Name: Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-06-09T14:45:00.000+00:00
Duration: 6 min 19 s
Description: Leer een betrouwbaar heterotopisch achterpoottransplantatiemodel bij ratten voor vasculaire composietallotransplantatie. Deze stapsgewijze techniek ondersteunt korte-termijnstudies naar preservatie en immuunafstoting.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dit werk werd ondersteund door het Bureau van de Assistent-minister van Defensie voor Gezondheidszaken via het Congressionally Directed Medical Research Program onder Award No. W81XWH-17-1-0680. Meningen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteurs en worden niet noodzakelijkerwijs onderschreven door het ministerie van Defensie.

Alle dieren kregen humane zorg in overeenstemming met de NIH-gids voor de verzorging en het gebruik van proefdieren. De Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC-protocol 2017N000184) en Animal Care and Use Review Office (ACURO) hebben alle dierprotocollen goedgekeurd. Inteelt mannelijke Lewisratten (250-400 g) werden gebruikt voor alle experimenten.
1. Chirurgie
<ol><li>Verdoof de Lewis-ratten met behulp van isofluraaninhalatie. Induceer anesthesie met 5% isofluraan in de inductiekamer en handhaaf anesthesie met 1,5-3% isofluraaninhalatie via een ademhalingskegel.</li>
	<li>Breng oogsmeermiddel aan vóór de operatie bij overlevingsprocedures. Scheer de operatieplaats, behandel met ontharingscrème, scrub en drapeer met steriele gordijnen.</li>
	<li>Bevestig de totale anesthesie met een teenknijptest vóór de incisie en regelmatig tijdens de procedure. Controleer de hart- en ademhalingsfrequenties gedurende de hele procedure. Voor alle operaties, onderhoud steriele omstandigheden door steriele instrumenten, benodigdheden, gordijnen en handschoenen te gebruiken. Zie de tabel met materialen voor de lijst van instrumenten die voor de procedures worden gebruikt.</li>
</ol>2. Donorrecht gedeeltelijke achterverkwerving
<ol><li>Maak een omtrekkende incisie van de huid boven de enkel bij het distale derde deel van het been.</li>
	<li>Skeletoniseer en cauteriseer de sapheneuze slagader en de terminale tak van de popliteale slagader met behulp van een bipolaire tang. Cauteriseer en snijd de gastrocnemius, soleus, tibialis anterior en biceps femoris spieren af totdat het tibiale bot is blootgesteld.</li>
	<li>Maak een incisie van 2,5 cm in de rechter liesplooi. Ontleed het inguinale vetkussen en trek het distaal in om de femorale vaten bloot te leggen. Gebruik een fishhook retractor om het liesband vast te pakken en de tang vast te klemmen om het inguinale vetkussen distisch vast te houden. OPMERKING: Het inguinale vetkussen is opgenomen in de oogst van de gedeeltelijke ledemaat.</li>
	<li>Ontleed de femorale vaten, individualiseer Murphy-takken (diepe gespierde collaterale takken bevinden zich meestal halverwege tussen het inguinale ligament en de epigastrische tak) en ligaat met 8-0 nylon banden.</li>
	<li>Hepariniseer de donorrat met 100 IE/kg heparine, geïnjecteerd in de dorsale ader van de penis met behulp van een naald van 27,5 G.</li>
	<li>Voltooi de huidincisie rond de heup.</li>
	<li>Cauterize de biceps femoris en gluteus superficialis spieren met behulp van bipolaire tang. Cauteriseer en snijd de heupzenuw op de middelste dijbeenlengte. Stel het dijbeen proximaal bloot ter hoogte van de achterste femurkam. OPMERKING: Adductor- en quadricepsspieren worden buiten de verkrijging gelaten. De innominate pedikel is bewaard gebleven.</li>
	<li>Ligaat femorale vaten met 8/0 nylon banden ter hoogte van het inguinale ligament. Voer een arteriotomie uit op de dijbeenslagader net onder de ligatuur en verwijd om het inbrengen van een 24 G angiokatheter mogelijk te maken.</li>
	<li>Cauteriseer en snijd de resterende spier onder de pedikel, waardoor de voorste kant van het dijbeen wordt blootgelegd.</li>
	<li>Snijd het scheenbeen en het dijbeen met behulp van een botsnijder zo proximaal en distisch mogelijk ( halverwege de lengte).</li>
	<li>Spoel de gedeeltelijke achterpoot met 2 ml heparine zoutoplossing (100 IE/ml) om een duidelijke veneuze uitstroom te verkrijgen. Bewaren op ijs in een steriel gaas tot microvasculaire overdracht(figuur 1).</li>
	<li>Terwijl het dier onder algemene anesthesie is, voert u euthanasie uit door exsanguinatie totdat het dier geen teken van leven vertoont (geen ademhalingsbeweging en geen hartslag).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62586/62586fig01.jpg"> Figuur 1: Rat gedeeltelijk achterpoot geoogst. Een 24 G angiocath wordt ingebracht in de femorale slagader, klaar voor heterotope microvasculaire overdracht. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62586/62586fig01large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
