Name: High-plex beeldvorming met behulp van spectrale confocale microscopie om niet-specifieke weefselfluorescentie te minimaliseren (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Ontdek hoe spectrale confocale microscopie met heparine-blokkering en computationele unmixing de IBEX-workflow optimaliseert voor hoog-plex beeldvorming in menselijk weefsel.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li>Hagios, C., Lochter, A., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+architecture%3A+The+ultimate+regulator+of+epithelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Philosoph+Trans+Royal+Soc+B%3A+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tissue architecture: The ultimate regulator of epithelial function.</a> Philosoph Trans Royal Soc B: Biol Sci. 353 (1370), (1998).</li>
<li>Mincarelli, L., Lister, A., Lipscombe, J., Macaulay, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+Cell+Identity+with+Single-Cell+Omics%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Defining Cell Identity with Single-Cell Omics.</a> Proteomics. 18 (18), (2018).</li>
<li>Macaulay, I. C., Voet, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+Cell+Genomics%3A+Advances+and+Future+Perspectives%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Single Cell Genomics: Advances and Future Perspectives.</a> PLoS Genet. 10 (1), (2014).</li>
<li>de Vries, N. L., Mahfouz, A., Koning, F., de Miranda, N. F. C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unraveling+the+Complexity+of+the+Cancer+Microenvironment+With+Multidimensional+Genomic+and+Cytometric+Technologies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Unraveling the Complexity of the Cancer Microenvironment With Multidimensional Genomic and Cytometric Technologies.</a> Front Oncol. , 10(2020).</li>
<li>van Dam, S., Baars, M. J. D., Vercoulen, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+Tissue+Imaging%3A+Spatial+Revelations+in+the+Tumor+Microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers%22%5BJournal%5D)">Multiplex Tissue Imaging: Spatial Revelations in the Tumor Microenvironment.</a> Cancers. 14 (13), (2022).</li>
<li>Bressan, D., Battistoni, G., Hannon, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dawn+of+spatial+omics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The dawn of spatial omics.</a> Science. 381 (6657), (2023).</li>
<li>Williams, C. G., Lee, H. J., Asatsuma, T., Vento-Tormo, R., Haque, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+introduction+to+spatial+transcriptomics+for+biomedical+research%5BTitle%5D)+AND+%22Gen+Med%22%5BJournal%5D)">An introduction to spatial transcriptomics for biomedical research.</a> Gen Med. 14 (1), (2022).</li>
<li>Ståhl, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+and+analysis+of+gene+expression+in+tissue+sections+by+spatial+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Visualization and analysis of gene expression in tissue sections by spatial transcriptomics.</a> Science. 353 (6294), (2016).</li>
<li>Pascal, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Correlation+of+mRNA+and+protein+levels%3A+Cell+type-specific+gene+expression+of+cluster+designation+antigens+in+the+prostate%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genom%22%5BJournal%5D)">Correlation of mRNA and protein levels: Cell type-specific gene expression of cluster designation antigens in the prostate.</a> BMC Genom. 9, (2008).</li>
<li>Patel, S. S., Rodig, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+Tissue+Imaging+Methods%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Overview of Tissue Imaging Methods.</a> Methods Mol Biol. 2055, (2020).</li>
<li>Ohno, M., Karagiannis, P., Taniguchi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protein+expression+analyses+at+the+single+cell+level%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Protein expression analyses at the single cell level.</a> Molecules. 19 (9), (2014).</li>
<li>Zimmermann, T., Marrison, J., Hogg, K., O’Toole, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clearing+up+the+signal%3A+Spectral+imaging+and+linear+unmixing+in+fluorescence+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Clearing up the signal: Spectral imaging and linear unmixing in fluorescence microscopy.</a> Methods Mol Biol. , 1075(2014).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nat Protoc. 17 (2), (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Aca+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Aca Sci U S A. 117 (52), (2020).</li>
<li>Kothurkar, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((%E2%80%99Iterative+Bleaching+Extends+Multiplexity%E2%80%99+facilitates+simultaneous+identification+of+all+major+retinal+cell+types%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">’Iterative Bleaching Extends Multiplexity’ facilitates simultaneous identification of all major retinal cell types.</a> J Cell Sci. 137 (23), (2024).</li>
