Name: Long fixatie onder constante druk voor de evaluatie van emfyseem bij muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-09-26T12:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: Leer longfixatie onder constante druk voor histologische evaluatie van emfyseem bij muizen. Deze methode behoudt longinflatie en maakt gelijktijdige fixatie van meerdere longen mogelijk voor betrouwbare resultaten.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd deels gesteund door JSPS KAKENHI Grantnummer 26461199 (T. Sato) en het Instituut voor milieu-en genderspecifieke geneeskunde, Juntendo University Graduate School of Medicine, Grant Number E2920 (T. Sato). De Funder had geen rol in het ontwerp van de huidige methodes en bij het schrijven van het manuscript.

De volgende methodes zijn goedgekeurd door de Dierenzorg-en gebruiks comités van Juntendo University School of Medicine. De richtlijnen voor een goed verloop van dierproeven, de wetenschapsraad van Japan, 1 juni 2006 werden opgevolgd. Er zijn drie belangrijke stappen in deze methode: 1) muis dissectie, 2) Long exsanguination, en 3) fixatie van Long weefsels bijgestaan door gespecialiseerde apparatuur. Meestal worden Long specimens verwerkt tot inbed ting na 48 h fixatie12,15,16,17,18.
1. sectie van de muis
<ol><li>Meet het lichaamsgewicht van de muis en bepaal vervolgens de hoeveelheid pentobarbital die u wilt toedienen.</li>
	<li>Injecteer pentobarbital intraperitoneaal met een dosering van 70 mg/kg lichaamsgewicht en bevestig anesthesie door de afwezigheid van reactie op Teen pinch.</li>
	<li>Injecteer de naald in een hoek van 45 ° tot deze door de huid en spieren dringt. Trek de zuiger en bevestig een lucht vacuüm, Injecteer vervolgens de pentobarbital.</li>
	<li>Bevestig anesthesie door de afwezigheid van reflex beweging. Opmerking: het gebruik van verdoofd Mouse in tegenstelling tot een geëgaliseerd muis wordt aanbevolen voor volledig Long exsanguination.</li>
	<li>Snijd de muis huid en buikspieren op de mediale lijn, gericht op de kopborststuk gebied.</li>
	<li>Snijd lateraal om een bredere werkruimte te bieden.</li>
</ol>2. Long van
<ol><li>Stel de membraan laag bloot en prik het met een tang.</li>
	<li>Open de thoracale ruimte en snijd het borstbeen gebied, waardoor de longen en het hart duidelijk kunnen worden gezien.</li>
	<li>Snijd het hart in linker atrium en rechter ventrikel.</li>
	<li>Plaats een canule (24 G) in het rechter ventrikel gebied en breng deze naar de kopse zone totdat deze de longslagader bereikt, zoals weergegeven in Figuur 1.</li>
	<li>Zet de pomp aan en laat de 1x fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) circuleren (ongeveer 200 mL/h) totdat alle longweefsel verandert in een witte kleur.</li>
</ol>3. fixatie van longweefsel
<ol><li>Verwijder de luchtpijp, longen en het hart.</li>
	<li>Vrij alle drie organen door het snijden van de omringende bindweefsels.</li>
	<li>Bind de rechter hoofd bronchus met een hechtdraad en snijd alle lobben van de rechter long.</li>
	<li>(Optioneel): de lobben van de rechter long bestaan uit vier delen. Snijd deze delen van de rechter hoofd bronchus en verdeel de onderdelen voor verwerking als bevroren weefselmonsters.</li>
	<li>Steek het hart en de lobben van de linker long in de bevestigingsmiddelen, gelegen in een 10 mL spuit. Let op: bevestigingsmiddelen zijn gevaarlijk. Draag de juiste beschermende uitrusting (bijv. lange rubberen handschoenen) en werk in een goed geventileerde ruimte.</li>
	<li>Maak een vacuümtoestand met een 10 mL spuit om de longen op te blazen, zoals weergegeven in Figuur 2.</li>
	<li>Plaats een canule (20 G) in de luchtpijp en bind een knoop.</li>
	<li>Blaas de longen op met bevestigingsmiddelen om te controleren op lekken, met behulp van een 1 mL spuit.</li>
	<li>Overbrengen naar drukapparatuur voor de Long fixatie, zoals afgebeeld in Figuur 3.</li>
	<li>Na het bevestigen van de perioden, verwijder het Long monster koppel de luchtpijp af met een knoop.</li>
</ol>