3. Recipiente operatie
<ol><li>Scheer vóór de incisie de achterkant van de nek en dien buprenorfine 0,01-0,05 mg/kg subcutaan toe. Plaats de rat in rugligging op een verwarmingskussen.</li>
	<li>Maak een incisie van 2,5 cm in de rechter liesplooi. Ontleed het inguinale vetkussen en leun het distaal om de femorale vaten bloot te leggen. Gebruik een haak om het liesband in te trekken en klemtang om het inguinale vetkussen distisch vast te houden.</li>
	<li>Ontleed de femorale vaten, individualiseer de Murphy-takken en ligaat met 8/0 nylon banden.</li>
	<li>Ligate beide vaten boven de epigastrische vaten met behulp van 8/0 nylon banden. Plaats approximatorklemmen proximaal en verwijd de uiteinden van het vat; spoelen met heparine zoutoplossing.</li>
	<li>Maak een incisie op de linkerflank boven de heup en maak een onderhuidse pocket met een onderhuidse tunnel naar de liesplooi. OPMERKING: De inzetincisie wordt gemaakt boven het bewegingsbereik van de heup om ervoor te zorgen dat het dier een normale achterbeweging behoudt. Bovendien zorgt het houden van een huidbrug tussen de transplantaatinzet en de microvasculaire transferplaats voor een betere fixatie van het transplantaat(figuur 2).</li>
	<li>Plaats het proximale deel van de gedeeltelijke ledemaat en het inguinale vetkussen door de onderhuidse tunnel voor microvasculaire overdracht. Voer veneuze en arteriële anastomosen uit met behulp van 10/0 nylon hechtingen. Verwijder beide approximatorklemmen en observeer revascularisatie van de ledemaat. Voer een "melktest" uit op beide vaten om de doorgankelijkheid van elke anastomose te beoordelen. OPMERKING: Acht tot negen hechtingen zijn meestal nodig voor veneuze anastomose, gemiddeld 6 hechtingen voor arteriële anastomose.</li>
	<li>Maak een longitudinale huidincisie aan de mediale kant van de getransplanteerde ledemaat en breng het transplantaat in. Verwijder overtollige huid van het transplantaat en sluit de wond met afzonderlijke hechtingen en een lopende hechting met absorbeerbare 4/0 hechtingen.</li>
	<li>Hecht de inguinale vetkussens van de getransplanteerde ledemaat en de ontvanger aan elkaar met behulp van twee afzonderlijke absorbeerbare hechtingen en sluit de inguinale plooi helemaal aan het einde na een laatste controle van de microvasculaire anastomosen. OPMERKING: Inguinale vetkussens worden stevig gehecht om een beschermende laag vet boven de anastomosen toe te voegen en zorgen voor een veilige positie van het transplantaat en de pedikel. Een zorgvuldige sluiting is beter voor wondgenezing; het voorkomt ook resterende bloedingen uit de wond en vermindert het risico op zelfverminking.</li>
	<li>Compenseer vochtverlies subcutaan met 1-3 ml zoutoplossing volgens de hoeveelheid perioperatieve bloedingen.</li>
	<li>Plaats een Elizabethaanse kraag om de nek van het dier en breng 2 losse hechtingen aan op de huid om deze in de juiste positie te houden.</li>
	<li>Stop de inademing van isofluraan en controleer het dier continu op een opwarmpad totdat het volledig bij bewustzijn en ambulant is.</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/62586/62586fig02.jpg"> Figuur 2: Perioperatief beeld vóór aanvang van de osteomyocutane ledemaat. Een huidbrug van ongeveer 1 cm blijft bewaard tussen de inguinale plooiincisie en de inzet van het transplantaat boven de heup. Het transplantaat wordt onder de brug geplaatst, waarbij het stabiel blijft voor microvasculaire overdracht. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/62586/62586fig02large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
4. Postoperatieve zorg
<ol><li>Controleer het dier tweemaal daags gedurende 72 uur, vervolgens eenmaal daags tot postoperatieve dag (POD) 7 en vervolgens twee keer per week. OPMERKING: De controle moet worden aangepast aan de toestand van het dier en het transplantaat (bleke ogen kunnen aanvullende vloeistoffen vereisen, porfyrinekleuring als indicator van dierlijke pijn, abnormale transplantaatkleur / temperatuur) en verdere zorg moet met de dierenarts worden besproken. Gedurende de gehele onderzoeksperiode is een enkele huisvesting vereist voor de ontvangende ratten om schade aan het transplantaat te voorkomen.</li>
	<li>Voer analgesie uit met subcutane injectie van buprenorfine en / of niet-steroïde anti-inflammatoir geneesmiddel volgens de IACUC-richtlijnen.</li>
	<li>Evalueer het transplantaat en voer dagelijks lichamelijk onderzoek uit met foto's met hetzelfde apparaat. OPMERKING: Het gebruik van ontharingscrème op de huid van het transplantaat is nuttig om de huidskleur van de transplantatie beter te beoordelen.</li>
</ol>

