Test wspinaczki muchowej: metoda testowania ogólnej lokomocji u Drosophila melanogaster

Streszczenie

Źródło: Gevedon, O., et al. Genetyczne badanie in vivo w celu identyfikacji nowych genów neuroprotekcyjnych u Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film opisuje prostą metodę ilościowego oznaczania lokomocji muchy i pokazuje przeprowadzony test wspinaczki. Test wspinaczki muchowej jest ogólnym testem funkcji motorycznych, który opiera się na negatywnej odpowiedzi geotaksji.

Protokół

Ten protokół jest fragmentem Gevedon et al., In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster, J. Vis. Exp.(2019).

1. Test wspinaczkowy (Na podstawie Ali et al., J. Vis. Exp. (2011))

1. Zatwierdzić test wspinaczkowy. W tym badaniu przetestowano test wspinaczkowy w oparciu o wcześniej opisaną metodologię przez Ali i wsp., przy użyciu much Elav^C155>UAS-Tau^R406W (wykazujących niższe wskaźniki przejścia wspinaczki) oraz Elav^C155>UAS-GFP (kontrolna) i Elav^C155>UAS-mCherry (kontrolna).
2. Wrzuć muchy do komory testowej, po jednej linii na raz (nie używaj znieczulenia CO₂) i pozwól im dojść do siebie przez 5 minut. Jeśli badanie jest wykonywane w różnych dniach, należy je wykonać o tej samej porze dnia. W tym badaniu wszystkie testy wspinaczkowe przeprowadzono po południu, aby kontrolować okołodobowy wpływ na lokomocję.
   UWAGA Unikaj wystawiania much na bezpośrednie działanie promieni słonecznych podczas testowania; Będzie to kolidować z ich zdolnością do wspinania się.
3. Na siłę postukaj komorą (oznaczoną stroną do dołu) o podkładkę pod mysz umieszczoną na twardej powierzchni 3 razy, aby wszystkie muchy rozpoczęły test od dołu. Obserwuj lokomocję much przez okres 10 sekund.
4. Należy odnotować liczbę much, które w tym czasie osiągną lub przekroczą linię 5 cm, a także całkowitą liczbę przebadanych much. Powtórz protokół, odczekując 1 minutę między każdą próbą, dla co najmniej 3 powtórzeń próby na linię.
   UWAGA W obecnym badaniu, każda fiolka zawierała od 2 do 19 much do wstępnego badania przesiewowego (samce) i od 6 do 21 much do analizy niedoboru mutantów skrzyżowanych linii żeńskich.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
fiolka VWR® Drosophila; Wąski	VWR	75813-160
Taśma do etykietowania laboratoryjnego ogólnego przeznaczenia VWR®	Firma VWR	Numer katalogowy: 89097-912
Standardowa podkładka pod mysz
Stereoskop	Motic		modelu SMZ-168
Inkubator Drosophila	Firma VWR	Numer katalogowy: 89510-750
R