Komórki reprezentują najbardziej podstawowe jednostki biologiczne wszystkich organizmów, niezależnie od tego, czy są to proste, jednokomórkowe organizmy, takie jak bakterie, czy duże, wielokomórkowe organizmy, takie jak słonie i gigantyczne sekwoje. W połowie XIX wieku zaproponowano teorię komórki, aby zdefiniować komórkę, która stwierdza:
Wszystkie komórki mają wspólne cechy, takie jak błona plazmatyczna, cytoplazma, DNA i rybosomy. Błona plazmatyczna to dwuwarstwa fosfolipidowa, która otacza komórkę. Ta cienka i płynna warstwa wokół komórek służy do izolowania zawartości komórki od jej otoczenia i reguluje wymianę materiału z otoczeniem, jednocześnie ułatwiając interakcje z innymi komórkami. Wewnątrz błony plazmatycznej komórka jest wypełniona żelowym płynem zwanym cytoplazmą, który zawiera cząsteczki organiczne, sole i inne materiały, które są niezbędne dla funkcji komórki. Dlatego w cytoplazmie zachodzą reakcje biochemiczne podtrzymujące życie, które są znane jako procesy metaboliczne. Rodzaje procesów metabolicznych, które komórka może wykonać, zależą od jej informacji genetycznej. Wszystkie komórki wykorzystują DNA jako materiał genetyczny, który jest dziedzicznym planem budowy struktur komórkowych i produktów. Wreszcie, wszystkie komórki używają rybosomów do syntezy swoich produktów białkowych.
Istnieją dwa typy komórek w zależności od lokalizacji ich materiału genetycznego: prokariotyczny, co oznacza "przed jądrem" i eukariotyczne, co oznacza "prawdziwe jądro". Dlatego, podczas gdy oba typy organizmów mają DNA, prokariota, takie jak bakterie, mają nukleoidy lub składniki "podobne do jądra" zamiast jądra, podczas gdy eukarionty mają prawdziwe, związane z błoną jądra, które zawierają ich DNA. Co więcej, prokariota są stosunkowo małe, około 0,1–5,0 mikrometrów (μm), w porównaniu do eukariontów, które zwykle mogą mieć wielkość od 10 do 100 μm. Niewielkie rozmiary prokariontów pozwalają na szybkie i bezproblemowe rozprowadzenie materiałów w komórce oraz realizację procesów metabolicznych, a także szybkie usuwanie odpadów lub innych produktów z komórki. W związku z tym komórki eukariotyczne posiadają wyspecjalizowane struktury zwane organellami, takie jak mitochondria lub aparat Golgiego, które umożliwiają wykonywanie funkcji życiowych.
Komórka eukariotyczna jest wspólną cechą pochodną wszystkich eukariontów, co oznacza, że miała jedno pochodzenie, które od tego czasu zostało odziedziczone przez wszystkie eukarionty. Najwcześniejsze komórki eukariotyczne są widoczne w skamieniałościach sprzed około 2,4 miliarda lat i są rozpoznawalne, ponieważ są większe niż komórki prokariotyczne1. Pochodzenie tego typu komórek wynikało ze zdarzenia endosymbiotycznego, w którym jedna komórka podobna do ameby pochłonęła bakterię mikrokokową i utworzyła stabilne współistnienie2. Pochłonięte bakterie przekształciły się w pierwsze organelle wytwarzające energię, mitochondria, które są organellami metabolizmu tlenowego w komórce. Mitochondria mają swój własny oddzielny genom i są podobne wielkością do prokariontów. Zawierają dwie warstwy membran, które obejmują dwa odrębne przedziały. Niektóre z reakcji, które rozkładają wysokoenergetyczne biomolekuły, zachodzą w wewnętrznym przedziale, podczas gdy w zewnętrznym przedziale mieszczą się reakcje, które przechwytują energię uwolnioną z tych związków do cząsteczek adenozynotrifosforanu (ATP), które mają być wykorzystane jako waluta energetyczna komórki.