<ol><li>Vogelmeier, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+strategy+for+the+diagnosis%2C+management%2C+and+prevention+of+chronic+obstructive+lung+disease+2017+report.+GOLD+Executive+Summary%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).</li>
<li>Pauwels, R. A., Rabe, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Burden+and+clinical+features+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease+%28COPD%29%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Burden and clinical features of chronic obstructive pulmonary disease (COPD).</a> Lancet. 364 (9434), 613-620 (2004).</li>
<li>Spurzem, J. R., Rennard, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of COPD.</a> Seminars in Respiratory and Critical Care Medicine. 26 (2), 142-153 (2005).</li>
<li>Vlahos, R., Bozinovski, S., Gualano, R. C., Ernst, M., Anderson, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+COPD+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Pulmonary+Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Modelling COPD in mice.</a> Pulmonary Pharmacology and Therapeutics. 19 (1), 12-17 (2006).</li>
<li>Vlahos, R., Bozinovski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+advances+in+pre-clinical+mouse+models+of+COPD%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Science+%28Lond%29%22%5BJournal%5D)">Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD.</a> Clinical Science (Lond). 126 (4), 253-265 (2014).</li>
<li>Stevenson, C. S., Belvisi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+animal+models+of+asthma+and+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+of+Respiratory+Medicine%22%5BJournal%5D)">Preclinical animal models of asthma and chronic obstructive pulmonary disease.</a> Expert Review of Respiratory Medicine. 2 (5), 631-643 (2008).</li>
<li>Stevenson, C. S., Birrell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Moving+towards+a+new+generation+of+animal+models+for+asthma+and+COPD+with+improved+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacology+and+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance.</a> Pharmacology and Therapeutics. 130 (2), 93-105 (2011).</li>
<li>Vandivier, R. W., Ghosh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+the+Relevance+of+the+Mouse+Cigarette+Smoke+Model+of+COPD%3A+Peering+through+the+Smoke%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Understanding the Relevance of the Mouse Cigarette Smoke Model of COPD: Peering through the Smoke.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 3-4 (2017).</li>
<li>Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+chronic+obstructive+pulmonary+disease%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Animal models of chronic obstructive pulmonary disease.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (1), L1-L15 (2008).</li>
<li>Rennard, S. I., Togo, S., Holz, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+inhibits+alveolar+repair%3A+a+mechanism+for+the+development+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+American+Thoracic+Society%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke inhibits alveolar repair: a mechanism for the development of emphysema.</a> Proceedings of the American Thoracic Society. 3 (8), 703-708 (2006).</li>
<li>Nikula, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+cigarette+smoke-induced+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Chest%22%5BJournal%5D)">A mouse model of cigarette smoke-induced emphysema.</a> Chest. 117, 246S-247S (2000).</li>
<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescence+marker+protein-30+protects+mice+lungs+from+oxidative+stress%2C+aging%2C+and+smoking%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).</li>
<li>Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+fixation+methods+on+lung+morphology+in+a+murine+model+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), L843-L851 (2010).</li>
<li>Hsia, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+official+research+policy+statement+of+the+American+Thoracic+Society%2FEuropean+Respiratory+Society%3A+standards+for+quantitative+assessment+of+lung+structure%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).</li>
<li>Kasagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomato+juice+prevents+senescence-accelerated+mouse+P1+strain+from+developing+emphysema+induced+by+chronic+exposure+to+tobacco+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).</li>
<li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+lack+of+vitamin+C+intake+generates+pulmonary+emphysema+in+senescence+marker+protein-30+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).</li>
<li>Koike, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vitamin+C+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+mice+and+provides+pulmonary+restoration%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+Cell+and+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).</li>
