Hipotezy: Hipoteza eksperymentalna jest taka, że w wycinkach wierzchołków korzeni, które zostały potraktowane nokodazolem, substancją chemiczną, która zakłóca polimeryzację mikrotubularną, wszystkie komórki zostaną zatrzymane na tym samym etapie cyklu komórkowego, a w nieleczonych plasterkach końcówki cebuli wszystkie różne etapy cyklu komórkowego zostaną zwizualizowane. Hipoteza zerowa jest taka, że nie będzie różnic w mitozie między dwiema grupami i że zostaną uwidocznione różne etapy cyklu komórkowego.
Aby przygotować się do tego eksperymentu, użyjesz cebuli, która została umieszczona w wodzie na kilka dni, aż zaczną kiełkować nowe białe wierzchołki korzeni. Za pomocą żyletki odetnij 1 cm kawałek od końca jednej z końcówek korzeni.
Umieść plasterek cebuli w probówce mikrowirówki oznaczonej jako "N" dla stanu nokodazolu.
Następnie odetnij drugi 1 cm kawałek wierzchołka korzenia cebuli i umieść w probówce do mikrowirówki oznaczonej "C" dla warunków kontrolnych.
Dodać 2 μl 5 mg/ml nokodazolu do 1 ml wody w probówce mikrowirówki oznaczonej N i 1 ml wody tylko do probówki oznaczonej C.
Pozostaw probówki zawierające końcówki korzeni do inkubacji na 12 godzin i przetrzyj miejsce pracy 70% etanolem.
Po zakończeniu inkubacji ustaw blok grzewczy na 60 ºC.
Umyj końcówki nasączone nokodazolem wodą, a następnie odessaj płyn.
Powtórz to pranie jeszcze dwa razy, w sumie trzy prania.
Napełnij obie probówki 1 ml jednego normalnego kwasu solnego. Inkubować probówki w bloku grzewczym o temperaturze 60 °C przez 12-15 minut, a następnie wyrzucić kwas do kolby na odpady.
Teraz dodaj 1 ml destylowanej wody kroplami do probówek co najmniej trzy razy, aby przepłukać próbki.
Teraz dodaj jeden mikrolitr barwnika DAPI do 10 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS).
Następnie umieść 50 μl tej rozcieńczonej barwnika DAPI w każdej probówce i pozostaw je w temperaturze pokojowej do inkubacji przez 12 minut.
Następnie przygotuj trzy płukania wodą destylowaną, jak w kroku 10.
Oznacz jeden preparat mikroskopowy jako 'Kontrola', a drugi jako 'Nocodazol'.
Przenieś wybarwione korzenie na odpowiednie szkiełka mikroskopowe i dodaj kroplę wody do szkiełka kontrolnego i kroplę nokodazolu do szkiełka nokodazolowego.
Użyj żyletki, aby usunąć niepoplamione części każdej końcówki korzenia i umieść szklaną osłonę na każdej próbce.
Ostrożnie dociśnij każde szkiełko nakrywkowe opuszkiem palca w rękawiczce, a następnie pozostaw szkiełka na 10 minut.
Na koniec obejrzyj slajdy pod obiektywem 40X mikroskopu fluorescencyjnego i zrób obrazy preparatów komórek wierzchołka korzenia.
