Podział komórek

KoncepcjePrzygotowanie instruktoraProtokół studencki
0 wyświetleń05:44 min
Print Procedure Steps
Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Obserwacja cyklu komórkowego w wierzchołku korzenia
    • Hipotezy: Hipoteza eksperymentalna jest taka, że w wycinkach wierzchołków korzeni, które zostały potraktowane nokodazolem, substancją chemiczną, która zakłóca polimeryzację mikrotubularną, wszystkie komórki zostaną zatrzymane na tym samym etapie cyklu komórkowego, a w nieleczonych plasterkach końcówki cebuli wszystkie różne etapy cyklu komórkowego zostaną zwizualizowane. Hipoteza zerowa jest taka, że nie będzie różnic w mitozie między dwiema grupami i że zostaną uwidocznione różne etapy cyklu komórkowego.
    • Aby przygotować się do tego eksperymentu, użyjesz cebuli, która została umieszczona w wodzie na kilka dni, aż zaczną kiełkować nowe białe wierzchołki korzeni. Za pomocą żyletki odetnij 1 cm kawałek od końca jednej z końcówek korzeni.
    • Umieść plasterek cebuli w probówce mikrowirówki oznaczonej jako "N" dla stanu nokodazolu.
    • Następnie odetnij drugi 1 cm kawałek wierzchołka korzenia cebuli i umieść w probówce do mikrowirówki oznaczonej "C" dla warunków kontrolnych.
    • Dodać 2 μl 5 mg/ml nokodazolu do 1 ml wody w probówce mikrowirówki oznaczonej N i 1 ml wody tylko do probówki oznaczonej C.
    • Pozostaw probówki zawierające końcówki korzeni do inkubacji na 12 godzin i przetrzyj miejsce pracy 70% etanolem.
    • Po zakończeniu inkubacji ustaw blok grzewczy na 60 ºC.
    • Umyj końcówki nasączone nokodazolem wodą, a następnie odessaj płyn.
    • Powtórz to pranie jeszcze dwa razy, w sumie trzy prania.
    • Napełnij obie probówki 1 ml jednego normalnego kwasu solnego. Inkubować probówki w bloku grzewczym o temperaturze 60 °C przez 12-15 minut, a następnie wyrzucić kwas do kolby na odpady.
    • Teraz dodaj 1 ml destylowanej wody kroplami do probówek co najmniej trzy razy, aby przepłukać próbki.
    • Teraz dodaj jeden mikrolitr barwnika DAPI do 10 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS).
    • Następnie umieść 50 μl tej rozcieńczonej barwnika DAPI w każdej probówce i pozostaw je w temperaturze pokojowej do inkubacji przez 12 minut.
    • Następnie przygotuj trzy płukania wodą destylowaną, jak w kroku 10.
    • Oznacz jeden preparat mikroskopowy jako 'Kontrola', a drugi jako 'Nocodazol'.
    • Przenieś wybarwione korzenie na odpowiednie szkiełka mikroskopowe i dodaj kroplę wody do szkiełka kontrolnego i kroplę nokodazolu do szkiełka nokodazolowego.
    • Użyj żyletki, aby usunąć niepoplamione części każdej końcówki korzenia i umieść szklaną osłonę na każdej próbce.
    • Ostrożnie dociśnij każde szkiełko nakrywkowe opuszkiem palca w rękawiczce, a następnie pozostaw szkiełka na 10 minut.
    • Na koniec obejrzyj slajdy pod obiektywem 40X mikroskopu fluorescencyjnego i zrób obrazy preparatów komórek wierzchołka korzenia.
  2. Zrozumienie utraty kontroli nad cyklem komórkowym
    • UWAGA: Zanim komórki będą mogły przejść przez wszystkie etapy cyklu komórkowego, muszą przejść kilka punktów kontrolnych. Te punkty kontrolne są regulowane przez cyklinę i białka kinazy zależnej od cyklin lub CDK. Jeśli cykliny i CDK stwierdzą, że poprzednie zdarzenia komórkowe nie zostały odpowiednio zakończone, zatrzymają komórki na tym etapie i zapobiegną ich proliferacji. W komórkach nowotworowych jedno lub kilka z tych molekularnych ograniczeń regulujących podział komórek zostaje utraconych, co pozwala uszkodzonym komórkom uciec spod kontroli proliferacji komórek. Te nieprawidłowe komórki przekształcają się w guzy, które są masą niekontrolowanie proliferujących komórek, które zakłócają normalne funkcje organizmu. Zauważ, że zanim się podzieli, ta komórka rakowa zaokrągla się i bardzo silnie załamuje światło pod mikroskopem świetlnym. Dzieje się tak, ponieważ nie wszystkie komórki rakowe z powodzeniem dzielą się na komórki potomne po każdej rundzie mitozy. Oznacza to, że często zawierają nadmiar organelli i DNA, a ten wzrost zawartości komórkowej oznacza, że będą załamywać światło intensywniej niż robią to normalne komórki.
  3. Wyniki
    • Zbadaj zebrane obrazy i zapisz w Tabeli 1 różne struktury komórkowe i etapy, które można zidentyfikować w plastrze końcówki cebuli, który został potraktowany nokodazolem. Kliknij tutaj, aby pobrać tabelę 1
    • Jeśli są jakieś komórki przechodzące mitozę, zwróć uwagę, jakie etapy podziału komórek widzisz.
    • Zapisz procent komórek w każdym etapie mitozy w Tabeli 1.
    • Następnie przyjrzyj się obrazom nieleczonego plasterka wierzchołka cebuli i zapisz, jakie struktury komórkowe możesz zidentyfikować.
    • Jeśli są jakieś komórki przechodzące mitozę, zastanów się, jakie etapy podziału komórek widzisz, i zapisz procentowy udział komórek w każdym etapie mitozy w Tabeli 1.

Browse More Videos

cykl kom rkowy