Name: Het gebruik van Arabidopsis mutanten eceriferum naar Plant Nagelriem Biosynthese Explore (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-05-31T22:16:00.000+00:00
Duration: 11 min 2 s
Description: Verken de analyse van plantencuticula-mutanten met behulp van Arabidopsis eceriferum. Deze methode helpt onderzoekers genetische factoren in cuticulavorming te begrijpen voor landbouwtoepassingen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

I. Visual Schermen en Reverse genetische benaderingen te Cuticle Mutanten identificeren. Cuticula mutanten in de modelplant Arabidopsis thaliana worden &quot;eceriferum&quot; mutanten, wat betekent &quot;niet voorzien was&quot;. Ze kunnen worden in de visuele schermen, dat wil zeggen, alleen maar door te kijken naar de mutant, kun je zien dat de bloeiwijze stam van de wild-type planten wittig is, terwijl de mutanten zijn donkergroen glanzend stengels. Een van de mutanten die werd geïsoleerd in dit soort visuele scherm is dit een, genaamd eceriferum4 of cer4. Een andere manier om te ontdekken interessante cuticula mutanten is met een reverse genetics aanpak: het kiezen van de kandidaat-genen van belang en dan het bestuderen van planten lijnen met dat gen verstoord. Deze mutanten hebben TDNA het verstoren van de gen van belang, in dit geval, een cytochroom P450 die we nu MAH1 noemen. PCR-resultaten (zoals weergegeven in de video) kan bevestigen dat de TDNA toevoeging is in het gen van belang. Wanneer twee gen-specifieke primers worden gebruikt om wild-type DNA te amplificeren, zien we een product, maar als de TDNA onderbreekt het, zoals in deze mutant, is er geen product daar. Omgekeerd, met behulp van primers die specifiek zijn voor de TDNA en gen, is een product alleen gezien in de mutant. We zoeken naar homozygoot mutant lijnen, waarbij zowel de moederlijke en vaderlijke kopieën van het gen worden verstoord. Als een kopie van het gen wordt verstoord door TDNA en het andere exemplaar is nog steeds wild-type, worden de PCR-resultaten gemengd. II. Met behulp van gaschromatografie om de chemische samenstelling van Cutlicle Wax bepalen. We analyseren de chemische samenstelling van de was met behulp van gaschromatografie. Eerst worden de oplosbare verbindingen wax verwijderd van de plant oppervlak door dompelen in chloroform. Vervolgens worden monsters geïnjecteerd in het gas chromatografie kolom, waar ze zullen worden verwarmd en verzonden via een stroom van gas. Verschillende verbindingen stok meer of minder aan de wanden van de kolom, het scheiden van de verbindingen, en ze komen uit een na de ander aan de andere kant van de kolom. Dan, als de verbindingen passeren van de vlam ionisatie detector, zien we de toppen. De retentietijd van elke piek is kenmerkend voor de verschillende verbindingen en van massaspectrometrie, we hebben geïdentificeerd elk van de componenten van Arabidopsis was. De belangrijkste pieken aanwezig zijn die van de C29 alkaan, de C29 keton en de C29 secundaire alcohol. De kleine pieken zijn de secundaire alcoholen, vetzuren, aldehyden en esters. De oppervlakte onder de pieken, ten opzichte van de standaard, vertelt ons hoeveel van elke verbinding aanwezig is. Wanneer we kijken naar gas chromatogrammen van deze cuticula mutanten, kan men zien hoe cer4 de primaire alcoholen en esters ontbreekt, terwijl mah1 mist secundaire alcoholen en ketonen. Deze fenotypes kunnen vertellen ons veel over de functie van het gen van belang in de plant. Bijvoorbeeld, voor we het wisten welk gen gemuteerd was in de cer4 lijn, het fenotype vertelde ons dat er een probleem was in de primaire alcohol tak van de biosynthese. Na de moleculaire identiteit van dat gen werd bestudeerd in de Kunst lab, werd ontdekt dat het deel uitmaakt van een gen familie van vette acyl reductases, die goed past bij deze chemische stof fenotype. III. Met behulp van Cryo-SEM om de structuur van Cuticle kristallen te bepalen Als we de Arabidopsis mutanten cuticula bestuderen, kunnen we zien of ze hebben de donkergroene, glanzende fenotype of het wild-type witte verschijning op de stam. We gebruiken de scanning electronen microscoop om op de cuticula kijken op het oppervlak van de plant en de basis van de visuele fenotype te identificeren. We maken gebruik van cryo-SEM, het bevriezen van de planten en ze te bekijken temperatuur van vloeibare stikstof in stand te houden van de cuticula intact, omdat de SEM vereist een vacuüm te bedienen en zonder te houden bevroren, de monsters zou uitdrogen en instorten. Hier cer4 en mah1 monsters, samen met het wild-type controles, worden ontleed en bevroren op de SEM stub. Wanneer de monsters worden overgebracht naar de koude-fase van de microscoop, kun je zien dat het oppervlak van de wild-type Arabidopsis stam cuticula is bedekt met kristallen. Het is het licht dat verstrooiing uit de kristallen die geeft de stam zijn witachtig uiterlijk. Hier is de cer4 stam; herinneren glossy gekeken? Het ontbreekt de kristallen op het oppervlak. Mensen hebben gedaan experimenten waar ze isoleren een pure wax verbinding uit de cuticula van een plant en wanneer ze het recrystallize in het lab, de kristallen vormen de dezelfde vormen als die gevonden worden op de planten. In Arabidopsis, geloven wij dat de kristallen zijn opgebouwd uit een mengsel van verbindingen en de situatie is ingewikkelder. Bijvoorbeeld, de chemische analyse laat zien dat in cer4, alleen de kleinere bestanddelen van primaire alcoholen en de daarvan afgeleide esters ontbreken, maar de kristallen op de cer4 stengel zijn verdwenen. In het geval van mah1, het effect van de mutatie in dat de cytochroom P450 enzym is dat de mutant planten twee belangrijke componenten van de was, secundaire alcoholen en ketonen ontbreekt, maar de kristallen op de mah1 planten vormen normaal. Voor meer informatie over Arabidopsis mutanten cuticula ga naar <a href="http://arjournals.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.arplant.59.103006.093219" target="_blank">Annual Review of Plant Biology</a> .