<li>Cohn, D. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delineating+spatial+cell-cell+interactions+in+the+solid+tumour+microenvironment+through+the+lens+of+highly+multiplexed+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Delineating spatial cell-cell interactions in the solid tumour microenvironment through the lens of highly multiplexed imaging.</a> Front Immunol. 14, (2023).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+An+open+and+extensible+method+for+high+content+multiplex+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22arXiv%22%5BJournal%5D)">IBEX: An open and extensible method for high content multiplex imaging of diverse tissues.</a> arXiv. , (2021).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+IBEX+Knowledge-Base%3A+A+central+resource+for+multiplexed+imaging+techniques%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">The IBEX Knowledge-Base: A central resource for multiplexed imaging techniques.</a> PLoS Biol. 23 (3), e3003070(2025).</li>
<li>Croce, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Light+and+Autofluorescence%2C+Multitasking+Features+in+Living+Organisms%5BTitle%5D)+AND+%22Photochem%22%5BJournal%5D)">Light and Autofluorescence, Multitasking Features in Living Organisms.</a> Photochem. 1 (2), (2021).</li>
<li>Wizenty, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence%3A+A+potential+pitfall+in+immunofluorescence-based+inflammation+grading%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence: A potential pitfall in immunofluorescence-based inflammation grading.</a> J Immunol Methods. 456, (2018).</li>
<li>Donaldson, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunofluorescence+Staining%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Immunofluorescence Staining.</a> Curr Protoc Cell Biol. 69 (1), 4.3.1-4.3.7 (2015).</li>
<li>Sicherre, E., Favier, A. L., Riccobono, D., Nikovics, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Non-specific+binding%2C+a+limitation+of+the+immunofluorescence+method+to+study+macrophages+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Genes%22%5BJournal%5D)">Non-specific binding, a limitation of the immunofluorescence method to study macrophages in situ.</a> Genes. 12 (5), (2021).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Monique+Hartlen%C2%A0Histotechnology+Lab+Manual%22">Monique Hartlen Histotechnology Lab Manual</a>. , NSCC. (2022).</li>
<li>Stephen Peters Frozen Section Technique. , Pathology Innovations, LLC. 
 <a target="_blank" href="https://pathology-innovations.squarespace.com/frozen-section-technique">https://pathology-innovations.squarespace.com/frozen-section-technique</a> (2023).</li>
<li>Stringer, C., Wang, T., Michaelos, M., Pachitariu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellpose%3A+a+generalist+algorithm+for+cellular+segmentation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Methods%22%5BJournal%5D)">Cellpose: a generalist algorithm for cellular segmentation.</a> Nat Methods. 18 (1), (2021).</li>
<li>Mayeno, A. N., Hamann, K. J., Gleich, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granule-associated+flavin+adenine+dinucleotide+%28FAD%29+is+responsible+for+eosinophil+autofluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukocyte+Biol%22%5BJournal%5D)">Granule-associated flavin adenine dinucleotide (FAD) is responsible for eosinophil autofluorescence.</a> J Leukocyte Biol. 51 (2), (1992).</li>
<li>Jenvey, C. J., Stabel, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autofluorescence+and+Nonspecific+Immunofluorescent+Labeling+in+Frozen+Bovine+Intestinal+Tissue+Sections%3A+Solutions+for+Multicolor+Immunofluorescence+Experiments%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Autofluorescence and Nonspecific Immunofluorescent Labeling in Frozen Bovine Intestinal Tissue Sections: Solutions for Multicolor Immunofluorescence Experiments.</a> J Histochem Cytochem. 65 (9), (2017).</li>
<li>Vlaminck, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+local+eosinophilia+in+the+surgical+outcome+of+chronic+rhinosinusitis%3A+A+3-year+prospective+observational+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Rhinol+Allergy%22%5BJournal%5D)">The importance of local eosinophilia in the surgical outcome of chronic rhinosinusitis: A 3-year prospective observational study.</a> Am J Rhinol Allergy. 28 (3), (2014).</li>
<li>Skinner, B. M., Johnson, E. E. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nuclear+morphologies%3A+their+diversity+and+functional+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Chromosoma%22%5BJournal%5D)">Nuclear morphologies: their diversity and functional relevance.</a> Chromosoma. 126 (2), (2017).</li>
<li>Duhamel, R. C., Johnson, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+nonfat+dry+milk+to+block+nonspecific+nuclear+and+membrane+staining+by+avidin+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Use of nonfat dry milk to block nonspecific nuclear and membrane staining by avidin conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 33 (7), (1985).</li>
<li>Valnes, K., Brandtzaeg, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+inhibition+of+nonspecific+eosinophil+staining+or+identification+of+eosinophilic+granulocytes+by+paired+counterstaining+in+immunofluorescence+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Selective inhibition of nonspecific eosinophil staining or identification of eosinophilic granulocytes by paired counterstaining in immunofluorescence studies.</a> J Histochem Cytochem. 29 (5), (1981).</li>