<ol><li>Lanteiri, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Feasibility%2C+reproducibility%2C+risks+and+benefits+of+face+transplantation%3A+a+prospective+study+of+outcomes%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Feasibility, reproducibility, risks and benefits of face transplantation: a prospective study of outcomes.</a> American Journal of Transplantation. 11 (2), 367-378 (2011).</li>
<li>Park, S. H., Eun, S. C., Kwon, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hand+transplantation%3A+current+status+and+immunologic+obstacles%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+and+Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Hand transplantation: current status and immunologic obstacles.</a> Experimental and Clinical Transplantation. 17 (1), 97-104 (2019).</li>
<li>Cetrulo, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Penis+transplantation%3A+first+US+experience%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Penis transplantation: first US experience.</a> Annals of Surgery. 267 (5), 983-988 (2018).</li>
<li>Grajek, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((First+complex+allotransplantation+of+neck+organs%3A+larynx%2C+trachea%2C+pharynx%2C+esophagus%2C+thyroid%2C+parathyroid+glands%2C+and+anterior+cervical+wall%3A+a+case+report%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">First complex allotransplantation of neck organs: larynx, trachea, pharynx, esophagus, thyroid, parathyroid glands, and anterior cervical wall: a case report.</a> Annals of Surgery. 266 (2), 19-24 (2017).</li>
<li>Pribaz, J. J., Caterson, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+limitations+of+conventional+autologous+reconstruction+of+the+head+and+neck%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Craniofacial+Surgery%22%5BJournal%5D)">Evolution and limitations of conventional autologous reconstruction of the head and neck.</a> Journal of Craniofacial Surgery. 24 (1), 99-107 (2013).</li>
<li>Lipson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+limb+transplantation+in+the+rat.+I.+Results+with+syngeneic+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Vascularized limb transplantation in the rat. I. Results with syngeneic grafts.</a> Transplantation. 35 (4), 293-299 (1983).</li>
<li>Lipson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascularized+limb+transplantation+in+the+rat.+II.+Results+with+allogeneic+grafts%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Vascularized limb transplantation in the rat. II. Results with allogeneic grafts.</a> Transplantation. 35 (4), 300-304 (1983).</li>
<li>Adamson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+model+of+hindlimb+osteomyocutaneous+flap+for+the+study+of+tolerance+to+composite+tissue+allografts%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">A modified model of hindlimb osteomyocutaneous flap for the study of tolerance to composite tissue allografts.</a> Microsurgery. 27 (7), 630-636 (2007).</li>
<li>Arav, A., Friedman, O., Natan, Y., Gur, E., Shani, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rat+hindlimb+cryopreservation+and+transplantation%3A+a+step+toward+%22organ+banking%22%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Rat hindlimb cryopreservation and transplantation: a step toward "organ banking".</a> American Journal of Transplantation. 17 (11), 2820-2828 (2017).</li>
<li>Gok, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+ex-situ+limb+perfusion+system+for+a+rodent+model%5BTitle%5D)+AND+%22ASAIO+Journal%22%5BJournal%5D)">Development of an ex-situ limb perfusion system for a rodent model.</a> ASAIO Journal. 65 (2), 167-172 (2019).</li>
<li>Gok, E., Rojas-Pena, A., Bartlett, R. H., Ozer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+skeletal+muscle+metabolomic+changes+associated+with+static+cold+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+Proceedings%22%5BJournal%5D)">Rodent skeletal muscle metabolomic changes associated with static cold storage.</a> Transplantation Proceedings. 51 (3), 979-986 (2019).</li>