Jądra i mitochondria nie są jedynymi wspólnymi strukturami komórek eukariotycznych. Inne wszechobecne organelle eukariotyczne to gładka i szorstka retikulum endoplazmatyczne (ER), aparat Golgiego, lizosomy i wakuole. Retikulum endoplazmatyczne oznacza po prostu "sieć wewnątrz plazmy" i jak sama nazwa wskazuje, jest to duża sieć błon wewnątrz komórki, zwłaszcza wokół jądra. Części szorstkiego ER rozciągają się od błony jądrowej i odróżniają się od gładkiego ER szorstkim wyglądem ze względu na liczne rybosomy na ich powierzchni. Szorstki ER jest miejscem syntezy białek, takich jak białka osadzone w błonie plazmatycznej lub białka wydzielane z komórki. W przeciwieństwie do tego, gładki ER wytwarza produkty na bazie lipidów, ale zawiera również enzymy do detoksykacji szkodliwych substancji chemicznych. Stąd komórki wątroby zawierają obfite gładkie ER. Ponadto komórki mięśniowe zawierają znaczne ilości gładkiego ER ze względu na funkcję magazynowania wapnia przez tę organellę, która jest niezbędna do skurczu mięśni. Aparat Golgiego sortuje, modyfikuje i pakuje produkty komórkowe do pęcherzyków, które łączą się z błoną plazmatyczną, aby uwolnić produkty. Niektóre z białek, które są wytwarzane w szorstkim ER, to wewnątrzkomórkowe enzymy trawienne. Enzymy te są upakowane w aparacie Golgiego w specjalnych pęcherzykach zwanych lizosomami. Główną funkcją lizosomów jest trawienie cząstek pokarmu pochłoniętych przez komórkę, a także starych części komórek. Wakuole to woreczki błony komórkowej, które służą jako jednostki magazynujące w komórkach. Mogą służyć do magazynowania wody w celu regulacji zawartości wody w komórce, a także do przechowywania produktów przemiany materii, a nawet trujących cząsteczek, w zależności od typu komórki i organizmu.
Komórki eukariotyczne rozwinęły również odrębne organelle, specyficzne dla każdego królestwa. Na przykład królestwo Plantae i Animalia są eukariotyczne, jednak organelle komórek roślinnych i zwierzęcych różnią się pod względem kluczowym, który pozwala im prowadzić swoje życie odpowiednio jako producenci i konsumenci. Rośliny lądowe muszą rosnąć wysoko i mieć sztywne łodygi do podtrzymywania liści, których używają do fotosyntezy. Muszą również być w stanie zatrzymać wodę pobieraną przez korzenie. Ich komórki odzwierciedlają te specyficzne potrzeby. W przeciwieństwie do komórek zwierzęcych, komórki roślinne mają chloroplasty, które są wykorzystywane do fotosyntezy i często zawierają zielony pigment chlorofil. Dodatkowo są otoczone ścianami komórkowymi, które są sztywnymi warstwami zewnętrznymi wykonanymi z celulozy, które wspomagają wzrost i zatrzymywanie wody. Ponieważ muszą przechowywać duże ilości wody, aby utrzymać ciśnienie wody w komórce, mają większe wakuole niż komórki zwierzęce. Ponadto komórki roślinne mają również inny rodzaj wyspecjalizowanych organelli magazynujących zwanych plastydami, które zawierają pigmenty, a także produkty fotosyntezy, takie jak skrobia. Różnice te są zauważalne i odróżniają komórki roślinne od komórek zwierzęcych: komórki roślinne mają na ogół regularny, prostokątny kształt ze względu na sztywne ściany komórkowe, podczas gdy komórki zwierzęce są zaokrąglone i bardziej nieregularne.