<li>Panchuk-Voloshina, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alexa+dyes%2C+a+series+of+new+fluorescent+dyes+that+yield+exceptionally+bright%2C+photostable+conjugates%5BTitle%5D)+AND+%22J+Histochem+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Alexa dyes, a series of new fluorescent dyes that yield exceptionally bright, photostable conjugates.</a> J Histochem Cytochem. 47 (9), (1999).</li>
<li>Bystrom, J., Amin, K., Bishop-Bailey, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysing+the+eosinophil+cationic+protein+-+a+clue+to+the+function+of+the+eosinophil+granulocyte%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+Res%22%5BJournal%5D)">Analysing the eosinophil cationic protein - a clue to the function of the eosinophil granulocyte.</a> Respiratory Res. , 12(2011).</li>
<li>Rahman, A. H., Tordesillas, L., Berin, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heparin+reduces+nonspecific+eosinophil+staining+artifacts+in+mass+cytometry+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Cyt+Part+A%22%5BJournal%5D)">Heparin reduces nonspecific eosinophil staining artifacts in mass cytometry experiments.</a> Cyt Part A. 89 (6), (2016).</li>
<li>Saitou, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue+intrinsic+fluorescence+spectra-based+digital+pathology+of+liver+fibrosis+by+marker-controlled+segmentation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">Tissue intrinsic fluorescence spectra-based digital pathology of liver fibrosis by marker-controlled segmentation.</a> Front Med. 5 (DEC), (2018).</li>
<li>Acuña-Rodriguez, J. P., Mena-Vega, J. P., Argüello-Miranda, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live-cell+fluorescence+spectral+imaging+as+a+data+science+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+Rev%22%5BJournal%5D)">Live-cell fluorescence spectral imaging as a data science challenge.</a> Biophys Rev. 14 (2), (2022).</li>
<li>Constantinou, P., Dacosta, R. S., Wilson, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extending+immunofluorescence+detection+limits+in+whole+paraffin-embedded+formalin+fixed+tissues+using+hyperspectral+confocal+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microscopy%22%5BJournal%5D)">Extending immunofluorescence detection limits in whole paraffin-embedded formalin fixed tissues using hyperspectral confocal fluorescence imaging.</a> J Microscopy. 234 (2), (2009).</li>
<li>Enninful, A., Baysoy, A., Fan, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unmixing+for+ultra-high-plex+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Unmixing for ultra-high-plex fluorescence imaging.</a> Nat Comm. 13 (1), (2022).</li>
<li>Chang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+Mass+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Cyt+Part+A%22%5BJournal%5D)">Imaging Mass Cytometry.</a> Cyt Part A. 91 (2), (2017).</li>
<li>Angelo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+ion+beam+imaging+of+human+breast+tumors%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Multiplexed ion beam imaging of human breast tumors.</a> Nat Med. 20 (4), (2014).</li>
<li>Baharlou, H., Canete, N. P., Cunningham, A. L., Harman, A. N., Patrick, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mass+Cytometry+Imaging+for+the+Study+of+Human+Diseases%E2%80%94Applications+and+Data+Analysis+Strategies%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mass Cytometry Imaging for the Study of Human Diseases—Applications and Data Analysis Strategies.</a> Front Immunol. 10, (2019).</li>
<li>Goltsev, Y., Nolan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CODEX+multiplexed+tissue+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">CODEX multiplexed tissue imaging.</a> Nat Rev Immunol. 23 (10), 613-613 (2023).</li>
<li>Black, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CODEX+multiplexed+tissue+imaging+with+DNA-conjugated+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">CODEX multiplexed tissue imaging with DNA-conjugated antibodies.</a> Nat Protoc. 16 (8), (2021).</li>
<li>Vorobjev, I. A., Kussanova, A., Barteneva, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+Spectral+Imaging+Cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Development of Spectral Imaging Cytometry.</a> Methods Mol Biol. 2635, (2023).</li>