<li>Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+basic+and+translational+research+in+reconstructive+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Birth+Defects+Research.+Part+C%2C+Embryo+Today%22%5BJournal%5D)">Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation.</a> Birth Defects Research. Part C, Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).</li>
<li>Fleissig, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modified+heterotopic+hindlimb+osteomyocutaneous+flap+model+in+the+rat+for+translational+vascularized+composite+allotransplantation+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Modified heterotopic hindlimb osteomyocutaneous flap model in the rat for translational vascularized composite allotransplantation research.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (146), e59458(2019).</li>
<li>Ulusal, A. E., Ulusal, B. G., Hung, L. M., Wei, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+hindlimb+allotransplantation+in+rats%3A+an+alternative+model+for+immunological+research+in+composite-tissue+allotransplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic hindlimb allotransplantation in rats: an alternative model for immunological research in composite-tissue allotransplantation.</a> Microsurgery. 25 (5), 410-414 (2005).</li>
<li>Jang, Y., Park, Y. E., Yun, C. W., Kim, D. H., Chung, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vest-collar+as+a+rodent+collar+to+prevent+licking+and+scratching+during+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The vest-collar as a rodent collar to prevent licking and scratching during experiments.</a> Lab Anim. 50 (4), 296-304 (2016).</li>
<li>Kern, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+rodent+orthotopic+forelimb+transplantation+model+that+allows+for+reliable+assessment+of+functional+recovery+resulting+from+nerve+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">A novel rodent orthotopic forelimb transplantation model that allows for reliable assessment of functional recovery resulting from nerve regeneration.</a> American Journal of Transplantation. 17 (3), 622-634 (2017).</li>
<li>Perez-Abadia, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-dose+immunosuppression+in+a+rat+hind-limb+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+International%22%5BJournal%5D)">Low-dose immunosuppression in a rat hind-limb transplantation model.</a> Transplant International. 16 (12), 835-842 (2003).</li>
<li>Sucher, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+hind-limb+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Orthotopic hind-limb transplantation in rats.</a> Journal of Visualized Experiments. (41), e2022(2010).</li>
<li>Fleissig, Y. Y., Beare, J. E., LeBlanc, A. J., Kaufman, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+of+the+rat+hind+limb+transplant+as+an+experimental+model+of+vascularized+composite+allotransplantation%3A+Approaches+and+advantages%5BTitle%5D)+AND+%22SAGE+Open+Medicine%22%5BJournal%5D)">Evolution of the rat hind limb transplant as an experimental model of vascularized composite allotransplantation: Approaches and advantages.</a> SAGE Open Medicine. 8, 2050312120968721(2020).</li>
<li>Lindboe, C. F., Presthus, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+denervation%2C+immobilization+and+cachexia+on+fibre+size+in+the+anterior+tibial+muscle+of+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathologica%22%5BJournal%5D)">Effects of denervation, immobilization and cachexia on fibre size in the anterior tibial muscle of the rat.</a> Acta Neuropathologica. 66 (1), 42-51 (1985).</li>
<li>Nazzal, J. A., Johnson, T. S., Gordon, C. R., Randolph, M. A., Lee, W. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+limb+allotransplantation+model+to+study+skin+rejection+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Microsurgery%22%5BJournal%5D)">Heterotopic limb allotransplantation model to study skin rejection in the rat.</a> Microsurgery. 24 (6), 448-453 (2004).</li>
</ol>

