een hoge nauwkeurigheid die vergelijkbaar is met de pathogenese van acide pneumonitis die bij mensen wordt waargenomen. We genereren een maximale acute niet-dodelijke lage pH-longschade en houden rekening met verschillen in de anatomische ademhalingsstructuur van knaagdieren-mensen door middel van een open tracheale opening gekoppeld aan circumferentiële drukontlasting.

Open Tracheostomie Maagzuur Aspiration muizenmodel van Acute Lung Injury Resultaten in Maximal Acute Lung Injury nonlethal

Een methode voor het veroorzaken van longinfecties bij immuungeschikt knaagdieren wordt beschreven. Met vaardigheid kan deze methode snel en eenvoudig worden uitgevoerd om een stabiele infectie te induceren met veel isolaten van S. pneumoniae, H. influenzae, P. aeruginosa, K. pneumoniae en A. baumannii.

Een robuuste Longontsteking Model in Immunocompetente Knaagdieren om Antibacteriële Werkzaamheid Evalueer tegen<i&gt; S. pneumoniae</i&gt;,<i&gt; H. influenzae</i&gt;,<i&gt; K. pneumoniae</i&gt;,<em&gt; P. aeruginosa</em&gt; of<em&gt; A. baumannii</em

Hier presenteren we methoden om secundaire bacteriële pneumonie onderzoeken te verbeteren door een niet-invasieve route van instillatie in de onderste luchtwegen te bieden, gevolgd door pathogeen herstel en transcriptie analyse. Deze procedures zijn reproduceerbaar en kunnen worden uitgevoerd zonder gespecialiseerde apparatuur zoals canules, geleidings draden of glasvezelkabels.

Een nauwkeurig pathogeen lever-en Terugwinningssysteem voor Muriene modellen van secundaire bacteriële pneumonie

Dit manuscript beschrijft de opstelling van een infectieus model van longontsteking bij muizen en de respectieve karakterisering van letselresolutie, samen met methoden voor het kweken van bacteriën en intratracheale instillatie. Een nieuwe benadering met behulp van hoogdimensionale flowcytometrie om het immuunlandschap te evalueren, wordt ook beschreven.

Experimenteel model om de resolutie van longontsteking te evalueren

Dit artikel beschrijft een nieuw muismodel voor de overgang van pneumokokken van een asymptomatische kolonisator naar een ziekteverwekkende ziekteverwekker tijdens virale infectie. Dit model kan gemakkelijk worden aangepast om polymicrobiële en gastheer-pathogeen interacties te bestuderen tijdens de verschillende fasen van ziekteprogressie en tussen verschillende gastheren.

Een muismodel voor de overgang van Streptococcus pneumoniae van kolonisator naar pathogeen bij virale co-infectie vat leeftijdsverergerde ziekte samen

Leer een muizenmodel voor orofaryngeale aspiratiepneumonie om infectieuze longontsteking te bestuderen. Deze reproduceerbare methode bootst klinische infectie na en helpt bij het testen van nieuwe therapeutische strategieën.

Lymfkliertest orofaryngeale aspiratie Model Ventilator-geassocieerde en ziekenhuizen opgelopen bacteriële longontsteking

Meer video's verkennen