<li>Hernandez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+Immunofluorescence+Tyramide+Signal+Amplification+for+Immune+Cell+Profiling+of+Paraffin-Embedded+Tumor+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex Immunofluorescence Tyramide Signal Amplification for Immune Cell Profiling of Paraffin-Embedded Tumor Tissues.</a> Front Mol Biosci. 8, (2021).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>2N zwavelzuur (H2SO4) oplossing</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>500 mL beker</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>6-wellsplaat</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>Bcl-6 - Alexa Fluor 647</td><td>BD Biosciences</td><td>561525</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm Fixatie/Permeabilisatie Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554722</td><td></td></tr><tr><td>Dissectiemicroscoop op tafel</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>Rundserumalbumine (BSA)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>CD11c - Alexa Fluor 700</td><td>BD Biosciences</td><td>561352</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD138/Syndecan-1 - PE</td><td>BioLegend</td><td>356503</td><td>Verdunningsfactor 1:200</td></tr><tr><td>CD20 - Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53020282</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD21 - Alexa Fluor 532</td><td>NovusBio</td><td>NBP2-60733AF532</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD23 - PE</td><td>BioLegend</td><td>338507</td><td>Verdunningsfactor 1:200</td></tr><tr><td>CD3 - iFluor 594</td><td>AAT Bioquest</td><td>100320C0</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD31 - Alexa Fluor 700</td><td>BioLegend</td><td>303134</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD34 - iFluor 594</td><td>AAT Bioquest</td><td>103400C0</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD38 - Alexa Fluor 700</td><td>BioLegend</td><td>303523</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD4 - Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>300520</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD45 - Alexa Fluor 532</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>58045942</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>CD54/ICAM-1 - Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>353113</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Chrome Alum-Gelatin Lijm</td><td>Newcomer Supply</td><td>1033A</td><td></td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>NC9511236</td><td>Ook Catalogusnr.50-465-347 voor grotere monsters</td></tr><tr><td>DAPI kalibratieschuif</td><td>Agar Scientific</td><td>AG2273</td><td></td></tr><tr><td>DAPI oplossing, 1 mg/mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td>Verdunningsfactor 1:3000</td></tr><tr><td>E-cadherin/CD324 - Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>147307</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>EpCAM/CD326 - Alexa Fluor 594</td><td>BioLegend</td><td>324228</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Eppendorf/falcon buisjes</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Pincetten</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>FoxP3 - eFluor 660</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50577382</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Microscoopglazen met bevroren uiteinde</td><td>ChemScience</td><td>GEW45-2575-W</td><td></td></tr><tr><td>GL7 - Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>53590282</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Heparine natriumzout</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>H3393</td><td>10KU</td></tr><tr><td>HLA-DR - PE</td><td>NovusBio</td><td>NB100-77855PE</td><td>Verdunningsfactor 1:200</td></tr><tr><td>Human TruStain FcX (Fc Receptor Blocking Solution)</td><td>BioLegend</td><td>422302</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Vochtwolk</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>IJsemmer met deksel</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>IgD - Alexa Fluor 488</td><td>BioLegend</td><td>348215</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>IL4Ra/CD124 - PE</td><td>BioLegend</td><td>144803</td><td>Verdunningsfactor 1:200</td></tr><tr><td>Imaris File Converter</td><td>OXFORD instruments</td><td>N/A</td><td>Conversie van elk afbeeldingsbestandformaat naar.ims formaat (https://imaris.oxinst.com/microscopy-imaging-software-free-trial#file-converter)</td></tr><tr><td>Isopentaan (2-Methylbutaan)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>Ki-67 - Alexa Fluor 488</td><td>BD Biosciences</td><td>558616</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Kimberly-Clark Professional Kimtech Science Kimwipes Delicate Task Wipers, 1-Ply</td><td>Kimtech Science</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>Grote (d.w.z. 25 cm lang) pincetten</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>Vloeibare Stikstof</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>Lithiumborohydride (LiBH4)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>222356</td><td></td></tr><tr><td>MECA-79 - Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53603680</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Microscoop glasplaatje Dekglas Nr.1 22x50 mm</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-542A</td><td></td></tr><tr><td>Milli-Q water</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Wat beschikbaar/gebruikt wordt in het lab</td></tr><tr><td>MUC2 - Alexa Fluor 488</td><td>NovusBio</td><td>NB120-11197AF488</td><td>Verdunningsfactor 1:100</td></tr><tr><td>Nunc Lab-Tek Chambered Coverglass</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>155380</td><td></td></tr><tr><td>PAP pen</td><td>