De auteurs hebben geen onthullingen.

Orthotopische ledemaattransplantatiemodellen bij knaagdieren zijn beschreven in de literatuur15,16,17; ze vereisen echter een zenuwherstel, spierherbevestiging en een perfecte osteosynthese van het dijbeen, wat een zeer moeilijke stap kan zijn. Deze modellen zijn ook geassocieerd met een hogere morbiditeit en mortaliteit bij knaagdieren14, vooral in de follow-up op korte termijn, omdat het herstel van een...

In de afgelopen twee decennia is VCA geëvolueerd als een revolutionaire behandeling voor patiënten die lijden aan ernstige misvorming, waaronder gezicht1,amputaties van de bovenste ledematen2,penis3en andere complexe weefseldefecten4,5. De gevolgen van levenslange immunosuppressie belemmeren echter nog steeds een bredere toepassing van deze complexe reconstructieve operaties. Fundamenteel onderzoek is cruciaal om anti-afwijzingsstrategieën te verbeteren. Het verhogen van de VCA-conserveringstijd is ook essentieel om de transplantatielogistiek te verbeteren en de donorpool te vergroten (omdat VCA-donoren aan meer criteria moeten voldoen dan solide orgaandonoren, waaronder huidskleur, anatomische grootte, geslacht). In deze context worden transplantaties van ledematen van ratten veel gebruikt in studies naar de immuunafstoting van allografts6,7,nieuwe tolerantie-inductieprotocollen8en conserveringsstudies9,10,11. Daarom zijn deze VCA-modellen een belangrijk element om te beheersen voor VCA translationeel onderzoek.
Osteomyocutane flappen zijn in de literatuur beschreven als betrouwbare modellen om VCA te bestuderen bij ratten8,12,13,14. Hoewel orthotopische transplantaties van alle ledematen langdurige evaluatie van de transplantaatfunctie mogelijk maken, is het een tijdrovende procedure die gepaard gaat met hogere postoperatieve morbiditeit en mortaliteitscijfers14. Heterotope ledemaattransplantatiemodellen zijn daarentegen niet-functioneel, maar maken reproduceerbare studies op VCA mogelijk. Postoperatieve uitkomsten kunnen betrouwbaar worden verwacht vóór de start van een VCA-transplantatiestudie bij ratten. Deze studie rapporteert een partieel heterotopisch osteomyocutaan flaptransplantatiemodel bij de rat met frequente mogelijke uitkomsten en complicaties die intraoperatief en postoperatief kunnen optreden tijdens een follow-upperiode van drie weken.

<table><tbody><tr><td>24 GA angiocatheter</td><td>BD Insyte Autoguard</td><td>381412</td><td></td></tr><tr><td>4-0 suture Black monofilament non absorbable suture</td><td>Ethicon</td><td>1667</td><td>Wordt gebruikt om de E-kraag aan de achterkant van de nek te hechten</td></tr><tr><td>4-0 suture Coated Vicryl Plus Antibacterial</td><td>Ethicon</td><td>VCP496</td><td></td></tr><tr><td>Adson Tissue Forceps, 11 cm, 1 x 2 Teeth with Tying Platform</td><td>ASSI</td><td>ASSI.ATK26426</td><td></td></tr><tr><td>Bipolar cords</td><td>ASSI</td><td>228000C</td><td></td></tr><tr><td>Black Polyamide Monofilament USP 10-0, 4 mm 3/8c</td><td>AROSurgical</td><td>T04A10N07-13</td><td>Wordt gebruikt om de microvasculaire anastomosen uit te voeren</td></tr><tr><td>Buprenorphine HCl</td><td>Pharmaceutical, Inc</td><td>42023-179-01</td><td></td></tr><tr><td>Dilating Forceps</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>18131-12</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Scissors 15 cm, Round Handle 8 mm diameter, Straight Slender Tapered Blade 7 mm, Lipshultz Pattern</td><td>ASSI</td><td>ASSI.SAS15RVL</td><td></td></tr><tr><td>Double Micro Clamps 5.5 x 1.5 mm</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>18040-22</td><td></td></tr><tr><td>Elizabethan collar</td><td>Braintree Scientific</td><td>EC-R1</td><td></td></tr><tr><td>Forceps 13.5 cm long, Flat Handle, 9 mm wide Straight Tips 0.1 mm diameter (x2)</td><td>ASSI</td><td>ASSI.JFL31</td><td></td></tr><tr><td>Halsey Micro Needle Holder</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>Heparin Lock Flush Solution, USP, 100 units/mL</td><td>BD PosiFlush</td><td>306424</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Patterson Veterinary</td><td>14043-704-06</td><td></td></tr><tr><td>Jewelers Bipolar Forceps Non Stick 11 cm, straight pointed tip, 0.25 mm tip diameter</td><td>ASSI</td><td>ASSI.BPNS11223</td><td></td></tr><tr><td>Lone Star Elastic Stays</td><td>CooperSurgical</td><td>3314-8G</td><td>Wordt gebruikt om het inguinale ligament terug te trekken voor dissectie van de femorale vaten</td></tr><tr><td>Lone Star Self-Retaining Retractors</td><td>CooperSurgical</td><td>3301G</td><td></td></tr><tr><td>Micro-Mosquito Hemostats</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>13010-12</td><td>Wordt gebruikt om het inguinale vetkussen distaal terug te trekken</td></tr><tr><td>Needle Holder, 15 cm Round Handle, 8 mm diameter, Superfine Curved Jaw 0.2 mm tip diameter, without lock</td><td>ASSI</td><td>ASSI.B1582</td><td></td></tr><tr><td>Nylon Suture Black Monolfilament 8-0, 6.5 mm 3/8c</td><td>Ethilon</td><td>2808G</td><td>Wordt gebruikt om collaterale takken op de femorale vaten te ligatureren</td></tr><tr><td>Offset Bone Nippers</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>16101-10</td><td></td></tr><tr><td>S&amp;T Vascular Clamps 5.5 x 1.5 mm</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Walton scissors</td><td>Fine science tools (FST)</td><td>14077-09</td><td></td></tr></tbody></table>

partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Partial Heterotopic Hindlimb Transplantation Model in Rats