Niektóre komórki, takie jak oocyty żaby, są wystarczająco duże, aby można je było zobaczyć gołym okiem, ale większości komórek nie można zobaczyć bez pomocy wizualnej. Dlatego naukowcy wykorzystują techniki mikroskopowe do badania struktur komórkowych i odróżniania typów komórek od siebie. Podczas gdy mikroskopy są w stanie powiększyć obiekty, które są trudne lub niemożliwe do zobaczenia ludzkim okiem, większość tkanek naturalnie nie ma pigmentacji. Dlatego stworzono rozwiązania, które mogą selektywnie barwić komórki na podstawie ich składu molekularnego. Pozwala to naukowcom rozróżnić organelle w komórce, typy tkanek w łodydze rośliny i warstwy tłuszczu u zwierząt, żeby wymienić tylko kilka przykładów. Barwnik błękitu metylenowego barwi kwasy nukleinowe martwych komórek, wiążąc się z ujemnie naładowanym DNA. Roztwór safraniny to kolejny biologiczny barwnik, który barwi jądra komórkowe na czerwono. Komórki muszą znajdować się w roztworach barwiących tylko przez krótki czas i mogą być zamontowane natychmiast po etapie barwienia. Powszechnie stosowanymi technikami montażu są montaż na mokro i zanurzenie w oleju. Mocowanie na mokro tworzy się poprzez pobranie próbki i umieszczenie jej na szkiełku podstawowym z płynem między szkiełkiem podstawowym a szkiełkiem nakrywkowym. Próbki komórek są zawieszone w cieczach, takich jak woda lub glicerol. Glicerol lepiej nadaje się do stosowania z żywymi kulturami, ponieważ zapobiega namnażaniu się bakterii3. Olejek immersyjny można dodać na wierzch szkiełka nakrywkowego, aby poprawić widoczność próbki przy dużym powiększeniu. Dzieje się tak, ponieważ olej ma taki sam współczynnik załamania światła jak szkło, co oznacza, że przepuszcza przez niego światło tak samo dobrze, jak szkło. Interfejs szkło-powietrze rozprasza światło bardziej niż olej lub szkło, więc klarowność obrazu jest zaburzona, gdy próbki są montowane "na sucho" lub bez oleju. Po wybarwieniu i zamontowaniu komórek są one gotowe do zbadania pod mikroskopem.
Istnieją różne techniki mikroskopowe, od technologii skanowania elektronowego, która umożliwiła naukowcom oglądanie obiektów na poziomie atomowym, po fluorescencyjne obrazowanie żywych komórek, które umożliwia monitorowanie ruchu cząsteczek w czasie rzeczywistym w poszczególnych komórkach4. Mikroskopia jasnego pola jest najprostszą techniką mikroskopową, wymagającą jedynie źródła światła halogenowego, soczewki kondensatora do skupienia światła, soczewki okularowej do oglądania obrazu i soczewki obiektywowej do powiększenia obrazu. W przypadku każdej techniki mikroskopowej ważne jest, aby zrozumieć części mikroskopu przed jego użyciem. Ogólnie rzecz biorąc, mikroskopy złożone używane do obrazowania w jasnym polu mają okular w górnej części lunety, który jest przymocowany do głowy i obiektywów. Okular ma powiększenie 10X, a soczewki obiektywowe są ustawione na określone powiększenie w zakresie 4X-100X. W standardowym mikroskopie znajduje się od trzech do pięciu obiektywów. Cele wskazują w dół na scenę, w której umieszcza się okaz do oglądania. Scena często składa się z części mechanicznych i klipsów scenicznych do trzymania slajdu i przesuwania go podczas oglądania. Przysłona to otwór w scenie, przez który przechodzi światło. Światło to jest kontrolowane przez regulowaną soczewkę kondensatora nad oświetlaczem lub źródłem światła. Aby kontrolować powiększenie stolika dla oglądanego obiektu, mikroskopy są wyposażone w pokrętła regulacji ostrości zgrubnej i precyzyjnej. Pokrętło zgrubnego ustawiania ostrości porusza się w większej skali niż precyzyjne ustawianie ostrości, ale znajdują się one na tej samej osi. Precyzyjna ostrość jest przydatna, gdy obiekt na stole montażowym zbliżył się do celów. Ważne jest, aby obiektyw nie dotykał obiektu na stoliku, ponieważ może to porysować soczewkę. Obiekty powinny być zawsze najpierw oglądane na obiektywie o najmniejszym powiększeniu i wyraźnie ostre przed przełączeniem na obiektywy o wyższym powiększeniu.