high-plex beeldvorming met behulp van spectrale confocale microscopie om niet-specifieke weefselfluorescentie te minimaliseren

High-plex Imaging using Spectral Confocal Microscopy to Minimize Non-specific Tissue Fluorescence

High-plex beeldvorming met behulp van spectrale confocale microscopie om niet-specifieke weefselfluorescentie te minimaliseren

Highly multiplexed imaging enables the study of functionally diverse cells and their niches within their native tissue environments. Iterative Bleaching ...

high-plex-imaging-using-spectral-confocal-microscopy-to-minimize-non

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

We hebben een nieuwe techniek van het kwantificeren van nicotine acetylcholine receptor veranderingen binnen subcellulaire regio's van specifieke subtypes van CNS neuronen beter de mechanismen van de nicotine verslaving te begrijpen met behulp van een combinatie van benaderingen waaronder fluorescerend eiwit tagging van de receptor met behulp van de knock-in aanpak en spectrale confocale beeldvorming.

Spectrale confocale beelden van de fluorescent gelabeld nicotinereceptoren in de knock-in muizen met chronische Nicotine Administratie

We demonstreren het gebruik van fluorescentie foto activerings lokalisatie microscopie (FPALM) om gelijktijdig meerdere soorten fluorescerend gelabelde moleculen binnen cellen af te beelden. De beschreven technieken leveren de lokalisatie op van duizenden tot honderdduizenden individueel fluorescent gelabelde eiwitten, met een precisie van tientallen nanometer binnen enkele cellen.

Gelijktijdige Multicolor beeldvorming van biologische structuren met fluorescentie Fotoactivatie Lokalisatie Microscopie

Het in beeld brengen van het dynamisch gedrag van organellen en andere subcellulaire structuren in vivo kan licht werpen op hun functie in fysiologische en ziektecondities. Hier presenteren we methoden voor het genetisch markeren van twee organellen, centrosomen en mitochondriën, en het in beeld brengen van hun dynamiek in levende zebravis-embryo's met behulp van breedveld- en confocale microscopie.