Gevasculariseerde composiet allotransplantaties (VCA) vormen de meest geavanceerde reconstructieoptie voor patiënten zonder autologe chirurgische mogelijkheden na een complex weefseldefect. Gezichts- en handtransplantaties hebben het leven van misvormde patiënten veranderd, waardoor ze een nieuw esthetisch en functioneel sociaal orgaan hebben. Ondanks veelbelovende resultaten presteert VCA nog steeds ondermaats als gevolg van levenslange immunosuppressiecomorbiditeiten en infectieuze complicaties. De rat is een ideaal diermodel voor in vivo studies naar immunologische routes en afstotingsmechanismen van transplantaten. Ratten worden ook veel gebruikt in nieuwe conserveringstechnieken voor samengesteld weefseltransplantaten, waaronder perfusie- en cryopreservatiestudies. Modellen die worden gebruikt voor VCA bij ratten moeten reproduceerbaar, betrouwbaar en efficiënt zijn met een lage postoperatieve morbiditeit en mortaliteit. Heterotope ledemaattransplantatieprocedures voldoen aan deze criteria en zijn gemakkelijker uit te voeren dan orthotopische ledemaattransplantaties. Het beheersen van microchirurgische modellen van knaagdieren vereist solide ervaring in microchirurgie en dierverzorging. Hierin wordt een betrouwbaar en reproduceerbaar model van partiële heterotope osteomyocutane flaptransplantatie bij ratten, de postoperatieve uitkomsten en de middelen om mogelijke complicaties te voorkomen gerapporteerd.

In deze single-operator studie werden 30 syngenegene heterotope partiële ledemaattransplantaties uitgevoerd. Succes werd op postoperatieve dag 21 gedefinieerd als de afwezigheid van VCA-falen of complicaties die euthanasie vereisen. De normale evolutie van het transplantaat is weergegeven in figuur 3. De gemiddelde duur voor gedeeltelijke ledemaatverwerving en transplantaatinstel bij de ontvanger was respectievelijk 35 en 105 min; de gemiddelde ischemietijd was 105 min. Tijdens de follow-up ...

Dit artikel presenteert een partieel heterotopisch osteomyocutaan flaptransplantatieprotocol bij ratten en de mogelijke uitkomsten ervan in de follow-up op middellange termijn.

Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Vascularized composite allotransplantations (VCA) represent the most advanced reconstruction option for patients without autologous surgical possibilities ...

