Name: In vitro Functionele analyse van regulerende T-cellen: Focus op proliferatie en differentiatie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Leer een gemodificeerde in vitro Treg-suppressie-assay voor immunologisch onderzoek met muizen-T-cellen. Deze methode evalueert proliferatie en differentiatie van effector-T-cellen tegelijkertijd.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1.5 mL centrifuge tube</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>1250 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>15 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>200 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>5 mL syringe piston</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>50 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>50 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>70 &mu;m cell strainer&nbsp;</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD28 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD3 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD4 PerCP-Cy5.5 (RM4-5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>45-0042-82</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Flow Cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>voor flow cytometrische data-acquisitie van immuuncelbeurtelingen</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>voor isolatie van primaire lymfocyten en T-celsubsets</td></tr><tr><td>CD25 Monoclonal Antibody (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>CD45.1 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>voor isolatie van primaire lymfocyten en T-celsubsets</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoclonal Antibody (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoclonal Antibody (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoclonal Antibody (MEL-14), FITC&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>eBioscience Cell Proliferation Dye eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>software voor flowcytometrie data-analyse</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Protein Transport Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Human TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Ionomycin calcium salt</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>LD Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>OctoMACS Separators</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>PE Rat IgG1, &kappa; Isotype Ctrl Antibody</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Purified anti-mouse CD16/32 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>voor celsortering</td></tr><tr><td>Recombinant mouse IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysing Buffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>UltraComp eBeads Compensation Beads&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>01-2222-42</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>Zombie Yellow Fixable Viability Kit</td><td>BioLegend</td><td>423104</td><td>of equivalent</td></tr><tr><td>&beta;-Mercaptoethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M3148</td><td>of equivalent</td></tr></tbody></table>

in vitro functionele analyse van regulerende t-cellen: focus op proliferatie en differentiatie

In Vitro Functional Analysis of Regulatory T cells: Focus On Proliferation And Differentiation

In het representatieve experiment werden naïeve T-cellen gebruikt als Tresp-cellen om de effecten van met Treg verrijkte cellen op de proliferatie en differentiatie van Th1- en Th17-cellen te onderzoeken. In dit experiment werden Tresp-cellen geactiveerd door anti-muis CD3- en APC-verrijkte niet-CD4+ cellen, en vervolgens gedifferentieerd tot Th1-cellen onder IL-12 p70-inductie of tot Th17-cellen onder TGF-β1 en IL-6 inductie. Onder deze twee inductiecondities werden veranderingen in de proliferatie en differe...

In vitro Functionele analyse van regulerende T-cellen: Focus op proliferatie en differentiatie

Regulatory T (Treg) cells play key roles in maintaining immune homeostasis. Abnormalities in Treg cell function are associated with various diseases, ...

in-vitro-functional-analysis-regulatory-t-cells-focus-on

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Wij beschrijven een werkwijze voor het regulerende, geheugen naïeve T-cellen van een menselijke bloed donoren. Gepolariseerde Tregs kan worden vergeleken met andere subgroepen in verschillende genetische en functionele toepassingen met genetische homogeniteit, zoals onderdrukking assay ook hier beschreven.

Genereren van Induced regulatoire T-cellen uit primaire menselijke naïef en geheugen T-cellen

Genereren van T-lymfocyten van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPS) cellen geeft een alternatieve aanpak van het gebruik van embryonale stamcellen voor T-cel-gebaseerde immunotherapie. De werkwijze blijkt dat door een...

Geregisseerd Differentiatie van geïnduceerde pluripotente stamcellen naar T lymfocyten

CD4+ regulatorische T-cellen zijn krachtige immuunmodulatoren en hebben belangrijke functies in immuunhomeostase. Het gebrek aan deze cellen in perifeer bloed maakt functionele studies uitdagend, specifiek in de context van HIV-1-infectie. We beschrijven hier een methode om functionele CD4+ Tregs te isoleren en uit te breiden van perifeer bloed van HIV-1-geïnfecteerde individuen.

Nieuwe tools om regulatoire T-cellen van HIV-1-geïnfecteerde individuen Expand

Adenovirale genoverdracht in naïeve CD4 T-cellen met transgene expressie van de Coxsackie adenovirus receptor kan de moleculaire analyse van regulatoire T...

Adenovirale transductie van Naïeve CD4 T-cellen aan Treg Differentiatie Studie

Naïve CD4+ T-cellen polariseren naar verschillende subsets, afhankelijk van de omgeving op het moment van activering.  De differentiatie van naïve CD4+ T-cellen naar verschillende effector-subsets kan in vitro worden bereikt door de toevoeging van T-celreceptor-stimuli en specifieke cytokine-signalen.

Muis Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Cell Isolatie en<em&gt; In vitro</em&gt; Differentiatie in T cel subsets

Hier beschrijven we een protocol om het fenotype van regulatorische T-cellen (Treg) te analyseren die zijn geïsoleerd uit naïeve en chronisch lymphocytaire choriomeningitis-virus geïnfecteerde muizen. Daarnaast bieden we een proces om de onderdrukkende activiteit van de Treg-cellen te evalueren.

Fenotypische en functionele analyse van geactiveerde regulatoire T-cellen Geïsoleerd van Chronische Lymfatische choriomeningitis-virus geïnfecteerde muizen

Dit protocol beschrijft de reproduceerbare productie en fenotypering van mens veroorzaakte regulerende T-cellen (iTregs) van naïeve CD4 + T-cellen in vitro. Verschillende protocollen voor FOXP3 inductie mogelijk maken voor de studie van specifieke iTreg fenotypes verkregen met de respectieve protocollen.

In vitro differentiatie van humane CD4 + FOXP3 + geïnduceerde regulatoire T-cellen (iTregs) van naïeve CD4 + T cellen met behulp van een TGF-β-bevattende Protocol

Hier presenteren we een protocol bij het opwekken van tolerantie in transplantatie, en beoordelen van in vitro en in vivo de onderdrukkende capaciteit van afzonderlijke cel subsets van de ontvanger en de immuunstatus van de ontvanger naar donor of exogene antigenen.

In Vitro en In Vivo beoordeling van T-, B- en myeloïde cellen onderdrukkende activiteit en humorale reacties van transplantatie ontvangers

Dit artikel beschrijft een nieuwe methode voor het genereren van tumor antigeen-specifieke geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige Thymus emigants (iTE) door een driedimensionaal (3D) Thymus cultuur systeem. iET zijn een homogene deelverzameling van T-cellen die nauw verwant zijn aan naïeve T-cellen met de capaciteit voor proliferatie, Geheugenvorming en tumor onderdrukking.

Een driedimensionaal Thymic cultuur systeem voor het genereren van Murine geïnduceerde pluripotente stamcel afkomstige tumor antigen-specifieke Thymic emigranten

Hier beschrijven we een robuuste methode voor het bepalen van de identiteit en zuiverheid van de immuuncel door middel van epigenetische handtekeningen gedetecteerd met behulp van kwantitatieve PCR (qPCR). DNA-demethylatie op een specifieke locus dient als een unieke identificatie voor een bepaald celtype en maakt identificatie van CD8+, regulatory, of Th17 T cellen mogelijk.

Bepaling van immuuncelidentiteit en zuiverheid Met behulp van epigenetische kwantitatieve PCR

Leer een gemodificeerde in vitro Treg-suppressie-assay voor immunologisch onderzoek met muizen-T-cellen. Deze methode evalueert proliferatie en differentiatie van effector-T-cellen tegelijkertijd.

In vitro Functionele analyse van regulerende T-cellen: Focus op proliferatie en differentiatie

Meer video's verkennen