UWAGA: W tym eksperymencie zmierzysz tempo oddychania komórkowego dla kiełkujących nasion, mierząc szybkość wymiany tlenu. Gdy tlen jest zużywany do dostarczania energii, kiełkujące nasiona uwalniają dwutlenek węgla. Ten dwutlenek węgla jest pochłaniany przez węglan potasu, a tym samym ogólne ciśnienie gazowe respirometru zostanie zmniejszone. HIPOTEZY: Hipoteza eksperymentalna jest taka, że kiełkujące nasiona będą wykazywać większą szybkość oddychania niż szklane kulki kontrolne. Dodatkowo, że w wyższych temperaturach szybkość oddychania komórkowego w nasionach wzrośnie. Hipotezy zerowe są takie, że zarówno szklane kulki, jak i kiełkujące nasiona będą wykazywać podobne tempo oddychania komórkowego i że temperatura nie ma wpływu na oddychanie.
Aby skonfigurować kontrolę, najpierw wyjmij tłok z przygotowanego mikrorespirometru i oznacz go odpowiednio "CR" lub "CH", w zależności od tego, czy jest to temperatura w pomieszczeniu kontrolnym, czy podgrzana obróbka.
Dodaj szklane mikrogranulki do każdego z mikrorespirometrów do znaku 0,5 ml i wciśnij tłok w strzykawce do znaku 1 ml.
Umieść 3 - 4 podkładki na rozszerzonym końcu każdego mikrorespirometru, aby obciążyć je podczas kąpieli wodnej. UWAGA: Mikrorespirometr będzie osadzony w kapilarze końcem do góry.
Ustaw urządzenia sterujące na bok.
Aby ustawić eksperymentalne respirometry siedzące, wyjmij tłok z przygotowanego mikrorespirometru i oznacz go odpowiednio "ER" lub "EH", w zależności od tego, czy jest to eksperymentalna temperatura pokojowa, czy podgrzana terapia.
Odmierz 0,5 ml kiełkujących nasion do strzykawki tuberkulinowej mikrorespirometru.
Następnie dociśnij strzykawkę do znaku 1 ml.
Umieść 3 - 4 podkładki na rozszerzonym końcu każdego mikrorespirometru, aby obciążyć je podczas kąpieli wodnej.
Aby użyć mikrorespirometrów, ostrożnie wciśnij mikrorespirometry "CR" i "ER" do łaźni wodnej o temperaturze pokojowej. Cała strzykawka powinna być zanurzona, ale rurki kapilarne powinny być całkowicie odsłonięte. Usuń wodę z wanny, aż do osiągnięcia tej pozycji. Upewnij się, że górna część rurki kapilarnej jest otwarta.
Wykonaj tę samą procedurę (krok 9) dla mikrorespirometrów "CH" i "EH", aby skonfigurować grupę eksperymentalną o wyższej temperaturze.
Odczekaj 5 minut zanim przejdziesz dalej, aby temperatura w mikrorespirometrach wyrównała się z łaźnią wodną.
Dodaj pojedynczą kroplę płynu manometru do górnej części każdej z czterech rurek kapilarnych, które uszczelniają komory mikrorespirometru. UWAGA: Jeśli komory działają prawidłowo, płyn manometru zostanie zassany do komory kapilarnej.
Użyj tłoka ustawionego w kąpieli, aby zassać płyn manometru do kapilary. Zatrzymaj się, gdy płyn znajdzie się mniej więcej w połowie rurki kapilarnej. WAŻNE: Nie należy naruszać mikrorespirometrów po dodaniu ich do kąpieli. Nie uderzaj w stół ani nie wkładaj ani nie wyjmuj niczego do lub z łaźni wodnej po uszczelnieniu i wyrównaniu komór.
Zaznacz dolną krawędź płynu manometru, która znajduje się bliżej komory. Reprezentuje to punkt czasowy zero.
Ustaw minutnik na dźwięk za 5 minut.
Po 5 minutach utwórz nowy znacznik, w którym znajduje się płyn manometru na każdym mikrorespirometrze. Powtarzaj co 5 minut, aż minie 25 minut lub do momentu, gdy płyn manometru przepłynie całą długość rurki kapilarnej.
Następnie wyjmij respirometry z łaźni wodnych.
Podczas sprzątania manometry powinny zostać zdekonstruowane w celu ich ponownego użycia lub wyrzucone do kosza.