We presenteren een betrouwbaar en reproduceerbaar chirurgisch model van heterotope achterpoottransplantatie bij ratten. Deze techniek is ideaal voor kortlopende studies naar conservering of immuunafstoting bij VCA. De stapsgewijze beschrijving stelt cursisten in staat om de operatie snel onder de knie te krijgen.Maak om te beginnen een omtrekkende incisie op de huid boven de enkel bij het distale derde deel van het been. Skeletoniseer en cauteriseer de sapheneuze slagader en de terminale tak van de popliteale slagader met behulp van een bipolaire tang. Cauteriseer en snijd de gastrocnemius, soleus, tibialis anterior en biceps femoris spieren totdat het tibiale bot is blootgesteld.Maak een incisie van 2,5 centimeter aan de rechter inguinale plooi en ontleed het inguinale vetkussen. Gebruik een vishaak retractor om het liesband vast te pakken. Houd het inguinale vetkussen distaal vast met een klemtang en trek het vetkussen in om de dijbeenvaten bloot te leggen.Ontleed de femorale vaten, individualiseer de Murphy-takken en ligaat met 8/0 nylon banden. Hepariniseer de donorrat door de heparine in de dorsale ader van de penis te injecteren met behulp van een naald van 27,5 gauge. Voltooi de huidincisie rond de heup.Gebruik de bipolaire tang om de biceps femoris en gluteus superficialis spieren dicht te maken, cauteriseer vervolgens en snijd de heupzenuw op de lengte van het midden van het dijbeen. Stel het dijbeen proximaal bloot ter hoogte van de achterste femurkuif en ligaat de femorale vaten met nylon banden ter hoogte van het inguinale ligament. Voer een arteriotomie uit op de dijbeenslagader net onder de ligatuur en verwijd om de 24 gauge angiocatheter in te brengen.Cauteriseer en snijd de resterende spier onder de pedikel om de voorste kant van het dijbeen bloot te leggen. Gebruik de botsnijder om het scheenbeen proximaal door te snijden en het dijbeen zo distisch mogelijk te snijden. Spoel de gedeeltelijke achterpoot met twee milliliter heparine zoutoplossing om een duidelijke veneuze uitstroom te verkrijgen.Plaats de achterpoot op ijs in een steriel gaasje tot de microvasculaire overdracht. Ontleed het inguinale vetkussen en leun het inguinale vetkussen distaal om de femorale vaten bloot te leggen. Gebruik een haak om het liesband in te trekken en klemtang om het inguinale vetkussen distisch vast te houden.Ontleed de femorale vaten, individualiseer de Murphy-takken en ligaat met nylon banden zoals aangetoond. Ligate beide vaten boven de epigastrische vaten met behulp van nylon banden. Plaats de approximatorklemmen proximaal, verwijd de vaatlens en spoel af met heparine zoutoplossing.Maak een incisie op de linkerflank boven de heup en maak een onderhuidse pocket met een onderhuidse tunnel naar de liesplooi. Plaats het proximale deel van de gedeeltelijke ledemaat en het inguinale vetkussen door de onderhuidse tunnel voor microvasculaire overdracht. Voer de veneuze en arteriële anastomosen uit met behulp van nylon hechtingen.Verwijder beide approximatorklemmen en observeer de revascularisatie van de ledemaat. Voer een melktest uit op beide vaten om de doorgankelijkheid van elke anastomose te beoordelen. Maak een longitudinale huidincisie aan de mediale kant van de getransplanteerde ledemaat en breng het transplantaat in.Verwijder de overtollige huid van het transplantaat en sluit de wond met afzonderlijke hechtingen en een lopende hechting met absorbeerbare 4/0 hechtingen. Hecht de inguinale vetkussens van de getransplanteerde ledemaat en de ontvanger aan elkaar met behulp van twee afzonderlijke absorbeerbare hechtingen en sluit de inguinale plooi na de laatste controle van de microvasculaire anastomose. De evolutie van het heterotope hindlimbmodel werd gevolgd tot het einde van de studie.De haargroei werd waargenomen tijdens de eerste postoperatieve week en de cutane terugtrekking verscheen na twee weken. Gevasculariseerde composiet allotransplantatie falen kan optreden tijdens de eerste postoperatieve week als gevolg van microvasculaire trombose. Veneuze trombose was in 20% van de gevallen de oorzaak van vroege euthanasie, die allemaal plaatsvonden vóór postoperatieve dag vijf.De huid leek blauw en werd elke dag donkerder. Zelfverminking is een ernstige zorg bij ongevoelige grafts en komt vaak voor tussen postoperatieve dag twee en zeven. Indien beperkt tot minder dan een derde van het transplantaatoppervlak en alleen betrekking heeft op de huid, kunnen chirurgische debridement en hechtingen met behulp van niet-absorbeerbare hechtingen worden besproken met de dierenarts van het personeel.Preventie van zelfverminking is afhankelijk van het gebruik van een e-halsband die tot postoperatieve dag zeven in de nek is gehecht en het reinigen van bloed of korst op de chirurgische wonden van het dier. Ernstige autofagie van meerdere lagen van het transplantaat leidt tot euthanasie van het dier. Dermale cysten verschenen na postoperatieve dag 14, soms met een cutaan necrotisch centrum vóór de fistel.Het is van cruciaal belang om ervoor te zorgen dat de plaatsing van het transplantaat niet voorkomt dat het dier ambulant wordt en dat de pedikel niet geknikt of strak is tijdens de inzet van het transplantaat. Ons team voerde conserveringsstudies uit in de verkregen ledematen vóór transplantatie. De effecten van verschillende duur van statische koude opslag zijn geëvalueerd, evenals verschillende ledemaatperfusieprotocollen.

partial-heterotopic-hindlimb-transplantation-model-in-rats

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden...

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

We beschrijven een nieuwe techniek voor heterotope abdominale hart-longtransplantatie (HAHLT) bij ratten. De transplantaatconfiguratie resulteert in een gedeeltelijk belaste graftcirculatie, waardoor een directe functionele beoordeling mogelijk is. Dit model kan worden gebruikt voor acute of chronische studies van de functie en het immunologische status van het getransplanteerde graft.