<li>Suzuki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen-rich+pure+water+prevents+cigarette+smoke-induced+pulmonary+emphysema+in+SMP30+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Hydrogen-rich pure water prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in SMP30 knockout mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 492 (1), 74-81 (2017).</li>
<li>Saad, M., Ruwanpura, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+Processing+for+Stereological+Analyses+of+Lung+Structure+in+Chronic+Obstructive+Pulmonary+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).</li>
<li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+surface+area+of+nonemphysematous+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">The internal surface area of nonemphysematous lungs.</a> The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).</li>
<li>Saetta, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Destructive+index%3A+a+measurement+of+lung+parenchymal+destruction+in+smokers%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers.</a> The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).</li>
<li>Renne, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendation+of+optimal+method+for+formalin+fixation+of+rodent+lungs+in+routine+toxicology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicologic+Pathology%22%5BJournal%5D)">Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies.</a> Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).</li>
<li>Schneider, J. P., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alterations+of+mouse+lung+tissue+dimensions+during+processing+for+morphometry%3A+a+comparison+of+methods%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology+Lung+Cellular+and+Molecular+Physiology%22%5BJournal%5D)">Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).</li>
<li>Wright, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+of+pulmonary+arterial+pressure+and+airflow+obstruction+to+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema.</a> Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).</li>
<li>Wright, J. L., Churg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cigarette+smoke+causes+physiologic+and+morphologic+changes+of+emphysema+in+the+guinea+pig%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Review+of+Respiratory+Disease%22%5BJournal%5D)">Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig.</a> The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).</li>
<li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+surface+area+and+other+measurements+in+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Internal surface area and other measurements in emphysema.</a> Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).</li>
<li>Wright, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airway+remodeling+in+the+smoke+exposed+guinea+pig+model%5BTitle%5D)+AND+%22Inhalation+Toxicology%22%5BJournal%5D)">Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model.</a> Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).</li>
<li>Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Instillation+and+Fixation+Methods+Useful+in+Mouse+Lung+Cancer+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research.</a> Journal of Visualized Experiments. (102), e52964(2015).</li>
<li>Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+generating+pulmonary+neutrophilia+using+aerosolized+lipopolysaccharide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li>
<li>Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+measurement+of+pulmonary+emphysema+and+small+airway+remodeling+in+cigarette+smoke-exposed+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (95), 52236(2015).</li>
<li>Nakanishi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clarithromycin+prevents+smoke-induced+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Respiratory+and+Critical+Care+Medicine%22%5BJournal%5D)">Clarithromycin prevents smoke-induced emphysema in mice.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 179 (4), 271-278 (2009).</li>
<li>Maeno, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+T+Cells+are+required+for+inflammation+and+destruction+in+cigarette+smoke-induced+emphysema+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice.</a> Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).</li>
<li>Sato, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+fixation+for+total+preanalytic+phase+evaluation+in+pathology+laboratories%3A+a+comprehensive+study+including+immunohistochemistry%2C+DNA%2C+and+mRNA+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Pathology+International%22%5BJournal%5D)">Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays.</a> Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen concurrerende belangen om te verklaren.

