Usuwanie puparium owadów: metoda badania poczwarek

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Fukutomi, Y., et al. Metody oceny okresów poczwarki i pomiaru pigmentacji skrzydeł Drosophila guttifera.J. Vis. Exp. (2018).

Ten artykuł opisuje technikę usuwania poczwarki owada przy jednoczesnym zachowaniu wewnętrznej poczwarki w stanie nienaruszonym, a tym samym nadającej się do dalszych badań. Przykładowy protokół przedstawia procedurę z Drosophila guttifera; jednak technika ta ma zastosowanie do innych gatunków Drosophila.

Protokół

Ten protokół jest fragmentem Fukutomi et al., Methods for Staging Pupal Period and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera, J. Vis. Exp. (2018).

1. Usuwanie poczwarki

UWAGA Poczwarki Drosophila są pokryte strukturą zwaną puparium. Owad Muscomorpha (muchy) nie zrzuca naskórka larwalnego w momencie przepoczwarzenia; Zamiast tego utwardza naskórek po apolizie i wykorzystuje go jako osłonę ochronną poczwarki, poczwarki. Poczwarka znajdująca się w poczwarce ma prawdziwy naskórek poczwarki, który jest bardzo miękki i delikatny. Zanim dojdzie do apolizy wokół P4(ii), nabłonek i poczwarka są ze sobą zrośnięte, dlatego usunięcie poczwarki bez uszkodzenia jest bardzo trudne. Po P5 usunięcie poczwarki jest pracochłonne, ale przydatne do obserwacji morfologicznej i określenia stadiów poczwarki. Proces odbywa się w następujący sposób.

Przyklej kawałek dwustronnej taśmy na ręczniku papierowym.
Umieść poczwarkę na taśmie dwustronnej brzusznie do góry (ryc. 1A).
Zlokalizuj przestrzeń między przednią stroną poczwarki a poczwarką wewnętrzną. Chwyć i usuń poczwarkę wokół tej szczeliny za pomocą kleszczy i odsłoń przednią stronę głowy poczwarki.
Włóż końcówkę kleszczy, przesuwając ją równolegle do osi przednio-tylnej. Podnieś końcówkę kleszczy, aby miejscowo złamać poczwarkę. Powtarzaj tę czynność, aż pęknięcie dotrze do tylnej części poczwarki. Upewnij się, że między poczwarką a nogami poczwarki jest również utworzona szczelina, a następnie przełam brzuszną stronę poczwarki i zminimalizuj uszkodzenie wewnętrznej poczwarki (ryc. 1B).
Po rozbiciu poczwarki tak bardzo, jak to możliwe, wyjmij poczwarkę za pomocą cienkiego pędzla (#5/0) (Ryc. 1C).
Umieścić poczwarkę na kawałku bibuły, który został zwilżony ddH₂O i umieszczony na plastikowej szalce Petriego (średnica 60 mm x wysokość 15 mm). Rób zdjęcia tak szybko, jak to możliwe, ponieważ odsłonięta poczwarka jest wrażliwa i łatwo wysycha.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Schemat sekcji owadów, etapy: cięcie i usuwanie, cięcie i otwieranie, ekstrakcja pędzlem.
Rysunek 1. Ilustracja przedstawiająca usuwanie poczwarki.(A) Umieść poczwarkę brzuszną stroną do góry na kawałku dwustronnej taśmy. Usuń przednią część poczwarki. (B) Przełam poczwarkę kleszczami od strony brzusznej. (C) Po rozbiciu poczwarki, wyjmij ją za pomocą pędzla.