Rat Heterotope Abdominale Hart / Single-longtransplantatie in een Volume geladen configuratie

Vasculaire composiet Allograft biedt levensveranderende voordelen aan transplantatie ontvangers, maar de biologische oorzaken van enten afwijzing en vasculopathie blijven slecht begrepen. De knaagdier chirurgische model hier gepresenteerd biedt een reproduceerbaar, klinisch relevant model van transplantatie, waardoor onderzoekers om afwijzing gebeurtenissen en potentiële therapeutische strategieën te evalueren om hun optreden te voorkomen.

Bewerkt Heterotopic achterpoten Osteomyocutaneous flap model in de rat voor translationele vasculaire composiet Allotransplantation onderzoek

Dit protocol presenteert een robuust, reproduceerbaar model van vascularized composiet allotransplant (VCA) gericht op gelijktijdige studie van immunologie en functioneel herstel. De tijd geïnvesteerd in zorgvuldige techniek in een rechter mid-dij achterpoot orthotopische transplantatie met de hand genaaid vasculaire anastomoses en neurale coaptatie levert de mogelijkheid om functioneel herstel te bestuderen.

Het nemen van de volgende stap: een neurale coaptatie orthotopische achterste ledemaat transplantatie model om functioneel herstel in Rat maximaliseren

We beschrijven een model van heterotopische buikharttransplantatie bij ratten, wat wijzigingen van de huidige strategieën impliceert, die leiden tot een vereenvoudigde chirurgische aanpak. Daarnaast beschrijven we een nieuw afstotingsmodel door in-ear injectie van vitale hartspiercellen, waardoor verdere transplantatie immunologische analyses bij ratten mogelijk zijn.

Een immunologisch model voor heterotopische hart- en hartspierceltransplantatie bij ratten

Dit protocol beschrijft een eenvoudige en efficiënte methode voor de transplantatie van aortaklepblaadjes onder de niercapsule om de studie van alloreactiviteit van hartkleppen mogelijk te maken.

Een vereenvoudigd model voor heterotopische hartkleptransplantatie bij knaagdieren

Dit artikel beschrijft een aangepaste techniek voor heterotope gevasculariseerde harttransplantatie met bijgewerkte aseptische techniek, analgesie en anesthesie.

Een gemodificeerd muizen heterotopisch harttransplantatieprotocol dat overeenkomt met hedendaagse normen voor aseptische techniek, anesthesie en analgesie

Deze studie toont een reproduceerbare heterotope abdominale harttransplantatietechniek bij ratten die beginners kunnen leren en uitvoeren. Bovendien wordt een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten gegenereerd door heterotope abdominale harttransplantatie uit te voeren en de aortaklep van de donor te beschadigen met behulp van een geleidedraad na het oogsten.

Gemodificeerde heterotope abdominale harttransplantatie en een nieuw aorta-regurgitatiemodel bij ratten

Het hier beschreven heterotope hulplevertransplantatieprotocol bij ratten biedt een praktisch onderzoeksinstrument voor het onderzoeken van mechanismen van afstoting van het levertransplantaat. Dit model helpt bij het verlichten van de chirurgische hindernissen en dierlijke stress van orthotope levertransplantatie bij ratten.

Heterotopisch aanvullend transplantaatmodel voor ratten in de hele lever met behulp van een hepaticouretostomie voor onderzoeken naar afstoting van transplantaten

We presenteren een reproduceerbaar muismodel van heterotopische vascularisatie allotransplantatie van achterpoot tot hals. Dit supermicrochirurgisch protocol, waarbij 0,3-0,5 mm vatenanastomosen worden gebruikt, integreert nylonfilamentgeleiding en veneuze manchetten. Het biedt een betrouwbaar platform voor translationele studies naar tolerantie, ischemie-reperfusieschade en immunologische mechanismen bij vasculariseerde samengestelde allotransplantatie.

Heterotopische achterpoot-naar-nek transplantatie bij de muis: een supermicrochirurgisch model van vasculariseerde composietallotransplantatie

Leer een betrouwbaar heterotopisch achterpoottransplantatiemodel bij ratten voor vasculaire composietallotransplantatie. Deze stapsgewijze techniek ondersteunt korte-termijnstudies naar preservatie en immuunafstoting.

Partieel heterotopisch hindlimbtransplantatiemodel bij ratten

Meer video's verkennen