De hier gepresenteerde fixatie procedure voor knaagdieren longen is niet nieuw; Dit systeem heeft echter verschillende voordelen. Ten eerste, het kan veel longen (maximaal 20) met dezelfde aandoening in één keer te repareren. De vereniging van Toxicologic pathologie stelt dat de druk voor zwaartekracht instillatie variëren van 22 – 25 cmH2O22. Met name, verschillende studies hebben uitgevoerd Long fixatie bij een druk van 25 CMH2O13,<sup cla...

COPD is een van de leidende wereldwijde oorzaken van overlijden1. Sigarettenrook is de belangrijkste oorzaak van COPD, maar de mechanismen van pathogenese blijven niet volledig gedefinieerd. COPD toont twee hoofdkenmerken, waaronder progressieve beperking van de luchtstroom en een abnormale ontstekingsreactie van de longen. Emfysemateuze stoornis treedt vaak op in de longen van COPD-patiënten2. De pathologische bevindingen van emfyseem worden gekenmerkt door alveolaire wand vernietiging3. Er zijn verschillende diersoorten gebruikt voor het genereren van COPD-modellen in vivo (d.w.z. honden, cavia's, apen en knaagdieren)4. Echter, de muis is uitgegroeid tot de meest gebruikte in de bouw van COPD modellen. Dit heeft vele voordelen, met inbegrip van de lage kosten, het vermogen om genetisch gemodificeerd, uitgebreide genoominformatie beschikbaarheid, beschikbaarheid van antilichamen, en het vermogen om een verscheidenheid van muis stammen gebruiken5. Momenteel is er geen muismodel dat de volledige kenmerken van menselijke COPD kan nabootsen; individuele onderzoekers moeten dus kiezen welk model het meest geschikt is voor het specifieke COPD-onderzoek6. De emfysemateuze muismodel is een van de vele COPD Muismodellen die momenteel beschikbaar zijn. Aanvullende modellen omvatten de exacerbatie muismodel, systemische co-morbidities model, en COPD susceptibiliteit model7.
Het emfysemateuze muismodel kan worden gegenereerd door verschillende soorten exogene agentia, waaronder chemische agentia en blootstelling aan sigarettenrook4. Chemische blootstelling (bv. aan elastase) produceert een ernstig type emfyseem, terwijl sigarettenrook resulteert in milde emfyseem8,9. Sigarettenrook wordt verondersteld de belangrijkste oorzaak te zijn voor de pathogenese van COPD; Daarom is de keuze van sigarettenrook als middel om een COPD-muismodel te creëren redelijk10. Veel studies hebben sigarettenrook gebruikt om emfyseem in de muis te maken. Zo heeft Nikula et al. met succes een emysemateuze muismodel gemaakt van B6C3F1 vrouwelijke muizen door ze bloot te stellen aan sigarettenrook gedurende 7 of 13 maanden11. We hebben ook een emysemateuze muismodel ingesteld via senescentie marker proteïne/SMP-30 KO muizen12. Het is cruciaal om een Long fixatie methode uit te voeren die dit milde emfyseem-model door blootstelling aan sigarettenrook goed kan visualiseren.
Er zijn verschillende methoden voor Long fixatie vastgesteld13. Er is echter geen gouden standaardmethode voor longweefsel fixatie voor het evalueren van emfyseem14. Verschillende studies van dit Lab hebben aangetoond dat het hier gepresenteerde fixatiesysteem nuttig is door een stabiele conditie te creëren voor het evalueren van emfyseem12,15,16,17,18. Het belangrijkste voordeel van het huidige systeem is dat het veel longen met dezelfde aandoening in één keer kan repareren zonder longcollaps of deflatie. Het huidige Long fixatiesysteem gebruikt een aantal speciale apparatuur waarmee Long specimens gedurende een bepaalde periode kunnen worden opgeblazen bij een geschikte constante druk. Deze speciale uitrusting bestaat uit drie delen, waaronder een onderste container, bovenste container en pomp. Long specimens worden in de onderste container geplaatst die is verbonden met bevestigingsmiddelen onder druk, wat resulteert in een 25 cmH2O drukverschil in het niveau van de agentia tussen de bovenste en onderste containers19.

<table><tbody><tr><td>10% formaline (formaline neutral buffer oplossing)</td><td>Wako</td><td>060-01667</td><td></td></tr><tr><td>Gebogen pincet</td><td>Hammacher</td><td>HSC187-11</td><td></td></tr><tr><td>Canule, maat 20G</td><td>Terumo</td><td>SR-FS2032</td><td></td></tr><tr><td>Canule, maat 22G</td><td>Terumo</td><td>SR-OT2225C</td><td>Canule om long te exsanguineren</td></tr><tr><td>Pincet</td><td>Hammacher</td><td>HSC184-10</td><td></td></tr><tr><td>Kimdoek</td><td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td><td>61000</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipe</td><td>Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark)</td><td>62011</td><td></td></tr><tr><td>Onderste container (acrylglas materiaal)</td><td>Tokyo Science</td><td>Op maat gemaakt</td><td>Drukapparatuur component</td></tr><tr><td>Rollerpomp</td><td>Nissin Scientific Corp</td><td>NRP-75</td><td>Pompmachine om long te exsanguineren</td></tr><tr><td>Rollerpomp RP-2000</td><td>Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd)</td><td>160200</td><td>Drukapparatuurpomp</td></tr><tr><td>Siliconen slang &Oslash; 9 mm</td><td>Sansyo</td><td>94-0479</td><td>Drukapparatuur component</td></tr><tr><td>Somnopentyl (64,8 mg/mL)</td><td>Kyoritsu Seiyaku</td><td>SOM02-YA1312</td><td>Pentobarbital Natrium</td></tr><tr><td>Chirurgisch schaar</td><td>Hammacher</td><td>HSB014-11</td><td></td></tr><tr><td>Hechtdraad, maat 0</td><td>Nescosuture</td><td>GA01SW</td><td></td></tr><tr><td>Spuit, 1 mL</td><td>Terumo</td><td>SS-01T</td><td></td></tr><tr><td>Spuit, 1 ml met naald</td><td>Terumo</td><td>SS-01T2613S</td><td></td></tr><tr><td>Spuit, 10 mL</td><td>Terumo</td><td>SS-10ESZ</td><td></td></tr><tr><td>Drieweg stopkraan</td><td>Terumo</td><td>TS-TR1K01</td><td></td></tr><tr><td>Bovenste container (acrylglas materiaal)</td><td>Tokyo Science</td><td>Op maat gemaakt</td><td>Drukapparatuur component</td></tr></tbody></table>