Beeldvorming Subcellulaire Structuren in het Living zebravis embryo

Amyloïde afzetting is een kenmerk van verschillende ziekten en treft vele verschillende organen. Deze paper beschrijft de toepassing van de fluorescentie van de verlichte geconjugeerd oligothiophene in combinatie met fluorescentie microscopie technieken kleuring. Deze kleuringstechniek vertegenwoordigt een krachtige tool voor de detectie en verkenning van eiwit-aggregaten in zowel klinische en wetenschappelijke opstellingen.

Imaging amyloïde weefsels gekleurd met verlichte geconjugeerd Oligothiophenes door hyperspectrale Confocal Microscopie en fluorescentie levensduur Imaging

Antilichamen die zich aan target receptoren van het celoppervlak binden kunnen verlenen bevleesdheid en clustering wijzigingen. Deze dynamische veranderingen hebben gevolgen voor het karakteriseren van Geneesmiddelenontwikkeling in de doelcellen. Dit protocol maakt gebruik van de confocal microscopie en afbeelding correlatie spectroscopie via ImageJ/FIJI te kwantificeren van de omvang van de receptor clustering op het celoppervlak.

Confocale microscopie onthult cel oppervlakte Receptor aggregatie via afbeelding correlatie spectroscopie

Spectrale beeldvorming is uitgegroeid tot een betrouwbare oplossing voor de identificatie en scheiding van meerdere fluorescentie signalen in een enkel monster en kan gemakkelijk signalen van belang onderscheiden van achtergrond of auto fluorescentie. Excitatie-Scanning Hyperspectrale beeldvorming verbetert deze techniek door de benodigde beeldverzamelings tijd te verlagen en tegelijkertijd de signaal-ruis verhouding te verhogen.

Excitatie-Scanning hyperspectrale beeld microscopie om fluorescentie signalen efficiënt te discrimineren

We beschrijven een snelle kleuringsmethode om multispectrale beeldvorming op bevroren weefsels uit te voeren.

Een snelle methode voor multispectrale fluorescentiebeeldvorming van bevroren weefselsecties

Hier wordt een methode beschreven die kan worden gebruikt om vijf of meer fluorescerende parameters af te beelden door middel van immunofluorescerende microscopie. Er wordt een analysepijplijn geschetst voor het extraheren van afzonderlijke cellen uit deze beelden en het uitvoeren van analyse van één cel door middel van flowcytometrie-achtige gatingstrategieën, die celsubsets in weefselsecties kunnen identificeren.

Histologiebeelden met hoge parameters genereren en analyseren met histoflowcytometrie

Dit protocol beschrijft de geavanceerde beeldvormingstoepassingen en het beheer van gedeelde middelen van een laser-scannend confocaal microscoopsysteem, geïntegreerd met een multiplexed arraydetector voor hoogresolutie cellulaire en subcellulaire beeldvorming. De workflow maakt multimodale beeldvorming mogelijk van confocaal tot superresolutie (~120 nm) binnen één platform, waardoor visualisatie op nanoschaal toegankelijker wordt.

Superresolutie beeldvorming en gedeeld beheer: een protocol voor confocale microscopie met multiplexdetectie

Dit gevisualiseerd experiment is een gids voor het gebruik van een fluorescerende moleculaire kloon van HIV voor live confocale imaging experimenten.

Visualiseren Cel-cel Overdracht van hiv met behulp van TL-Klonen van HIV en Live confocale microscopie

Ontdek hoe spectrale confocale microscopie met heparine-blokkering en computationele unmixing de IBEX-workflow optimaliseert voor hoog-plex beeldvorming in menselijk weefsel.

High-plex beeldvorming met behulp van spectrale confocale microscopie om niet-specifieke weefselfluorescentie te minimaliseren

Meer video's verkennen