het gebruik van arabidopsis mutanten eceriferum naar plant nagelriem biosynthese explore

Use of Arabidopsis eceriferum Mutants to Explore Plant Cuticle Biosynthesis

De plant cuticula is een wasachtige buitenste laag met planten die een primaire rol in het waterbeheer heeft, maar is ook een belangrijke barrière tegen het binnendringen van pathogene micro-organismen. De cuticula is opgebouwd uit een taaie verknoopt polymeer genaamd &quot;cutine&quot; en een beschermende waslaag dat de zeehonden de plant oppervlak. De wasachtige laag van de cuticula is duidelijk op veel planten, die als een glanzende film op de klimop blad of als een stoffige buitenbekleding op het oppervlak van een druif of een koolblad dankzij verstrooiing kristallen aanwezig zijn in de was licht. Omdat de cuticula is een essentiële aanpassing van de planten aan een terrestrische milieu, het begrijpen van de genen die betrokken zijn in de fabriek cuticula formatie heeft toepassingen in zowel de land-en bosbouw. Vandaag laten we de analyse van de plant cuticula mutanten geïdentificeerd door vooruit en reverse genetics benaderingen.

De plant cuticula is een wasachtige buitenste laag met planten die een primaire rol in het waterbeheer heeft, maar is ook een belangrijke barrière tegen het binnendringen van pathogene micro-organismen. In deze video, tonen we de analyse van de plant cuticula mutanten geïdentificeerd door vooruit en reverse genetics benaderingen.

Het gebruik van Arabidopsis mutanten eceriferum naar Plant Nagelriem Biosynthese Explore

De plantcuticula is een wasachtige buitenlaag op planten die een primaire rol speelt bij het vasthouden van water, maar ook een belangrijke barrière vormt tegen het binnendringen van ...

De plantencuticula is een wasachtige buitenlaag van planten die een primaire rol speelt bij waterbehoud, maar ook een belangrijke barrière vormt tegen het binnendringen van pathogene micro-organismen. De cuticula bestaat uit een taai, gecrosslinkt polymeer genaamd cutine en een beschermende waslaag die het oppervlak van de plant afsluit. De waslaag van de cuticula is bij veel planten duidelijk zichtbaar, zoals in de vorm van een glanzende film op een klimopblad of als een stoffige buitenlaag op het oppervlak van een druif of een koolblad.Dankzij lichtverstrooiende kristallen die in de was aanwezig zijn, vormt de cuticula een essentiële aanpassing van planten aan een terrestrische omgeving. Kennis over de genen die betrokken zijn bij de vorming van de plantencuticula heeft toepassingen in zowel de landbouw als de bosbouw. Vandaag tonen we de analyse van de plantencuticula MUS, geïdentificeerd via forward- en reverse-genetica benaderingen.Hoi, mijn naam is Patricia Lam van het laboratorium van Lyrica Kunz bij de Afdeling Bot aan de UVC. Vandaag ga ik, samen met anderen, laten zien hoe deze planten AB kunnen worden bestudeerd om te begrijpen hoe planten specifieke was produceren. Ik b

use-arabidopsis-eceriferum-mutants-to-explore-plant-cuticle

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Antenne-installaties organen zijn beschermd door de cuticula, een supramoleculaire biopolyester-wax montage. We presenteren protocollen bij selectieve verwijdering van epi-en intracuticular was van tomaat fruit nagelriemen op moleculaire en microniveau door solid-state NMR en atomic force microscopie, respectievelijk te controleren, en om de verknoping capaciteit van gemanipuleerde cuticulair biopolyesters te beoordelen.