long fixatie onder constante druk voor de evaluatie van emfyseem bij muizen

Lung Fixation under Constant Pressure for Evaluation of Emphysema in Mice

Emfyseem is een belangrijk kenmerk van chronische obstructieve longziekte (COPD). Studies met een emfysemateuze muismodel vereisen een optimale Long fixatie om betrouwbare histologische specimens van de longen te produceren. Vanwege de aard van de structurele samenstelling van de longen, die grotendeels uit lucht en weefsel bestaat, bestaat het risico dat het tijdens het fixatie proces instuilt of leegmaakt. Er bestaan verschillende Long fixatie methodes, die elk zijn eigen voor-en nadelen hebben. De Long fixatie methode die hier wordt gepresenteerd, maakt gebruik van constante druk om optimale weefsel evaluatie mogelijk te maken voor studies met een emfysemateuze muis Long-model. Het belangrijkste voordeel is dat het in één keer veel longen met dezelfde aandoening kan oplossen. Long specimens worden verkregen uit chronische sigarettenrook blootgestelde muizen. Long fixatie wordt uitgevoerd met behulp van gespecialiseerde apparatuur die de productie van constante druk mogelijk maakt. Deze constante druk handhaaft de longen in een redelijk opgeblazen toestand. Zo genereert deze methode een histologisch monster van de longen dat geschikt is om door sigarettenrook veroorzaakte milde emfyseem te evalueren.

Zoals eerder beschreven, kunnen de gespecialiseerde apparatuur, die een uitgebreide constante druk genereert, worden onderverdeeld in drie delen (Figuur 3A). Het onderste deel is het punt waarop het Long monster moet worden ingevoegd (Figuur 4A). De longen worden via een canule (20 G) op de punt van formaline flow aangesloten met behulp van een drieweg stop Haan (Figuur 4B). Er word...

Hier gepresenteerd is een nuttig protocol voor Long fixatie die een stabiele aandoening creëert voor histologische evaluatie van Long specimens uit een muismodel van emfyseem. Het belangrijkste voordeel van dit model is dat het veel longen met dezelfde constante druk kan oplossen zonder longcollaps of deflatie.

Long fixatie onder constante druk voor de evaluatie van emfyseem bij muizen

Emphysema is a significant feature of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Studies involving an emphysematous mouse model require optimal lung ...

De constante druk in het fixatieapparaat behoudt de longen in een redelijk opgeblazen toestand, waardoor een histologisch longexemplaar ontstaat dat geschikt is voor de evaluatie van milde sigarettenrook geïnduceerde emfyseem. Het belangrijkste voordeel van dit model is dat het veel longen tegelijkertijd kan repareren met dezelfde constante druk zonder instorting of deflatie van de longen. Het aantonen van de procedure zal Naoko Arano een afgestudeerde student van mijn laboratorium.Na bevestiging van een gebrek aan reactie op reflexbeweging maak een incisie in de huid en spierweefsel langs de mediale lijn van de muis, gericht op de kopvormige regio, en lateraal gesneden om een bredere werkruimte te creëren. Na het blootstellen van de middenriflaag doorboren het weefsel met tangen en open de thoracale ruimte. Snijd het achterstevengebied waardoor de longen en het hart kunnen worden gevisualiseerd.En snijd het linker atrium en de rechter hartkamer. Steek een 24-meter canule aangesloten op een perfusiepomp in het rechter ventrikelgebied en richt de canule naar het cephalic gebied totdat het de longslagader bereikt. Zet vervolgens de pomp aan en doorsnijd het weefsel met ongeveer 200 m

lung-fixation-under-constant-pressure-for-evaluation-emphysema

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

Een muismodel voor de ventilator geïnduceerde longschade is een belangrijk instrument om een ​​acute longbeschadiging...