Mikroskopia jest ważnym narzędziem w wielu aspektach dziedziny medycyny, w tym w badaniach, diagnozie i leczeniu. Ma to zastosowanie w medycynie, jako nowej metody leczenia w miejsce bardziej inwazyjnej chirurgii5. Chirurdzy korzystają również z mikroskopów, z których niektóre zostały zmodyfikowane tak, aby można je było zamontować na głowie chirurga i są obsługiwane za pomocą pedałów nożnych. Mają one znacznie mniejsze powiększenie niż stosowane obecnie mikroskopy świetlne, ale ułatwiają bezpieczne wykonywanie delikatnych zabiegów, takich jak chirurgia optyczna i neurochirurgiczna.
Życie, od największych organizmów po najmniejsze, składa się z komórek. Komórki są budulcem życia i dostarczają materiałów potrzebnych do istnienia życia.
Podczas gdy komórki ze wszystkich środowisk zawierają podobne struktury, takie jak DNA i białko, istnieją dwa różne typy komórek w zależności od tego, jak takie struktury są zorganizowane wewnętrznie. Komórki prokariotyczne, te należące do bakterii i archeonów, są proste w swojej organizacji. Na przykład, chociaż ich genom jest gęsto upakowany, nie jest otoczony błoną. Komórki eukariotyczne, te tworzące zwierzęta, rośliny i grzyby, są bardziej złożone. Dzielą swoje wewnętrzne struktury na organelle, struktury związane z błoną, które pełnią określone funkcje. W przeciwieństwie do prokariontów, eukariotyczne DNA jest zamknięte w błonie jądrowej. Inne organelle to retikulum endoplazmatyczne, mitochondrium i lizosom.
Pierwsze komórki na Ziemi pojawiają się w zapisie kopalnym sprzed około 3,7 miliarda lat i uważano, że były prokariotyczne. Komórki eukariotyczne pojawiły się po raz pierwszy około 2,4 miliarda lat temu, kiedy komórka podobna do ameby pochłonęła komórkę bakteryjną i utworzyła stabilne współistnienie. Z biegiem czasu ta komórka w komórce ewoluowała, tworząc struktury takie jak chloroplast i mitochondrium.
Rośliny i zwierzęta mają również zróżnicowane potrzeby metaboliczne i strukturalne, co prowadzi do dalszych różnic w ich komórkach. Ponieważ rośliny muszą wytwarzać własną energię, komórki roślinne zawierają chloroplasty, które pomagają w fotosyntezie. Komórka roślinna zawiera również dużą wakuolę do przechowywania białek, metabolitów i wody. Wreszcie, komórki roślinne mają również sztywną ścianę komórkową, niezbędną do wzrostu i zatrzymywania wody.
Ponieważ komórki są tak małe, można je zobaczyć tylko pod mikroskopem. Jednym z najprostszych sposobów oglądania komórek jest mikroskop jasnego pola. Ten mikroskop zawiera źródło światła, soczewkę kondensatora do skupiania światła, soczewkę okularową do oglądania próbki oraz soczewkę obiektywową do powiększenia. Mikroskop to nie jedyna rzecz potrzebna do wizualizacji tego, co niewidzialne. Struktury w komórkach są przezroczyste, więc komórki muszą być zabarwione barwnikami. Na przykład safranina jest używana do barwienia jąder komórkowych na czerwono.
W tym ćwiczeniu laboratoryjnym użyjesz mikroskopu złożonego do wizualizacji komórek policzków i komórek roślinnych.