Isolatie en Biofysische Studie van Fruit nagelriemen

We beschrijven een protocol met behulp van dia's kamer en de media te planten zaadlobben voor confocale beeldvorming van de opperhuid te immobiliseren over meerdere dagen van de ontwikkeling, het documenteren van stomata differentiatie. Fluorofoor-gemerkte eiwitten kan dynamisch worden gevolgd door expressie en subcellulaire lokalisatie, het verhogen van het inzicht in de mogelijke rollen tijdens de celdeling en cel-type differentiatie.

Lange termijn, hoge resolutie Confocale Time Lapse Imaging van<em&gt; Arabidopsis Cotyledon</em&gt; Epidermis Bij het ontkiemen

We presenteren de procedure om een zaadhuid beddengoed assay (SCBA) monteren van Arabidopsis thaliana zaden. De MKBA bleek een krachtig instrument genetisch en in vitro onderzoeken worden hoe het endosperm controles zaadkieming slapende zaden en in reactie op licht signalen. De MKBA is in beginsel van toepassing onder elke situatie waar het endosperm wordt vermoed dat de embryonale groei beïnvloeden.

Een zaadhuid Bedding Assay om Genetisch Explore<em&gt; In Vitro</em&gt; Hoe de Endosperm Controls zaadontkieming in<em&gt; Arabidopsis thaliana</em

De samenstelling van de plantencelwand varieert tussen weefselsoorten en kan lignine, cellulose, hemicellulosen en pectine omvatten. Er zijn verschillende kleuringstechnieken ontwikkeld om verschillen op celtypeniveau te visualiseren. Dit artikel is een samenstelling van veelgebruikte celwandkleuringstechnieken.

Histochemische kleuring van<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Secundaire celwand Elements

Lipide polyesters vormen de structurele componenten van twee celwandmodificaties, de plantencuticula en suberine-bevattende diffusiebarriers. In deze video beschrijven we een methode om cutine te depolymeriseren uit volledig ontvette bladeren. De methode kan worden toegepast op het onderzoeken van mutanten die beperkt zijn in de biosynthese van cutine of suberine.

Isolatie en analyse van de samenstelling van de Plant Nagelriem Lipid Polyester Monomeren

Chromatine immunoprecipitatie is een krachtige techniek voor de identificatie van DNA-bindingsplaatsen van Arabidopsis eiwitten in vivo. Deze procedure omvat chromatine verknoping en fragmentatie, selectieve immunoprecipitatie met antilichamen tegen het eiwit van belang en qPCR analyse van gebonden DNA. We beschrijven een eenvoudige ChIP assay geoptimaliseerd voor Arabidopsis planten.

Chromatine immunoprecipitatie assay voor de identificatie van Arabidopsis eiwit-DNA interacties<em&gt; In Vivo</em

Dit protocol beschrijft een methode voor de waarneming van de embryogenese Arabidopsis via zaadknop goedkeuring, gevolgd door de inspectie van embryo patroonformatie onder een microscoop.

Een methode voor het karakteriseren van de embryogenese Arabidopsis

Een high-throughput protocol voor de oppervlaktesterilisatie van Arabidopsisthaliana (Arabidopsis) zaden wordt geleverd, waarbij de vloeistofbehandelingsstappen worden geoptimaliseerd met een eenvoudig zuigapparaat dat is gebouwd met een vacuümpomp. Honderden zaadmonsters kunnen op één dag aan de oppervlakte worden gesteriliseerd.

High-throughput, robuuste en zeer tijdflexibele methode voor oppervlaktesterilisatie van Arabidopsis-zaden

Het atoomkrachtmicroscopie-inkepingsprotocol biedt de mogelijkheid om de rol van de fysische eigenschappen van de celwand van een bepaalde cel van een weefsel of orgaan te ontleden tijdens normale of beperkte groei (d.w.z. onder watertekort).

Atomic Force Microscopie om de fysieke eigenschappen van epidermale cellen van levende Arabidopsis-wortels te bestuderen

Dit protocol beschrijft een robuuste zaailingenbestrijdingsmethode die geen voorafgaande ervaring of training vereist en tegen zeer lage kosten kan worden uitgevoerd met behulp van materialen die gemakkelijk toegankelijk zijn in de meeste laboratoria voor moleculaire biologie.

Schaalbare, flexibele en kosteneffectieve zaailingenenting

Dit artikel beschrijft twee fenotyperingsmethoden zonder het gebruik van epidermale peelings om de genen te karakteriseren die de stomatale ontwikkeling regelen. De eerste methode demonstreert hoe een stomataal fenotype kan worden geanalyseerd met behulp van een toluidineblauwe O-gekleurde plantenepidermis. De tweede methode beschrijft hoe stomatale liganden te identificeren en hun biologische activiteiten te volgen.

Identificatie van de genen die betrokken zijn bij de ontwikkeling van stomato via epidermale fenotypescores

Verken de analyse van plantencuticula-mutanten met behulp van Arabidopsis eceriferum. Deze methode helpt onderzoekers genetische factoren in cuticulavorming te begrijpen voor landbouwtoepassingen.

Het gebruik van Arabidopsis mutanten eceriferum naar Plant Nagelriem Biosynthese Explore

Meer video's verkennen