Druk gecontroleerde ventilatie te Acute Lung Injury in Muizen Braken

Het volgende protocol schetst het proces van isoleren, ventileren en instrumenteren muis longen stabiel of pulsatiele pulmonale vasculaire druk-flow relaties maatregel om de effecten van de bloedstroom, luchtstroom, luchtweg veranderingen en vasculaire veranderingen op rechter ventrikel afterload kwantificeren.

Karakterisering van de geïsoleerde, geventileerde en Instrumented Mouse Lung geperfuseerd met pulsatiele flow

Het huidige protocol bevat een gedetailleerde stap-voor-stap beschrijving van de vereiste om metingen van de ademhalingswegen mechanica, alsmede de beoordeling van de luchtwegen voor geïnhaleerde methacholine in muizen met behulp van de geforceerde oscillatie techniek (flexiVent voeren procedures; SCIREQ Inc, Montreal, Qc , Canada).

Evaluatie van Respiratory System Mechanics in Muizen met behulp van de Gedwongen Oscillatie techniek

Het doel van dit protocol is om geautomatiseerde methoden te bieden om chronische longpathologieën te kwantificeren in een muismodel van COPD. Het protocol omvat het blootstellen van muizen aan sigarettenrook (CS), het meten van longfunctie, het opblazen van de longen en het gebruik van morfometrische methoden om emfyseem en kleine luchtwegremodellering bij muizen te meten.

Geautomatiseerde Meting van longemfyseem en Kleine luchtweg remodeling in sigarettenrook blootgesteld Muizen

Hier presenteren we een protocol om eenvoudig en betrouwbaar de longdruk-volumecurve bij muizen te meten, waaruit blijkt dat het voldoende gevoelig is om fenotyische parenchymveranderingen in twee veelvoorkomende longaandoeningen, pulmonaire fibrose en emfyseem, te detecteren. Deze metrische biedt een middel om de structurele veranderingen in de long te kwantificeren met de zich ontwikkelende pathologie.

Meting van de druk-volume curve in muizenlongen

Het doel van dit artikel is om eenvoudige methoden die sterk zal helpen bij de opzet en analyse van de muis longen met longkanker of andere aandoeningen te beschrijven. We presenteren 3 protocollen eenvoudig en betrouwbaar uit te voeren long instillaties, fixatie, en longvolume metingen.

Instillatie en Fixatie Methoden Nuttig in Mouse Lung Cancer Research

Deze studie beschrijft de succesvolle generatie voor een nieuwe diermodel van chronische obstructieve longziekte (COPD) door muizen aan hoge concentraties van ozon herhaaldelijk bloot te leggen.

Generatie van het Model van een chronische obstructieve longziekte in muizen door herhaalde ozon blootstelling

Interne longoppervlakte (ISA) is een kritisch criterium voor de beoordeling van longmorfologie en fysiologie bij longziekten en schade-geïnduceerde alveolaire regeneratie. We beschrijven hier een gestandaardiseerde methode die de metafora voor ISA kan minimaliseren in zowel longpneumonectomy als protes implantatie muis modellen.

Een gestandaardiseerde methode voor het meten van het interne longoppervlak door middel van muizenpneumonectomy en prothese implantatie

Het doel van deze methode is om een eenvoudige en efficiënte methode voor de perfusie, inflatie en fixatie van muislongen te presenteren voor het onderzoek van longtumorpathologie en evaluatie van uitzaaiingen naar de long.

Perfusie en inflatie van de muislong voor tumor histologie

Hier presenteren we een protocol om micro-computertomografie (micro-CT) te gebruiken om geventileerde gebieden te kwantificeren in een unilateraal bleomycine-geïnduceerd longfibrosemodel via intratracheale instillatie aan de laesiezijde.

Unilaterale longvolumeanalyse met behulp van micro-CT voor verbeterde beoordeling van longfibrose in preklinische modellen

Leer longfixatie onder constante druk voor histologische evaluatie van emfyseem bij muizen. Deze methode behoudt longinflatie en maakt gelijktijdige fixatie van meerdere longen mogelijk voor betrouwbare resultaten.

Long fixatie onder constante druk voor de evaluatie van emfyseem bij muizen

Meer video's verkennen